第7章 基因治疗
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第一章测试1.生命具有不断自我更新繁殖后代以及对外界产生反应的能力。
()A:错B:对答案:B2.生命的演化过程总是朝着熵增加的方向进行。
()A:错B:对答案:A3.在生物体的整个运动过程中,贯穿了物质、能量、信息三者的变化、协调和统一。
()A:对B:错答案:A4.生命是一种多分子体系的存在形式,是一种过程,也是一种现象。
()A:对B:错答案:A5.严整有序的结构不是生命的基本特征之一。
()A:对B:错答案:B第二章测试1.中国古代的种痘之术,属于接种疫苗。
()A:错B:对答案:B2.朊病毒是一种具有感染性的蛋白质,通过在宿主体内不断地复制而致病。
()A:对B:错答案:B3.细胞的发育潜能是由细胞质中DNA决定的。
()A:对B:错答案:B4.关于克隆羊多莉的描述不正确的是:()A:多莉的细胞核与细胞质来自不同的羊B:需要在试管内受精C:属于同种异体细胞核移植技术D:属于无性繁殖答案:B5.关于诱导性多潜能干细胞(iPSC)技术,说法错误的是:()A:有望成为器官再生医学的重要细胞来源。
B:该技术需使用胚胎细胞或卵细胞。
C:可通过基因转移技术将某些转录因子导入动物或人体某些细胞内。
D:可使某些细胞成为类似胚胎干细胞样的多潜能细胞。
答案:B第三章测试1.蜜蜂的公蜂是单倍体。
()A:对B:错答案:A2.下列可以用于制备重组DNA的是:()A:质粒B:限制性核酸内切酶C:ABC都是D:两个不同来源的DNA片段答案:C3.我国市场上可能含有转基因作物成分的食物不包括:()A:菜籽油B:圣女果C:大豆油D:新鲜番木瓜答案:B4.以下工具酶中不能用于基因组精准编辑的是:()A:CRISPR/Cas-sgRNA核酸酶复合体B:TALEN/转录激活因子样效应核酸酶C:ZFN/锌指核酸酶D:IIS限制性核酸内切酶答案:D5.下列关于基因治疗的描述,错误的是:()A:目前基因治疗还面临许多技术挑战和伦理问题需要解决。
B:基因治疗的策略可以概括为“转基因”和“基因编辑”两种。
第三章基因表达与基因表达的调控1.关于分解物阻遏的作用机制,说法正确的是A.葡萄糖缺乏时,cAMP浓度低B.葡萄糖缺乏时,CAP浓度低C.葡萄糖缺乏时,cAMP不能与CAP形成复合物D.葡萄糖缺乏时,cAMP-CAP复合物浓度高E.葡萄糖缺乏时,cAMP-CAP复合物失去DNA结合能力2. 关于加尾修饰,说法错误的是A.组蛋白的成熟mRNA无需加poly A尾B.加尾信号包括AAUAAA和富含GU的序列C.剪切过程需要多种蛋白质因子的辅助D.加尾不需模板E.多聚A形成的过程是缓慢、匀速的反应3. 关于操纵子的说法,正确的是A.几个串联的结构基因由一个启动子控制B.几个串联的结构基因分别由不同的启动子控制C.一个结构基因由不同的启动子控制D.转录生成单顺反子RNAE.以正性调控为主4. mRNA在蛋白质合成中的功能是A.运输遗传密码所对应的氨基酸B.与蛋白质结合,提供合成场所C.与帽子结合蛋白结合启动翻译D.由三联体密码指引氨基酸的排列顺序E.通过剪切因子切除poly A尾调控翻译效率5. 关于基因表达调控的说法错误的是A.转录起始是调控基因表达的关键B.环境因素影响管家基因的表达C.在发育分化和适应环境上有重要意义D.表现为基因表达的时间特异性和空间特异性E.真核生物的基因表达调控较原核生物复杂的多6. 翻译的实质是A.将4种脱氧核糖核苷酸的排列顺序转换为4种核糖核苷酸的排列顺序B.将4种核糖核苷酸的排列顺序转换为4种脱氧核糖核苷酸的排列顺序C.将4种脱氧核糖核苷酸的排列顺序转换为20种氨基酸的排列顺序D.将4种核糖核苷酸的排列顺序转换为20种氨基酸的排列顺序E.将蛋白质一级结构的信息转换为空间结构的信息7. 关于加帽修饰,说法正确的是A.snRNA不能被加帽B.由加帽酶催化5' 端加入7甲基鸟苷酸C.加帽酶可以与RNA聚合酶I、II、III相结合D.hnRNA转录终止后才开始加帽E.RNA聚合酶发生磷酸化后,使加帽酶与之脱离8. 特异转录因子不能够A.结合RNA聚合酶B.结合基础转录因子C.结合其他特异转录因子D.结合转录非核心元件9. 关于多顺反子mRNA,正确的说法是A.几个mRNA分子有不同的开放阅读框B.几个结构基因由不同的启动子调控转录C.一个mRNA分子有几个开放阅读框D.多个结构基因编码一类蛋白质E.一个结构基因编码多种蛋白质10. 下列哪项不参与调控真核细胞基因的特异性表达A.反应元件B.特异转录因子C.增强子D.基础转录因子E.沉默子11. E.coli的RNA聚合酶中,辨认转录起始点的组分是A.核心酶B.σC.αD.βE.β'12. 哪一项不属于基因表达的范畴A.mRNA模板指导的蛋白质合成B.DNA模板指导的hnRNA合成C.DNA模板指导的DNA合成D.DNA模板指导的rRNA合成E.DNA模板指导的snRNA合成13. 乳糖操纵子的调控方式是A.CAP的正调控B.阻遏蛋白的负调控C.正、负调控机制不可能同时发挥作用D.CAP拮抗阻遏蛋白的转录封闭作用E.阻遏作用解除时,仍需CAP加强转录活性14. 基因特异性表达的根本机制是A.顺式作用元件的种类不同B.RNA聚合酶活性的差异C.基础转录因子的质和量的差异D.特异转录因子的质和量的差异E.表达产物后加工过程的差异15. 下列哪种因素对原核生物的翻译没有影响A.microRNAB.稀有密码子所占的比例C.mRNA的稳定性D.反义RNAE.调节蛋白结合Mrna16. 乳糖操纵子中,能结合别位乳糖(诱导剂)的物质是A.AraCB.cAMPC.阻遏蛋白D.转录因子E.CAP17. 已知某基因转录产物的部分序列是5’-AUCCUGGAU-3’,那么该基因中反意义链的相应序列为B.5'-TAGGTCCTA -3'C.5'-TAGGACCTA-3'D.5'-UAGGACCUA-3'E.5'-ATCCUGGAT-3'18. 基因表达包括:①复制②转录③逆转录④翻译A.①+②B.①+③C.②+④D.③+④E.①+②+④19. 锌指结构可能存在于下列哪种物质中A.阻遏蛋白B.RNA聚合酶C.转录因子D.端粒酶E.核酶20. 某种情况下,基因的点突变可能不会影响它所编码的蛋白质的一级结构,遗传密码的哪种特点对此发挥了重要作用A.方向性B.连续性C.摆动性D.通用性E.简并性第四章重组DNA技术1. 聚合酶链反应可表示为()A.PECB.PERC.PDRD.BCRE.PCR2. 在基因工程中通常所使用的质粒存在于()A.细菌染色体B.酵母染色体C.细菌染色体外D.酵母染色体外E.以上都不是3. 基因工程的基本过程不包括A.载体和目的基因的分离B.限制性内切酶的切割C.DNA重组体的形成及转化D.蛋白质空间结构的测定E.重组体的筛选与鉴定4. 基因工程的操作步骤:①使目的基因与运载体结合②将目的基因导入受体细胞③检测目的基因的表达④提取目的基因。
作者:吴乃虎出版社:高等教育出版社第一章基因工程概述第一节基因操作与基因工程一、基因操作与基因工程的关系二、基因工程的诞生与发展第二节基因工程是生物科学发展的必然产物一、基因是基因重组的物质基础二、DNA的结构和功能三、基因操作技术的发展促进基因工程的诞生和发展四、基因工程的内容第三节基因的结构——基因操作的理论基础一、基因的结构组成对基因操作的影响二、基因克隆的通用策略第一篇基因操作原理第二章分子克隆工具酶第一节限制性内切酶一、限制与修饰二、限制酶识别的序列三、限制酶产生的末端四、DNA末端长度对限制酶切割的影响五、位点偏爱六、酶切反应条件七、星星活性八、单链DNA的切割九、酶切位点的引入十、影响酶活性的因素十一、酶切位点在基因组中分布的不均一性第二节甲基化酶一、甲基化酶的种类二、依赖于甲基化的限制系统三、甲基化对限制酶切的影响第三节DNA聚合酶一、大肠杆菌DNA聚合酶二、KIenow DNA聚合酶三、T4噬菌体DNA聚合酶四、T7噬菌体DNA聚合酶五、耐热DNA聚合酶六、反转录酶七、末端转移酶第四节其他分子克隆工具酶一、依赖于DNA的RNA聚合酶二、连接酶三、T4多核苷酸激酶四、碱性磷酸酶五、核酸酶六、核酸酶抑制剂七、琼脂糖酶八、DNA结合蛋白九、其他酶第三章分子克隆载体第一节质粒载体一、质粒的基本特性二、标记基因三、质粒载体的种类第二节λ噬菌体载体一、λ噬菌体的分子生物学二、λ噬菌体载体的选择标记……第四章人工染色体载体第五章表达载体第六章基因操作中大分子的分离和分析第七章基因芯片技术第八章PCR技术及其应用第九章DNA序列分析第十章DNA诱变第十一章DNA文库的构建和目的基因的筛选第十二章基因组研究技术第二篇基因工程应用第十三章植物基因工程第十四章动物基因工程第十五章酵母基因工程第十六章细菌基因工程第十七章病毒基因工程第十八章医药基因工程第十九章基因工程产品的安全及其管理第一章基因工程概述第一节基因操作与基因工程一、基因操作与基因工程的关系基因操作(gene manipulation):指对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。
《分子生物学》课程教学大纲(理论学时:16学时)使用教材:医学分子生物学(供8年制及7年制临床医学等专业用)分子生物学是一门从分子水平研究生命现象、生命的本质、生命活动及其规律的科学。
医学分子生物学是分子生物学的一个重要分支,是从分子水平研究人体在正常及疾病状态下生命活动及其规律的一门科学。
它主要研究人体生物大分子和大分子体系的结构、功能、相互作用及其同疾病发生、发展的关系。
作为一门课程,医学分子生物学涵盖了医学各专业学生必须学习的分子生物学基础知识,以及分子生物学在医学领域中形成的专门研究领域及相关知识。
医学分子生物学既要较系统地了解分子生物学的基础理论知识和技术理论知识,同时也要了解分子生物学在医学领域的应用和相关研究进展。
本书共二十三章,包括5个方面内容。
第二章至第十章介绍分子生物学基本知识,主要介绍基因和基因组的基本概念和基本特点,基因组核酸复制与损伤修复、基因表达和功能蛋白形成与降解、基因表达调控、细胞间通讯与信号转导的基本概念和基本理论,细胞增殖与凋亡的相关分子生物学机制。
第十一章至第十三章介绍基因操作的基本知识,包括基因分析、基因功能研究和基因克隆与表达的相关基本知识和研究策略。
第十四章至第十八章介绍疾病分子生物学机制,介绍了基因和基因组、细胞间通讯和信号与人类健康和疾病之间关系。
第十九章至第二十一章介绍分子生物学理论与技术在医学中应用,包括基因诊断和基因治疗概念与相关研究。
最后两章介绍分子生物学新兴研究领域、生物信息学在基因和蛋白质研究中的应用。
本大纲正是从上述目的出发,在要求学生掌握分子生物学基本知识与基本技术,同时了解分子生物学在医学领域的应用与相关研究。
使学生们在分子水平上研究人体在正常及疾病状态下生命活动及其规律,为从事临床医学打下深厚的基础。
绪论一、目的要求了解分子生物学的定义、研究对象和研究内容;分子生物学发展简史;生物遗传物质的发现;现代分子生物学的建立和深入发展;分子生物学与相关学科的关系;分子生物学在医学和生物学中的应用。
第2章一、1. DNA聚合酶I(E.coli)的生物功能有(聚合作用)、(5’→3’外切酶作用)和(3’→5’外切酶)作用。
2. (解旋酶)作用是使DNA双螺旋打开,反应需要ATP提供能量。
3. 在DNA复制过程中,改变DNA螺旋程度的酶叫(拓扑异构酶)。
4. DNA生物合成的方向是(5’→3’),冈奇片段合成方向是(5’→3’)。
5. 在DNA合成中负责复制和修复的酶是(DNA聚合酶)。
6. DNA后随链合成的起始要一段短的(RNA引物),它是由(DNA引发酶)以核苷酸的底物合成的。
7. 帮助DNA解旋的(单链结合蛋白(SSB))与单链DNA结合,使碱基仍可参与模板反应。
8. 在DNA复制和修复过程中,修补DNA双螺旋上缺口的酶称为(DNA连接酶)。
9. 复制叉上DNA双螺旋的解旋作用由(DNA解旋酶)催化的,它利用来源于ATP水解产生的能量沿DNA链单向移动。
10. DNA引发酶分子与DNA解旋酶直接结合形成一个(引发体)单位,它可在复制叉上沿后随链下移,随着后移链的延伸合成RNA引物。
11. 证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是(肺炎双球菌的转化实验)、(噬菌体的侵染实验)。
12. 大肠杆菌的基因组是(一股双螺旋(或双股、双股环状))DNA,它的复制是由单一原点出发按(θ(或双向θ))方向进行。
13. 在DNA复制和修复过程中修补DNA螺旋上缺口的酶称为(DNA连接酶)。
14. 染色体一般由(DNA)和(蛋白质)两部分组成。
15. 核小体一般由(DNA)和(组蛋白)两部分组成16. DNA复制是一个(半保留)的过程,即子代分子的一半来自亲代,而另一半是新合成的。
这个复制特点保证了遗传信息的(高保真性)。
17. DNA后随链合成的起始要一段短的(RNA引物),它是由(DNA引发酶)以核糖核苷酸为底物合成的。
18. 紫外线照射可在相邻两个(胸腺)嘧啶间形成(嘧啶二聚体)。
19. DNA复制时,随后链的延长方向与解链方向相反,其中刚合成的短片段叫做(冈崎片段)。
第7章纳米基因药物7.1 概述自20世纪70年代DNA重组技术诞生以来,以重组DNA技术为核心的现代生物技术产业蓬勃发展。
1976年,世界上第一家应用生物技术开发新药的公司(Gentech 公司)建立,开创了现代生物技术产业发展的新纪元。
1982年美国Lilly 公司首先将重组胰岛素投放市场,标志世界第一个基因工程药物的诞生。
接着,美、日、英、瑞士等国先后批准了10余种基因工程药品上市。
例如,EPO、G-CSF、tPA等,在治疗肿瘤等一系列疾病上取得明显的疗效。
此后,以基因工程药物为主的各种基因工程产品和细胞工程产品层出不穷,并陆续商品化。
基因工程药物因其疗效好,副作用小,应用范围广泛而成为各国政府和企业投资开发的热点领域,大量的基因工程药品连续问世,年产值达数十亿美元。
基因工程药物是将目的基因用DNA 重组的方法连接在载体上,然后将载体导入靶细胞(微生物、动物细胞或人体组织靶细胞),使目的基因在靶细胞中得以表达,最后将表达的目的蛋白质提纯及做成制剂,从而成为蛋白质药物或疫苗。
这就称为基因工程药物。
现有或正在开发中的基因工程药物大致有以下几类:单克隆抗体、疫苗、基因治疗药物、干扰素、白介素、生长因子、重组可溶性受体、反义药物、人生长技术、组织纤溶酶原激活剂、凝血因子、集落刺激因子、促红细胞生成素及超氧化物歧化酶(SOD)等,若目的基因直接在人体组织靶细胞中表达,就成为基因治疗(Gene therapy)。
广义基因治疗是指利用基因药物的治疗。
通常所说的基因治疗,即狭义基因治疗,是指用完整的基因进行基因替代治疗,一般用DNA序列。
主要的治疗途径是体外(ex vivo)基因治疗,即在体外用基因转染病人靶细胞,然后将经转染的靶细胞输入病人体内。
自1990年较成功地进行了腺苷脱氨酶(ADA)缺乏引起的免疫缺陷病的人体基因治疗至今,大部分基因治疗临床试验都是体外基因治疗,即先从病人体内获得某种细胞(例如T淋巴细胞),进行培养,在体外完成基因转移后,筛选成功转移的细胞扩增培养,然后重新输入患者体内。
《基因工程》习题集第一章基因工程概述1.什么是基因工程,基因工程的基本流程?2.基因工程诞生的条件与标志分别是什么?3.简述基因工程的发展简史。
4.基因工程有哪些主要应用?5.通过本章的学习,请举两个基因工程应用的具体例子并加以简单说明。
第二章基因工程的载体和工具酶1. 基因工程载体必须满足哪些基本条件?2. 质粒载体有什么特征,有哪些主要类型?3. 噬菌体载体有哪些?携带能力分别有多大?4. 什么是人工微小染色体?有哪些类型?5. 什么是穿梭载体?6. 表达载体应该具备什么条件?7. 限制性内切核酸酶的特点与使用注意事项有哪些?8. DNA聚合酶和Klenow大片段各有什么作用?9. DNA连接酶在什么情况下使用?如何将不同DNA分子末端进行连接?10. 碱性磷酸酶有什么作用?11. 末端脱氧核苷酸转移酶有哪些作用?12. 在基因工程研究和应用中,为什么必须使用载体来克隆外源DNA片段?13. 分析影响限制性内切核酸酶酶切的因素有哪些?14. 举例说明大肠杆菌DNA聚合酶Ι在基因工程中的应用。
15. 请描述用载体pUC18来克隆DNA片段的过程。
在这个克隆实验中,你怎样选择含有克隆片段的重组子?第三章基因工程的常规技术1. 琼脂糖凝胶电泳的原理是什么2. 琼脂糖凝胶电泳的影响因素有哪些?3. 探针有哪些类型?探针标记有哪些方法?4. 探针的间接标记有什么优点?什么是ABC荧光(显色酶)标记法?5. Southern杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么?6. Northern杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么?7. Western杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么?8. 菌落(嗜菌斑)原位杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么?9. 简述PCR技术的基本原理。
10. PCR反应体系的主要成分与主要程序是怎样的?11. 提高PCR反应特异性的因素有哪些?12. 什么是逆转录PCR?13. 什么是反向PCR?14. 什么是多重PCR?15. 什么是荧光定量PCR?16. 什么是基因芯片技术?17. DNA芯片有哪些主要的应用?18. 什么是蛋白质芯片?19. 什么是基因组文库?其构建方法是怎样的?20. 什么是cDNA文库?它的构建流程是什么?21. 构建cDNA文库需要用到哪些工具酶?22. 合成cDNA第二条链有哪些方法?23. 简述酵母双杂交系统的基本原理。
基因治疗技术研究与创新第一章:背景介绍随着现代医学技术的不断发展,基因治疗作为一项新兴的治疗手段正逐渐进入人们的视野。
基因治疗的主要目的是利用基因工程技术,将人体需要的功能基因导入到病患体内,从而达到治疗疾病的目的。
临床试验表明,基因治疗对于许多常见的、严重的疾病具有很高的治疗效果,比如白血病、神经系统疾病、遗传性疾病等,在未来的医疗领域中将有着广泛的应用前景。
第二章:研究方法本章将介绍基因治疗的研究方法。
基因治疗可分为体外基因治疗和体内基因治疗两种方法。
1. 体外基因治疗体外基因治疗是指在体外将特定的基因转染到患者的细胞中,经培养后再注入患者体内。
这种方法主要用于白血病、细胞免疫缺陷等疾病的治疗。
2. 体内基因治疗体内基因治疗是指将基因直接送入患者体内,使其在患者体内表达。
这种方法常用于遗传性疾病、神经系统疾病等疾病的治疗。
此外,还有基因编辑技术,包括CRISPR-Cas9等方法,是利用人工设计的核酸序列,针对病变突变的特定位点进行精准修复。
第三章:临床应用本章将围绕基因治疗在临床上的应用展开介绍。
基因治疗在临床上主要用于以下几类疾病的治疗,这里只针对部分疾病做简要的介绍。
1. 遗传性疾病遗传性疾病发病率高、治疗难度大、病情严重。
基因治疗可以通过体内基因治疗的方式进行治疗。
例如,肌营养不良症的患者,因为某个特定酶缺失,会导致肌肉重度萎缩和运动障碍,这种疾病采用基因治疗的方法进行治疗可以达到较好的效果。
2. 白血病白血病是一种危害极其严重的恶性疾病。
目前,基因治疗已在临床上开始应用于白血病的治疗。
利用基因治疗可以对白血病患者的免疫系统进行改善,使其免疫系统重新恢复功能性。
3. 神经系统疾病神经系统疾病是目前存在的难题,比如阿尔茨海默病、帕金森病等,难以治疗,以至于一些患者会出现失智、瘫痪等症状。
而基因治疗可以通过基因干预这些神经系统疾病的发生过程,从而起到治疗的效果。
第四章:应用现状本章将探讨基因治疗在现实生活中的应用现状。
基因工程复习题题型:名词解释(10个)30分;填空(每空1分) 20分;选择题(每题1分)10分;简答题(4个)20分;论述题(2个)20分。
第一章绪论1.名词解释:基因工程:按照预先设计好的蓝图,利用现代分子生物学技术,特别是酶学技术,对遗传物质DNA直接进行体外重组操作与改造,将一种生物(供体)的基因转移到另外一种生物(受体)中去,从而实现受体生物的定向改造与改良。
遗传工程广义:指以改变生物有机体性状为目标,采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作,以改良品质或创造新品种。
包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。
狭义:基因工程。
克隆:无性(繁殖)系或纯系。
指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。
2.什么是基因克隆及基本要点?3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。
A) 限制性内切酶和DNA连接酶的发现(标志着DNA重组时代的开始);B) 载体的使用;C) 1970年,逆转录酶及抗性标记的发现。
4.基因工程研究的主要内容是什么?基础研究:基因工程克隆载体的研究基因工程受体系统的研究目的基因的研究基因工程工具酶的研究基因工程新技术的研究应用研究:基因工程药物研究转基因动植物的研究在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究第二章基因克隆的工具酶1.名词解释:限制性核酸内切酶:一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。
回文结构:双链DNA中的一段倒置重复序列,当该序列的双链被打开后,可形成发夹结构。
同尾酶:来源不同、识别序列不同,但产生相同粘性末端的酶。
同裂酶:不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列黏性末端:DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合,这样的DNA末端,称为粘性末端。
平末端:DNA片段的末端是平齐的。
基因工程复习归纳第一章绪论1.基因工程的定义:是指按照人们的愿望,经过严密的设计,将一种或多种生物体〔供体〕的基因与载体在体外进展拼接重组,然后转入另一种生物体〔受体/宿主〕内,使之按照人们的意愿稳定遗传、并表达出新的性状的技术。
2.基因工程概念的开展:遗传工程→DNA重组技术→分子/基因克隆〔Molecular/Gene→基因工程→基因操作。
应用领域以“基因工程〞、“DNA重组〞为主基因工程基因工程的历史性事件1973:Boyer和Cohen建立DNA重组技术1978:Genetech公司在大肠杆菌中表达出胰岛素1982:世界上第一个基因工程药物重组人胰岛素上市1988:PCR技术诞生1989:我国第一个基因工程药物rhIFNα1b上市2003: 世界上第一个基因治疗药物重组腺病毒-p53上市3.基因工程的三大关键元件基因〔供体〕:外源基因、目的基因载体:能将外源基因带入受体细胞,并能稳定遗传的DNA分子〔克隆载体、表达载体〕。
宿主〔受体〕:,能摄取外源DNA、并能使其稳定维持的细胞〔组织、器官或个体〕。
4.基因工程的根本步骤〔切、接、转、增、检〔大肠杆菌是中心角色〕〔1〕目的基因的获取:从复杂的生物基因组中,经过酶切消化或PCR扩增等步骤,别离出带有目的基因的DNA片断。
〔2〕重组体的制备:将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记〔抗菌素抗性〕的载体分子上。
〔3〕重组体的转化:将重组体〔载体〕转入适当的受体细胞中。
〔4〕克隆鉴定:摘要转化成功的细胞克隆〔含有目的基因〕。
〔5〕目的基因表达:使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。
第二章 DNA重组克隆的单元操作一、用于核酸操作的工具酶1.限制性核酸内切酶(主要存在于原核细菌中,帮助细菌限制外来DNA的入侵)。
限制性核酸内切酶的功能与类型其中II型限制性核酸内切酶:切割位点专一,适于DNA重组,是DNA重组中最常用工具酶。