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从白纹伊蚊与致倦库蚊分离和鉴定可结合登革Ⅱ病毒的蛋白分子付宇姣;郑学礼;潘京【摘要】目的筛选登革Ⅱ病毒(DENV-2)识别白纹伊蚊、致倦库蚊的连接分子.方法提取不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊的总蛋白,用SDS-12％ PAGE进行分析,用病毒覆盖蛋白结合试验(VOPBA)筛选不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊表达连接DENV-2分子.结果 VOPBA检测不同发育时期白纹伊蚊显示:幼虫样品的泳道可见到25 000、35 000、50 000的DEN-2结合分子,蛹样品的泳道可见到35 000、50 000分子,雄蚊样品可见到50 000分子,雌蚊样品中可见到35 000、50 000分子.DEN-2结合蚊35 000分子在白纹伊蚊幼虫、蛹及成蚊的雌蚊的三个阶段均存在,而雄蚊的成蚊则缺少这一分子.VOPBA检测不同发育时期致倦库蚊:幼虫样品可见100 000分子,蛹样品可见40、100 000分子,另外在50 000位置上下亦可见48 000、60 000左右的多个条带,雄蚊与雌蚊样品均见40 000、100 000分子.结论 35 000大小的蛋白分子分布与白纹伊蚊感染组织向性相关.%Objective To screen DENV-2 binding proteins from Aedes albopictus and Culex. quinquefasciatus. Methods The total proteins of Aedes albopictus and Culex. quinquefasciatus in different developmental stages were prepared and analyzed with SDS-12% polyacrylamide gel. After electophoresis the proteins were transferred using Mini Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell (Bio-Rad ) to a nitrocellulose membrane. Virus overlay protein-binding assay (VOPBA) was carried out using anti-dengue virus 1-4 monoclonal antibody. Results In Aedes albopictus, VOPBA detected DEN-2 binding molecules of 25 000, 35 000, and 50 000 in larvae samples, molecules of 35000 and 50 000 in pupae samples, a 50 000 molecule in male mosquito samples, and molecules of 35 000 and 50 000 in female mosquito samples. DENV-2 binding protein of 35 000 was found in the larvae, pupae, and female mosquitoes, but not in male mosquitoes. In Culex. Quinquefasciatus, VOPBA detected a molecule of 100 000 in larvae samples, molecules of 40 000, 100 000, and around 50 000 (48 000 and 60 000) in pupae samples, and molecules of 40 000 and 100 000 in male mosquitoes and female mosquito samples. Conclusion Several proteins capable of binding DENV are found in Aedes albopictus and Culex. quinquefasciatus in different development stages. The 35 000 molecule expressed in Aedes albopictus as a putative receptor protein may be related to virus tropism in mosquito tissues.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2013(033)003【总页数】4页(P342-345)【关键词】白纹伊蚊;致倦库蚊;登革Ⅱ病毒;受体分子【作者】付宇姣;郑学礼;潘京【作者单位】南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系,广东广州510515【正文语种】中文登革病毒（DENV）感染是世界范围内的一个严重公共卫生问题，特别是热带和亚热带国家［1-2］。
2019年钦州市蚊虫抗药性监测工作方案一、监测目的规范白纹伊蚊/埃及伊蚊饲养方法，抗药性监测方法，为卫生杀虫剂、器械杀灭效果提供依据。
二、监测范围白纹伊蚊/埃及伊蚊三、监测内容与方法1.白纹伊蚊/埃及伊蚊的饲养1.1目的规范白纹伊蚊/埃及伊蚊饲养方法，为卫生杀虫剂、器械杀天效果测定提供标准试虫。
1.2适用范围适用于白纹伊蚊/埃及伊蚊饲养的操作1.3职责1.3.1蚊虫饲养人员必须掌握蚊虫饲养技术。
1.3.2与饲养无关的人员木经许可不得进入饲养室，不允许饲养人员在饲养室干与饲养无关的事，饲养室内严禁吸烟。
1.4饲养1.4.1器材:方形塑料盆(或搪瓷盆)、蚊笼、饲养架、吸管、平皿、烧杯等。
1.4.2环境条件:温度26+1C,相对湿度75%+5%，光照时间14小时。
1.4.3饲料:猪肝和馒头晒干后按1:1的质量比用粉碎机磨碎后，过60目或者80目网筛。
1.4.4饲养方法1.4.4.1成虫饲养成蚊在蚊笼中饲养，每笼密度为200-300只蚊虫，蚊笼上部放置10%糖水浸透的海绵作为饲料，每天更换一次。
成蚊在大量羽化后第2天多数可完成交配，此时即可供雌蚊吸血。
供血时，将小白鼠腹部朝上固定在塑料板上，放入笼内喂血24-48小时，雌蚊吸血后2-3天可产卵，产卵期间笼内放入1个250mL的烧杯，内放三分之二水，将圆形滤纸对折2次后，成一圆筒状放入烧杯内，滤纸筒外缘高于烧杯外缘，且下部接触水面，使滤纸筒润湿便于伊蚊在滤纸上产卵。
经常观察烧杯内水是否不足，及时补水。
每日观察产卵量，如产卵量大可一天一换滤纸，如卵量少可以两天一-换。
一次供血可以连续产卵3天。
1.4.4.2卵纸的保存:将产有伊蚊卵的滤纸筒拿出，自然晾干后放于实验室环境内，可保存2个月。
1.4.4.3幼虫饲养:在方形塑料盆(或搪瓷盆)内盛脱氯水，饲养幼虫200-300条，每日加饲料1-2次，1-2龄幼虫加料要少，如水面有膜:需要及时去膜。
幼虫化蛹后，用吸管将蛹移入盛有脱氯水的烧杯中，置于蚊笼内待其羽化。
第一章概述登革热(dengue fever，DF)是由4个血清型登革病毒(dengue virus，DV)引起的急性蚊媒传染病，主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。
DF是分布最广，发病最多，危害较大的一种虫媒病毒性疾病，广泛流行于全球热带和亚热带的非洲、美洲、东南亚和西太平洋地区的l00多个国家和地区。
在临床上，登革热是一种严重的流感样的疾病．主要表现为起病突然、高热、剧烈头痛、眼眶后痛、肌肉和关节痛，可伴有皮疹、淋巴腺肿和白血球减少，可波及所有人群，但症状可因病人的年龄不同而不同。
一般将这种病型称为古典型登革热(classical dengue fever，CDF)，此类型传播迅速，可引起较大规模的流行。
在登革热流行期，易感人群的罹患率通常为40％～50％，可高达80％～90％，但病死率很低。
登革出血热(dengue haemorrhagic fever DHF)是以高热、出血、肝大，严重病例循环衰竭为特征，病死率高，是较为严重的一种临床类型。
伴有休克综合征的称为登革休克综合征(dengue shock syndrome，DSS)。
登革热没有特效的治疗方法。
如果没有适当的治疗，登革出血热的病死率可超过20％，经过有效的支持疗法，病死率可低于l％。
目前，预防或控制登革热的唯一有效措施是控制蚊媒。
由于4种血清型中的任何一种登革病毒都能引起疾病，且只针对一或两种血清型病毒的保护性抗体可能会导致增加更严重疾病的危险，登革热疫苗研究进展困难。
理想的能预防4种血清型病毒的疫苗产品可能将在今后几年内被实际应用。
全球约25亿的人群处于登革热的威胁中。
1955年~1988年间共有80个国家向世界卫生组织（WHO）报告发生国登革热/登革出血热，共报告876万多病例（见表1-1）。
世界卫生组织（WHO）目前估计全球每年有5000万人感染登革病毒，其中约50万登革出血热病例（其中大部分为儿童）需要住院治疗，至少2.5%的登革出血热病例死亡。
精心整理附件3登革热媒介伊蚊监测指南一、监测目的（一）掌握登革热媒介伊蚊种类构成、密度、分布及季节变化和长期趋势。
（二）为登革热风险评估、预测预警、控制规划提供科学依据。
（三）动态监测疫点、疫区媒介伊蚊密度，评估疫情传播风险和伊蚊控制效果。
二、媒介伊蚊的监测方法（一）布雷图指数法。
1.器具：手电筒、捞勺、吸管、蚊虫收集装置、标签纸等。
2.方法：每个监测点按不同地理方位选4个街道/村的居民区调查不少于100户，检查记录室内外所有小型积水容器及其幼虫孳生情况，收集阳性容器中的蚊幼进行种类鉴定，或带回实验室饲养至成蚊进行种类鉴定，计算布雷图指数（记录、统计表见附表1，2）。
为避免连续监测对蚊虫密度造成影响，相邻两次监测应在不同户次进行。
户的定义：每个家庭、集体宿舍/单位办公室/酒店的2个房间、农贸市场/花房/外环境/室内公共场所等每30㎡定义为一户。
3.密度指标：布雷图指数（BI）计算公式（二）诱蚊诱卵器法。
1.器具：诱蚊诱卵器、白色滤纸、隔夜自来水、标签纸等。
2.方法：每个监测点按不同地理方位选4个街道/村的居民区共布放不少于100只诱蚊诱卵器，一般每25-30米距离布放一个诱蚊诱卵器，主要布放在居民区、单位、学校等楼顶天台、工地、空中花园或外环境的树木、花草、灌木丛等公共绿化带等，连续布放4天，第4天检查，收集诱捕成蚊，蚊卵需饲养至高龄幼虫或成蚊后进行种类鉴定，计算诱蚊诱卵器指数。
（记录、统计表见附表3，4）。
3.密度指标：诱蚊诱卵器指数计算公式（三）双层叠帐法。
1.器具：双层叠帐（外层：长×宽×高：1.8m×1.8m×1.5m；内层：长×宽×高：1.2m×1.2m×2.0m）、计数器、手电筒、电动吸蚊器等。
2.操作：选择居民区附近的外环境作为监测地点，在上午或下午媒介伊蚊活动高峰时段内，诱集者位于内部封闭蚊帐中暴露两条小腿，收集者利用电动吸蚊器收集停落在蚊帐上的伊蚊持续30min，分类鉴定，记录诱蚊开始与结束的时间、地点、温度、湿度和风速（附表5）。
第1篇一、实验目的1. 了解不同蚊子的形态特征。
2. 掌握蚊子种类的辨别方法。
3. 提高对蚊子防治工作的认识。
二、实验材料1. 蚊子样本：采集自不同环境下的蚊子样本。
2. 实验器材：放大镜、显微镜、记录本、绘图工具等。
3. 蚊子种类鉴定书籍或资料。
三、实验方法1. 观察蚊子样本：仔细观察蚊子样本的形态特征，包括身体颜色、长度、翅膀形状、触角长度等。
2. 比较蚊子样本：将蚊子样本与蚊子种类鉴定书籍或资料中的图片进行对比，找出相似之处。
3. 绘制蚊子样本：根据观察结果，绘制蚊子样本的形态特征图。
4. 鉴定蚊子种类：结合观察结果和资料，确定蚊子样本的种类。
四、实验步骤1. 收集蚊子样本：在不同环境下采集蚊子样本，确保样本具有代表性。
2. 观察蚊子样本：使用放大镜和显微镜观察蚊子样本的形态特征。
3. 记录观察结果：将观察到的蚊子样本特征记录在记录本上。
4. 比较蚊子样本：将蚊子样本与蚊子种类鉴定书籍或资料中的图片进行对比，找出相似之处。
5. 绘制蚊子样本：根据观察结果，绘制蚊子样本的形态特征图。
6. 鉴定蚊子种类：结合观察结果和资料，确定蚊子样本的种类。
7. 分析实验结果：总结实验过程中发现的问题，提出改进措施。
五、实验结果与分析1. 观察结果：通过观察，我们发现蚊子样本具有以下特征：身体颜色、长度、翅膀形状、触角长度等。
2. 比较结果：将蚊子样本与蚊子种类鉴定书籍或资料中的图片进行对比，发现蚊子样本与某一种蚊子的特征相似。
3. 鉴定结果：结合观察结果和资料，我们确定蚊子样本为某种蚊子。
4. 分析结果：通过对蚊子样本的观察和鉴定，我们了解了不同蚊子的形态特征，掌握了蚊子种类的辨别方法。
六、实验结论1. 本实验成功辨别了蚊子种类，为蚊子防治工作提供了理论依据。
2. 通过观察和比较，我们掌握了蚊子种类的辨别方法，提高了对蚊子防治工作的认识。
3. 在今后的工作中，我们将继续关注蚊子种类的变化，为蚊子防治工作提供更多帮助。
