miR-181a-5p靶向Kras对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的调控作用

专利名称：miR-181a-5p基因在非小细胞肺癌中的应用专利类型：发明专利
发明人：金由辛,韦嘉励,马中良,李艳利,赵波涛
申请号：CN201410107043.X
申请日：20140321
公开号：CN104164477A
公开日：
20141126
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及miR-181a-5p基因在非小细胞肺癌中的应用。

本发明发现一种抑制非小细胞肺癌生长的微小RNA，miR-181a-5p与ATG2B基因mRNA的3′-UTR互补，可能抑制靶基因mRNA的翻译或直接降解靶基因的mRNA。

在HEK293T细胞中利用荧光素酶报告基因分析，初步验证了ATG2B是miR-181a-5p的靶基因。

接着在A549细胞中过表达miR-181a-5p，发现miR-181a-5p显著下调ATG2B的mRNA水平。

所公开的为在A549细胞系中ATG2B是miR-181a-5p的靶基因的首次报道，该发明利用miRNA为非小细胞肺癌提供药物靶点方面提供了一定的应用价值。

申请人：上海大学
地址：200444 上海市宝山区上大路99号
国籍：CN
代理机构：上海上大专利事务所(普通合伙)
代理人：陆聪明
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Mir-181a通过靶向c-fos基因抑制肺癌细胞迁移林述琨;温吉海;王耀鹏【摘要】目的：利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-181a的直接靶基因c-fos,探讨miR-181a促进肺癌细胞迁移的可能机制.方法：Transwel小室检测miR-181a对肺癌细胞迁移的影响；应用生物信息学预测软件TargetScan对miR-181a 靶基因进行预测,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-181a对靶基因c-fos的3'UTR 区的调控作用；通过Western blot方法检测miR-181a对c-fos 蛋白表达的影响；结果：A549细胞转染miR-181a后,细胞的迁移能力降低；生物信息学预测c-fos是miR-181a的靶基因,构建融合c-fos的3'UTR区表达质粒pMIR-c-fos,在此基础上对c-fos的3'UTR“种子区”进行定点突变.双荧光素酶报告基因分析表明miR-181a 能够作用于c-fos的3'UTR. Western blot方法进一步证实c-fos是miR-181a的靶基因.结论：Mir-181a可能通过靶向c-fos基因,抑制肺癌细胞迁移.【期刊名称】《药品评价》【年(卷),期】2012(000)036【总页数】4页(P28-30,34)【关键词】肺癌;miR-181a;迁移;A549细胞【作者】林述琨;温吉海;王耀鹏【作者单位】大连普兰店市中心医院病理科;普兰店市中心医院肺外科;大连普兰店市中心医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R735.1MicroRNA(miRNAs)是一类在生物体内普遍存在的单链非编码蛋白质小分子RNA，研究表明，它们可以特异性识别靶基因mRNA的3’UTR并与之结合，引起靶mRNAs发生降解或翻译受到抑制[1,2]。

近年来研究发现，miRNA在多种人类肿瘤的发生、发展中起癌基因或抑癌基因的作用[3,4]。

214 2016, Vol.37，No.21葚品科学※营养卫生羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖和诱导细胞凋亡研究李谣s陈金龙s王丽颖s张月巧s吴素蕊2，明建ia*(1.西南大学食品科学学院，重庆 400715; 2.中华全国供销合作总社昆明食用菌研宄所，云南昆明 650223;3.西南大学国家食品科学与工程实验教学中心，重庆 400715)摘要：以黑脉羊肚菌多糖为原料，研宄羊肚菌多糖对人乳腺癌细胞M D A-M B-231 (以下简称M D A)增殖和凋 亡的影响。

结果表明：在无细胞毒性范围内，羊肚菌多糖能显著抑制人乳腺癌细胞M D A的增殖，半数有效浓度 (median effective concentration，EC50)值为0.096 mg/m L，同时人乳腺癌细胞M DA表现出多种细胞凋亡的形态学变 化。

免疫印迹检测实验结果显示，羊肚菌多糖能抑制B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2，Bcl-2)蛋白表达，促进 Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax)表达，同时增加Bax/Bcl-2蛋白表达比值，并呈现出剂量依赖效 应。

说明羊肚菌多糖能抑制人乳腺癌细胞M DA增殖，促进细胞凋亡。

关键词：羊肚菌；多糖；人乳腺癌细胞M DA-M B-231;细胞增殖；细胞凋亡Polysaccharides from Morchella angusticeps Peck Inhibit Cell Proliferation and Induce Apoptosis inMDA-MB-231 Human Breast Cancer CellsL I Yao1,CHEN Jinlong1,WANG Liying1,ZHANG Yueqiao1,WU Surui2,MING Jian13*(1.College of Food Science,Southwest University,Chongqing400715, China;2.Kunming Edible Fungi Institute,A ll China Federation of Supply and Marketing Cooporatives,Kunming650223, China;3.National Food Science and Engineering Experimental Teaching Center,Southwest University,Chongqing400715, China)Abstract:The effects of polysaccharides from Morchella angusticeps Peck(PMEP)on the proliferation and apoptosis of MDA-MB-231 human breast cancer cells were investigated in this study.The results showed that PMEP could significantly inhibit the proliferation of M DA-MB-231 in the non-cytotoxic concentration range with a median effective concentration (EC50)of0.096 mg/m L.M DA-M B-231 cells also showed a series of morphological changes associated with apoptosis.Western blotting assay showed that PMEP could inhibit the expression of B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) protein,increase the expression of Bcl-2 associated X protein(Bax)and Bax/Bcl-2 ratio in a dose-dependent manner.In conclusion,PMEP could inhibit the proliferation and induce the apoptosis of MDA-MB-231 cells.Key words:Morchella esculenta;polysaccharide;MDA-MB-231 human breast cancer cell;cell proliferation;cell apoptosis DOI:10.7506/spkx1002-6630-201621036中图分类号：S567.3 文献标志码：A文章编号：1002-6630 (2016) 21-0214-05引文格式：李谣，陈金龙，王丽颖，等.羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞M DA-M B-231增殖和诱导细胞凋亡研宄[J].食品科学,2016, 37(21): 214-218. D0I:10.7506/spkx1002-6630-201621036. L I Yao,CHEN Jinlong,WANG Liying,et al.Polysaccharides from Morchella angusticeps Peck inhibit cell proliferation and induce apoptosis in M DA-MB-231 human breast cancer cells[J].Food Science,2016, 37(21): 214-218. (in Chinese with English abstract)D0I:10.7506/spkx1002-6630-201621036. 羊肚菌（M orchella esculenta (L.)Pers.，M EP)是 肚而得名，常见的羊肚菌有尖顶羊肚菌、黑脉羊肚菌、一种药食两用的真菌，因其菌盖表面凹凸不平、状如羊 褐赭色羊肚菌、粗腿羊肚菌、宽圆羊肚菌。

miR-181a在人类恶性肿瘤中作用机制的研究进展雷振伟;张瑜;张旭【摘要】microRNA(miRNA)是一组长度为20～ 25个核苷酸的非编码小RNA,通过与靶基因mRNA结合在转录后水平调控靶基因的表达.microRNAs在细胞发生发展、增殖、凋亡和分化等众多生物学过程中发挥着重要作用.研究表明,异常表达的miR-181a通过调控功能蛋白的表达水平及信号通路而与众多肿瘤的发生发展密切相关,涉及的生物学过程包括肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移、凋亡和生存.本文就miR-181a分子的基因结构、基因表达与调控、生物学功能以及与人类恶性肿瘤发生的关系的研究进展作一综述.【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2016(037)011【总页数】4页(P1204-1207)【关键词】微RNA;miR-181a;基因表达调控;恶性肿瘤【作者】雷振伟;张瑜;张旭【作者单位】解放军总医院泌尿外科,北京100853;解放军总医院泌尿外科,北京100853;解放军总医院泌尿外科,北京100853【正文语种】中文【中图分类】R733microRNA是一类长度为20～25个核苷酸、内生的非编码小RNA，通过与靶基因mRNA的3'UTR区域结合而在转录后水平负向调控靶基因的表达[1]。

研究表明，异常表达的miRNA通过调控功能蛋白的表达水平和信号通路网而与众多肿瘤的发生发展密切相关，涉及的生物学过程包括肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移、凋亡和生存[2]。

其中，miR-181家族成员miR-181a在细胞发展和分化过程中发挥着重要作用，其异常表达与肿瘤、自身免疫性疾病等密切相关。

本文就miR-181a 在人类恶性肿瘤中作用机制的研究进展作一综述。

miR-181家族共有4个成员，miR-181a、miR-181b、miR-181c、miR-181d，分别位于3条独立的染色体上，其种子区域与数以百计的mRNA互补，通过抑制结合或者激活RNA诱导的沉默复合体或促进降解的方式调控靶基因，进而参与各种生理或病理过程。

microRNA干扰抑制MTDH的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和侵袭能力的影响苏洁之;梁庆模【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2017(046)005【摘要】目的探讨microRNA干扰技术沉默异黏蛋白(MTDH,metadherin蛋白)基因表达及对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭能力的影响.方法将人工合成的针对MTDH基因的miRNA片段瞬时转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,通过Western blot法、RT-PCR法检测MTDH蛋白表达和MTDHmRNA;应用MTT检测法、划痕实验、Transwell实验检测抑制MTDH基因后对乳腺癌细胞增殖、转移、侵袭能力的影响.结果 MTDHmiRNA能有效抑制MTDH蛋白和MTDHmRNA表达,最佳抑制率分别为79.41％、80.56％ (P ＜0.05);经miRNA干扰的细胞,生长速度明显受到抑制(P＜0.05),侵袭迁移能力显著下降(P＜0.05).结论 MTDH miRNA瞬时转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞可明显抑制癌细胞中MTDH表达,沉默MTDH基因表达后可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长增殖、侵袭迁移能力.%Objective To investigate the effects of RNA interference technique silencing MTDH on proliferation,metastasis and invasion of human breast cancer cell MDA-MB-231.Methods The MTDH miRNA was transfected into Human breast cancer cell MDA-MB-231 by means of lipofectamine 2000.The silencing efficiency of MTDH was examined by RT-PCR and western blot.The influence of MDA-MB-231 cell proliferation,metastasis and invasion ability from inhibition MTDH genewas conducted by using MTT assay,scratch experiments,and Transwell assay.Results MTDH miRNA effectively inhibited MTDH mRNA and protein levels.The best inhibition rate were 79.41％ and 80.56％ (P ＜ 0.05).With miRNA interferring cells,the ability of cells proliferation was decreased (P ＜ 0.05),and cells invasive and metastasis were depressed (P ＜0.05).Conclusion MTDH expression is obviously suppressed after transfected by MTDH miRNA in MDA-MB-231 cells.The inhibition of MTDH expression from microRNA leads to significant suppression of proliferation,invasion and metastasis of breast cancer cell MDA-MB-231.【总页数】7页(P84-90)【作者】苏洁之;梁庆模【作者单位】570102海口,海南医学院附属医院乳腺胸部肿瘤外科;421001 衡阳,南华大学附属南华医院胸外科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.利用RNA干扰抑制CXCR4基因表达对乳腺癌细胞转移和侵袭能力的影响 [J], 张树成;乔雷;高红2.RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用 [J], 张帆;姜军;唐振宁;杨新华;徐琰;范林军;张毅;陈莉;周艳;陈庆秋3.RNA干扰技术抑制Galectin-3表达对三阴性乳腺癌细胞 MDA-MB-231增殖和凋亡的影响 [J], 魏杨辉;张宗明;杨莉涛;黄耀;刘娟;张卫星;吴爱国4.抑制NBS1表达对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响 [J], 华晶;王雅杰5.构建RNA干扰真核表达载体靶向抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231内的VEGF-C表达之研究 [J], 钟强;朱晨芳;戚晓亮;孙波;顾岩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

非甾体类抗炎药对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖影响的实验室研究闫晓枫;王杨;张岩【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2008(012)009【摘要】目的通过研究阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用,探讨并比较阿司匹林和塞来昔布的抗肿瘤作用.方法采用MTT法检测不同浓度的阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响.结果阿司匹林、塞来昔布单药对MDA-MB-231细胞生长均有抑制作用,表现为浓度、时间依赖性,统计学差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的阿司匹林、塞来昔布分别联合阿那曲唑后对MDA-MB-231细胞的抑制作用较单用阿那曲唑增强,亦表现为浓度依赖性,差别具有统计学意义(P<0.05).结论阿司匹林和塞来昔布均有抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用,两者分别联合阿那曲唑后有协同抗肿瘤的作用.【总页数】4页(P1089-1092)【作者】闫晓枫;王杨;张岩【作者单位】吉林大学第三临床医院,血液肿瘤内科,吉林,长春,130021;吉林大学第三临床医院,血液肿瘤内科,吉林,长春,130021;吉林大学第三临床医院,血液肿瘤内科,吉林,长春,130021【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡[J], 何朵; 吴博; 赵菊梅2.七叶皂苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231和T-47D增殖的影响 [J], 刘红梅;文钦琳;唐琳;李峰3.山苍子油对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其可能机制的研究[J], 周恩正;郭贵明;苏旭;吴春凯;左丽4.沉默UBA2对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和迁移的影响 [J], 吴明;赵玉洁;彭楠茜;陈波5.下调HOX转录反义RNA对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响 [J], 叶惠荣;张玉娟;曹茵;王西跃;吴丽华;陈桂林;陈丽娟;袁惠玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

miR-181a与乳腺癌关系的研究进展谷牧青;杨春;王利娟;Pierre Hardy;贾婵维;阮祥燕【摘要】微小RNA(microRNAs, miRNAs)是一类高度保守的非编码单链RNA,通过与靶基因mRNA的3′非编码区特异性结合,在转录后水平沉默靶基因表达,从而发挥着功能.一些研究表明miR-181a的表达与肿瘤密切相关,对肿瘤的形成、侵袭及转移起着很重要的作用.miR-181a在乳腺癌中的作用,目前还有诸多争议,一些研究表明miR-181a具有抑癌基因的作用,而另一些研究发现其具有促进肿瘤生成、转移的作用.本文就其在乳腺癌细胞中发挥作用的潜在作用机制,以及其未来临床应用可能,如作为肿瘤标志物用于早期乳腺癌诊断,评估病人化学药物治疗(以下简称化疗)敏感性,作为辅助化疗药物增强化疗敏感性药物等方面进行综述.%MicroRNAs (miRNAs) are highly conserved non-coding single stranded RNAs.miRNAs participate in fundamental biological processes and pathophysiological processes by silencing their target mRNAs expression through binding to their 3` untranslated regions (3`-UTRs).Emerging studies have shown that alterations of miR-181a levels are involved in the initiation, progression and metastasis of human cancers.Some studies have indicated that miR-181a serves as tumor suppressors, and others have revealed the oncogenic roles of miR-181a.A growing number of evidence has linked the pathological role of miR-181a to breast cancer.Here, we specifically summarize the various published data of the links between miR-181a and breast cancers, and to explain the potential clinical application of miR-181a.miR-181a may be used as a clinically diagnostic biomarkers of breastcancer for early stage diagnosis, for evaluation of the chemotherapy sensitivity, and for directing the clinical treatment in patients.【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2017(038)004【总页数】4页(P526-529)【关键词】乳腺癌;miR-181a;肿瘤标志物;诊断;化疗【作者】谷牧青;杨春;王利娟;Pierre Hardy;贾婵维;阮祥燕【作者单位】首都医科大学附属北京妇产医院生殖医学科,北京 100026;蒙特利尔大学CHU-saint-Justine医院药理学系研究中心,蒙特利尔 H3T 1C8,加拿大;首都医科大学附属北京妇产医院妇科内分泌科,北京 100026;蒙特利尔大学CHU-saint-Justine医院药理学系研究中心,蒙特利尔 H3T 1C8,加拿大;首都医科大学附属北京妇产医院生殖医学科,北京 100026;首都医科大学附属北京妇产医院妇科内分泌科,北京 100026【正文语种】中文【中图分类】R737.9微小RNA(microRNAs，miRNAs)是近年来发现的一类内源性非编码调控的单链RNA，长度约为22个碱基，广泛存在于动物和植物中。

非小细胞肺癌中miR-181a-5p功能的研究.总结1.071miR-181a-5p在非小细胞肺癌中的功能研究[摘要] 目的探索miR-181a-5p 的抑癌机制，并探讨它作为标志物用于检测肺癌细胞的可行性。

方法：采用CCK8（Cell Counting Kit-8）方法和流式细胞术分别检测细胞增殖情况和细胞凋亡情况; 蛋白质印迹技术检测miR-181a-5p对靶蛋白表达的影响；细胞划痕和Transwell实验检测miR-181a-5p对细胞株的运动抑制；利用双荧光报告基因实验对靶基因进行验证。

结果：结果显示miR-181a-5p抑制可A549细胞株的增殖，并且促进细胞的早期凋亡；A549细胞的运动受到miR-181a-5p显著的抑制；miR-181a-5p 直接作用于靶基因的3′UTR行使调控。

结论：miR-181a-5p可显著抑制NSCLC (non-small cell lung cancer) 细胞生物进程，发挥抑癌基因的作用。

[关键词]miR-181a-5p；增殖；迁移；凋亡；非小细胞肺癌RHsSnpv5CNA8DKI。

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[中图分类号] [文献标识码]Analysis of miR-181a-5p function in Non- small cell lungcancer F0CTN4iZQDLRnFX。

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[Abstract]Objective The aims of this study were to explore the biologic functions in NSCLC of miR-181a-5p and to investigate whether it can be a marker for detecting NSCLC. Methods1.To examine the cell growth and apoptosis, CCK8 and flow cytometry were applied ,respectively. 2. Todetermine the expression effects of miR-181a-5p, western blot blot was used.3. Transwell assay and wound healing assay. 4. Plasmid constructs and luciferase reporter assay.Results 1. miR-181a-5p inhibited cell proliferation and promoted cell apoptosis in vitro.2. Transwell assay and wound healing assay showed that miR-181-5p negatively regulated cell migration in vitro.3. miR-181a-5p down-regulated Kras expression by directly targeting its 3′-UTR 5. Kras is inversely correlated with miR-181a-5p expression in NSCLC. Conclusion miR-181a-5p might provide a potential treatment approach for NSCLC patients. Oj7eBtc39pC1Xwy。

㊃综述㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2023.16.026m i R-181基因家族在临床常见疾病中的研究进展*王春芳综述,柴富ә审校右江民族医学院附属医院检验科,广西百色533000摘要:微小R N A(m i R N A)是一类小的非编码R N A,广泛存在于真核生物体内,能够在转录后通过抑制目的基因信使R N A(m R N A)的翻译或促进m R N A降解来调节基因表达㊂m i R N A已成为多种生物过程的关键调控因子,各种调控机制不仅控制着它们的表达,还控制着它们的活性和生物利用度,这取决于m i R N A在人类相关蛋白质编码基因的潜在结合位点㊂m i R N A在免疫系统的发育和调控中也发挥着重要的作用,可以调控机体关键的细胞过程,包括细胞分化㊁血管生成和炎症反应的发生㊂现已发现很多生理过程和病理结果高度依赖于m i R N A,包括癌症㊁心血管疾病和代谢性疾病㊂其中,m i R-181基因家族在胚胎发育㊁细胞增殖㊁凋亡㊁自噬㊁线粒体功能和免疫反应等关键生物过程中发挥调节作用㊂该文综述了近年来m i R-181基因家族在临床疾病中的诊断和治疗方向及研究前沿,以期为m i R N A的临床疾病治疗提供新的思路㊂关键词:m i R-181;基因家族;生物标志物;靶标;疾病中图法分类号:R446.9文献标志码:A文章编号:1672-9455(2023)16-2416-05A d v a n c e s i n t h e s t u d y o f m i R-181g e n e f a m i l y i n c o m m o n c l i n i c a l d i s e a s e s*WA N G C h u n f a n g,C HA I F uәD e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y,t h e A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f Y o u j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t yf o r N a t i o n a l i t i e s,B a i s e,G u a ng x i533000,Chi n aA b s t r a c t:m i c r o R N A(m i R N A)i s a k i n d o f s m a l l n o n-c o d i n g R N A w h i c h i s w i d e l y f o u n d i n e u k a r y o t i c o r-g a n i s m s a n d i s a b l e t o r e g u l a t e g e n e e x p r e s s i o n a f t e r t r a n s c r i p t i o n b y r e p r e s s i n g m e s s e n g e r R N A(m R N A) t r a n s l a t i o n o r p r o m o t i n g m R N A d e g r a d a t i o n.m i R N A h a v e e m e r g e d a s k e y r e g u l a t o r s o f a v a r i e t y o f b i o l o g i c a l p r o c e s s e s,a n d v a r i o u s r e g u l a t o r y m e c h a n i s m s c o n t r o l n o t o n l y t h e i r e x p r e s s i o n b u t a l s o t h e i r a c t i v i t y a n d b i o-a v a i l a b i l i t y,d e p e n d i n g o n t h e p o t e n t i a l b i n d i n g s i t e s o f m i R N A i n g e n e s e n c o d i n g r e l e v a n t h u m a n p r o t e i n s. m i R N A a l s o p l a y a n i m p o r t a n t r o l e i n t h e d e v e l o p m e n t a n d r e g u l a t i o n o f t h e i mm u n e s y s t e m,r e g u l a t i n g k e y c e l l u l a r p r o c e s s e s i n t h e b o d y,i n c l u d i n g c e l l d i f f e r e n t i a t i o n,a n g i o g e n e s i s a n d i n f l a mm a t i o n.M a n y p h y s i o l o g i c a l p r o c e s s e s a n d p a t h o l o g i c a l o u t c o m e s h a v e b e e n f o u n d t o b e h i g h l y d e p e n d e n t o n m i R N A,i n c l u d i n g c a n c e r,c a r-d i o v a s c u l a r a n d m e t a b o l i c d i s e a s e s.A m o n g t h e m,t h e m i R-181g e n e f a m i l y h a s i m p o r t a n t r o l e s i n t h e r e g u l a-t i o n o f k e y b i o l o g i c a l p r o c e s s e s s u c h a s e m b r y o n i c d e v e l o p m e n t,c e l l p r o l i f e r a t i o n,a p o p t o s i s,a u t o p h a g y,m i t o-c h o n d r i a l f u n c t i o n a n d i mm u n e r e s p o n s e.T h i s a r t i c l e r e v i e w s t h e d i a g n o s t i c a n d t h e r a p e u t i c d i r e c t i o n s a n d r e-s e a r c h f r o n t i e r s o f t h e m i R-181g e n e f a m i l y i n c l i n i c a l d i s e a s e s i n r e c e n t y e a r s,w i t h t h e a i m o f p r o v i d i n g n e w i-d e a s f o r t h e c l i n i c a l d i s e a s e t r e a t m e n t o f m i R N A.K e y w o r d s:m i R-181;g e n e f a m i l y;b i o m a r k e r;t a r g e t;d i s e a s e微小R N A(m i R N A)是一类长约22个核苷酸的内源性非编码小R N A分子,通过与目的基因信使R N A(m R N A)的3'非翻译区(3'U T R)不完全互补配对结合,导致靶m R N A发生降解或沉默,从而在转录后水平参与靶基因表达的调控[1]㊂m i R-181具有丰富的生物学功能,参与心脏㊁肺㊁骨骼肌和免疫系统的正常生长发育[2-3],其表达异常时可与多种人类疾病的发生㊁发展相关,在心血管㊁免疫系统疾病的发生中扮演着重要的角色,但具体机制仍有待进一步研究[4-6]㊂现将m i R-181在系统性红斑狼疮(S L E)㊁白血病㊁脑卒中㊁肝癌㊁肺癌等疾病中的表达调控作用及具体机制进行综述,以期为临床治疗和预后评估提供新的方向㊂1 m i R-181基因家族的基因结构m i R-181基因家族由m i R-181a㊁m i R-181b㊁m i R-181c和m i R-181d组成,表达出8个成熟序列,分别是m i R-181a-3p㊁m i R-181a-2-3p㊁m i R-181a-5p㊁m i R-181b-3p㊁m i R-181c-3p㊁m i R-181b-5p㊁m i R-181c-5p和m i R-㊃6142㊃检验医学与临床2023年8月第20卷第16期 L a b M e d C l i n,A u g u s t2023,V o l.20,N o.16*基金项目:国家自然科学基金地区科学基金项目(81960303);广西自然科学基金项目(2021J J A140882)㊂ә通信作者,E-m a i l:c f248248248@163.c o m㊂Copyright©博看网. All Rights Reserved.181d-5p,其中m i R-181c的成熟体有22个核苷酸, m i R-181a㊁m i R-181b和m i R-181d的成熟体有23个核苷酸㊂虽然m i R-181a1㊁m i R-181a2㊁m i R-181b1与m i R-181b2前体结构不同,但成熟体序列却是一致的㊂m i R-181所有成员含有共同的5'端 种子 序列A C A U U C A,造就它们成为在进化过程中基因组结构非常保守的关键序列,且常成簇地排列在染色体上,使其碱基序列相差甚微,功能相近,因此会协同表达及发挥功能[7]㊂2 m i R-181基因家族的生物学作用m i R-181基因家族是免疫系统调节的重要调控因子,可调控T细胞和B细胞的增殖㊁分化㊁免疫应答㊁免疫耐受等生理㊁病理过程[8-9]㊂大量研究表明, m i R-181在多种疾病的病理㊁生理中发挥调控作用,其中包括炎症反应㊁自身免疫及细胞的增殖分化[8-10]㊂m i R-181a为m i R-181家族重要成员,可表达于人体组织细胞中㊂有研究表明,m i R-181a在胸腺T细胞发育和外周T细胞激活期间可以调节T细胞激活阈值,并且与老年人的抗病毒和疫苗反应密切相关[10]㊂m i R-181a和m i R-181b(m i R-181a/b)位于1号和9号染色体上,m i R-181a/b的调控机制复杂,与不同的靶基因直接相关,有研究表明,m i R-181a/b在肺癌患者的肿瘤组织和血浆中存在异常表达[11]㊂m i R-181c㊁m i R-181d2个m i R-181家族成员也能参与免疫炎症反应的发生㊂其中,m i R-181c靶向结合炎症因子白细胞介素(I L)-2的3'U T R,从而抑制C D4+T细胞的激活,参与免疫炎症反应[12]㊂目前,m i R N A在肿瘤的研究中有了很大进展,有研究表明,m i R-181a在肝癌和乳腺癌的肿瘤组织中表达异常,同时还调控了肿瘤细胞的凋亡㊁侵袭㊁增殖和分化,并参与了W n t/β-连环蛋白和转化生长因子(T G F)-β信号通路的调控[13]㊂有研究发现,上调m i R-181b可通过靶向结合炎症细胞因子C X C L1和C X C L2来抑制乳腺癌细胞的迁移[14],也可通过靶向结合S o x6来抑制肺癌细胞的增殖和分化[15]㊂以上研究表明,m i R-181家族在疾病的发生㊁发展中发挥着重要的作用㊂3 m i R-181基因家族与疾病的相关性3.1 m i R-181与S L E 多种m i R N A目前被证实与S L E的发生㊁发展密切相关[16-18],m i R-181在其发病过程中扮演重要角色㊂S L E是一种多器官受累㊁临床异质性明显㊁免疫耐受失调的自身免疫性疾病,自身抗体的产生及免疫复合物的不同脏器累积是其标志性特征,其中狼疮性肾炎(L N)是最常见的并发症㊂S L E在西方国家㊁日本的发病率和病死率有下降趋势,但在我国的形势依然严峻㊂有研究发现,m i R-181a在调节T细胞和B细胞分化及免疫应答中起着关键作用,并在S L E患者血清中存在差异表达[19]㊂A L E X A N D E R等[20]研究显示,m i R-181a通过靶向调控I L-8㊁I L-1α㊁I L-1β㊁I L-6等免疫炎症因子的表达参与S L E的病理进程㊂有研究表明,在缺血/再灌注(I/R)暴露的肾脏中m i R-181d-5p的表达下调,可以改善肾脏功能,减少细胞凋亡和炎症反应[21],然而有关m i R-181d在S L E的发生㊁发展中的作用机制仍未被充分研究㊂上述研究表明,m i R-181可能成为评估S L E病情发展的关键性标志物㊂3.2 m i R-181与白血病白血病是一种造血系统的恶性肿瘤,由于发病机制复杂,导致治疗难度较大㊂有充分的证据表明,m i R N A在白血病患者中异常表达,参与了疾病的发生㊁发展[22]㊂目前,临床药物治疗白血病不良反应明显,很多患者都存在耐药现象,所以急需发现白血病新的潜在作用机制,寻求新的治疗方式㊂V E R MA等[23]研究表明,m i R-181家族成员与I L-1β㊁T o l l样受体(T L R)介导的白血病T C L1原癌基因及免疫相关基因表达呈负相关,m i R-181a的表达水平在M1/M2型患者较M3/M4型患者细胞中明显升高㊂有研究发现,m i R-181b表达水平在慢性淋巴细胞白血病(C L L)患者体内表达下调,这可能与C L L 患者预后不良相关[24]㊂多年来,化学免疫疗法氟达拉滨-环磷酰胺-利妥昔单抗(F C R)是一线治疗症状性B-C L L患者的金标准,有研究发现,血液m i R-181c是F C R疗效的有效预测生物标志物[25]㊂此外,Z HU 等[26]研究表明,m i R-181a/b在慢性粒细胞白血病(C M L)中表达下调,且其下调与不良预后有关㊂体外动物研究发现,m i R-181a/b可以调控靶基因B C L-2㊁M C L-1和X I A P,同时B C L-2㊁M C L-1和X I A P的表达下调与白血病细胞对化疗药物的耐药有关,提示m i R-181a/b与白血病细胞对化疗药物的耐药密切相关㊂有研究发现,m i R-181d在C M L中呈过表达,通过靶向结合组蛋白去甲基化酶(R B P2)促进白血病细胞增殖[27]㊂以上研究表明,m i R-181家族参与了白血病的多个生物学过程,可以在疾病的诊断和治疗中发挥重要作用,有望成为白血病的预后评估指标㊂3.3 m i R-181与脑缺血损伤脑卒中是一种严重威胁人类健康的脑血管疾病,由于该疾病的发病因素较多,发病率高,预后差,早期预防成为疾病治疗的关键㊂目前,研究已经发现m i R-181基因家族可通过调控N F-κB信号通路参与炎症反应,而炎症反应是脑卒中的重要并发症,可见m i R-181与脑卒中的病理进程密切相关㊂目前研究发现,能量衰竭㊁兴奋性氨基酸细胞毒性作用㊁氧化应激㊁免疫反应㊁凋亡是缺血性脑卒中主要的发病机制,其缺血性炎症反应过程可能通过激活T L R来发挥炎症作用㊂研究发现,m i R-181c 通过其3'U T R末端负向调控T L R4信号的表达,抑制N F-κB的激活,进一步抑制炎症因子T N F-α㊁I L-1α和I L-1β的表达㊂m i R-181c可减少神经胶质细胞释放T N F-α,进而也减少了神经细胞的凋亡[28];m i R-㊃7142㊃检验医学与临床2023年8月第20卷第16期 L a b M e d C l i n,A u g u s t2023,V o l.20,N o.16Copyright©博看网. All Rights Reserved.181a可通过直接下调单核细胞和巨噬细胞释放的I L-1α,从而达到抗感染作用,m i R-181a从整体上能引起星状胶质细胞功能障碍㊂上述研究表明,m i R-181家族分子在脑卒中发展过程中发挥着重要的作用㊂有趣的是,目前鲜有m i R-181d与脑卒中的相关报道,可以作为研究的新方向㊂但是一种m i R N A往往存在多个作用靶点,盲目地选用m i R N A反而会不利于疾病的治疗,所以临床要依据m i R N A的功能基础实施治疗㊂3.4 m i R-181与肝癌肝癌是我国最常见的实性肿瘤,分为原发性肝癌和继发性肝癌两大类,原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,高发于东南沿海及广西地区㊂最新研究表明,肝细胞癌可以释放大量的m i R N A,m i R N A可以直接或间接地通过靶向有关蛋白来参与肿瘤调控,同时m i R N A可以改变肿瘤的微环境㊂研究发现,m i R-181基因家族m i R-181a㊁m i R-181b㊁m i R-181c和m i R-181d在肝细胞癌中的表达均明显上调,并且通过直接靶向调控细胞分化相关的转录因子C D X2㊁G A T A6及W n t信号通路抑制因子N L K的表达,达到维持肝癌细胞的特性[8],提示m i R-181有望成为治疗肝癌的分子靶标与生物标志物㊂Z H A O等[29]研究证实,高转移性结直肠癌细胞释放的富含m i R-181a-5p的细胞外囊泡通过激活肝星状细胞和重塑肿瘤微环境促进肝转移,为肝转移机制提供新的见解㊂WA N G等[30]研究发现,m i R-181b和m i R-181d高表达于被喂食无胆碱与限定氨基酸诱发的肝癌小鼠肝组织中,调控金属蛋白酶组织抑制因子-3(癌症抑制因子)的表达明显降低,同时发现m i R-181b在肝癌细胞中呈高表达,其表达水平受到T G F-β的调控,但是其作用机制尚未明确㊂W E I等[31]研究发现,肝癌细胞来源的外泌体通过m i R-181d-5p的传递和S O C S3/F A K/S r c通路在骨髓间质干细胞分化和肝癌转移中发挥作用㊂上述研究提示,m i R-181在肝癌的发生㊁发展过程中扮演重要的促癌基因角色㊂3.5 m i R-181与肺癌肺癌是全球发病率最高的癌症,大多数患者为非小细胞肺癌(N S C L C)㊂肺癌的治疗仍存在很多困难,如患者后期易出现多重耐药和癌细胞的转移㊂有研究指出,m i R N A可以作为肺癌诊断和预后的重要标志物,其中m i R-181与肺癌调控作用密切相关㊂C H E N等[32]通过微阵列表达谱检测筛选发现15种m i R N A在耐放疗N S C L C患者及非耐放疗N S C L C患者肺癌组织中存在明显差异,且发现m i R-181a的靶基因在磷脂酰肌醇3-羟基激酶(P I3K)/蛋白激酶B(A K T)信号通路㊁N S C L C信号通路等癌症信号通路中明显富集,靶向结合会对N S C L C的放射敏感性产生影响㊂有研究表明,小细胞肺癌(S C L C)患者体内m i R-181d的表达水平升高,可以靶向结合B C L-2,抑制肿瘤细胞的增殖[33]㊂Z HU等[34]进行了人肺癌细胞多药耐药性研究,发现与亲本细胞比较,耐药细胞株中m i R-181b的表达水平明显下调,且通过外源性转染过表达m i R-181b,使耐药细胞可恢复相应药物敏感性,此外,m i R-181b主要通过对B c l-2的调控而发挥作用㊂疾病的早期诊断至关重要,目前m i R N A可以对多种疾病患者进行生存预测,起到辅助治疗的作用,但m i R-181在肺癌组织中的作用机制及靶标调控仍有待进一步研究㊂3.6 m i R-181与妊娠期高血压疾病(H D C P) H D-C P是一种产科常见的综合征,是临床上发病率较高的多器官受累性疾病,由于缺乏有效的预防及治疗手段,HD C P严重危害着孕妇及胎儿的健康㊂H D C P 以高血压㊁蛋白尿㊁免疫系统失调为主要的临床特征㊂由于m i R N A在血液中表达水平较高且容易获得,所以血液中差异表达的m i R N A有望成为H D C P诊断的标志物㊂有研究发现,m i R-181b可能在H D C P诱导的心脏病中起到保护心肌的作用,有望成为新的标志物[35]㊂研究指出,m i R-181b在H D C P患者胎盘中高表达,主要作用机制是m i R-181b的3'U T R末端能与纤溶酶原激活物抑制剂1(P A I-1)m R N A结合并调控P A I-1的表达,P A I-1在血管内皮细胞及血管平滑肌细胞上表达丰富,在血管平滑肌细胞的肥大㊁增殖㊁重塑中发挥至关重要的作用,表明m i R-181b通过影响血管重塑可提高胎盘细胞的侵袭力,在H D C P的发生㊁发展中起重要作用[36]㊂有研究显示,m i R-181a 在孕妇体内表达水平升高,尤其在子痫前期孕妇体内表达水平升高更明显,可见m i R-181a的异常表达在H D C P的发生㊁发展中具有重要的参考意义㊂3.7 m i R-181与其他疾病很多前瞻性研究报道了m i R-181家族成员可能与心脑血管疾病㊁炎症反应㊁肿瘤㊁病毒感染和神经系统疾病密切相关㊂J I N等[37]研究发现,m i R-181a-2-3p在预测胃癌患者顺铂治疗获益方面有着重要的价值,靶向下调m i R-181a-2-3p 可抑制肿瘤生长,抑制顺铂介导的耐药㊂此外,顺铂联合m i R-181a-2-3p下调可能是未来顺铂耐药胃癌患者的一种有前途的治疗选择㊂有研究发现,在人表皮生长因子受体2(H E R2)阳性乳腺癌中观察到高去甲基化酶(F T O)表达,则提示着乳腺癌晚期进展,通过F T O/m i R-181b-3p/A R L5B信号通路促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移的致癌活性[38]㊂L I等[39]报道表明, G S K I P基因是m i R-181c-5p在宫颈鳞状细胞癌(S C C)中的靶基因,而G S K I P是W n t/β-c a t e n i n信号的激活剂,通过负向调节β-c a t e n i n抑制剂G S K3β, m i R-181c-5p通过抑制G S K I P的表达来减弱S i H a细胞的干细胞特性㊂m i R-181d是一种对肿瘤具有调控作用的m i c r o R N A,有研究发现m i R-181d可以通过调节胞内P I3K/A K T途径抑制胃癌细胞的增殖和转移[40]㊂以上研究均表明m i R-18的表达与多种疾病㊃8142㊃检验医学与临床2023年8月第20卷第16期 L a b M e d C l i n,A u g u s t2023,V o l.20,N o.16Copyright©博看网. All Rights Reserved.相关㊂4展望m i R N A作为一类内源性非蛋白编码基因,通过与目的基因m R N A的3'U T R不完全互补配对结合,从而精准地调控靶蛋白编码基因的表达水平,已成为后基因组时代医学及生物学领域的研究热点之一㊂尽管m i R-181在调控肿瘤㊁免疫系统及心血管等疾病发生㊁发展方面的研究已取得一定的进展,其主要研究着重于m i R-181的表达调控作用,但m i R-181如何导致其靶m R N A s抑制或沉默的机制仍未阐明,因此,有必要进行m i R-181对特定靶基因具体调控机制的研究㊂另外,m i R-181家族成员在相关疾病的动物模型或人体中发生了异常变化,但是其在人类疾病中的具体作用尚无确切的定论㊂然而,随着分子遗传学㊁分子生物学㊁人类基因组学研究的逐步深入,发现m i R-181家族在肝细胞癌㊁口腔鳞状细胞癌㊁胶质瘤㊁S L E等疾病的病理进程中扮演着重要的角色,有望成为一类新的生物标志物或治疗靶标,为临床诊断和治疗及预后提供有利的方向㊂参考文献[1]L U O B,Z HO U K,L I U F U Y,e t a l.N o v e l i n s i g h t i n t om i R N A b i o l o g y a n d i t s r o l e i n t h e p a t h o g e n e s i s o f s y s-t e m i c l u p u s e r y t h e m a t o s u s[J].F r o n t I mm u n o l,2022,13: 1059887.[2]I N D R I E R I A,C A R R E L L A S,C A R O T E N U T O P,e t a l.T h e p e r v a s i v e r o l e o f t h e m i R-181f a m i l y i n d e v e l o p m e n t, n e u r o d e g e n e r a t i o n,a n d c a n c e r[J].I n t J M o l S c i,2020,21(6):2092.[3]X I A O C,R A J E W S K Y K.m i c r o R N A c o n t r o l i n t h e i m-m u n e s y s t e m:b a s i c p r i n c i p l e s[J].C e l l,2009,136(1): 26-36.[4]P O P-B I C A C,P I N T E A S,C O J O C N E A N U-P E T R I C R,e t a l.m i R-181f a m i l y-s p e c i f i c b e h a v i o r i n d i f f e r e n t c a n c-e r s:a m e t a-a n a l y s i s v i e w[J].C a n c e r M e t a s t a s i s R e v,2018,37(1):17-32.[5]P R I C E N L,R O T L L A N N,C A N F RÁN-D U Q U E A,e ta l.G e n e t i c D i s s e c t i o n o f t h e I m p a c t o f m i R-33a a n d m i R-33b d u r i n g t h e P r o g r e s s i o n o f A t h e r o s c l e r o s i s[J].C e l lR e p o r t s,2017,21(5):1317-1330.[6]K R A U S S S,N A L A V A D E R,W E B E R S,e t a l.U p r e g u l a-t i o n o f m i R-25a n d m i R-181f a m i l y m e m b e r s c o r r e l a t e sw i t h r e d u c e d e x p r e s s i o n o f a t x n3i n l y m p h o c y t e s f r o mS C A3p a t i e n t s[J].M i c r o r n a,2019,8(1):76-85. 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miR -181a -5p 在ACS 患者血清中表达及对人HCASMC 细胞增殖迁移的调控作用、与ADAMTS1靶向关系颚璐莎1，易华2，张艳芳11 内蒙古自治区人民医院心内科，呼和浩特010017；2 内蒙古自治区人民医院病理科摘要：目的　观察微小RNA -181a -5p （miR -181a -5p ）在急性冠脉综合征（acute coronary syndrome ，ACS ）患者血清中的表达及对人冠状动脉平滑肌细胞（human coronary artery smooth muscle cell ，HCASMC ）增殖和迁移的调控作用，探讨miR -181a -5p 与血小板反应蛋白解整合素金属肽酶1（ADAMTS1）的靶向关系。

方法　采集100例ACS 患者［ACS 组，其中急性心肌梗死（AMI ）患者55例、不稳定心绞痛（unstable angina pectoris ，UAP ）患者44例］、40例冠脉造影结果阴性者（对照组）的外周静脉血，采用实时荧光定量PCR 法检测两组血清miR -181a -5p 。

取对数生长期HCASMC 细胞，分为一、二、三、四组，采用脂质体转染法分别转染miR -181a -5p 模拟物（miR -181a -5p mimics ）、模拟物阴性对照（mimics -NC ）、miR -181a -5p 抑制物（miR -181a -5p inhibitor ）及抑制物阴性对照（inhibitor -NC ），培养48 h 时采用CCK -8法测算细胞增殖能力、采用Transwell 迁移实验测算细胞迁移能力，培养24 h 时采用采用Western Blotting 法检测各组细胞ADAMTS1蛋白。

取对数生长期HCASMC 细胞分为A 、B 、C 、D 四组，A 组先后转染突变型ADAMTS1荧光素酶报告基因质粒（ADAMTS1-MUT ）、miR -181a -5p mimics ；B 组先后转染ADAMTS1-MUT 、mimics -NC ；C 组先后转染野生型ADAMTS1荧光素酶报告基因质粒（ADAMTS1-WT ）、miR -181a -5p mimics ； D 组先后转染ADAMTS1-WT 、mimics -NC ，培养24 h 时取各组细胞采用双荧光素酶报告基因实验检测各组细胞相对荧光素酶活性。

多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量与肿瘤细胞增殖、迁移的相关性刘湲;刘伟;张素芳;李妮;孙国芳【期刊名称】《海南医学院学报》【年(卷),期】2018(024)017【摘要】目的:探讨多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量与肿瘤细胞增殖、迁移的相关性.方法:选择2012年3月～2017年12月间在本院确诊并治疗的多发性骨髓瘤患者52例作为多发性骨髓瘤组,另取同期在本院进行骨髓穿刺并最后明确骨髓功能无殊的健康者36例作为正常对照组.对比两组骨髓组织中miR-181a表达量以及疾病相关增殖基因、疾病相关侵袭基因表达量的差异,采用Pearson检验评估多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量与肿瘤细胞增殖、迁移的相关性.结果:多发性骨髓瘤组骨髓组织中miR-181a的表达量高于正常对照组;骨髓组织中PCDH10、TIP30 mRNA的表达量低于正常对照组,c-maf、ADAM10 mRNA的表达量高于正常对照组;骨髓组织中Annexin2、HSP90、PIK3R1、Twist1 mRNA 的表达量高于正常对照组,TGFBI、PTEN mRNA的表达量低于正常对照组(P<0.05).相关性分析发现,多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量与肿瘤细胞增殖及迁移活力直接相关.结论:多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量异常增高,具体表达量与肿瘤细胞的增殖及迁移活力直接相关.【总页数】4页(P1607-1610)【作者】刘湲;刘伟;张素芳;李妮;孙国芳【作者单位】陕西省榆林市第一医院血液科,陕西榆林 719000;陕西省榆林市第一医院血液科,陕西榆林 719000;陕西省榆林市第一医院血液科,陕西榆林 719000;陕西省榆林市第一医院血液科,陕西榆林 719000;陕西省榆林市第一医院血液科,陕西榆林 719000【正文语种】中文【中图分类】R733.3【相关文献】1.多发性骨髓瘤患者血清lncRNA HOTAIR表达量与血清β2微球蛋白及预后的相关性 [J], 徐声鸣;沙辉;吕龙龙;黄琦;陈龙;张泽天;赵松;靳凤艳;牛丰2.骨肉瘤组织中NOV基因表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性研究 [J], 高飚3.多发性骨髓瘤患者骨髓组织中miR-181a和miR-373的表达及临床意义 [J], 刘仁涛;袁慕知;方宝枝;周一飞;余晓4.多发性骨髓瘤患者骨髓组织中miRNA-181a、miRNA-373的表达及相关性分析 [J], 王娴婷;郑良达;解晶;江文华5.多发性骨髓瘤骨髓组织中C-MYC基因表达与预后的相关性研究 [J], 张叶华; 许峰; 吕兰芳; 许长庆; 蔡桐; 陈欣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

第 49 卷第 4 期2023年 7 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.4Jul.2023DOI：10.13481/j.1671‐587X.20230403miR-181a-5p和BACH2表达对白血病CCRF-CEM细胞凋亡和侵袭的影响王旭颖, 荆明箴, 余谨, 付荣, 杨茹（湖北省武汉血液中心检验科，湖北武汉430030）［摘要］目的：探讨微小RNA-181a-5p （miR-181a-5p）靶向BTB与CNC同源基因2（BACH2）对急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞凋亡和侵袭的调控作用，并阐明其作用机制。

方法方法：体外构建BACH2过表达重组质粒（overExpBACH2）、miR-181a-5p inhibitor和inhibitor-NC，转染人ALL T淋巴细胞CCRF-CEM，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和免疫荧光染色检测转染效果。

将CCRF-CEM细胞分为对照组、inhibitor-NC组、miR-181a-5p inhibitor组、BACH2过表达（overExpBACH2）组、miR-181a-5p inhibitor+空载体（EV）组和miR-181a-5p inhibitor+ overExpBACH2组。

CCK-8法检测各组细胞增殖活性，流式细胞术检测G2期细胞百分率和细胞凋亡率。

Western blotting法检测各组细胞中细胞周期蛋白D3（CyclinD3）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）蛋白表达水平，Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数，RT-qPCR法检测各组细胞中基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶14（MMP-14）和BACH2 mRNA及miR-181a-5p表达水平。

《鬼臼苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用及其作用机制的研究》篇一一、引言三阴性乳腺癌（TNBC）是一种恶性程度高、预后较差的乳腺癌亚型，因其缺乏有效的治疗靶点而成为乳腺癌治疗的难题。

近年来，天然药物在抗癌治疗中的潜力逐渐受到关注，其中鬼臼苦素作为一种具有抗肿瘤活性的化合物，其对三阴性乳腺癌的治疗效果尤其引人关注。

本研究旨在探讨鬼臼苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用及其作用机制。

二、材料与方法1. 材料鬼臼苦素、MDA-MB-231细胞株、DMEM培养基、胎牛血清、MTT试剂等。

2. 方法（1）细胞培养与处理：将MDA-MB-231细胞在DMEM培养基中培养，并分别用不同浓度的鬼臼苦素处理细胞。

（2）细胞增殖实验：采用MTT法检测鬼臼苦素对MDA-MB-231细胞增殖的影响。

（3）流式细胞术：检测细胞周期、凋亡等相关指标。

（4） Western blot：检测相关蛋白的表达情况。

三、实验结果1. 鬼臼苦素对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用实验结果显示，鬼臼苦素能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖，且随着药物浓度的增加，抑制作用逐渐增强。

2. 鬼臼苦素对MDA-MB-231细胞周期的影响流式细胞术结果显示，鬼臼苦素能将MDA-MB-231细胞阻滞在S期，并降低S期细胞比例，同时增加G0/G1期细胞比例。

3. 鬼臼苦素诱导MDA-MB-231细胞凋亡的作用流式细胞术检测显示，鬼臼苦素能显著诱导MDA-MB-231细胞凋亡，并呈剂量依赖性。

4. 鬼臼苦素作用机制的相关蛋白表达情况Western blot结果显示，鬼臼苦素能上调p53、p21等抑癌基因的表达，同时下调Bcl-2等抗凋亡蛋白的表达，从而发挥其抗肿瘤作用。

四、讨论本研究表明，鬼臼苦素能显著抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖，其作用机制可能与以下几个方面有关：一是通过阻滞细胞周期于S期，降低S期细胞比例；二是通过诱导细胞凋亡，增加凋亡细胞比例；三是通过上调抑癌基因的表达和下调抗凋亡蛋白的表达，从而发挥抗肿瘤作用。