血清α淀粉酶测定
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血清α淀粉酶（AMS）（EPS-G7法）测定
1. 实验原理
AMS测定采用酶动态比色测定法。所用底物为4,6-亚乙基-,D-麦芽七糖苷-对硝基苯酚（EPS－G7）。样品中－淀粉酶分解底物EPS－G7，生成对硝基苯酚（PNP），在405nm处比色，吸光度的上升速率与样品中-淀粉酶的活力成正比。
2 亚乙基－G5 ＋ 2 G2PNP
5EPS-G7＋5H2O -淀粉酶 2 亚乙基－G4 ＋ 2 G3PNP
亚乙基－G3 ＋ G4PNP
-葡萄糖苷酶
2G2PNP＋2G3PNP＋G4PNP＋14H2O 5PNP＋14G
（反应式中PNP：对硝基苯酚；G：葡萄糖）
2. 标本采集与处理：
2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 标本类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆、尿液。
2.3 血清分离 血清或血浆应在收集后尽快分离出来。未酸化的尿液，随机或限时收取。
3. 标本存放：不要用嘴吸取标本或对标本吹气，以免唾液污染标本唾液中的淀粉酶使结果升高。血清淀粉酶在20～25℃稳定一个星期，避免微生物降解作用；在2～8℃时稳定一个月。尿液样品在2～8℃可稳定10天，在15～25℃可稳定2天。对于尿液，酸性pH值可使淀粉酶的稳定性减弱，因此，储存前pH值应调至大约7.0。
4. 标本运输：常温条件下运输
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血的不能做测定。
6. 实验材料：
6.1 AMS测定试剂盒 （试剂1 6×64 ml ＋ 试剂2 6×16 ml）
6.1.1 试剂组成
试剂1：
GOOD’S 缓冲液 pH 7.1 100mmol/L
氯化钠 50mmol/L
氯化镁 10mmol/L
-葡萄糖苷酶 ≥23KU/L 试剂2：
EPS－G7 3mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为24个月。
6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。
6.1.5注意事项：唾液和皮肤中含有-淀粉酶，应避免用嘴吸取试剂，避免皮肤接触试剂。试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。
6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：无需手工计算，在37℃每个标本的结果仪器自动以U/L报告。手工测定计算方法为：
-淀粉酶(U/L) = △A/ min×F
反应总体积（ml）×1000
F =
毫摩尔消光系数×样品体积（ml）×比色杯光径
注：1000＝IU/ml到U/L的转换系数
PNP在405 nm处的毫摩尔消光系数：9.90
12. 参考值范围
血清或血浆 16-108U/L
随机尿液 100-1200U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义：-淀粉酶是将淀粉降解为麦芽糖的水解酶类。人体内的-淀粉酶来源于多种器官：胰淀粉酶由胰腺产生并释放到肠道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由肾脏清除并经尿液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。
检测血清、尿液中-淀粉酶活力主要用于诊断胰腺功能紊乱和监测并发症的发展。急性胰腺炎发作病人在腹痛开始后的几小时内，血液淀粉酶活力升高，约12小时后达到峰值；并至少在5天后活力回复至参考范围内。由于多种非胰腺疾病如腮腺炎、肾功能不全等也会引起-淀粉酶的升高，所以-淀粉酶对胰腺功能紊乱的诊断特异性不高。因此，为了确诊急性胰腺炎，还应进行脂肪酶检测
14. 操作性能
14.1 线性范围：3～2400U/L
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法7，AU680批内不精密度小于5%，总不精密度小于10%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密度
n=20 x
(U/L) s
(U/L) CV
(%) 批间精密度
n=20 x
(U/L) s
(U/L) CV
(%)
样品1 184 2.00 1.08 样品1 180 1.82 1.01
样品2 398 2.67 0.67 样品2 383 3.74 0.97
样品3 841 4.96 0.59 样品3 817 7.48 0.92
14.3 方法学比较：
本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对100个样品进行AMY活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+1.00U/L；r=0.998。
14.4 灵敏度：本试剂的检测限为3U/L。
14.5 病人结果可报告范围：3～2400U/L
15. 超出范围结果处理：本法线性上限为2400U/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：10稀释，重新测定，结果乘以11。
16. 病危报警值的处理 当血清AMS>300U/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。
17. 方法局限性
17.1 本法线性上限为2400U/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：10稀释，重新测定，结果乘以11。
17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L，胆红素浓度684mol/L，甘油三酯浓度11.3mmol/L时没有观察到干扰。即使极低浓度的血红蛋白都会对检测产生干扰。
18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19. 参考文献：
1. Friedman,R.B. and Young,D.S.Effects of Diseases on Clinical Laboratory
Tests,2nd Edition,AACC Press,Washington,DC,1989.
2. Blair,H.E.,Genzyme,US Patent Pending.
3. Tietz,N.W.(Ed), Clincial Guide to Laboratory Tests,2nd Edition,W.B.
Saunders,1990.
4. Henry,R.J.,Cannon,D.C.and Winkelman,J.W.,Clinical Chemistry,Principles &
Technciques,2nd Edition,Harper & Row,943-949;1974.
5. NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986.
6. Young,D.S.,Effects of Drugs on Clincial Laboratory Tests,4th Edition,AACC
Press,1995.
7. NCCLS,Evaluation Protocol EP5-T2,1992.
8. Rauscher,E. et al.,Fresenius Z, Analyt. Chem.,324,304;1986.
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。
