实验室用液体配制

重量法稀释溶液公式
操作步骤
1、计算：n=m/M , c=n/v ,ρ=m/v
例：实验室用密度为1.18g/mL，质量分数为36.5%，浓盐酸配制250ml，0.3mol/L的盐酸溶液。

v=m/p=(0.25*0.3*36.5)/(36.5%*1.18)
2、称量或量取：固体试剂用分析天平或电子天平（为了与容量瓶的精度相匹配）称量，液体试剂用量筒。

3、溶解：将称好的固体放入烧杯，用适量（20~30mL）蒸馏水溶解。

4、复温：待溶液冷却后移入容量瓶。

5、转移（移液）：由于容量瓶的颈较细，为了避免液体洒在外面，用玻璃棒引流，玻璃棒不能紧贴容量瓶瓶口，棒底应靠在容量瓶瓶壁刻度线下。

6、洗涤：用少量蒸馏水洗涤烧杯内壁2~3次，洗涤液全部转入到容量瓶中。

7、初混：轻轻摇动容量瓶，使溶液混合均匀。

8、定容：向容量瓶中加入蒸馏水，液面离容量瓶颈刻度线下1~2cm时，改用胶头滴管滴加蒸馏水至液面与刻度线相切。

9、摇匀，盖好瓶塞反复上下颠倒，摇匀，如果液面下降也不可再加水定容。

10、由于容量瓶不能长时间盛装溶液，故将配得的溶液转移至试剂瓶中，贴好标签。

实验室所需溶液配制1.费休氏试液,购买；2.氢氧化钠溶液,C=0.01mol/l;氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体0.4g溶于200ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；3.中性红溶液,C=1%;准确称取中性红固体1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；4.溴百里香酚蓝溶液,C=1%;准确称取溴百里香酚蓝固体1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；5.碘化钾溶液,C=10%;准确称取KI固体50g溶于50ml蒸馏水中,并在500ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；6.硫代硫酸钠溶液,C=0.1mol/l;硫代硫酸钠分子量158.11,准确称取硫代硫酸钠固体15.811g溶于200ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；7.硫酸溶液,C=2mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体108.78ml稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；8.淀粉溶液,C=0.5%;准确称取可溶性淀粉0.5g,溶于50ml水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；9.铬酸钾溶液,C=50g/L;准确称取铬酸钾固体50g,溶于500ml水中,并在1000ml容量瓶中定容,搅拌下逐滴加入10%的硝酸银溶液,直至溶液出现棕红的悬浮物为止.静置1昼夜,用干净的滤纸漏斗过滤即可,不一定用饱和硝酸银溶液,用10%硝酸银溶液即可.配制方法:1克硝酸银+10毫升纯水溶解,置于棕色瓶中；10.氯化钠基准试剂,C=0.1mol/l,氯化钠分子量58.5,准确称取氯化钠固,5.85g溶于500ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；11.硝酸银溶液,C=0.1mol/l,硝酸银分子量169.87,准确称取硝酸银固体8.49g溶于200ml蒸馏水中,并在500ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液,用前采用基准氯化钠试剂10标定,需保存于棕色试剂瓶中；12.酚酞指示剂,C=0.1%,准确称取酚酞固体0.1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；13.氯化钡溶液,C=10%,准确称取氯化钡固体10g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；14.乙醇溶液,C=1%,准确移取乙醇AR1ml与100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；15.盐酸标准溶液,C=1mol/l,分子量36.46,D154=1.2039.11%,1.1529.57%、1.1020%、1.0510.17%;准确量取39.11%盐酸77.68ml或称取93.216g,稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入盐酸而非向盐酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；16.甲基橙指示剂,C=0.1%,准确称取甲基橙固体0.1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；17.邻苯二甲基二辛酯DOP标准液C=100ppm配制：用1ml移液管移取1mlDOPAR加入250ml容量瓶中,并用二氯甲烷稀释至250ml定容,摇匀即可得DOP浓度为4000ppm溶液;用5ml移液管移取浓度为4000ppmDOP溶液2.5ml,加入100ml 容量瓶中,用二氯甲烷稀释至100ml,摇匀即可得浓度为100ppmDOP溶液；18.钼酸铵溶液的配制,C=5%,准确称取钼酸铵固体5g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；19.硫酸溶液,C=10mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体543.9ml稀释与300ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；20.氢氧化钠溶液,C=5%,准确称取氢氧化钠固体5g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；21.氯化亚锡溶液,C=10%,准确称取氯化亚锡固体5g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液,溶液配置完成后向其中投入锡粒一颗并保存于大口瓶中；22.二氧化硅贮备液,1ml相当于1.0mg二氧化硅：准确称取分析纯硅酸钠4.730g分子式Na2SiO3·9H2O,分子量284.22溶于200ml蒸馏水中,并与1L容量瓶中定容,保存于塑料瓶中;23.二氧化硅工作液,C=20ppm,用移液管移取二氧化硅贮备液20ml与1L容量瓶中定容,即可得上述浓度溶液,保存于塑料瓶中;24.硫酸溶液,C=1mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体54.4ml或称取100.096g稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；25.硫代硫酸钠溶液,C=0.05mol/l,硫代硫酸钠分子量158.11,准确称取硫代硫酸钠固体7.9055g溶于200ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；26.硼酸溶液,C=2%,准确称取硼酸固体2g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液,保存于塑料大口瓶中；27.氢氧化钠溶液,C=40%,准确称取硼酸固体40g,溶于50ml蒸馏水中,冷却后在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液,保存于塑料大口瓶中或胶塞玻璃瓶中；=1.2039.11%,1.1529.57%、28.盐酸溶液,C=0.05mol/l,分子量36.46,D1541.1020%、1.0510.17%;准确量取39.11%盐酸3.884ml或称取4.661g,稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入盐酸而非向盐酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；29.甲基红乙醇溶液,C=1%,准确称取甲基红固体1g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；30.溴甲酚绿乙醇溶液,C=1%,准确称取溴甲酚绿固体1g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；31.甘油水溶液,C=2%,准确移取甘油AR2ml与100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；32.盐酸溶液,C=6mol/l,分子量36.46,D15=1.2039.11%,1.1529.57%、1.1020%、41.0510.17%;准确量取39.11%盐酸466.08ml或称取559.296g,稀释与300ml蒸馏水中,向水中加入盐酸而非向盐酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；33.氢氧化钠溶液,C=6mol/l,氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体240g溶于500ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；34.氢氧化钠溶液,C=1mol/l,氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体40g溶于500ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；。

实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1MTri-HCl□组份浓度1MTri-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1.称量121.1gTri置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tri溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTri-HCl□组份浓度1.5MTri-HCl（pH8.8）□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTri置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tri溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10某TEBuffer□组份浓度100mMTri-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTri-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至1L 后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3M醋酸钠□组份浓度3M醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1.称取40.8gNaOAc3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer□组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4□配制量1L□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

实验室所需溶液配制1.费休氏试液，购买；2.氢氧化钠溶液，C=0.01mol/l。

氢氧化钠分子量40.0，准确称取氢氧化钠固体0.4g溶于200ml蒸馏水中，并在1L容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液；3.中性红溶液，C=1%。

准确称取中性红固体1g溶于50ml蒸馏水中，并在100ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液；4.溴百里香酚蓝溶液，C=1%。

准确称取溴百里香酚蓝固体1g溶于50ml蒸馏水中，并在100ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液；5.碘化钾溶液，C=10%。

准确称取KI固体50g溶于50ml蒸馏水中，并在500ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液；6.硫代硫酸钠溶液，C=0.1mol/l。

硫代硫酸钠分子量158.11，准确称取硫代硫酸钠固体15.811g溶于200ml蒸馏水中，并在1000ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液；7.硫酸溶液，C=2mol/l，硫酸分子量98.08，浓度98%时密度约1.84g/ml，准确量取硫酸液体108.78ml稀释与500ml蒸馏水中，向水中加入硫酸而非向硫酸中加水，冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；8.淀粉溶液，C=0.5%。

准确称取可溶性淀粉0.5g，溶于50ml水中，并在100ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液；9.铬酸钾溶液，C=50g/L。

准确称取铬酸钾固体50g，溶于500ml水中，并在1000ml容量瓶中定容，搅拌下逐滴加入10%的硝酸银溶液,直至溶液出现棕红的悬浮物为止.静置1昼夜,用干净的滤纸漏斗过滤即可，不一定用饱和硝酸银溶液,用10%硝酸银溶液即可.配制方法:1克硝酸银+10毫升纯水溶解,置于棕色瓶中；10.氯化钠基准试剂，C=0.1mol/l，氯化钠分子量58.5，准确称取氯化钠固,5.85g溶于500ml蒸馏水中，并在1000ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液；11.硝酸银溶液，C=0.1mol/l，硝酸银分子量169.87，准确称取硝酸银固体8.49g溶于200ml蒸馏水中，并在500ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液，用前采用基准氯化钠试剂（10）标定，需保存于棕色试剂瓶中；12.酚酞指示剂，C=0.1%，准确称取酚酞固体0.1g溶于50ml蒸馏水中，并在100ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液；13.氯化钡溶液，C=10%，准确称取氯化钡固体10g溶于50ml蒸馏水中，并在100ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液；14.乙醇溶液，C=1%,准确移取乙醇（AR）1ml与100ml容量瓶中定容，即可得到上述浓度溶液；15.盐酸标准溶液，C=1mol/l，分子量36.46，D154=1.20(39.11%),1.15(29.57%)、1.10(20%)、1.05(10.17%)。

常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。

2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。

3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。

4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含0.5g卡那霉素。

取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。

5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。

剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。

6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。

配制溶液的方法有
配制溶液的方法主要有以下几种：
1. 固体溶解法：将固体溶质加入到溶剂中，通过搅拌和加热使其溶解。

这是最常用的配制溶液的方法，比如将盐加入水中配制盐水。

2. 溶液稀释法：当需要调整溶液浓度时，可以通过溶液稀释的方法进行。

将已有的浓溶液取出一部分，加入适量的溶剂使其稀释，从而得到所需浓度的溶液。

3. 液体混合法：将两种或多种溶液混合在一起，通过计算混合前后的溶质浓度和容积，可以得到所需浓度的溶液。

这种方法常用于配制某些特定浓度的试剂液。

4. 稀酸稀碱稀化法：将浓度较高的酸、碱加入到大量的水中，通过稀化的方法得到所需浓度的酸碱溶液。

这种方法常用于配制实验室中的常用酸碱溶液。

5. 水合物溶解法：有些化合物具有结晶水，通过将结晶体加入到水中，可以得到溶解度较高的溶液。

这种方法常用于配制一些含水合物的溶液。

在配制溶液时，需要注意以下几点：
1. 需要准确称量溶质和溶剂，以保证溶液浓度的准确性。

2. 溶质的溶解度和溶剂的性质需要考虑，确保溶解度足够高，否则溶质不易溶解或溶液浓度无法满足需求。

3. 在溶质溶解过程中，可以适当加热或搅拌促进其溶解，但需注意加热时避免溶液溢出或溶质分解。

4. 配制过程中，需要注意实验室安全，避免对身体和环境造成伤害。

总之，配制溶液的方法多种多样，具体选择哪种方法要根据实际情况和需求确定。

在操作过程中，需要严格控制溶质和溶剂的量，充分考虑溶液的浓度和溶解度，以确保得到所需浓度的溶液。

同时还需注重实验室安全，遵守操作规范，保证人身安全和环境保护。

v1.0 可编辑可修改常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨 10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。

2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至％，高压蒸汽灭菌15min后使用。

3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。

4、%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含卡那霉素。

取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。

5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。

剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。

6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。

实验室溶液配制技巧-标准化文件发布号：（9556-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII实验室溶液配制技巧液体溶液配制可以说是实验室分析人员最基础的一门技术，也是每天工作中的必选项。

液体溶液的配置包括溶质的计算、移液、定容等基础操作，还包括一些混合溶液的前后加入顺序及利用一些试剂自身的化学性质，掌握了溶液配制的技巧，可以大大缩短配置时间，提高实验效率。

我们都知道，溶液是由至少两种物质组成的均一、稳定的混合物，被分散的物质（溶质）以分子或更小的质点分散于另一物质（溶剂）中。

溶液是混合物。

种类分为：一般溶液和标准溶液。

一般溶液只是专指液体溶液。

一般溶液的配制过程1.计算：计算配制所需固体溶质的质量或液体浓溶液的体积。

2.称量：用托盘天平称量固体质量或用量筒或移液管量取液体体积。

3.溶解：在烧杯中溶解或稀释溶质，恢复至室温（如不能完全溶解可适当加热）。

检查容量瓶是否漏水。

4.转移：将烧杯内冷却后的溶液沿玻璃棒小心转入一定体积的容量瓶中（玻璃棒下端应靠在容量瓶刻度线以下）。

5.洗涤：用蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2～3次，并将洗涤液转入容器中，振荡，使溶液混合均匀。

6.定容：向容量瓶中加水至刻度线以下1～2cm处时，改用胶头滴管加水，使溶液凹面恰好与刻度线相切。

7.摇匀：盖好瓶塞，用食指顶住瓶塞，另一只手的手指托住瓶底，反复上下颠倒，使溶液混合均匀。

8.装瓶，贴签。

举例：配制500mL，L碳酸钠溶液步骤及注意事项所需的仪器：烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、分析天平、药匙、量筒步骤：第一步：计算：所需碳酸钠的质量=**106=克；第二步：称量：在天平上称量克碳酸钠固体，并将它倒入小烧杯中；第三步：溶解：在盛有碳酸钠固体的小烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使其溶解；第四步：移液：将溶液沿玻璃棒注入500mL容量瓶中；第五步：洗涤：用蒸馏水洗烧杯2～3次，并倒入容量瓶中；第六步：定容：倒水至刻度线1～2cm处改用胶头滴管滴到与凹液面平直；第七步：摇匀：盖好瓶塞，上下颠倒、摇匀；第八步：装瓶、贴签；误差分析：固体药品的称量与液体药品的量取是否准确；把溶液向容量瓶中转移，溶液洒了；未洗涤烧杯和玻璃棒；用待配液润洗了容量瓶；定容时水加多了或加少了；定容时未平视刻度线。

PBS缓冲液的配制(1PBS)NaCl 8gKCL 0.2gNa2HPO4 1.44gKH2PO4 0.24g调pH至7.4，加去离子水至1000ml，放于4℃备用。

Hank's 液用于冲洗动物组织和细胞，具有等渗和一定的酸性缓冲能力。

本实验中使用的是无钙、无镁Hank's 液（又称D- Hank's液），具体配方如下：NaCl 8.00gKCl 0.40gNa2HPO4.12H2O 0.134gNaHCO3 0.35g1%酚红 2ml加去离子水至 1000ml10磅高压灭菌10分钟，0-4℃储存备用。

使用前将调pH至7.2-7.4。

胰酶 (0.25%)NaCl 8gKCl 0.4g柠檬酸钠（5H2O） 1.12g磷酸二氢钠（2H2O） 0.056g碳酸氢钠 1g葡萄糖 1g胰酶 2.5g加去离子水至 1000ml用滤器过滤除菌，分装后放于-20℃备用。

大肠杆菌感受态细胞的制备按分子克隆实验指南中的氯化钙法制备感受态细胞。

以无菌的接种环取冻存的JM83菌种划线接种于LB琼脂平板上，37℃温箱培养过夜。

次日挑取生长好单个菌落接种于5ml LB 培养液中37℃振荡培养过夜。

取1ml过夜培养液接种到100ml LB液体培养基中，37℃剧烈振荡培养2-3小时使OD600达到0.4左右。

在无菌条件下将细菌培养物倒入灭菌后冰预冷的离心管中，冰浴10分钟，4℃1600g离心10分钟后尽弃上清。

加入100ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl2溶液重新悬浮沉淀的细胞，在冰浴中放置30分钟，4℃1600g离心10分钟后尽弃上清。

加入10ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl2溶液再次悬浮沉淀的细胞，加入终浓渡为15% 灭菌的甘油，混匀后分装为200 μl/管，直接用于转化或置-70℃冰箱保存备用。

CEF细胞制备取10日龄的SPF鸡胚，先后用碘酒棉和酒精棉消毒气室部位，无菌取出鸡胚，用Hank's液洗涤胚体，去头、四肢和内脏，剪成2mm大小的组织块，用0.25%胰酶溶液(4ml/胚)在37℃水浴中消化12分钟左右，然后倒掉胰酶，用不含血清的Hank's液洗涤2~3次后，再加入适量的营养液（DMEM），吹打分散细胞，用6层纱布过滤，制成每毫升含活细胞数106-107个的细胞悬液，分装为5 ml/60mm平皿，制成CEF单层细胞。

几种溶液的配制方法1、PBS:取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH 值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL 或NaOH调整。

2、TBS：2.1 Tris缓冲液配方：（0.5 M pH7.6）Tris（三羟甲基氨基甲烷）60.57g1N HCL 约420ml双蒸水加至1000mlTris缓冲液配制方法：先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。

此液为储备液，4℃冰箱中保存。

2.2 TBS配方：Tris-HCI缓冲液（0.5M pH7.6）100mlNaCI 8.5~9g (0.15mol/L)双蒸水加至1000mlTBS配制方法：先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl 缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。

3、枸橼酸盐缓冲液（Citrat e buffer）：3.1 储存液：A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸（C6H8O7·H20）溶于1000ml蒸馏水中。

B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7·2H20）溶于1000ml蒸馏水中。

3.2 工作液：取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.0±0.14、胰酶（Trypsin）：4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液：常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。

胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。

4.2 ZLI-9010胰蛋白酶：取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。

实验室常用试剂缓冲液的配制方法实验室中常常需要使用各种试剂和缓冲液，以下是一些常用试剂和缓冲液的配制方法及其用途。

1.NaCl溶液配制：NaCl作为实验室常用的盐类试剂，可用于生化、分子生物学等多个实验室操作中。

常用浓度为0.9%（w/v）的生理盐水。

配制方法如下：称取对应质量的NaCl加入蒸馏水中，搅拌溶解，用蒸馏水调整至最终体积。

2.血红蛋白溶液配制：血红蛋白溶液可用于实验室的一些生化、免疫学等实验。

常用方法如下：从新鲜血液中分离出血红蛋白，加入适量的生理盐水或缓冲液，控制pH值为7.4-7.6，并用密闭容器保存。

3. Tris-HCl缓冲液配制：Tris-HCl缓冲液在生物化学实验中广泛应用于DNA/RNA电泳、蛋白质电泳等实验。

常用方法如下：按需求称取Tris固体加入一定量的去离子水中，搅拌溶解，用强碱（比如氢氧化钠）或强酸（比如盐酸）调整pH值至所需范围。

1. Tris缓冲液配制：Tris缓冲液常用于酶反应、凝胶电泳等实验中，配制方法如下：称取适量的Tris固体加入适量的去离子水中，搅拌溶解，用浓盐酸或盐酸调节pH值至所需范围，并用去离子水稀释至最终体积。

2.PBS缓冲液配制：PBS缓冲液在生物学实验中用于细胞培养、免疫染色等操作中。

配制方法如下：称取适量的NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4固体加入适量的去离子水中，搅拌溶解，并用去离子水稀释至最终体积，调整pH值至所需范围。

3. Tris-Borate-EDTA（TBE）缓冲液配制：TBE缓冲液常用于核酸凝胶电泳中，配制方法如下：称取适量的Tris固体加入适量的去离子水中，搅拌溶解，用浓盐酸或盐酸调节pH值至所需范围，然后加入Boric acid和EDTA固体，继续搅拌溶解，并用去离子水稀释至最终体积。

以上仅是一些常见的试剂和缓冲液的配制方法，实验室中还会使用到很多其他试剂和缓冲液。

在配制试剂和缓冲液时，需要注意选择合适的纯度的试剂、使用无菌器具和操作台，并遵循相应的实验操作规范和安全要求。

细胞培养PBS配方PBS即磷酸盐缓冲生理盐水，都是含有H2PO4-、HPO42- 缓冲体系和NaCl，用于调节渗透压，达到与人体相当的水平，分为含钾离子和不含钾离子两种。

1、不含钾离子的PBS配方（由NaCl，Na2HPO4和NaH2PO4三种成分组成，用于其它实验缓冲和稀释用）母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB（pH=7.4）的配制：先配 0.2M PB （pH=7.4，100ml）：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4，即可。

然后只需将0.2M PB （pH=7.4）按相应比例适当稀释即可，如：0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

配好后加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。

* 其他各种另 PH值的 0.2M PB（100ml）配方：pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml）5.7 93.56.55.8 92 85.9 90 106.0 87.7 12.36.1 85 156.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51 496.9 45 557.0 38 627.1 33 677.2 28 727.3 23 777.4 19 817.5 16 847.6 13 877.7 10.5 0.57.8 8.5 91.57.9 7 938.0 5.3 94.7 .2、含钾离子的PBS配方（由NaCl，KCl，Na2HPO4和KH2PO4四种成分组成，一般用于组织培养）0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法：(免疫组化常用)称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可，高压灭菌。

实验室常用试剂配制方法一、50×TAE：称242g Tris溶于800mL 双蒸水中，加入57.1mL 冰醋酸和18.6g（或100mL 0.5mol/L，pH=8.0）EDTA，再加水定容至1L，室温保存备用。

二、1×TAE：将50×TAE加双蒸水稀释至1×使用。

三、LB液体培养基：称取10g蛋白胨（bacto-typtone）、5g 酵母提取物（bacto-yeast extract）和10g NaCl，溶于950mL 双蒸水中，摇动至完全溶解，定容至1L，120℃湿热灭菌20min，冷却至室温后4℃保存备用。

四、100mg/mL氨苄青霉素（Amp）：称取100mg粉末状氨苄青霉素（Amp）置于1.5mL 离心管中，加入800μL 无菌水使其完全溶解，定容至1mL，-20℃保存备用。

五、LA液体培养基：按照x mL培养基加入x μL的比例将100mg/mL的氨苄青霉素（Amp）加入LB液体培养基中，4℃保存备用。

六、LB固体培养基：称取10g蛋白胨（bacto-typtone）、5g 酵母提取物（bacto-yeast extract）、10g NaCl和15g琼脂粉，溶于950mL 双蒸水中，摇动至完全溶解，定容至1L，120℃湿热灭菌20min，稍冷却后按照x mL培养基加入x μL的比例加入100mg/mL的氨苄青霉素（Amp），充分混匀后倒入培养皿中制成琼脂平板，4℃保存备用。

（1L培养基大约可以倒40个平板）七、200mg/mL IPTG：称取2g 粉末状IPTG溶于8mL 双蒸水中，再定容至10mL，配成200mg/mL 溶液，（用0.22μm滤膜过滤除菌，）分装为每份1mL，-20℃保存备用。

八、20mg/mL X-gal：将X-gal溶于二甲基甲酰胺，配成20mg/mL，分装后于-20℃避光保存。

九、DEPC水：将水加入干净玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（v/v），放置过夜，高压湿热灭菌，4℃保存备用。

实验室常用试剂配制的原理及注意事项1.配制EDTA滴定液：①可加热促使溶解，先浓配后稀释，摇匀后放24h为好，使其充分稳定。

②标定前氧化锌炽灼一定要到800℃，色泽应达鲜黄绿色，否则其中二氧化碳难以除尽。

③注意pH值变化，先滴加氨试液中和盐酸后加水稀释。

④铬黑T粉末放置不能过久，否则灵敏度差，指示液应逐滴加，充分振摇。

2.配制醇制氢氧化钾滴定液：①因AR级KOH标示含量为82实际上均为80左右，所以应为理论量355g。

②乙醇中醛类受光线作用呈深浅不同黄色故乙醇需精制无醛乙醇，精制后应立即放冷配制，制法见中国药典2000年版附录。

③防止二氧化碳与乙醇挥发，光照影响，应贮存于橡皮塞棕色玻璃瓶中，而且临用新标定。

3.配制四苯硼钠滴定液：①加新制Al(OH)3凝胶，使滤液澄清，强力振摇使溶解完全，先滤上清液。

②做好空白，滴定中特别是近终点速度要很慢，注意观察色泽变化，贮存期间出现浑浊应重新标定。

4.配制亚硝酸钠滴定液：①加无水碳酸钠作稳定剂用，使pH值保持在10左右，铂电极应临用前活化好。

②在试样加入前加KBr以促进反应。

③室温应30℃用胶管连接滴定管插入到液面下2/3处避免硝酸分解，计算好理论量“先快后慢”特别是近终点，逐滴加入，并搅拌。

5.配制草酸滴定液：①酸化应用硫酸，不可用硝酸或盐酸（硝酸有氧化性而盐酸易被高锰酸钾氧化）。

②近终点前加速反应加热可用水浴，直火加热温度难以控制，且温度太高草酸分解而使结果不准确。

6.配制氢氧化钠滴定液：①用饱和氢氧化钠液制备应新沸冷水制成而且应陈化6小时左右。

排除碳酸钠干扰与二氧化碳。

②制备饱和氢氧化钠时应分多次加入氢氧化钠固体，过饱和后应放置三天后取上清液，应一次取出避免倒流而冲浑液体。

③也可用新制热蒸馏水，但制好后应放至室温，尽量避免二氧化碳干扰。

④基准应在玛瑙乳钵中研细，利于溶解，在终点前基准应全溶解，否则结果有误。

⑤标定前贮存聚乙烯塑料瓶中，用虹吸法取用，进气管前端用钠石灰和棉花过滤，定期或钠石灰变色后更换，防止二氧化碳影响浓度。

常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：少伟、顾颖、晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：毅歆、）六、EIA系统（责任人：胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。

2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。

3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。

4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，含0.5g卡那霉素。

取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。

5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。

剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。

6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。

配液的计算方法液体配制是化学实验中必不可少的步骤之一。

在实验室中，我们需要根据实验的要求，精确地配制出一定浓度的溶液。

因此，掌握配液的计算方法是非常重要的。

本文将从基础知识、计算公式、实际操作等方面进行介绍。

一、基础知识在液体配制中，我们需要了解一些基础知识，如溶液的浓度、摩尔质量、物质的量等概念。

1. 浓度浓度是指单位体积或单位质量的溶液中所含溶质的量。

常见的浓度单位有质量浓度、摩尔浓度、体积浓度等。

在实验室中，常用摩尔浓度来表示溶液的浓度。

2. 摩尔质量摩尔质量是指一个物质的摩尔质量，即分子量或原子量的数值。

单位为克/摩尔。

例如，氯化钠的分子量为58.44克/摩尔。

3. 物质的量物质的量是指一个物质中所含的分子、原子或离子的数量。

单位为摩尔。

例如，1摩尔氯化钠中含有58.44克氯化钠。

二、计算公式在液体配制中，我们需要根据实验要求计算出所需的溶质质量或溶液体积。

下面介绍一些常用的计算公式。

1. 摩尔浓度计算公式摩尔浓度（M）=物质的量（mol）÷溶液体积（L）例如，要配制0.1M的氯化钠溶液，且溶液体积为100mL，那么所需氯化钠的物质的量为0.01mol，即：物质的量（mol）=摩尔浓度（M）×溶液体积（L）=0.1mol/L × 0.1L =0.01mol所需氯化钠的质量为58.44g/mol × 0.01mol =0.5844g。

2. 质量浓度计算公式质量浓度（g/L）=溶质质量（g）÷溶液体积（L）例如，要配制质量浓度为0.1g/L的氯化钠溶液，且溶液体积为100mL，那么所需氯化钠的质量为0.1g/L × 0.1L =0.01g。

3. 稀释计算公式稀释前浓度×稀释前体积 = 稀释后浓度×稀释后体积例如，要将100mL浓度为0.1M的氯化钠溶液稀释至0.01M，那么所需的稀释液体积为：稀释液体积 = 稀释前浓度×稀释前体积÷稀释后浓度=0.1mol/L × 100mL ÷ 0.01mol/L =1000mL即需要将100mL的氯化钠溶液稀释至1000mL。

抗体稀释液牛血清白蛋白1gNaN3 0。

08g30% Triton 1ml（PBS）定容PBS(1x）100ml驴血清封闭液血清5—10mlNaN3 0.05g30% Triton 0.5ml（PBS）定容PBS（1x）100m抗原稀释液A 18ml+B 82 ml5双蒸水1000ml ，PH=6封片液Na2CO3 0。

689gNaHCO3 1。

554g溶于50ml 双蒸水50ml 甘油加热混合抗原修复液A:柠檬酸2.1g————100ml ddH2OB:二水柠檬酸三钠14。

7g--——-500mlA 18ml+B 82ml+900mlddH2O-——--——-1L(PH=6。

0）Neurobasal Mediaglutamine, 1%penicillin/streptomycin, 10 ng/mL platelet—derivedgrowth factor, 10 ng/mL FGF, and 2％B27BRDUBrdU is a brominated analog of thymidine.STABILITY / STORAGE AS SUPPLIED:BrdU should be stored at —0°C and desiccated。

If properly stored，it will have a shelf-life of two years.SOLUBILITY / SOLUTION STABILITY:Sigma routinely tests the solubility at 50 mg/mL in 1 M ammonium hydroxide yielding a clear colorless solution。

It can be dissolved in water at a concentration of up to 10 mg/mL。

It is also soluble in DMF, DMSO and water (with heat) at 50—100 mg/mL.Solutions at neutral pH should be stable for at least 6 months when stored frozen at -20°C. APPLICATIONS:BrdU is selectively incorporated into cell DNA at the S phase of cell cycle。

实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler）美蓝染色液A液:美蓝(Methylene blue) 0.3 克95％酒精毫升B液：氢氧化钾（KOH) 0。

01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。

2、齐氏（Ziehl）石炭酸复红染色液A液：碱性复红（Basic fuchsin）0。

3 克95％酒精10。

O 毫升B液：石炭酸(苯酚）5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95％酒精中,配成A液。

将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。

将两者混合即成。

3、结晶紫染色液(Huclker改订）A液：结晶紫（Crystai violet）2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4）2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。

将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。

两液混合即成.4、路戈氏（LugoI)碘液（革氏鉴别染色用)碘1。

0克碘化钾2。

0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。

5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液（芽孢染色用）孔雀绿（Malachite green）5。

0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95％酒精溶解,再加蒸馏水。

7、Dorner黑素液（英膜染色用）黑素(Nigrosin）10。

0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛）0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂,用玻璃棉过滤。

8、刚果红染色液刚果红(Congo red）2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3） 5.0毫升蒸馏水95。

010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片,短期保存）石炭酸10。

0克甘油20.0毫升乳酸（比重l。

21) 10.0毫升棉蓝0。

02克蒸馏水10。

0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。

母液工作液的配置过程母液和工作液是在实验室中常用的两种液体溶液，用于进行定量的化学分析、生物实验以及药物制备等工作。

母液是一种高浓度的溶液，通常用于配制工作液，而工作液是一种稀释了的溶液，用于实际的实验操作和测量分析。

下面将详细介绍母液和工作液的配置过程。

母液的配置过程一般包含以下几个步骤：1. 确定溶质种类和浓度：首先需要确定需要配置的溶质的种类和浓度。

这通常需要参考实验操作手册、化学文献或者实验室中既定的标准操作规程。

例如，其中一种化学试剂的母液浓度为1 mol/L。

2.计算所需重量和容量：根据所需的浓度和所需配制的体积，可以计算出所需的溶质质量和溶剂体积。

一般来说，可以使用以下公式进行计算：质量（g）= 浓度（mol/L）* 体积（L） * 分子量（g/mol）在使用质量（g）进行计算时，可以使用天平来称量所需的质量。

3.稀释母液：将计算出的所需质量的溶质加入到一定量的溶剂中，搅拌混合均匀。

一般来说，在实验室内可以使用玻璃烧瓶或者容量瓶来搅拌混合溶液，确保母液中的溶质均匀分布。

4.封装保存：将配制好的母液转移到干净的密封容器中，如玻璃瓶、烧瓶或者瓶塞，以防止溶质的挥发、氧化或被外部污染物污染。

并在容器上注明溶质的名称、浓度、日期等必要信息。

工作液的配置过程一般包含以下几个步骤：1.确定所需浓度：根据实验需要，确定所需的工作液浓度。

工作液的浓度一般需要参考实验操作手册、标准曲线或者已有的化学分析方法。

2.计算稀释倍数：根据母液的浓度和所需的工作液浓度，可以计算出所需的稀释倍数。

稀释倍数可以通过以下公式计算：稀释倍数=母液浓度/工作液浓度3.计算所需体积：根据稀释倍数和所需的工作液体积，可以计算出所需稀释母液的体积。

一般来说，可以使用以下公式进行计算：母液体积（mL）=工作液体积（mL）*稀释倍数4.稀释母液：将计算出的所需体积的母液转移到一个干净的容器中，再加入适量的溶剂进行稀释。

可以使用容量瓶、移液管或者注射器进行精确的体积测量和稀释操作。