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九项呼吸道病毒检查一、呼吸道九联检主要检测病原体的IgM抗体,包括嗜肺军团菌(LP)、肺炎支原体(MP)、Q热立克次体(COX)、肺炎衣原体(CP)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(IFA)、乙型流感病毒(IFB)和副流感病毒1、2和3型(PIVS)。
二、采用间接免疫荧光法，主要针对九项病原体的IgM 检测。
由于机体受到抗原刺激后最早产生的抗体是IgM，但是IgM的半衰期短（约5天）若血清中特异性IgM类抗体含量增高，表明有近期感染，这有助于感染性疾病的早期诊断。
以下是关于九项病原体名称及其潜伏期和产生IgM的时间。
九项病原体IgM抗体产生时间三、临床意义嗜肺军团菌是社区获得性肺炎的重要致病菌。
在欧洲和北美军团军肺炎占社区获得性肺炎前3,4位，ICU重症社区获得性肺炎的第三位，而医院获得性肺炎的1～5 %也由嗜肺军团菌所致。
对人致病的嗜肺军团菌有16个血清型，80%军团菌肺炎有嗜肺军团菌血清Ⅰ型引起。
然而军团菌细菌培养检出率低, 只有50%左右, 目前临床上血清特异性抗体检查是常用的诊断军团菌感染的主要手段。
肺炎支原体是目前儿童呼吸道感染的重要病原体之一，占儿童肺炎感染病原体的15%左右，由于肺炎支原体传统培养难度大，单纯凭借患儿的临床症状不易确诊是否感染，支原体抗体于感染后7～9d出现，3～4周达高峰，可持续4～6月，采用血清特异性抗体检查是常用的诊断肺炎支原体感染的主要手段。
Q热立克次体可引起Q热等全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎等。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体广泛存在于世界范围内，人类是其唯一的宿主，仅1个血清型。
实验室检测方法有分离培养、血清学检测、核酸扩增技术等，目前临床主要使用血清学检测方法。
肺炎衣原体是呼吸道感染主要病原之一，人与人之间的传播方式最有可能通过呼吸道飞沫。
肺炎衣原体感染与小儿肺炎、哮喘及慢性咳嗽等呼吸道疾病密切相关。
近年来，随着人员在社会上的流动范围进一步扩大及频繁、现代化生活的享受及体育锻炼的减少、人口的老龄化、生活环境改变等因素所致，疾病发生的概率增加。
本文对呼吸道被九种病原体感染情况作一统计分析，并探讨其在人体感染后产生IgM抗体分布情况。
资料与方法2018年1月-2019年2月收治患者762例，年龄12～90岁，平均54.3岁。
标本采集：清晨空腹采集静脉血4mL，置于血清分离胶管(非可替)中，颠倒混匀3～5次，3000r/min，分离血清。
试剂与仪器：①试剂：郑州安图生物工程股份有限公司提供。
②仪器：免疫荧光显微镜、离心机。
检测方法：采用间接免疫荧光法(IFA)检测，按照试剂说明书进行，并用免疫荧光显微镜观察结果。
质量控制：质量控制10孔，除了嗜肺军团菌，载玻片上的所有抗原都是从细胞培养物中获得。
每1个病毒类病原体孔中都含1%～15%用甲醛灭活的感染细胞，无感染的细胞用丙酮固定。
九项呼吸道感染病原体IgM抗体阴性为正常，最后进行统计学分析。
结果762例九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测情况，结果全阴性582例，阳性180例，占检测数的23.6%。
阳性人群中男93例(51.7%)，女87例(48.3%)。
180例阳性结果，见表1和表2。
讨论嗜肺军团菌中人最容易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
据临床统计约10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起。
临床上军团菌感染主要有肺炎型和庞蒂亚克热型两种表现形式。
现代人们无论在单位工作，还是在自己家中和娱乐场所活动，由于大量空调的使用，加之对空调的消毒及清洁保养不到位，导致空调内产生大量的细菌，随空调的气流流动而传播给人们，易感人群易发病。
其中以军团菌较为常见。
军团菌肺炎潜伏期为2～10d，IgM抗体在感染后1周出现，并可持续存在3～6个月[1]。
肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，在季节交替时，易感人群容易发病。
特别是老年人，由于免疫力下降，也会导致肺炎支原体感染的机会增加。
九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测操作规范
一、实验目的：检测九项呼吸道感染病原体IgM抗体
二、实验原理：间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中抗体与吸
附在载玻片上的抗原发生反应。
样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。
在下一步中，抗原-抗体复合物与荧光标记素标记的抗人球蛋白反应。
用荧光显微镜观察结果。
三、实验材料：1、试剂：磷酸缓冲液、吸附剂（羊抗人IgG）、结
合物（异硫氰酸荧光素）、封闭介质（甘油缓冲液）。
2、器料：载玻片（前九孔含有抗原，第十孔为质控孔）、盖玻片、37℃恒温箱、3000rpm离心机、荧光显微镜、湿盒。
四、实验步骤：1、配制PBS溶液：1瓶PBS加1L水溶解。
2、稀释血清样本：按1:1比例稀释血清样本，即15微升血清加入15微升PBS溶液中。
3、将30微升稀释后的血清样本加入150微升吸附剂，彻底混匀，离心3000rpm离心15分钟。
4、在载玻片上每孔加入15微升吸附剂处理后的血清（离心后的上清液）。
5、将载玻片放入湿盒，37℃温育60分钟。
6、用pbs溶液缓慢冲洗载玻片后，再用蒸馏水冲洗1-2次，置孵育箱内干燥。
待载玻片完全干燥后，每孔加入抗人IgMFITC结合物15微升。
7、将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。
8、用PBS溶液缓慢冲洗载玻片后，再用蒸馏水冲洗1-2次，置孵育箱内干燥。
9、加适量封闭介质，盖上盖玻片。
10、尽快用荧光显微镜在100倍下观察结果。
五、实验结果：。
呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】通用名称：呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：PNEUMOSLIDE IgM商品名称：PNEUMOSLIDE IgM【包装规格】10人份/盒【预期用途】采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
已报道的非典型性肺炎的病原体有很多，其中最常见的有：嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
Q热立克次体Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。
在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。
微量免疫荧光法（MIF）是最灵敏和最特异的诊断方法。
腺病毒腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。
呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。
流感病毒它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。
由于它易于与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难。
因此，实验室诊断就显得非常重要。
副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎（哮吼）。
3型具有流行性，1和2型具有地域性。
【检测原理】间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】通用名称：呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：PNEUMOSLIDE IgM商品名称：PNEUMOSLIDE IgM【包装规格】10人份/盒【预期用途】采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
已报道的非典型性肺炎的病原体有很多，其中最常见的有：嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
Q热立克次体Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。
在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。
微量免疫荧光法（MIF）是最灵敏和最特异的诊断方法。
腺病毒腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。
呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。
流感病毒它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。
由于它易于与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难。
因此，实验室诊断就显得非常重要。
副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎（哮吼）。
3型具有流行性，1和2型具有地域性。
【检测原理】间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
9项呼吸道病原体检测在呼吸道感染病因分析中的应用摘要：目的分析在呼吸道感染病因分析中应用9项呼吸道病原体检测的临床价值。
方法择取2015年1月至2017年12月我院收治的4112例呼吸道感染患者，所选患者均在空腹状态下采集静脉血，通过间接免疫荧光法联合检测9项呼吸道病原体：LP1（呼吸道嗜肺军团菌1型）、COX（Q热立克次体）、ADV（腺病毒）、IFA（甲型流感病毒）、PIV（副流感病毒）、MP（肺炎支原体）、CP（肺炎衣原体）、RSV（呼吸道合胞病毒）、IFB（乙型流感病毒）。
结果4112例患者血清IgM（免疫球蛋白M）总阳性率为35.02%（1440/4112），IFB阳性率最高，MP阳性率次之。
484例患者为病原体合并感染，阳性率为11.77%（483/4112）。
结论在呼吸道感染病因分析中应用9项呼吸道病原体检测具有显著临床价值，病毒与MP是呼吸道感染的主要病原体，应在检测中重点关注。
关键词：呼吸道病原体；呼吸道感染；病因分析【Abstract】 Objective：To analyze the clinical value of detecting 9 respiratory pathogens in the etiological analysis of respiratory tract infection. Methods：From January 2015 to December 2017，4112 patients with respiratory tract infection admitted to our hospital were enrolled. All patients were selected to receive venous blood under fasting condition. Nine respiratory pathogens were detected by indirectimmunofluorescence：LP1 Legionella pneumophila type 1），COX（fever zoster virus），ADV（adenovirus），IFA（influenza A virus），PIV（parainfluenza virus），MP（Mycoplasma pneumoniae），CP（Chlamydia pneumoniae），RSV （respiratory syncytial virus），IFB（influenza B virus）. Results：The total positive rate of serum IgM（immunoglobulin M）in 4112 patients was 35.02%（1440/4112）. The positive rate of IFB was highest and the positive rate of MP was second. 484 patients with pathogen infection，the positive rate was 11.77%（483/4112）. Conclusion：The detection of 9 respiratory pathogens has significant clinical value in the etiological analysis of respiratory tract infection. Virus and MP are the main pathogens of respiratory tract infection and should be focused on the detection.【Key words】 Respiratory pathogens；Respiratory tract infections；Etiology analysis 呼吸道感染属于临床常见疾病之一，通常是因细菌、病毒、衣原体、支原体等导致感染。
