PCR技术在临床检验中的应用
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医学信息2013年2月第26卷第2期(下半月)Medical Information.Feb.2013.Vo1.26.No.2 化。其发生的转化主要有以下几个方面:首先,经过加入大量的水、 辅料进行加热处理之后,重要巾的生物碱在质量上会发生一定的变 化;其次,对于一些含有挥发油的中药材,在经过炮制之后,能够将 挥发油所产生的副作用降低或者去除;再者,加入酒之后,有利于煎 tP,中药材中的苷类成分,而采用密炙的方法则可以促进苷类物质中 苷元的溶解,这样子有利于最大程度吸收有效成分,以促进疗效的 提高。最后,经过炮制,可以将鞣质溶解在乙醇或者水中,在加热的 情况下则会产生胶状容易。同时,中药炮制会影响药物的临床效果, 其会受到炮制方法差异的影响,同时也会受到辅料种类和量的影 响,因此,一般来说,当炮制方法不一样的时候,药物所起到的治疗 效果也是不大一样的。经过炮制,中药中各种有效物质很快能够溶 解}H来,且保存比较容易,能够更好发挥药效。在炮制过程中,应保 证中药具有一定的比例,以确保疗效的完全发挥。 在本研究中,观察200例患者服用经过炮制的药物之后的效果, 结果显示,四组患者的治疗效率都比较高,尤其是含苷类的中药,其 治疗总有效率达到了98%,因此,在中医理论的指导基础上,进行中 药炮制,实现对中药材的二次加T和处理,将其应用在疾病治疗巾, 能起到不错的疗效,且经过炮制,能大大降低药物中潜藏的毒性,减 少患者不良反应,值得在临床中推广应用。 参考文献: 【1】赵志欣,邵景梅浅谈炮制对中药成分及疗效的影响Ⅱ】.中国实用医药,2009,3 (16) [21-6秀红中药炮制对 晦床疗效的影响叭.中国社区医师:医学专业半月刊, 2010,12(14) I3]路国红,李艳红中药炮制增效的探讨UI.中国现代药物应用,2010,12(1). 编辑/孙杰 PCR技术在三种男性性病检测中的应用 鲜胜 f5-@大学第一临床医学院湖北省宜昌市中心人民医院检验科,湖北宜昌443003) 摘要:目的研究临床男性性传播疾病(STD)中三种常见病原体的感染规律、发患者群及混合感染情况,为指导临床诊断和用药提供依据。方法 采用棉试子获取620例男性尿道口分泌物.采用PCR技术检测分析患者分泌物,主要使用针对三种常见病原体淋病奈瑟茵(NG)、沙眼衣原 体(CT)、解脲支原体(uu)的试剂进行检测,同时重点观测两种以上病原体混合感染规律。结果所有患者经PCR检测发现阳性检出率最高 的三种病原体为解脲支原体(UU)39.76%、淋病奈瑟菌(NG)35.54%,两种病原菌均好发于2l ̄30岁男性人群;沙眼衣原体(CT)29 03%,好发于 3l ̄40岁男性人群 其中混合感染UU+NG组合阳性率34.12%,略高于CT+UU、NG+CT混合感染率33 89%、28.35%。结论聚合酶链反应 PCR技术灵敏度高、操作快捷,在检测男性性病中具有较高的效价,对于检出UU、NG、CT等最常见病原体中阳性率高于传统检测技术,适合 临床推广应用。 关键词:聚合酶链反应;性传播疾病(STD);病原体分析 PCR技术操作简便、耗时较少,在适宜的温度和时间内,可达到 准确的分析数据,适用于l临床各个分子生物学领域的研究分析。男 性性传播疾病(STD)好发于青壮年,据流行病学研究发现,患有淋病 或非淋病性尿道炎的患者本人或配偶均有不洁或不规律性接触史 …。本实验针对确诊或疑似性病620例男性患者,采用PCR技术分析 发病规律。现将实验报道如下: 1资料与方法 1.1一般资料随机选取2009年2月~2012年10月就诊于我院皮肤 科、泌尿外科的确诊或疑似性病男性患者620例,年龄24~59.5岁, 平均年龄(31+-11.5)岁,病程1个月~7a,平均病程(7±3.5)月。患者入 院主诉见尿频、尿急,尿道口灼热感,排尿淋漓不畅,尿道口见脓性 或非脓性分泌物,部分患者有低热。所有入选病例患者本人或配偶 有不洁性接触式、未婚性接触史。 1.2标本采集嘱患者采集标本前使用消毒生理盐水冲洗尿道口3 次,医师使用消毒棉签在男性尿道口旋转蘸取分泌物5~10s,将采集 物放入试管中,混入2ml生理盐水,标本密封送检。操作流程严格遵 守PCR试剂盒使用说明。 1.3实验设备ABI 7300实时荧光定量基因扩增仪(美国ABI公司); 加样器(德国Eppendof公司);PCR反应试剂盒有上海亿欣生物科 技有限公司提供。 1.4检测步骤将标本离心、提取,三步循环数据为:变形92 ̄{2、35s; 复性95oc、40s;延伸90 ̄{2,45s 扩增条件完成后,由电脑自动分析数 据。 1.5统计学处理本实验所有统计学计算采用SPSS16.0统计学软件 完成。采集数据及资料分析采用 检验,以±标准差进行平均计数, 以P<0.05为有统计学意义。 2结果 2.1常见病原体单独治病阳性率620例男性患者中,i种病原体检 }H人数总计221例,总阳性率为35.65%。其中UU好发于21~3O岁 的人群感染率为12.20%(31/254),31~40岁感染率为9.84%(25/ 254)。NG好发人群分布率为21~3O岁感染率12.32%(26/211),31~ 收稿日期:2013-1—30 镶 40岁感染率为10.43%(22/211 o CT好发男性年龄分布为21~30岁 阳性检出率6.45%(10/155),31—40岁阳性检 率12.26%(19/155), 见表1。 表1 常见病原体单独治病阳性率
浅谈聚合酶链反应在医学检验中的应用
摘要:聚合酶链式反应(pcr)作为一种体外核酸扩增技术,具有高度的特异性和灵敏度,目前已广泛应用于医学检验中。pcr技术的应用,不但保证了检验结果的准确性和可靠性,而且节省了大量的人力物力,在临床上具有巨大的推广应用价值。本文就目前pcr技术在临床检验中的应用进行简要论述。
关键词: 聚合酶链式反应 医学检验 应用前景
1 聚合酶链反应概述
聚合酶链反应(polymerase chain reaction,pcr)是一项模拟dna体内复制过程的体外dna扩增技术,自该技术诞生以来,它在分子生物学及医学的各个领域广泛应用。它主要是由变性、复性、延伸三个基本步骤组成的循环反应。变性即利用加热的方法使双链dna解链成两股单链;复性就是降低反应温度使这两股单链按碱基互补的原则分别与引物结合成双链;最后是延伸,在dna聚合酶的作用下,按照碱基互补配对的原则合成互补链;三个步骤完成为一个循环,每完成一个循环完成一次级数倍增,极微量dna经过扩增后可以达到极易检测的水平。pcr技术其灵敏度高可以达到pg级,同时还能保证被扩增的基因片段与原基因片段保持不变。pcr技术还具有操作快速简便、易掌握,并且对标本要求不高等优点,使之广泛的应用于临床医学检验。
2 聚合酶链式反应在医学检验中的应用
经过近几十年的研究发现,人类许多疾病的发生常与体内的遗传物质的改变有关,比如体细胞的癌基因或抑癌基因突变引发各种肿瘤,性细胞的基因突变则引起各种遗传病,各种病原体可以把它们特异的基因带人人体进而引起各种传染病。由于医学技术的进步,pcr技术的出现为我们进行基因诊断奠定了基础,这将改变以往对疾病的表型进行诊断的诊断方式,使得我们可以从本质上认识和诊断疾病。尤其是在感染性疾病、肿瘤、遗传疾病等进行临床检验时,pcr技术具有无可比拟的重要性。
临床医学检验新技术 荧光定量PCR
所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
技术原理:将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得CT值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
临床应用:各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价;地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测;肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断;遗传基因检测实现遗传病诊断。检测种类涉及多种病原体,从细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体、螺旋体到寄生虫。
酶联免疫分析技术
酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)技术自20 世纪70年代初问世以来,发展非常迅速,目前被广泛应用于免疫学、医学、生物学等许多领域。ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
技术原理:酶联免疫吸附试验是一种固相免疫测定技术,其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。测定时,将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,后加入酶标抗体与免疫复合物结合,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分,最后加入酶反应底物,根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法。
根据检测目的和操作步骤不同,有双抗体夹心法、间接法、竞争法三种类型的常用方法。
PCR检测技术在常见细菌中的运用
摘要:目的:采用pcr技术对常见细菌进行检测,并观察分析其检测应用的效果。
方法:回顾分析法是对本研究中几种常见细菌的pcr检测结果进行分析、回顾的一种方法。文章采用这种方法对本研究中随机选取的1组案例进行资料分析,探讨pcr检测技术在肠道致病菌检测效果的运用,从而体现pcr技术在常见细菌中检测的优势,提高人体的生命健康。
结果:采用pcr检测技术发现肠道中常见致病细菌一般为沙门氏菌属、大肠埃希菌属与金黄色葡萄球菌等。
结论:pcr检测技术能够实时检测出细菌分布、存在的阳性率,并根据此判断患者染病的致病机制以及流行学特点,起到了有效预防、控制的效果。
关键词:pcr检测技术常见细菌运用
【中图分类号】r9【文献标识码】b【文章编号】1671-8801(2013)03-0289-02
pcr检测技术是一种聚合酶链反应,其采用变性——退火——延伸三个步骤使dna基因能够在体外实现解旋解链,类似于一种体外增加、复制形式。pcr技术在1971年由khorana提出,将dna进行变形后,与合适的引物进行杂交,并将引物利用dna聚合酶延伸出来,重复循环该过程使trna基因克隆出来。在1985年,pcr技术正式为人们所认可,由此,聚合酶链反应正式实现了细胞内的dna复制。pcr检测技术在1989年成为重大科学发明,其对于细菌的检测过程中具有重复性好、特异性强、操作简单、稳定性好等优势,逐渐成为检测常见细菌的主要方式,对于人们疾病的预防与防治具有十分重要的作用。
1一般资料与方法
1.1一般资料。本研究采用最为常见的革兰氏阴性杆菌中的埃希菌属、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌属等作为研究方向,采用pcr技术对肠道中的致病菌进行检测,并观察其结果,探讨pcr技术在常见细菌中检测的优势,提高人体预防与防治的效果。
案例资料(食物中毒、突发爆发性腹泻患者中的常见菌群):
在公共突发事件发生时,肠道致病菌是诱发患者病发腹泻、中毒等的主要原因。肠道致病菌存在的主要原因在于食品污染,而化学性污染、物理性污染以及生物性污染均属于食品污染的形式。