临床分子生物学检验技术

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第1～6章

1、现代分子生物学的开端：1953年，Watson和Crick提出了DNA双螺旋结构，标志着现代分子生物学的兴起，为揭开人类生命现象的本质奠定了基础。

2、临床分子生物学检验：是分子生物学技术在临床检验诊断应用中发展起来的，以疾病为中心、以生物分子标志物为靶标的新一代临床检验诊断技术，是临床分子生物学的重要组成部分。

3、应用到临床的分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物。

4、分子标志物：是指可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质（多肽）、代谢产物等生物分子，是生物标志物的一种类型。

5、核酸分子标志物包括：基因突变，DNA多态性，基因组DNA片段，RNA和循环核酸等多种形式。

6、DNA一级结构（直径，两个碱基之间的距离，一个螺距，一个螺旋有多少个核苷酸）：DNA一级结构就是指各核苷酸单体沿多核苷酸链排列的顺序。

7、DNA二级结构（右手螺旋—B型最常见，左手螺旋—Z型）：DNA的二级结构是双螺旋结构，主要特征是①主干链反向平行：DNA分子是一个由两条平行的脱氧多核苷酸链围绕同一个中心轴盘曲形成的右手螺旋结构，两条链行走方向相反，一条链为5’→3’走向，另一条链为3’→5’走向。磷酸基和脱氧核糖基构成链的骨架，位于双螺旋的外侧；碱基位于双螺旋的内侧。碱基平面与中轴垂直。②侧链碱基互补配对：两条脱氧多核苷酸链通过碱基之间的氢键连接在一起。DNA双螺旋的直径为2nm，一圈螺旋含10个碱基对（一个螺旋有20个核苷酸），每一碱基平面的轴向距离为0.34nm，故每一螺距为3.4nm，每个碱基的旋转角度为36°。

8、DNA三级结构（真核生物DNA三级结构是染色质或染色体）：DNA双螺旋进一步盘曲形成更加复杂的结构，称为三级结构。超螺旋是DNA三级结构的最常见的形式。

临床分子生物学检验技术模拟练习题（附答案）

一、单选题（共100题，每题1分，共100分）

1、检测TB的实验室技术中，被认为是目前最先进的一种检测TB及其耐药性的方法是

A、PCR技术

B、荧光定量 PCR技术

C、PCR-RFLP技术

D、全自动结核杆菌检测技术

E、DNA 测序技术

正确答案：D

2、属于微小缺失综合征的不包括

A、Wilms瘤

B、着色性干皮病

C、Angelman 综合征

D、Prader-Willi综合征

E、WAGR综合征

正确答案：B

3、淋病奈瑟菌耐青霉素的分子机制与以下哪组基因有关

A、katG和inhA

B、gyrA和parC

C、penA和ponA

D、gyrA和gyrB

E、rrs和rpsL

正确答案：C

4、下列不是影响DNA复性因素的是

A、DNA浓度

B、DNA的分子量

C、温度

D、碱基组成

E、DNA 的来源

正确答案：E

5、硝酸纤维素和 PVDF膜结合蛋白主要靠

A、疏水作用

B、氢键作用 C、离子键作用

D、盐键作用

E、酯键作用

正确答案：A

6、下列不能用于核酸转移作固相支持物的是

A、NC膜

B、尼龙膜

C、化学活性膜

D、滤纸

E、PVC膜

正确答案：E

7、有关多重PCR的描述正确的是

A、同一个模板，多种不同的引物

B、相同的引物，多种不同的模板

C、多个模板，多种引物

D、引物的Tm值、反应时间和温度、反应缓冲液等尽量不一致以区分不同产物

E、同一反应内各扩增产物片段的大小应尽可能相同或接近

正确答案：A

8、Western 印迹过程中若转移<20kD的蛋白质时应采用何种硝酸纤维素膜

A、0.2μm

B、0.3μm

C、0.4μm

D、0.5μm

E、0.6μm

正确答案：A

9、双向电泳的样品制备目的不包括的是

A、还原

B、氧化

C、变性

D、去除蛋白质杂质

E、溶解

正确答案：B 10、寡核苷酸探针的Tm简单计算公式为

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随着分子生物学技术的不断发展和应用，临床分子生物学检验技术在疾病的诊断、治疗和预防中起到了越来越重要的作用。本文将介绍临床分子生物学检验技术的原理、应用和发展趋势。

一、临床分子生物学检验技术的原理

临床分子生物学检验技术是通过对人体细胞、组织或体液中的分子进行检测，以达到疾病的早期诊断、治疗监测和预后评估的目的。其主要原理包括基因检测、蛋白质检测和核酸检测。

1. 基因检测：通过对人体DNA或RNA进行检测，可以发现基因突变、重排和缺失等变异情况。这些基因变异与许多遗传性疾病、肿瘤等疾病的发生和发展密切相关。

2. 蛋白质检测：蛋白质是细胞的重要功能分子，其异常表达与许多疾病的发生和发展有关。通过检测人体组织或体液中特定蛋白质的含量和活性，可以诊断和监测疾病的进展。

3. 核酸检测：核酸是构成基因的重要组成部分，通过检测DNA或RNA的序列和表达水平，可以发现遗传病例、感染病毒和检测肿瘤等。

二、临床分子生物学检验技术的应用

临床分子生物学检验技术在医学领域的应用非常广泛，主要包括以下几个方面：

1. 遗传性疾病的诊断和筛查：通过检测患者的基因序列，可以发现遗传病例并进行早期诊断和家族筛查。

2. 肿瘤的诊断和治疗监测：通过检测肿瘤细胞的基因突变和蛋白质表达水平，可以确定肿瘤的类型和分级，指导治疗方案的选择和疗效的监测。

3. 传染病的诊断和监测：通过检测病原体的核酸，可以快速准确地诊断感染病例，并监测传染病的流行病学特征和耐药性变化。

4. 个体化治疗的指导：通过对患者基因型和表型的分析，可以为个体化治疗提供依据，选择最合适的药物和剂量，提高治疗效果和减少不良反应。

三、临床分子生物学检验技术的发展趋势

随着高通量测序技术的发展和成本的降低，临床分子生物学检验技术正朝着更快速、更精确和更便捷的方向发展。

1. 基因组学的应用：全基因组测序和全外显子组测序技术的应用将有助于发现新的致病基因和突变，为疾病的诊断和治疗提供更多的遗传信息。

(完整word)临床分子生物学检验 总

四个阶段：

一、以导致遗传病的基因突变位点为靶标，以DNA分子杂交为核心

二、以PCR技术为核心

三、以生物芯片为核心

四、以DNA测序技术为核心

广义：分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物

临床分子生物学检验靶标主要以核酸（DNA和RNA)为主

基因组DNA是临床分子生物学检验中最常用的分子靶标

病原生物基因1。菌种鉴定：PCR—测序和PCR—DNA探针杂交;缩短检测时间

2。确定病毒感染和病毒载量:明确感染源,判断病情,监测疗效

3.病毒分析:基因型变异产生不同临床症状

4。细菌耐药监测和分子流行病学调查 :随机扩增多态性DNA；指导选择治疗方案，控制病原菌的感染传播

基因变异1。致病基因的分子缺陷 2.线粒体基因突 3。肿瘤相关基因

单基因病1。致病基因结构发生了改变，影响了编码产物量和质的改变，如血红蛋白病、血友病、Duchenne肌营养不良等。

2。致病基因中核苷酸三联体重复序列发生高度扩展，如脆性X综合征、亨廷顿病、强直性肌营养不良等。

基因多态性用于：1.基因定位和疾病相关性分析2。疾病诊断和遗传咨询3。多基因病的研究4。器官移植配型和个体识别

循环游离核酸检测（包括游离DNA和游离RNA）用于：产前诊断、恶性肿瘤早期诊断、病例检测

临床分子生物学检验技术以分子杂交技术、PCR技术和DNA测序技术、芯片技术、双向电泳技术、生物信息学技术为主要技术

分子生物学检验技术可用于微生物感染的确诊、感染性病原体的分型、耐药监测。

分子生物学检验技术有利于临床上对遗传性疾病的早期预防、早期诊断、早期治疗。

重要国际生物信息中心：1.美国国立生物技术信息中心（NCBI）2.欧洲生物信息学研究所(EBI） 3。日本国立遗传研究所(DDBJ）

一级核酸数据库有GenBank、EMBL和DDBJ；

蛋白质序列数据库有SWISS-PROT、PIR、UNIPROT等。蛋白质X射线晶体三维结构数据库有PDB等.