漆酶的分离纯化及其应用研究

烟台师范学院学报（自然科学版）　Ｙａｎｔａｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｊｏｕｒｎａｌ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　

，一＋’　‘、　÷综述÷　一一．．　疏水色谱法及其在生物大分子　

分离纯化中的应用　

王　云　，常　玲　，吴金男　

（常熟高等专科学校．１．生化系；２．人事处；江苏常熟２１５５００）　

摘要：综合评述了疏水相互作用色谱法（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＩＣ）的理论　

及其在生物人分子分离纯化方面的研究进展．　关键词：疏水相互作用色谱法；分离纯化；生物大分子　

中图分类号：０６５８；ＱＳ１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４—４９３Ｏ（２ＯＯ２）０２—０１３５—０６　

在生物工程下游技术中通常需要从复杂的混合体系中分离提纯生物活性物质．色谱　

法因其具有较高的分辨能力而成为一种主要的分离手段（如凝胶过滤色谱法、离子交换色　

谱法、亲和色谱法和疏水相互作用色谱法等）．其中，疏水相互作用色谱法（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ　ｉｎ—　

ｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＩＣ）是利用蛋白质表面疏水性区域与固定相上疏水性配基相　

互作用力的差异，将不同蛋白质组份分离开来．与离子交换色谱法、亲和色谱法相比，疏水　

相互作用色谱法中，蛋白质与固定相的相互作用力较弱，蛋白质活性在色谱分离过程中不　

易丧失ｕ］．因此，自１９７２年文［２］成功地利用疏水相互作用色谱法分离纯化糖原磷酸化酶　

以来，疏水相互作用色谱法得到了广泛地应用．近几年来，该法在研究蛋白质的折叠机理　

和结构等方面也有重要的应用　“Ｊ．　

１　疏水相互作用色谱法的原理　

和其他色谱方法一样，疏水相互作用色谱法是利用样品中各组份与色谱填料上配基　

相互作用力的差异，在洗脱时由于各组份移动速度的不同而达到分离的目的．配基通常是　

一些疏水性基团，如丁基、苯基等．蛋白质表面多由亲水性基团组成，也有一些由疏水性较　

ｅ零　纸　

漆酶在造纸工业中应用的研究进展　

桑益洲　王飞　石淑兰　（天津科技大学１６８信箱３００２２２）　

……………＿。……一…－　摘要…………－－……－－－……．　

本文主要讨论了漆酶在造纸工业中应用的研究进展，探讨了漆酶在纸浆漂　：　白，纤维改性，纸浆脱墨等方面应用的研究进展。　：　

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漆酶（Ｌａｃｃａｓｅ．ＥＣ　１．１０＿３．２）又称酚酶　（Ｐｈｅｎｏｌａｓｅ），是一类含铜多酚氧化酶。漆酶能　催化多酚、多氨基苯等底物使其氧化。早在　

１８８３年Ｙｏｓｈｉｄｏ发现漆树分泌物中的一种蛋　

白质可催化漆的固化过程，１８９４年Ｂｅ￣ｒａｎｄ　将这种蛋白质命名为漆酶。漆酶不仅存在于　

漆树的分泌物中，而且存在于多种植物、昆虫　和高等真菌中。其中最主要的产漆酶者是担　

子菌纲中的白腐菌类。不同来源的漆酶具有　不同的催化性质，即使是相同来源，比如同一　

白腐菌菌种，可分泌多种具有不同性质的漆　酶组分，包括氧化能力，酶蛋白分子量，最适　

ｐＨ值、底物的专一性等等，因此所起的作用　是各不相同的。　造纸工业是我国和世界经济的重要支柱　产业之一，随着国家经济的迅速发展，对纸的　

・收稿日期：２００６—４—１０　需求迅速增加。与所有工业的工艺发展相同，　

造纸的工艺过程也在不断地创新发展。在造　纸工业的各种新技术中，漆酶在造纸工业中　

的应用具有很大的优势和潜力，呈现了良好　的前景。　１　漆酶在纸浆漂白中的应用　

漆酶是一种含铜的酶蛋白，它的氧化还　原势较低，只能氧化降解酚型的木素结构单　

元，而不能氧化降解在植物纤维木素结构中　占主要的非酚型单元。自１９９０年报道漆酶在　

传递电子的介体（ＡＢＴＳ）帮助下具有氧化非　酚型结构的木素模型化合物以后，１９９４年，　

一项称之为Ｌｉｇｎｏｚｙｍ或ＬＭＳ生物漂白专利　技术的问世，使漆酶漂白成为生物漂白研究　的热点。一般认为，在漆酶／介体脱木素过程　存在一个氧化还原循环（见图ｉ），即漆酶氧　化介体形成小分子化合物自由基，并扩散到　

３０　微生物学杂志　２００８年７月第２８卷第４期ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ　Ｊｕｌｙ　２００８　Ｖｏ１．２８　Ｎｏ．４　

黑曲霉Ｔｘ－７８耐酸性　淀粉酶的分离纯化及其性质研究　

李　勃，党　永，马　瑜，陈颖怡　

（陕西省微生物研究所，陕西西安７１００４３）　

摘要从酒曲中选育得到产耐酸性ｄ一淀粉酶的嗜酸性黑曲霉菌株Ｔｘ・７８，经酒精沉淀，ＣＭ５２和ＤＥ５２纤维　

素离子交换层析对该酶进行纯化，通过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ检验其纯度并测得其分子量为７４　ｋｕ。该耐酸性Ｏｔ－淀粉酶　

具有显著的热稳定性及酸稳定性，其最适反应温度与ｐＨ分别为７０℃和ｐＨ　４．０。当反应温度低于６０℃时，　该酶在ｐＨ　４．Ｏ条件下可保持稳定活性达３　ｈ以上。ｃａ“、Ｂａ“对提高酶活力具有明显作用。薄层层析表明　

该酶制剂水解淀粉最终产物主要为麦芽糖和葡萄糖。　

关键词　黑曲霉；耐酸性ｄ一淀粉酶；纯化；性质　

中图分类号Ｑ５５　文献标识码Ａ　文章编号　１００５—７０２１（２００８）０４—００３０一Ｏ５　

Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　Ａｃｉｄ．．Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　

ａ－Ａｍｙｌａｓｅ　ｆｒｏｍ　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　

ＬＩ　Ｂｏ，ＤＡＮＧ　Ｙｏｎｇ，ＭＡ　Ｙｕ，ＣＨＥＮ　Ｙｉｎｇ—ｙｉ　

（Ｓｈａａｎｘｉ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．Ｉｎｓｔ．Ｘｉ’∞７　１００４３）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｎ　ａｃｉｄ　ｓｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ａｃｉｄ—ａｃｔｉｖｅ　Ｏｔ—ａｍｙｌａｓｅ（ＡＳＡＡ）ｗａｓ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｆｒｏｍ　ａ　ｎｅｗｌｙ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｉｃ　Ａｓｐｅｒ—　

ｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　Ｔｘ－７８　ｆｒｏｍ　ａ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｒ’Ｓ　ｙｅａｓｔ　ｗｉｔｈ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ，ＣＭ５２　ａｎｄ　ＤＥ５２　ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ　ｉｏｎ・ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｃｈｒｏｍａ—　

微生物分离纯化技术及其应用

摘要：微生物的分离纯化技术是进行微生物学研究的基础。本文介绍了微生物学中常用的传统分离纯化技术并且分析了其所存在的问题，综述了近年来涌现微生物分离纯化的新技术、新方法，并对其今后的发展趋势作了展望。

关键词：微生物；分离；纯化

Abstract: The microbial separation and purification technology is the basis

of

microbiological studies. The traditional separation and purification technology

in

microbiology and its problems of existence was described in this paper. The

new

methods and new technologies of microbial separation and purification emerged

in

recent years were summarized .Then its development trends in the future

was

prospected.

Key words：microorganism; separation;purification

0前言

在地球上，生活着各式各样的生物，大多数生物体形较大，肉眼可见，但还存在着一类体形微小﹑数量庞大、肉眼难以看见的微小生物。微生物虽然微小，“看不见”“摸不着”，似乎感到陌生，但它与我们人类却有着非常密切的关系[1]。由于每种微生物有不同的形态和生理特性，他们在自然界的作用和对人类的影响也必然有差异。人们要想观察、研究和利用某一种微生物，或者大量培养某一种微生物，就必须事先将它从各种微生物混生的环境中分离开来，获得纯培养物[2]。所以，微生物的分离纯化技术是一项十分重要的技术，是进行微生物学研究的基础。