生化分析仪上项目影响组

全自动生化分析仪校准规范全自动生化分析仪校准规范(湿式)全自动生化分析仪是临床诊断的重要手段之一 ,其检测结果是否准确对临床疾病的诊断和治疗监测有直接的影响。

在仪器检测结果精密度良好的前提下，仪器校准是保证检测结果准确的关键步骤，为此结合国内的相关标准的基础上，就全自动生化分析仪校准的基本要求提出如下建议。

1杂散光的试验方法1.1设定两个单试剂项目，波长设为340nm;1.2设定上述项目的试剂位，分别以蒸馏水和亚硝酸钠标称溶液(50g/L)为试剂和样本，每个项目重复测定5测试;1.3查看反应曲线或反应数据，以最后一点的吸光度作为所测定溶液的吸光度，共得到5个蒸馏水和5个亚硝酸钠标称溶液的吸光度;1.4计算最小的亚硝酸钠溶液吸光度与最大的蒸馏水溶液的吸光度的差值，为杂散光。

1.5应符合标准的要求;当测定波长为340nm时，杂散光应不大于0.5%(或吸光度不小于2.3)。

2吸光度线性范围的试验方法2.1以340nm吸光度不低于2.0(以蒸馏水为空白)的重铬酸钾溶液为原液，用蒸馏水稀释出相对浓度分别为1、2、3、4、5、6、7、8、9和10(原液)的系列溶液;2.2设定一个单试剂项目，波长为340nm，试剂和样本均为待测溶液;通过反应曲线或反应数据查找试剂空白段的吸光度;2.3按照浓度由低到高的顺序，每个浓度重复测定2次;2.4以相对浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，画出散点图;2.5用最小二乘法对所有数据进行线性拟合，按照公式(1)、(2)和(3)计算每一个点的相对偏倚;相对偏倚=100*(A-(a+b*C))/(a+b*C) (1)式中:A为实际测定的吸光度，a为线性拟合的截距，b为线性拟合的斜率。

22b=(nΣA*C-ΣAΣC)/( nΣC-(ΣC)) (2)a=(ΣA/n)-b*(ΣC)/n (3)式中:A为吸光度，C为相对浓度，n为总的测定点数。

2.6应符合标准的要求:线性范围不小于2.0，各测定值的相对偏移不大于?5,。

全自动生化分析仪7600标准化操作程序文件单位：山东省平度市人民医院部门：检验科生化室文件编号： SHJW20110310版本：第二版批准实施日期： 2011年03月10日有效期：一年复审计划：每年进行复审,测定系统发生变化时需进行修订编写者：张关磊审批者：张建军保管者：张建军修订记录：全自动生化分析仪7600标准化操作规程1、操作流程开机检查→打开电源→水源→仪器状态确认→试剂准备→校验与质控测定→一般样品测定→复查样品测定→急查样品测定→仪器状态测定→结束操作→关闭电源、水源→关机检查。

2、基本使用流程2．1开机检查接通电源前需进行开始工作检查，如加样机构、试剂分注机构、反应容器清洗机构、各种清洗液量的检查。

操作部检查、轨道的检查。

样品针、试剂针有无脏物附着、是否弯曲。

反应容器清洗喷嘴和试剂吸量器是否有漏气和气泡等。

2．2打开水源、电源此法只对不使用定时器的仪器说明。

(1)打开水源开关和纯水机电源，水压要求0.5-3.5Kgf/cm2，电传导率为1us/cm以下。

(2)打开样品供给部左侧的电源开关（绿色按钮），为了使试剂藏库工作，分电盘的开关通常是开着的。

仪器显示初始画面并自动进行初期动作。

所有指定准备工作进行完呈待机状态。

2．3仪器状态确认（1）报警确认：仪器发生报警时，触摸“报警”（Alarm）键，显示报警窗口，显示详细说明和处理方法，按处理方法进行处理。

（2）流路内气泡的确认：若发现流路内有气泡，则触摸实用工作键(Utility)键、维护(Maintenance)键，显示维护保养画面。

触摸维护“排气”后，按“实行”(Select)键。

（3）吸光度的确认：检查吸光度值，确认检查值在允许范围内。

A.触摸“Maintenance”键，维护画面打开。

B.触摸“Maintenance”键，“光度计检查”键后，按“实行”(Select)键。

（4）反应槽温度的确认：A.触摸主菜单的观察(System Overview)键，观察窗口打开。

全自动生化分析仪试剂存在的问题及解决方法1 优质的仪器用水优质的仪器用水是使用好检验试剂的一个十分重要环节之一。

因为测定离子类的项目：比如铜、铁、锌、钙、Mg、磷。

这些项目在使用过程中，仪器用水的质量相当重要，虽然现在一般医院的生化仪都带有制水系统，但制水系统基本都是制备去离子水，离子交换树脂在使用一段时间后交换能力明显下降，需要定期进行更换，否则制备的水离子含量多，电导率偏高。

使用含离子超标的水冲洗仪器，直接影响检验结果。

再如血氨、二氧化碳项目，如果水质不好，仪器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，则检测该项目的结果也会受到严重的影响。

还有如果血清中含有GLDH，而仪器用水存在氨时，可消耗NADH，使利用NADH的酶联连续监测法结果偏高。

解决办法：定期监测水质，当仪器用水的电阻小于1．0MQ时要更换离子交换树脂或活性炭。

2 标本的及时分离及测定标本的及时分离及测定是用好检验试剂的首要环节因为凡是利用NADH转化为NAD 变化率来检测其物质含量的试验都或多或少受到血液存放时间的影响。

原因是全血存放时间越长，红细胞利用血清中的糖进行无氧酵解产生丙酮酸，丙酮酸使NADH转化为NAD ，这样使测定结果假性升高。

解决办法：①作好与临床的沟通，对抽血人员和标本运送人员(传递人员)进行培训；②及时分离血清并及时检测；③也可将全自动生化分析仪上的延迟时间设置大于60秒，这样试剂在延迟期内消除丙酮酸的干扰，可完全避免假阳性结果的出现。

3 交叉污染3．1 生化分析仪本身的清洗问题造成的交叉污染在使用全自动生化分析仪时，仪器的交叉污染现象是引起实验结果偏离的一个原因。

由于全自动生化分析仪试剂针需要接触各种试剂，一般难以彻底清洗干净，所以容易造成分析项目的携带污染．而生化项目的测定往往仅需要几微升样本，试剂往往需要几百微升，尤其在没有自动冲洗程序的流动池式生化分析仪上，由于前带现象的存在，如果前一个样本为高值样本，则接后的第一个低值标本结果应慎重报告。

1 故障一1.1 故障表现在生化项目测试时，机器报错，紧急停止机器，经检查后发现加试剂2的试剂搅拌棒弯折。

1.2 故障分析根据故障现象，分析机械臂电路控制部分，此处电路由电路号电路板控制，用光电耦合器感应机械臂动作位置。

机器运行时，此处的动作位置感应光电耦合器因灰尘阻挡光线，在机械臂未行进到位的情况下，给出错误指令，致使机械臂在没有旋转到试剂杯上空的时候，就向下行进，导致搅拌棒弯折。

1.3 故障解决处理弯折的搅拌棒时要小心，以防止搅拌棒折断，搅拌棒矫正后安装上，进入维修菜单让搅拌棒旋转，观察旋转情况，调整搅拌棒角度，防止搅拌棒旋转时碰试剂杯杯壁，引起搅拌不均匀影响结果，然后①大连市皮肤病医院器械科打开机器上盖，用吹气球和无纺布擦拭控制搅拌棒运行的光电耦合器的感应端后运行恢复正常。

2 故障二2.1 故障表现机器启动后，自检可以通过，运行正常，但是在反应结束打印结果的时候，有一些项目的结果为0。

2.2 故障分析分析机器故障所造成的原因有几点，首先打印出结果为０的项目的吸光度，发现其项目对应的吸光度值也为０，根据这种状态显示，排查光源灯是否稳定，这一点开机自检后光源灯并未报错，又进入维修菜单后，检查灯泡单元电压，发现电压稳定在9 V左右[1]，排除灯泡亮度问题，进而检查滤光片可见光部分，也无问题，进一步排查到数据接收部分，发现数据接收部分8芯排线插头部分接触不良，导致数据检测出来以后，无法传送到分析打印单元。

进而造成打印不出数值的情况。

2.3 故障解决更换接收传送数据用8芯排线后数据恢复正常。

3 故障三3.1 故障现象检测项目时，有些项目值重复性不好，打印出吸光度值发现有跳点现象。

以总胆为例，机器在试剂杯加入试剂，在第3点加入试剂1，在第10点测量吸光度，在第13点加入试剂2，在第14～20点测吸光度，但是该反应在第11点时吸光度值为1221，在13点时加入试剂2，吸光度值为1055，第16点时吸光度值为1015，但是在第20点测量后吸光度值反而为1023。

全自动生化分析仪常见异常结果及原因分析反应曲线波动、跳动1．几乎所有反应曲线跳动l 电源接地不良：主电源接地不良、光电盒接地不良l 反应盘进水：真空泵压力密封圈磨损、真空泵电源接触不良、管接头处漏气、管路漏气、吸废液钢管堵塞、单向阀坏、比色杯破裂l 搅拌杆不搅拌：搅拌电机坏、搅拌电机线接触不良、搅拌杆顶住比色杯底l 光路歪：灯泡装歪、比色杯装歪、温控锅装歪、透镜装歪l 试剂加入异常：试剂针堵塞、试剂注射器脱落、试剂针接头处脱落、快速接头脱落l 一次性比色杯不干净l 阳光直射反应光电系统l 外界干扰因素：如发动机，电钻等2．只有个别波长反应曲线跳动l 电源接地不良：主电源接地不良、光电盒接地不良3．只有个别项目反应曲线跳动l 试剂异常：试剂变混浊、变色或试剂放错位置试剂经搅拌后起较多气泡，挡住光路反应曲线异常1．几乎所有反应曲线形状正确，反应曲线平稳，但基本无反应l 样本未加入：样本针堵塞、样本注射器脱落、样本针接头处脱落、快速接头脱落2．个别项目反应曲线形状正确，反应曲线平稳，但基本无反应l 第二试剂未加入：第二试剂放错位置3．个别项目反应曲线形状改变，但反应曲线平稳l 试剂加入异常：试剂盘固定销钉脱落、试剂注射器漏气。

4．个别项目反应曲线形状改变，剧烈上升或下降，反应曲线或平稳，或小幅波动l 试剂异常：试剂性能差或失效，最易发生在ALP、GGT、AMY等项目上5．个别测试反应曲线形状改变，剧烈上升或下降，但反应曲线平稳l 试剂间交叉污染：最易发生在TG、TC、Glu和Bun等项目上l 样本异常：样本中含有某些药物或干扰成分，最易发生在TB、DB等项目上反应曲线正常，结果重复性差1．几乎所有项目重复性差l 样本加入异常：样本针半堵塞、样本注射器中有气泡、样本针接头处密封不严、样本针内壁阀关闭不严l 试剂加入异常：试剂针半堵塞、试剂注射器中有气泡、试剂针接头处密封不严、试剂针内壁阀关闭不严l 搅拌异常：搅拌电机坏、搅拌电机线接触不良、搅拌杆顶住比色杯底l 试剂/样本内外壁清洗不够，交叉污染大：液泵压力下降、第二级过滤器堵塞l 反应盘温度不稳定：反应盘温度波动较大2．个别项目重复性差l 试剂放错位置l 试剂异常：试剂性能差或失效，最易发生在ALP、GGT、AMY等项目上l 项目参数设置异常：样本量少、反应时间短、反应方法设置错误l 定标异常：定标液浓度设置错误、定标液失效反应曲线正常，结果为零或很低1．几乎所有项目结果为零或很低l 样本加入异常：样本针堵塞、样本注射器中有气泡、样本针接头处密封不严、样本针内壁阀关闭不严l 搅拌异常：搅拌电机坏、搅拌电机线接触不良、搅拌杆顶住比色杯底2．个别项目结果为零或很低l 试剂空白测试异常l 试剂放错位置：特别是第二试剂放错位置l 试剂失效或变色：最易发生在ALP、GGT、AMY等项目上l 试剂量少3．个别项目测试结果为负数l 试剂空白测试异常l 试剂失效或变色。

全自动生化分析仪交叉污染分析摘要：目的探讨医院检验科生化室全自动生化分析仪使用中交叉污染的鉴别、原因及对策。

方法用全自动生化分析仪进行交叉污染的分析及排除。

结果临床生化检测中交叉污染对临床结果影响较大，须采取一些预防措施。

结论在日常工作中，既要注意项目间的设置，以减少交叉污染，更要重视仪器的使用、维护、保养，及时发现问题、及时解决，从而从根本上保证结果的准确，为临床提供客观真实的诊断依据。

关键词：全自动生化分析仪；交叉污染；原因及对策；项目间设置当生化检测处于手工或半自动分析时，我们多注重标本性状(如溶血、脂血或黄疸)对结果的影响，近年来，随着医学技术的进步和迅速发展，各种全自动生化分析仪相继出现并广泛应用于临床实验室，全自动生化分析仪具有多项目、多样本的处理能力，由于共用吸样针、试剂针、搅拌棒以及比色杯，交叉污染的情况不可避免地存在[1]。

且仪器使用过程中，由于状态的改变，交叉污染会日趋严重，下面就全自动生化分析仪的交叉污染进行分析和讨论。

1 材料和方法1.1 仪器OLYMPUS2700全自动生化分析仪。

1.2 试剂葡萄糖(GLU、氧化酶法)；无机磷(P、钼酸铵方法);肌酸激酶同工酶(CK-MB、速率法)、胆碱酯酶(CHE、速率法)均由上海荣盛生物药业有限公司提供。

各项目按照试剂说明书提供的参数设置。

1.3 标本健康体检者的混合血清。

1.4 方法选择P项目为实验对象,将含有磷酸盐的项目葡萄糖、肌酸激酶同工酶、胆碱酯酶与无机P项目进行组合,取混合血清10份,按照表1中的方式1、方式2、方式3的测定顺序进行测定,观察葡萄糖、肌酸激酶同工酶、胆碱酯酶对P的影响[2]。

表1GLU、CK-MB、CHE与P进行组合设置方式方法1234567891方式1GLUP P P P GLUP P P P方式2CK-MBP P P P CK-MBP P P P方式3CHEP P P P CHEP P P P注:样本2、7检测试剂针，3、8检测样品针，4、9检测搅拌棒，5、10为对照管，GLU、P项目设置在外圈，CK-MB、CHE项目设置在内圈。

方法及参数有关的知识1、导向知识:生化分析仪的基本原理是分光光度计,或者俗称比色计.分光光度计的依据是“朗伯—比尔定律”。

朗伯—比尔定律阐述了液体吸光度与液体浓度的关系，并且引申出相应的公式及推导公式。

吸光度越高,溶液的色度也就越深,反之越浅。

当然前提是同波长下.一般来说,生化反应把吸光度增加的叫做正反应，或者叫做上升反应，色度越来越深；吸光度下降的反应叫做负反应或者下降反应，色度越来越浅.应用和维修的界限其实很难划分，一般来说操作问题属于应用，故障属于维修。

但结果问题有可能是应用问题，也有可能是故障，所以生化仪区分应用和维修我认为纯属找麻烦。

2、生化的测试方法:从分光光度计的方法来说,有透射和散射两种方法,生化仪只用到透射法，因为它只有一套光路。

贝克曼的自有机型和特定蛋白仪及免疫类血凝类设备，还增加有散射法等等.生化的测试方法只有两种，那就是终点法和速率法，其余方法都是衍生法。

而单试剂或者双试剂与否与方法关系不大，只跟衍生法有关。

2。

1 终点法顾名思义，在反应终点进行吸光度测定的方法，其衍生方法有一点终点法，对应单试剂;两点终点法对应双试剂.还有一些相关的概念:试剂空白、血清空白。

先声明一下，下面出现的所有例图都是选自日立、奥林巴斯、东芝、拜耳这些生化仪的手册，选择的目的一是有代表性，而是清晰度好，并非我个人有所倾向。

2。

2 一点终点法：也就是单试剂采用的方法.这是奥林巴斯的曲线示意图,它是R1+S方式，所有生化仪都是以样本S的加入为正式读点的开始，之前加入的试剂读点都为0或负数。

所有试剂和样本加入后，都进行搅拌。

上图中R1加入搅拌后进行第一个读点吸光度测试,读点编号为0，然后加入样本再次搅拌开始正式读点1-27。

而测试读点是27，也就是反应终点。

当然，不一定非要到最后一个读点，很多蛋白反应速度很快,几分钟就到达终点，所以根据情况设置。

奥林巴斯的机型算是一类机型,与贝克曼自有机型类似，R和S间隔读点，也正是这个特性引发了试剂空白和血清空白的应用。

全自动生化分析仪及测定试剂盒目前已在各医院检验科大量应用，但在检测病人标本时，由于存在试剂间的化学污染，检测结果的可靠性受到一定程度的影响[1-4]，这一点目前并未得到生化检验人员足够的重视。

出现问题时，往往未能追究原因，以避免相似问题的再发生。

本文结合实际，探讨试剂间化学交叉污染的来源及如何避免的对策，希望引起检验人员重视，以减少此类污染带来的结果准确性问题。

一、试剂间化学污染的来源全自动生化分析仪发展迅速，具有多项目、多样本的处理能力，检测速度不断提高，但由于共用吸样针、试剂针、搅拌棒以及比色杯，当生化仪长期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起吸附力增加、生化仪内污垢的积聚、测试顺序安排不当，且常规清洗不能有效消除交叉污染时，就会增加试剂间化学污染的可能性，引起测定结果偏高或偏低。

1．试剂针污染：目前大多数全自动生化分析仪采用双试剂检测样本，试剂R1、R2的吸取与吐出，一般分别只配有一套试剂针。

当试剂针在清洗不完全，或黏附力增加时，残留试剂可能会对下一相邻检测项目的检测结果造成影响。

2．搅拌棒污染：在试剂与样本混合后，往往需要用搅拌棒加以混匀，而搅拌棒若清洗不完全，或黏附力增加时，残留试剂及样品就会对下一相邻检测项目的检测结果造成影响。

3．比色杯污染：生化分析仪的比色杯一般是循环使用的，每个比色杯检测完毕后，进行清洗，然后继续下一个检测项目的检测。

当某个比色杯清洗不完全时，吸附在比色杯上的上一个项目的残留试剂，可能会对在这个比色杯中进行的下一个项目的检测结果造成影响。

以上3种可能的污染，以比色杯污染最为严重，因为比色杯最难以清洗干净，且在实际工作中难以判断该比色杯上一测试的项目；试剂针吸量较大，亦难以清洗干净。

二、试剂间化学污染的类型试剂间化学污染的原因很多，常见的类型主要有以下几种：1．试剂成分的直接污染：上一个测定试剂中含有下一个测试所要测定的物质，直接干扰下一检测的测定结果。

如：淀粉酶（AMY）试剂中含有较高浓度的钙（Ca2+）；碱性磷酸酶（ALP）（IFCC法）、肌酸激酶（CK）（NAC法）、肌酸激酶-MB（CK-MB）（NAC法）、二氧化碳（CO2）（PEPC法）、AMY（EPS法）、三酰甘油（TG）等试剂中含有镁（Mg2+）；葡萄糖（GLU）（氧化酶法）、总蛋白（TP）与酸性磷酸酶（ACP）试剂中含有较高浓度的钾（K+）；胆碱酯酶（ChE）、总胆固醇（CHOL）、GLU (GOD法)、尿酸（UA）(尿酸酶法)、乳酸脱氢酶（LD）(IFCC法)、羟丁酸脱氢酶（HBDH）(DGKC法)等试剂中可能含有磷酸缓冲液；CHOL、TG试剂及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂中可能含有胆酸钠；丙氨酸氨基转移酶（ALT）(IFCC法)、天冬氨酸氨基转移酶（AST）(IFCC法)试剂中含有高活性的LD；以上试剂的交叉污染就分别会对Ca2+、Mg2+、K+（紫外酶法）、磷（P）、总胆汁酸（TBA）及LD的测定结果造成干扰。

一．基本名词1.单试剂：只有R1试剂，如：Ca，Mg，ALB，TP，当样本加入到试剂中时，即刻开始反应。

2.双试剂：有Ｒ1,R2配套两种试剂，样本首先加入到试剂R１中参与反应，育温后再加入试剂R2，进一步反应来达到检测的目的。

通常Ｒ1与样本反应，达到去除干扰或为加入Ｒ2后的进一步反应做准备的目的。

3加样模式：不同的仪器有不同的加样方式：3.1双试剂加样模式：R1加入后，加入样本（S），开始为下一步加入R2后的反应作准备，再经一定的时间后，加入R2，开始进行检测所需要的反应。

3.2单试剂加样模式：先加入R1，再加入R2，经过一定的时间再加入样本，再进行检测反应。

4．单试剂与双试剂的界限：在某些双试剂，由于各试剂成份及所参与反应的目的的不同，有的双试剂可以事先混成单试剂，但有的双试剂只能用双试剂通道来做。

如：4.1 R1用来去干扰的目的：R1试剂用来清除血清中的干扰物，防止R2与血清中的干扰物反应。

如化学氧化法的TBIL，DBIL，CR（酶），LDL-C等。

4.2 单试剂不稳定：R1,R2中的成份相互影响发生反应,使试剂中色源提前反应,引起起始吸光度及吸光度变化率的改变等。

（CHE,GGT）4.3仪器自身特点：同时试剂的应用也要考虑到检测仪器的特点，因为有的仪器（如半自动，手工）它没有双试剂的加样模式，那它只能用单试剂来做，一般双试剂加样模式的仪器也可以单试剂加样来做，但是单试剂加样的仪器就不一定能做那些只能双试剂模式的检测。

5.标准品：实际上是一个或几个已知浓度的样本，它在检测中作为一个或几个参照物，使以后的所有的检测都与之比校，以此来得到其它样本的浓度。

6.标准品的定义：6.1国际标准品由WHO或相应组织标定的，用肯定的、公认的、准确的物理或化学方法测定的定值材料。

6.2国际生物学活性标准品根据生物学反应由WHO或相应组织标定的国际活性单位的材料。

6.3参考标准血清国家标准化组织根据国际标准化生产的法定材料。