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优化的细菌鞭毛染色技术

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Ａｂ ｔａ ｔ Ｔ ｉ ｓｕ ｙｉ ｔ ｐｉ ｅｔｅｔ ｄｔ ｎ ｌ ｉ ｅＱ ｅｔ ｔｉｉｇｍｅｈ ｄ ｙｕ ｉｇｔｎ ｉ ｎ ｅ １ ｗ ｔ ｉｈ ｒ ｓｒ ｃ ｈｓ ｔｄ ｓ ｏｏ ｔ ｈ ｒ ｉ ｏ ａ ｌ ｒ ｕ ｓ ｓａｎｎ ｔｏ ．Ｂ ｓｎ ａ ｎｎａ ｄＦ Ｃ３ ｉ ｈｇ ｅ ｍｚ ａ ｉ Ｓｖ ｈ ｍａｓｃ ｎ ｅ ｔａｉｎ ｓｍｏｄ ｎ ｔｅｅｓ ｌｔ ｎ ｒ ｅ ａａｅｙｓ ｒｄ ｓ ｏ ｃ ｎｒｔ ｓａ ｒａ ｔ（ｈ ｓ ｏｕｉ ｓｗｅｅｓｐ ｒｔｌ ｔ ｅ ），ａｓ ｂｅａ ｄ ｃｅｒｓａｎｎ ｅｕｔ ｆ ａ ｉｕ ｏ ｏ ｏ ｔ ｌ ｎ ｌａ ｔｉｉｇｒｓｌ ｏ ｃ ｌｓ ａ Ｂ ｌ
色 时间太长 ， 且效果 不够稳 定 。不 少 生 物 、 医学 专 业 的教 师及科研 人员 对鞭毛 的染 色方 法 进行 了改
１ 材料 与方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 菌种 ． ． １ １２ 培 养基 ．．
枯 草芽 胞杆 菌 （ 实验 室保存 ） 。 牛 肉膏蛋 白胨 半 固体培 养基 ： 牛
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微 生物 学杂 志 ２０ 年 ７ ０７ 月第 ２ 卷第 ４ ７ 期 Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ ＩＲ ＢＯ Ｏ ＹＪｌ２０ ｏ ２ Ｎ ． Ｏ Ｒ Ａ ＦＭ Ｃ Ｏ ＩＬ Ｇ ｕ ７ １ ７ ｏ ｙ０ Ｖ ． ４
优 化 的细 菌鞭 毛 染 色技 术
，
关键 词 细 茵鞭 毛 ； 色 ； 染剂 ； 性 染料 染 媒 碱
中 图分 类号Ｑ３ ９ 文献标识码 Ｂ 文章 编 号 １０ ７ ２ （０ ７ Ｏ ０ ９ ０ ０ ５— ０ １ ２ ０ ） ４— ０ ４— ３
Ａｎ ｉ ｐｒ ｖ ｄ ｓ ａ ｎｉ ｅ ｈｏ ｏ ａ ｔ ｒａ ａ ｅ ｕｍ ｍ ｏ ｅ ｔ ｉ ｎｇ ｍ ｔ ｄ ｆ ｒ ｂ ｃ ｅ ｉ ｌｆ ｇ ｌ ｌ
细菌鞭 毛的着 生方式是 鉴别 细菌 种类 的重 要
依据 ， 鞭毛染 色是 重要 的实 验 技 能 。但 因鞭 毛 极
作 步骤 ， 强 实验 效 果 ， 增 经过 多次 实验 ， 制 出一 研 种新 的鞭 毛染 色 方 法 ： 单 宁 酸 和三 氯化 铁 作媒 用 染 剂 ， 加单 宁酸和 三氯 化铁 的量 ， 将两 液 分别 增 并 保存 ， 临用时混 合在 一起 ， 染后 用 细菌单 染 色 的 媒
进 “ ， 到较好 的效果 ， 得 但仍存 在 不 同方 面 的 不
足 。如谷海 赢先生 改进 的银 染法 ， 液易 配制 、 染
保存 时间长 ， 色 时间 短 ， 色效 果 较 好 ， 因其 染 染 但
配制 的银 染液 加 大 了 硝酸 银 的 量 ， 加 了 实验 成 增
肉膏 ３ ｇ Ｌ 蛋 白 胨 １ ／ ， ａ １５ｇ Ｌ 琼 脂 ／ ， ０ ｇ Ｌ Ｎ Ｃ ／ ，
美蓝 ， 分别对培 养好 的枯 草芽胞 杆 菌进行 染 色 ， 得
到极好 的染色 效果 。
为纤 细 ， 直径 通 常只有 １ ２ ｍ， 其 ０～ ０ ａ 并且 鞭 毛 的 生 长又受培 养条 件 及 培 养 时 间的 影 响 ， 以要 想 所
技术 较为 困难 。现 用 实 验 教 材 上 介 绍 的银 染
ｓｂｔｓ ａ ｏｔ ｎｄｗ ｉ ｅｐｃｉ ｌ ｓ ｉｅ ｙｓｆ ｎｎａｕｏ ｓｓｌｔｎ ｈ ｉ ｓｃｒｏｉ ａｉ ａ ａｅｃｎｅ ｕｔｌ ｓ ｂａ ｅ ｈ ｈｒｓｅｔ ｅ ｔｎｄ ｂ ａ ａｉ ｑ ｅｕ ｏｕｏ ，ｔｅＱ ’ ａｂｌ ｃ ｌ ｌｓｅｃ ｉｅ ｗ ｉ ｃ ｖｙ ａ ｒ ｉ ｃ ｄ ｋ
王桂 萍 ，朱 陶 ，王 宜磊 ，张 子 宇 ，李 财 新 ，杨 宏 宇
（ 泽 学 院 生命 科 学 系 ， 菏 山东 菏泽 ２４ １ ） ７ ０ ５
摘 要
优 化 了 实验教 材 上 传 统 的 银 染 液 鞭 毛 染 色方 法 ， 单 宁 酸 和 Ｆ Ｃ３ 媒 染 剂 ， 大单 宁酸 和 Ｆ Ｃ 的 用 ｅ １做 增 ｅ１
质 量浓 度 （ 将 其 配 制 的溶 液分 别保 存 ） 然 后 用碱 性 染 料 沙 黄水 溶 液 齐 氏 石 炭 酸 碱 性 复 红 染液 和 稀 释 并 ， ”、 ‘
１ ｏ倍 吕 氏碱 性 美蓝 染液 … 分 别对培养好的枯草 芽胞杆茵进 行染色， 到较粗 、 得 清晰的染 色结果。
得 到理想 的染色 结 果 ， 使初 学 者 易 掌 握 的 染 色 染 液沙 黄水溶 液 、 氏石炭 酸碱 性 复红 、 并 齐 吕氏碱 性 法 ， 果虽好 ， 染 色 液配 制 较 难 掌 握 ， 存 时 间 效 但 保 也短 ， 且染 色液 中的药 品硝 酸银 价 格 较 贵 ， ｅ 并 Ｌｉ ｂ ｓｎ氏鞭 毛染色 法 ， 不存 在 银染 法 的 缺点 ， ｏ 虽 但染
ｆｃ ｉ ｎ ｅ ｌ ｌ ｅ ｖ’ ｌ ａｅ ｃｅ ｅ ｍｅｈｙｅ ｅ ｂｕｅ ｕ ｈｓｎ ａ ｄ ｄｅ ｕｐｅ ｄｉ ｕｔｄ ｌ Ｓａ ｋ ｌｓ ｎｃ ｔ ｌ ｎ ｌ ． Ｋ ｅ ｗ ｏ ｄ Ｂａ ｔｒａ ｌｇ ｌ ｙ ｒｓ ｃｅ ｉｌｆａ ｅｌ ； Ｓ ａｎ ｎ ｕｍ ｔｉ ｉ ｇ；Ｍ ｏ ｄ ｎｔ Ｂａ ｉ ｙ ｒａ ； ｓｃ ｄ ｅ
ＷＡＮＧ ｉｐ ｎ Ｇｕ — ｉ ｇ，Ｚ ＨＵ ｏ，Ｗ ＡＮＧ ・ｅ ，ＺＨＡＮＧ ｉｙ Ｔａ Ｙｉｌ ｉ Ｚ — ｕ，ＬＩＣａ — ｉ ｉｘ ｎ，ＹＡＮＧ ｎ — ｕ Ｈｏ ｇ ｙ
（ Ｄ￣ａ ｍｅ ｏ ｉ ｃ ｎｅ ， ｆ ｅＵ ｉ ｒ ｔ ， ｅ ｈ ｎ ｏ ｇ ２ ４ １ ） ａ ｍ ｆ Ｓｉ ｃ ｌｅ ｎ ｅｓｙ Ｈ ｚ Ｓ ａ ｄ ｎ ， ７ ０ ５ ｆＬ ｅ ｅ ｓ ｚ ｖ ｉ ｅ

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实验四 鞭毛染色法及活细菌活动性的观察

实验四 鞭毛染色法及活细菌活动性的观察

实验四
鞭毛染色法及活细菌活动性的观察
一、实验目的及要求
1、了解细菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色 的方法； 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性。
二、实验原理

细菌的鞭毛很纤细，直径一般为0.1-0.2μm， 只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用 特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看 到它。 鞭毛染色的基本原理是：即在染色前先用媒染 剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗， 然后再进行染色。 常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等 配制而成。
四、实验方法
（一）鞭毛染色（硝酸银染色法）
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，置洗衣粉过滤液中（洗 衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。取 出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在 火焰上烧去酒精。
2.菌液的制备：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染色前 应将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上连续移 接3-5代，以增强细菌的运动力。最后一代菌种放恒温箱中 培养12-16h。然后，用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌 液数环，移至盛有1-2mL无菌水的试管中，使菌液呈轻度混 浊。将该试管放在37℃恒温箱中静置10min（放置时间不宜 太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松展开。
3.制片：吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端，立即将玻片倾 斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。 涂片放空气中自然干燥。 4.染色： ①滴加A液，染3-5min； ②用蒸馏水充分洗净 A 液； ③用B液冲去残水，再加 B 液于玻片上覆盖染色 数秒至1min，必要时在酒精灯微火加热直至显 褐色，立即用蒸馏水洗，自然干燥。 5.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜 检查。结果：菌体呈深褐色， 鞭毛呈浅褐色。
细菌鞭毛染色

细菌鞭毛染色

细菌鞭毛染色很多细菌自细胞内长出一至很多根细丝状附属物称为鞭毛.鞭毛是细菌的运动器官,有鞭毛的细菌均可运动.鞭毛瘦长透亮,其宽度在一般光学显微镜波长检验范围之外,所以不易观看.但是在不染色状况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在. 【试验目的】学习并把握鞭毛染色的原理和方法.【试验原理】细菌的鞭毛特别纤细,直径一般在20nm左右,用电镜才能观看.本试验采纳特别染色法,即在染色前先经媒染剂处理,媒染剂吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可达到一般光学显微镜的辨析范围以内.染色后,即可利用一般光学显微镜进行观看.【试验材料、药品及器具】1、菌种培育18-24h的菌种大肠杆菌(Escherichia coli)一般变形杆菌(Proteus Vulgaris)荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens)2、染色液鞭毛染色液甲鞭毛染色液乙(试验前配好的新奇染液)3、器皿显微镜、酒精灯、洗瓶装蒸馏水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、洁净载玻片、玻璃缸、无菌水三管、灭菌长滴管三支.【试验步骤】1、用长滴管取无菌水轻轻移入长好菌种的试管内,培育20-30min 使细菌自己渐渐游入水中并充分伸展其鞭毛,使水呈轻度混浊.2、取一滴菌悬液滴于玻片的1/3位置上,然后轻轻抬起此端,使悬液缓慢流至玻片另一端,平放使其在空气中自然干燥固定.切忌用火焰烘干.3、在涂片部位滴甲液,染色3~5min.4、用蒸馏水轻轻冲洗.5、加乙液染30~60s,可在酒精灯上稍稍加热.冲洗多余的染液.6、制片干后检查.【试验结果】1、显微镜下检查鞭毛染成什么颜色和外形.2、比较菌种鞭毛着生的位置、数目并绘图.【思索题】1、菌种的培育时间与鞭毛染色有什么关系?2、你在显微镜下看到的鞭毛是否为原来的大小和外形?3、鞭毛涂片与芽孢涂片有何区分?为什么?。

鞭毛染色实验报告

鞭毛染色实验报告

1. 掌握鞭毛染色的原理和方法。

2. 观察细菌鞭毛的形态、数量和分布位置。

3. 了解鞭毛在细菌分类和鉴定中的意义。

二、实验原理鞭毛是细菌的运动器官，对细菌的分类和鉴定具有重要意义。

鞭毛染色是一种特殊染色方法，通过媒染剂和染色剂的作用，使鞭毛变粗，便于在显微镜下观察。

常用的媒染剂有单宁酸、明矾钾等，染色剂有碱性复红、硝酸银、结晶紫等。

三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、大肠杆菌。

2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。

3. 试剂：鞭毛染色液（A液）、0.01%美蓝水溶液（B液）、香柏油、二甲苯、无菌水、凡士林。

4. 工具：显微镜、接种环、酒精灯、凹载玻片、盖玻片、镊子、细玻棒、吸水纸。

四、实验步骤1. 活化菌种：将保存的菌种在新制备的牛肉膏蛋白胨斜面培养基上连续移种2-3次，每次于30℃培养10-15h。

活化后菌种备用。

2. 制片：在干净载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用无菌操作法，以接种环从活化菌种中取少许菌苔（注意不要带培养基），在载玻片的水滴中轻沾几下。

将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓缓流到另一端，然后平放，于空气中干燥。

3. 染色：滴加鞭毛染色液A液，染3-5min。

用蒸馏水充分洗净A液，使背景清洁。

将残水沥干或用B液冲去残水。

滴加B液，在微火上加热使微冒蒸汽，并随时补充染料以免干涸，染30～60s。

待冷却后，用蒸馏水轻轻冲洗干净，自然干燥或滤纸吸干。

4. 镜检：先用低倍镜和高倍镜找到典型区域，然后用油镜观察。

菌体为深褐色，鞭毛为褐色。

注意观察鞭毛着生位置（镜检时应多找几个视野，有时只在部分涂片上观察到鞭毛）。

1. 金黄色葡萄球菌：观察到典型的鞭毛，数量较多，主要分布在菌体一端。

2. 普通变形杆菌：观察到鞭毛，数量较少，主要分布在菌体两端。

3. 大肠杆菌：未观察到鞭毛。

六、实验讨论1. 鞭毛染色是细菌鉴定的重要方法之一，通过观察鞭毛的形态、数量和分布位置，可以初步判断细菌的种类。

2. 本实验中，金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌均具有鞭毛，而大肠杆菌无鞭毛。

鞭毛染色原理

鞭毛染色原理

鞭毛染色原理鞭毛染色是一种常用的细胞生物学技术，它通过染色技术可以清晰地观察细胞鞭毛的结构和形态，为研究细胞运动、感觉和信号传导等提供了重要的手段。

鞭毛是细胞表面的一种突起结构，其直接参与了细胞的运动和感知功能。

鞭毛染色的原理主要是利用染色剂特异性地与鞭毛结构中的蛋白质或其他成分结合，从而使鞭毛在显微镜下呈现出清晰的形态。

下面将详细介绍鞭毛染色的原理及其操作步骤。

首先，鞭毛染色的原理是利用染色剂与鞭毛结构中的特定成分发生特异性反应。

通常使用的染色剂有伊红、甲苯胺蓝等，它们可以与鞭毛中的蛋白质或核酸等成分结合，使鞭毛呈现出颜色。

通过染色后，在显微镜下观察可以清晰地看到鞭毛的形态和结构。

其次，进行鞭毛染色的操作步骤如下，首先，将待观察的细胞置于载玻片上，并在玻片上加一滴染色剂。

然后，用玻璃棒轻轻搅拌，使染色剂均匀地覆盖在细胞上。

接着，用盖玻片轻轻盖住待观察的细胞，避免空气氧化影响染色效果。

最后，将载玻片放置在显微镜下观察，调节倍率和焦距，即可清晰地看到染色后的鞭毛结构。

鞭毛染色技术的应用非常广泛，特别是在细胞生物学和生物医学研究中。

通过观察鞭毛的形态和结构，可以了解细胞的运动、感知和信号传导等重要生理功能。

同时，鞭毛染色还可以用于研究细胞器官的形成和功能，为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。

总之，鞭毛染色是一种重要的细胞生物学技术，通过染色剂与鞭毛结构中的特定成分发生特异性反应，清晰地观察细胞鞭毛的结构和形态。

它在细胞生物学和生物医学研究中具有重要的应用前景，为揭示细胞的生理功能和疾病发生机制提供了重要的手段。

希望通过本文的介绍，能够让读者对鞭毛染色原理有一个更加清晰的了解。