Transwell实验原理与操作步骤

Transwell侵袭实验总结第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。

1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。

更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。

但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。

这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。

下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。

我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。

学会这5步，轻松搞定transwell实验生物学霸丁香通出品轻松采购无忧科研做肿瘤研究的人，很少有不知道 transwell 实验的，它是用来研究肿瘤细胞的迁移侵袭转移情况的一种简便快捷的实验方法，还可以构建两种细胞的共培养体系以及趋化性试验。

今天咱们就来讲讲怎么做肿瘤细胞的侵袭转移实验。

Transwell 侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。

我们在膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，于是细胞就要分泌金属蛋白酶将基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面，最后我们检测高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭能力了。

而迁移实验就是不铺胶直接让细胞穿过就行了。

Transwell 简易图以下学霸君来介绍侵袭实验步骤：实验前准备：transwell 小室（一般选用12um），24 孔板，基质胶（corning），细胞实验所需的基本的材料。

基质胶铺板用BD 公司的Matrigel 1：8 稀释（可以直接用无血清的培养基稀释），包被 Transwell 小室底部膜的上室面，置37℃孵箱 1-4h 使Matrigel 聚合成凝胶（时间不宜太长，之前有人说在37 度孵箱过夜，反正元元师兄觉得不太可能）。

注意事项：1. 铺胶之前将枪头以及所用的耗材至于冰箱4 度当中，否则配胶的时候会直接凝固。

2. 铺胶的厚度自己摸索，25ul，40ul，100ul。

3. 注意铺胶过程不要产生气泡，铺胶均匀，否则影响实验结果。

4. 注意无菌操作。

2制作细胞悬液1. 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。

但这一步并不是必须的。

2. 消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用 PBS 洗 1－2 遍，这一步很必要，否则细胞表面覆有血清培养基，细胞没有迁移侵袭的动力），用无血清培养基重悬。

transwell小体原理-回复transwell，也称为转移百分率孔板（Transwell Permeable Supports），是一种常用于研究细胞迁移、侵袭和转移的实验方法。

它通过模拟生理条件下的细胞迁移情况，提供了一种方便、可靠的实验平台。

本文将详细介绍transwell小体的工作原理和使用方法。

第一步：理解transwell小体的基本原理transwell小体由上下两个隔离的室组成，上室为细胞培养室，下室为培养液室。

两者之间分隔着一块孔径合适的膜片。

通常，膜片选择多孔性聚碳酸酯或胶原膜，其孔径大小可根据具体实验需求进行选择。

细胞可以通过膜孔迁移到下室中，从而模拟细胞在体内穿越生理屏障的过程。

第二步：制备transwell小体实验装置1. 准备上下室：选择适当容量的上下室，通常上室较小，下室较大，确保两个室都可以容纳足够的培养液和细胞。

2. 安装膜片：将膜片放入上室中，确保膜片放置平整，没有明显的气泡或污染物。

3. 连接上下室：使用连接管将上室与下室连接起来，并确保连接部分密封良好，以防止液体泄漏。

第三步：培养细胞1. 处理膜片：在实验前，先对膜片进行处理。

对于多孔性膜片，可以先进行预涂或预培养，以增加细胞附着和生长的效率。

2. 细胞培养：将需要进行迁移实验的细胞悬浮液加入上室中，并注意控制细胞密度，避免过高或过低的细胞数目。

3. 培养液添加：在上室中添加适当的培养液，以满足细胞的生长和迁移需求。

同时，在下室中加入相应的培养液，以提供适当的环境和条件。

第四步：进行实验1. 实验前处理：在进行实验前，可以对细胞进行预处理，例如添加化学物质或进行基因操作，以模拟特定的生理或病理状态。

2. 实验操作：将设备放置在恒温培养箱中，以保证适宜的温度和环境条件。

根据实验需要，可以对不同的上下室中的条件进行调控，例如填充不同的培养液、添加特定的化学物质等。

3. 实验时间：根据具体实验要求和细胞特性，确定合适的实验时间。

Transwell小室实验是一种常用于细胞学研究中的实验方法，主要用于研究细胞迁移、侵袭、成血管和细胞-细胞相互作用等细胞生物学现象。

本文将详细介绍Transwell小室实验的原理及其在细胞学研究中的应用。

一、Transwell小室实验原理Transwell小室实验是通过一种特殊的小室装置进行的，该装置由两个分隔的小室组成，上下两个小室之间通过一片具有微孔的多孔膜相连。

这片多孔膜的孔径可以根据实验需要进行选择，常见的孔径有3um、8um等。

在实验过程中，我们将需要观察的细胞或细胞外基质放置在上小室中，而下小室中则向其添加一定浓度的化学物质或药物。

待实验进行一定时间后，我们可以通过上下小室之间的多孔膜来观察细胞的迁移、侵袭或是其他相关现象。

在Transwell小室实验中，我们可以根据实验需要对多孔膜进行功能修饰，比如涂覆胶原蛋白、基质蛋白等物质，或是加入不同浓度的化学刺激物质，以模拟细胞在不同生理环境下的行为。

这种设置能够更真实地反映细胞在体内的生理活动，进一步帮助我们理解细胞的生理与病理过程。

二、Transwell小室实验在细胞学研究中的应用1.细胞迁移和侵袭研究Transwell小室实验广泛应用于细胞迁移和侵袭研究中。

我们可以将需要研究的细胞悬浮在上小室中，然后在下小室中添加诱导因子，比如趋化因子、血浆成分等，通过多孔膜对细胞进行筛选，并观察细胞在多孔膜上迁移扩散的情况。

这种实验能够模拟体内细胞在不同环境中的迁移和侵袭过程，帮助我们更好地理解细胞在肿瘤转移、炎症反应等生理和病理过程中的行为。

2.成血管研究Transwell小室实验也常用于细胞成血管相关的研究。

我们可以在上小室中培养内皮细胞或其他与血管生成相关的细胞，然后在下小室中添加适当的生长因子或细胞因子，观察细胞在多孔膜上形成管状结构。

这种实验方法有助于我们深入了解血管生成的分子机制，并为相关疾病的治疗提供新的思路。

3.细胞-细胞相互作用研究在细胞-细胞相互作用研究中，Transwell小室实验也具有重要的应用价值。

地区：上海简介：在A549细胞中过表达human Oct-4基因，通过对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组进入下室的细胞数量进行测定，研究Oct-4基因对细胞迁移能力的影响。

提供商：oobio服务名称：细胞侵袭侵袭小室实验摘要：在A549细胞中过表达human Oct-4基因，通过对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组进入下室的细胞数量进行测定，研究Oct-4基因对细胞迁移能力的影响。

实验结果显示Oct-4基因可以促进A549细胞的迁移能力。

为进一步深入研究Oct-4基因的功能提供实验数据。

关键词：Oct-4，Transwell，A549，细胞迁移一、实验原理Transwell小室底层的一张有通透性的膜（一般为聚碳酸酯膜），将其放置于孔板中，小室内称上室，培养板内称下室。

由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞。

应用Transwell可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

肿瘤迁移实验：研究肿瘤细胞的迁移能力或特定情况下肿瘤细胞的迁移能力。

常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。

肿瘤侵袭实验：研究肿瘤细胞的侵袭能力或特定情况下肿瘤细胞的侵袭能力。

在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，细胞要把基质消化后才可以从上室迁移到下室，计数进入下室的细胞量测定细胞的侵袭能力。

二、实验目的用质粒Oct-4-EGFP转染后的A549细胞与正常细胞组、阴性对照组进行比较分析，考察基因Oct-4对A549细胞的迁移能力产生的影响。

三、实验步骤实验共分以下4个主要步骤：1. 质粒转染细胞：准备A549细胞，转染前一天按照70-80%密度铺在6cm培养皿中。

16h后，按照转染试剂说明书转染细胞（8μg质粒，20μl lipofectamine 2000转染试剂）。

Transwell侵袭实验总结第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。

1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。

更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。

但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。

这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。

下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。

我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。

transwell方法Transwell方法是一种常用的细胞迁移和侵袭性研究技术，也称为Boyden室或Boyden腔。

该技术利用了细胞在特定条件下通过孔隙的能力，可以模拟细胞在体内穿越基底膜的过程。

本文将从Transwell 方法的原理、应用、优缺点等方面进行介绍。

一、Transwell方法的原理Transwell方法是利用Transwell腔的特殊结构，将上下两个室隔离开来，上室放置细胞悬液，下室放置培养基和化合物，通过孔隙模拟细胞穿越基底膜的过程。

Transwell腔通常由两个部分组成，上部为细胞培养室，下部为底部过滤膜室。

过滤膜通常为聚碳酸酯或聚酰胺材料，可以选择不同的孔径大小和孔隙度，以适应不同类型的细胞。

Transwell方法的操作流程如下：1. 准备Transwell腔和底部过滤膜。

2. 在上室中加入细胞悬液。

3. 在下室中加入培养基和化合物。

4. 将Transwell腔放入细胞培养箱中培养。

5. 取出Transwell腔，将上室中的细胞悬液倒掉，用PBS或其他缓冲液洗涤。

6. 取出底部过滤膜，用甲醇或其他固定液固定细胞。

7. 进行免疫染色或其他检测。

二、Transwell方法的应用Transwell方法主要用于细胞迁移和侵袭性研究，可以模拟细胞穿越基底膜的过程，评估细胞侵袭性、迁移能力和转移能力，同时也可以研究细胞与化合物之间的相互作用。

具体应用包括：1. 细胞迁移和侵袭性研究。

可以用于研究肿瘤细胞的侵袭和转移能力，评估药物对细胞迁移和侵袭性的影响。

2. 细胞与化合物相互作用研究。

可以用于筛选化合物的抑制作用，评估化合物对细胞迁移和侵袭性的影响。

3. 细胞-细胞相互作用研究。

可以用于研究细胞-细胞相互作用对细胞迁移和侵袭性的影响，评估细胞间信号转导通路。

4. 细胞与基质相互作用研究。

可以用于研究细胞与基质之间相互作用的过程，评估细胞与基质之间的黏附和迁移能力。

三、Transwell方法的优缺点Transwell方法具有一定的优点和缺点：1. 优点：Transwell方法操作简单，可以模拟细胞穿越基底膜的过程，评估细胞侵袭性、迁移能力和转移能力，同时也可以研究细胞与化合物之间的相互作用。

Transwell实验超详细Transwell侵袭实验总结第⼀节概念这⾥想明确两个概念，⼀个是Transwell，另⼀个是肿瘤细胞侵袭模型。

1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有⼩室的意思，可以从字⾯上理解，这是⼀类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是⼀种膜滤器（Membrane filters），也可认为是⼀种有通透性的⽀架（permeable supports）。

更准确地说，Transwell应该是⼀种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell⼩室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为⼀个可放置在孔板⾥的⼩杯⼦，不同⼚家对Transwell会有不同的命名，⽽不同型号也可有不同形状，不同⼤⼩，根据实验需要，可有不同选择。

但⽆论是何种外形，其关键部分都是⼀致的，那就是杯⼦底层的⼀张有通透性的膜，⽽杯⼦其余部分的材料与普通的孔板是⼀样。

这层膜带有微孔，孔径⼤⼩有0.1－12.0µm，根据不同需要可⽤不同材料，⼀般常⽤的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。

下图是⼀个Transwell装置的纵切⾯将Transwell⼩室放⼊培养板中，⼩室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。

我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从⽽可以研究下层培养液中的成分对细胞⽣长、运动等的影响。

应⽤不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进⾏共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种⽅⾯的研究。

下⾯参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖⼦具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞⼤⼩。

transwell侵袭实验原理及步骤展开全文transwell侵袭实验就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，细胞会往高营养的培养液方向移动。

应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

transwell侵袭实验内容：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。

常用0.4、3.0µm。

我们实验室用的是0.4µm。

将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。

（2）趋化性实验可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。

①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。

②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。

（3）肿瘤细胞迁移实验常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。

（4）肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0µm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。

在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或实验设定的药物或者影响因子，细胞会分泌相关酶类消化模拟细胞外基质膜的基质胶，从而从上室迁移到下室，通过计数进入下室的细胞量测定细胞的侵袭能力。

细胞迁移抑制实验操作步骤 (Transwell)该实验旨在研究细胞迁移的抑制效果，以下是操作步骤的简要说明：1. 准备实验材料：- Transwell细胞迁移板- 细胞培养基- 细胞培养物- PBS缓冲液- 1% 无菌牛血清白蛋白2. 处理Transwell板：- 将Transwell板放入96孔培养板中- 在每个孔中加入100 ___的PBS缓冲液，并孵育15分钟- 弃去PBS缓冲液，但不要让Transwell板干燥3. 细胞处理：- 取出需要进行迁移实验的细胞培养物- 用培养基洗涤细胞两次，以去除血清成分- 将细胞培养基排出，用PBS缓冲液洗涤细胞一次，以去除残留的培养基成分- 加入适量的细胞培养基，使细胞浓度适宜4. 细胞孵育：- 将处理好的细胞均匀分配到Transwell板的上室孔中（通常为每个孔加入100 ___）- 对于空白对照，将相应的孔中只加入细胞培养基而不加入细胞- 确保Transwell板的下室孔中加入足够的细胞培养基，以保持湿润环境- 将96孔培养板放入背倒式组织培养箱中，以37°C条件下孵育所需时间（通常为24小时）5. 固定和染色：- 孵育结束后，可将上室孔中的未迁移细胞用棉签轻轻擦去- 将Transwell板放入4% 巯基乙酸缓冲液中固定细胞，孵育30分钟- 弃去固定液，用PBS缓冲液洗涤Transwell板两次- 加入适量的染色液（一种常用的染色液为1% 结晶紫染液），孵育10分钟- 弃去染色液，用琼脂糖缓冲液洗涤Transwell板两次，使板面干燥6. 分析和计数：- 用显微镜观察Transwell板的下室孔中迁移的细胞- 根据需要，可以将下室孔中的细胞收集下来进行进一步的实验- 使用图像分析软件或手动计数方法计算迁移细胞的数量和密度这些操作步骤可帮助您进行细胞迁移抑制实验，根据实验要求和具体情况，您可以进行适当的调整和优化。

转移孔试验（Transwell Assay）是一种常用的细胞实验技术，用于研究细胞的迁移能力和侵袭性。

它在生物医学研究中非常重要，特别是在肿瘤转移和疾病发展的研究中扮演着关键的角色。

1. 原理Transwell Assay的原理基于细胞在不同化学环境下的迁移和侵袭行为。

该实验通常使用转移孔板（Transwell Plate）进行，该板上有一个具有微孔滤膜的孔，可分为上下两个腔室。

上腔室通常包含待检测的细胞悬液，下腔室为培养基或其他化学物质。

2. 应用范围Transwell Assay广泛应用于肿瘤转移、细胞迁移和侵袭、药物筛选等领域。

通过该实验，可以评估细胞对化学因子、药物的反应以及细胞自身的迁移和侵袭能力。

3. 操作步骤a. 孵育：将细胞悬液加入上腔室，培养一定时间以使细胞附着并生长。

b. 处理：根据实验设计，在上下腔室分别加入化学因子或药物。

c. 染色：对下腔室的细胞进行染色，观察和统计细胞迁移或侵袭情况。

d. 分析：通过显微镜观察和图像分析，得出细胞迁移和侵袭情况的定量结果。

4. 个人观点我认为Transwell Assay可以帮助我们更好地理解细胞迁移和侵袭的机制。

通过该实验，我们可以研究不同因素对细胞行为的影响，为疾病的治疗和药物的研发提供重要参考。

总结：Transwell Assay以其独特的原理和广泛的应用范围成为细胞生物学领域中不可或缺的技术手段。

通过逐步的操作步骤，我们可以准确地评估细胞的迁移和侵袭能力，为研究和临床应用提供可靠的数据支持。

我相信随着科技的不断发展，Transwell Assay将在更多领域展现其重要价值。

Transwell Assay作为一种先进的细胞实验技术，已经在许多领域得到了广泛的应用和发展。

在肿瘤转移方面，Transwell Assay可以帮助科学家们深入研究肿瘤细胞的侵袭和转移机制，从而为肿瘤的早期诊断和治疗提供重要的理论依据。

在药物筛选和药理学研究中，Transwell Assay的应用也为新药研发提供了有效的评台，有助于评估药物对细胞迁移和侵袭的抑制或促进作用。

Transwell实验（⼩室法）检测细胞侵袭师妹师兄，你知道什么⽅法可以⽤来检测肿瘤细胞的侵袭能⼒吗？Transwell请输⼊请输⼊该怎么做呢？看完下⾯⼩笔姐姐的讲解，你就会了请输⼊1 原理将transwell⼩室放⼊培养板中，⼩室内称上室，培养板内称下室，上下室内都要盛装培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。

将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从⽽可以研究下层培养液中的成分对细胞⽣长、运动等的影响。

应⽤不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进⾏共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多⽅⾯的研究。

检测肿瘤细胞侵袭能⼒时，上室种肿瘤细胞，下室加⼊FBS或某些特定趋化因⼦，肿瘤细胞会往营养成分⾼的下室跑。

但与肿瘤细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上层侧铺上了⼀层基质胶，⽤来模拟体内细胞外基质，细胞欲进⼊下室，先要分泌基质⾦属蛋⽩（MMPs）将基质胶降解，⽅可通过聚碳酸酯膜。

最后，看看进⼊下室的细胞有多少，就可以知道该肿瘤细胞的侵袭能⼒啦。

2 步骤1包被基底膜50 mg/L Matrigel 1.8稀释液60-80 ul包被Transwell⼩室底膜的上室⾯，4℃晾⼲2⽔化基底膜吸出培养板中残余液体，每孔加⼊50 uL含10 g/L BSA的⽆⾎清培养液，37℃，30 min3制备细胞悬液先让细胞撤⾎清饥饿12-24⼩时，进⼀步去除⾎清的影响（可选择步骤）消化细胞，离⼼去除培养液，⽤PBS洗1-2次，⽤含10 g/L BSA的⽆⾎清培养基重悬。

调整细胞密度，取细胞悬液200 uL加⼊Transwell上⼩室（24孔板⼩室⼀般200 uL）4加样24孔板下室⼀般加⼊500-600 uL含FBS或趋化因⼦的培养基Tip: 下层培养液和⼩室间常会有⽓泡产⽣，⼀旦产⽣⽓泡，下层培养液的趋化作⽤就减弱甚⾄消失了。

因此⼀旦有⽓泡产⽣，要将⼩室提起，去除⽓泡，再将⼩室放进培养液5细胞计数常规培养12-48 h后（主要依癌细胞侵袭能⼒⽽定），⽤棉签擦去基质胶和上室内的细胞，75%预冷的酒精固定30 min，再⽤0.1%结晶紫染⾊10 min。

Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。

更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。

但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。

这层膜带有微孔，孔径大小有－µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。

将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。

我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。

这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择µm以下孔径。

常用、µm。

我们实验室用的是µm。

将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。

transwell实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!Transwell 实验是一种常用的细胞迁移和侵袭实验方法，用于研究细胞在体外的迁移和侵袭能力。

细胞增殖实验操作步骤 (Transwell)
本文档旨在提供细胞增殖实验（Transwell）的操作步骤。

以下
是该实验的基本步骤：
材料准备
1. 细胞培养基
2. 受试细胞
3. Transwell装置
4. 离心管和显微镜片
5. 细胞培养皿和培养室
实验步骤
1. 将细胞培养基加热至37摄氏度。

2. 将受试细胞离心收集，用培养基洗涤并重新悬浮。

3. 在Transwell装置的上室中加入细胞悬浮液，注意不要过载。

4. 在下室中加入细胞培养基，确保充分覆盖Transwell装置底部。

5. 将装置放置在培养皿中，并放入培养室内，保持37摄氏度
的温度和5%二氧化碳浓度。

6. 对实验进行不同的时间点观察，例如24小时、48小时、72小时等。

7. 可根据需要在特定时间点采集细胞样本进行进一步的分析。

数据分析
1. 使用显微镜观察Transwell装置中细胞的形态和数量。

2. 可进行荧光染色等方法来评估细胞增殖情况。

3. 对不同时间点的数据进行统计分析，例如计算平均细胞数、生长速率等。

请注意，本文档仅提供了细胞增殖实验（Transwell）的基本操作步骤，具体实验条件和细节需根据实际研究要求进行调整。

参考文献：
[1] Example Reference 1
[2] Example Reference 2。

transwell原理和技术Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。

更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。

但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。

这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。

将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。

我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。

这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0μm以下孔径。

常用0.4、3.0μm。

我们实验室用的是0.4μm。

将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。

一、背景分析随着生活水平的提高，消费者对厨房用品的需求日益增长，尤其是在每年的节假日和换季时节，锅具市场呈现出明显的销售旺季。

为了抓住这一有利时机，提高销售业绩，特制定以下工作计划。

二、工作目标1. 提高锅具产品在市场上的占有率。

2. 实现销售业绩同比增长20%。

3. 提升客户满意度，增加老客户复购率。

4. 加强团队建设，提高员工综合素质。

三、工作措施1. 市场调研与产品规划（1）针对不同消费群体，进行市场调研，了解消费者需求。

（2）根据市场调研结果，优化产品结构，推出符合市场需求的新产品。

（3）对现有产品进行升级，提高产品质量和性价比。

2. 营销策略（1）制定线上线下相结合的营销策略，扩大宣传范围。

（2）利用社交媒体、短视频平台等新媒体渠道进行宣传推广。

（3）举办各类促销活动，如限时折扣、满减优惠、赠品等，吸引消费者购买。

（4）与知名电商平台合作，扩大销售渠道。

3. 渠道拓展（1）加强与各大商超、家电卖场的合作，争取更多销售点。

（2）拓展线上销售渠道，如天猫、京东、拼多多等。

（3）发展加盟商，扩大销售网络。

4. 客户服务（1）设立客户服务中心，提供24小时咨询服务。

（2）对客户进行分类管理，针对不同客户需求提供个性化服务。

（3）开展客户满意度调查，及时了解客户需求，改进服务。

5. 团队建设（1）组织员工参加专业培训，提高业务能力。

（2）开展团队建设活动，增强团队凝聚力。

（3）设立激励机制，激发员工工作积极性。

四、时间安排1. 第一阶段（1-2月）：完成市场调研，优化产品结构，制定营销策略。

2. 第二阶段（3-4月）：开展线上线下宣传推广，拓展销售渠道。

3. 第三阶段（5-6月）：举办各类促销活动，提高销售业绩。

4. 第四阶段（7-8月）：总结经验，调整策略，为下一销售旺季做准备。

五、工作总结1. 定期召开销售会议，总结经验，分析问题，调整策略。

2. 对销售业绩进行跟踪分析，确保各项措施落实到位。

地区： 上海 简介： 在A549细胞中过表达human Oct-4基因，通过对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组进入下室的细胞数量进行测定，研究Oct-4基因对细胞迁移能力的影响。 提供商： oobio

服务名称： 细胞侵袭

侵袭小室实验 摘要：在A549细胞中过表达human Oct-4基因，通过对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组进入下室的细胞数量进行测定，研究Oct-4基因对细胞迁移能力的影响。实验结果显示Oct-4基因可以促进A549细胞的迁移能力。为进一步深入研究Oct-4基因的功能提供实验数据。 关键词：Oct-4，Transwell， A549，细胞迁移

一、 实验原理 Transwell小室底层的一张有通透性的膜（一般为聚碳酸酯膜），将其放置于孔板中，小室内称上室，培养板内称下室。由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞。应用Transwell可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 肿瘤迁移实验：研究肿瘤细胞的迁移能力或特定情况下肿瘤细胞的迁移能力。常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。 肿瘤侵袭实验：研究肿瘤细胞的侵袭能力或特定情况下肿瘤细胞的侵袭能力。在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，细胞要把基质消化后才可以从上室迁移到下室，计数进入下室的细胞量测定细胞的侵袭能力。

二、 实验目的 用质粒Oct-4-EGFP转染后的A549细胞与正常细胞组、阴性对照组进行比较分析，考察基因Oct-4对A549细胞的迁移能力产生的影响。

三、 实验步骤 实验共分以下4个主要步骤：

1. 质粒转染细胞： 准备A549细胞，转染前一天按照70-80%密度铺在6cm培养皿中。16h后，按照转染试剂说明书转染细胞（8μg质粒，20μl lipofectamine 2000转染试剂） 。

transwell统计方法Transwell统计方法是一种常用的实验技术，用于研究细胞迁移和侵袭的过程。

本文将介绍Transwell统计方法的原理、操作步骤以及其在细胞研究中的应用。

一、原理Transwell统计方法基于Transwell腔室，通过人工模拟细胞迁移和侵袭的环境，来研究细胞在不同条件下的迁移和侵袭能力。

Transwell腔室由两个隔离的腔室组成，中间隔以小孔，可以允许细胞通过。

上腔室涂有一层基底膜，用于模拟细胞迁移和侵袭的环境。

通过上腔室内细胞的迁移和侵袭情况，可以评估细胞的迁移和侵袭能力。

二、操作步骤1. 准备Transwell腔室：将Transwell腔室放入无菌培养皿中，加入适量的培养基，使其浸没在培养基中。

保持腔室表面湿润。

2. 细胞处理：将需要研究的细胞分离培养，并将其洗涤至适宜的细胞密度。

3. 细胞接种：将细胞悬液加入上腔室，将上腔室放置在含有培养基的培养皿中。

保持上腔室表面湿润，并确保细胞不会溢出。

4. 添加诱导剂：根据研究需要，可以向上腔室中添加适当的诱导剂，以模拟特定的迁移和侵袭环境。

5. 培养：将培养皿放入恒温培养箱中，以适宜的温度和湿度进行培养。

根据研究需要，可以选择不同的培养时间。

6. 细胞染色：培养结束后，将上腔室中的细胞染色，以便观察和计数。

常用的染色方法有克里斯蓝染色、伊红染色等。

7. 观察和计数：使用显微镜观察上腔室中的细胞，并通过计数细胞数量来评估细胞的迁移和侵袭能力。

三、应用Transwell统计方法在细胞研究中具有广泛的应用。

主要有以下几个方面：1. 细胞迁移和侵袭的研究：通过Transwell统计方法可以评估不同细胞在不同环境条件下的迁移和侵袭能力，从而深入了解细胞的功能和机制。

2. 肿瘤转移的研究：肿瘤转移是恶性肿瘤的重要特征，Transwell 统计方法可以模拟肿瘤细胞在体内转移的过程，为研究肿瘤转移提供重要的工具。

3. 药物筛选和评估：Transwell统计方法可以用于评估抑制细胞迁移和侵袭的药物效果，为药物筛选和评估提供依据。