培养基的组成、配制与灭菌

实验一培养基的配制及灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、别离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。

在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。

培养基的配制，一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育的需要，二是培养基在使用前不带菌，三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化。

培养基的灭菌通常在培养基配制后进行，其目的是杀灭培养基中残存的微生物或活的生物残体，保证培养基在贮存过程中不变质，也防止其他生物对培养的污染。

一、实验目的1．掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。

2．明确培养基的配制原理。

3．掌握配制培养基的一般方法和步骤。

4．了解湿热和干热灭菌的原理，并掌握有关的操作技术。

二、实验原理灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。

消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。

灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而到达灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。

干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。

细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。

因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高〔160～170℃〕，时间长〔1～2h〕。

但干热灭菌温度不能超过 180℃。

否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。

高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。

导致菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。

在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。

实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。

4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。

二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。

培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。

为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。

基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。

在配制母液时应注意防止沉淀产生。

绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。

各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。

通常使用的浓度单位是mg/L。

配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。

灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。

培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。

培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。

灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。

（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。

二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。

配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。

2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。

由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。

NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。

2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。

细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。

赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。

3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。

用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。

4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。

培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。

2、培养基配制时的注意事项。

四、提交实验报告附：MS培养基配方。

实验五培养基的配制和灭菌实验五培养基的配制和灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2.学习常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。

3.熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。

二、实验器材1.药品及试剂马铃薯，葡萄糖，琼脂，牛肉膏，蛋白胨，NaCl，无菌水2.仪器及其它试管、三角瓶、烧杯、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、棉花、旧报纸、麻绳、纱布、培养皿三、实验内容1.实验分组食科0901本 29人/班→7人/组，分4组2.培养基配方配方一：马铃薯培养基200ml→培养酵母菌用马铃薯水煮液 40g、葡萄糖 4 g、琼脂 4g、水 200ml、pH 自然马铃薯去皮装于烧杯中，进行煮沸，用四层纱布过滤于三角瓶中，再加糖和琼脂补水至200ml 121℃灭菌20min配方二：普通营养琼脂培养基150ml→培养大肠杆菌、枯草芽孢杆菌用蛋白胨 10g、牛肉膏 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g分装于10支试管中（试管1/5体积装液量）121℃灭菌20min四、实验方法、步骤（一）试管、锥形瓶及培养皿清洗 1人/组（二）棉塞制做 1人/组（三）培养基制作 1人/组1、马铃薯培养基削皮→切片→称量→装于烧杯中煮沸→纱布过滤于三角瓶→加糖、琼脂融化→补无菌水至200ml2、普通营养琼脂培养基称量→熔化均一→分装（试管1/5体积装液量）（四）加棉塞培养基配制完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。

（五）试管与三角瓶包扎试管5个/扎用橡皮筋捆成一捆，三角瓶在棉塞外包扎旧报纸（学会活结打法），贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。

（六）培养皿包扎 8套/包.组（七）灭菌锅的使用将包扎好的培养皿，装有培养基且包扎好的试管与三角瓶放入高压蒸汽灭菌锅内，121℃,20min高压蒸汽灭菌。

（八）摆斜面灭菌完毕，将试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上，搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。

培养基配制和灭菌方法验证一、培养基配制培养基是一种供养菌落生长的基础物质，可以提供细菌所需的营养物质和环境条件。

培养基的配制是非常关键的步骤，如果配制不当会影响到培养菌落的生长和观察结果的准确性。

1.1固体培养基的配制固体培养基是通过在液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）使其凝固，形成固体的培养基。

固体培养基可以用来分离纯菌、观察菌落特征以及保存菌种。

配制固体培养基的主要步骤如下：步骤一：准备配方根据不同的菌种需要，选择适当的培养基配方。

常见的培养基如营养琼脂(NA)、大肠杆菌琼脂(MacConkey)、血琼脂(Blood Agar)等。

步骤二：计量和溶解根据配方，按照适当的比例称量需要的成分，并加入适量的蒸馏水。

然后，将成分加热溶解，直至成分完全溶解。

步骤三：凝固将已溶解的培养基液倒入培养皿或试管中，装入适量的培养基液。

温度下降至约50℃时，可以添加相应的抗生素(如青霉素)等，促进无菌条件的保持。

待培养基液凝固后，即可进行灭菌处理。

1.2液体培养基的配制液体培养基主要用于培养大量的菌落或进行革兰氏染色等实验。

液体培养基的配制步骤与固体培养基配制类似，只是不需要加入凝固剂。

为了确保培养基无菌，常常需要进行灭菌处理。

2.1常见的灭菌方法常见的灭菌方法主要包括以下几种：1)高压灭菌法：利用高温高压的环境，将培养基中的微生物逐一被杀死。

常用的高压灭菌法是使用高压蒸汽灭菌器进行处理。

2)紫外线灭菌法：使用紫外线灭菌器，将细菌暴露在紫外线下，排除细菌生长的可能性。

3)化学灭菌法：使用化学物质，如乙醛、次氯酸钠等，浸泡培养基或在培养基上喷雾，杀灭细菌。

2.2检验培养基灭菌效果的验证方法验证培养基灭菌效果的方法主要有两种：物理指标法和培养法。

1)物理指标法：即通过检测物理指标，如温度、压力等，来验证灭菌效果。

例如，在培养基中放置一个温度计，通过测量温度变化来判断灭菌的有效性。

2)培养法：即将培养基在灭菌前后进行对照培养，观察菌落的生长情况，或通过采样培养基，进行菌种分离和鉴定。

培养基的配制与灭菌的注意事项培养基配制：1.选择合适的成分：根据实验需求选择合适的成分，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、维生素和其他添加剂等。

不同菌株具有不同的营养需求，因此需要根据菌株的特点进行选择。

2.称量成分：准备好所需的成分，并根据实验方案的要求称量合适的量，注意遵循慎重、准确的原则。

称量时要注意卫生和避免污染，避免手直接接触培养基成分。

3.溶解和调节pH：将所需的成分加入适量的去离子水中，用磁力搅拌器充分溶解。

根据菌株的要求，调节培养基的pH值。

常用的调节剂有氢氧化钠（NaOH）和盐酸（HCl）。

4.加入琼脂糖：将配制好的液体培养基加热至沸腾并搅拌，然后加入适量的琼脂糖，再次搅拌直至琼脂糖完全溶解。

5.分装和灭菌：将配制好的培养基分装到培养皿或试管中，然后灭菌。

灭菌的注意事项：1.选择合适的灭菌方法：常见的灭菌方法包括高压灭菌、滤液灭菌和热灭菌等。

选择合适的灭菌方法应基于培养基的成分和需求。

2.准备好实验室器具：在灭菌前，要确保实验室器具和操作台面都是清洁的，并准备好所需的灭菌设备和物品，如高压锅、培养皿、试管和酒精灯等。

3.严格操作：灭菌前要对培养基容器进行必要的清洁，如使用酒精进行消毒。

然后将培养基装入容器中，并用适当的方法进行密封，如用铝箔纸包裹或用锡纸密封。

4.控制温度和时间：根据选择的灭菌方法和设备的要求，设置合适的温度和时间。

灭菌时间一般为15-30分钟，不同的培养基和设备可能有所不同，需要根据实际情况进行调整。

5.检查培养基质量：灭菌后，打开培养基试管或培养皿的盖子，观察培养基是否有异常变化，如出现颜色变化、气泡或异味等。

若有异常，应立即进行处理。

总结：培养基的配制与灭菌是微生物学实验中必不可少的环节。

正确的配制和灭菌可以保证培养基的纯度和质量，从而确保实验结果的可靠性。

在培养基的配制过程中，要选择合适的成分，准确称量，并注意卫生和避免污染。

灭菌时，要选择合适的灭菌方法，并控制温度和时间，同时注意实验室器具的清洁和消毒。

实验三培养基的配制及灭菌培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。

主要用于微生物的分离、培养、鉴定以及菌种保藏等方面。

培养基一般应含有微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。

此外，为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基的pH。

一般细菌、放线菌适于生长在中性或微碱性的环境中，而酵母菌和霉菌则适于生长在偏酸性的环境中。

因此，在配制培养基时，须将培养基调节在一定pH的范围内。

迄今为止，培养基的种类极其繁多。

按培养基的成分，可将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。

天然培养基是指利用动物、植物、微生物或其它天然有机成分配制而成的培养基。

其优点是营养丰富、价格便易；缺点是成分不能准确确定且不稳定。

实验室常用的牛肉汁或麦芽汁培养基即为天然培养基。

合成培养基是指完全利用已知种类和成分的化学试剂配制而成的培养基。

优点是各成分均为已知且含量稳定，缺点是价格较贵。

实验室常用的高氏一号培养基即为合成培养基。

半合成培养基是指由天然有机成分和已知化学试剂混合组成的培养基。

实验室常用的马铃薯葡萄糖培养基即为半合成培养基。

按培养基的物理状态，可将培养基分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。

固体培养基是指在液体培养基中加入一定量的凝固剂（常加1.5％～2％的琼脂）经融化冷凝而成；半固体培养基是指在液体培养基中加入0.2％～1％左右的琼脂，经融化冷凝而成；液体培养基是指培养基中不加凝固剂琼脂，培养基呈液体状态。

按培养基的用途，可将培养基分为加富培养基、选择培养基和鉴别培养基。

加富培养基是指在培养基中加入某些特殊营养物质，促使某种持殊性能的微生物迅速生长，有利从混合菌群中分离出所需种类微生物。

例如为了分离能够利用石蜡的微生物，常在培养基中加入石蜡作为碳源。

选择培养基是指在培养基中加入某些微生物生长抑制剂，抑制那些不需要的微生物的生长，以达到从混杂微生物菌群的环境中分离到所需的微生物。

一、培养基的配制与灭菌技术培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的用于培养微生物的营养基质。

培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。

就培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。

按培养基特殊用途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。

按培养基制成后的物理状态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。

固体培养基是在液体培养基中加入1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加入0.5 %-0.8 %的琼脂。

一般培养基除含有大量水分外, 还含有碳素、氮素、无机盐类和维生素等。

此外, 由于徽生物生长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最大的生命活力, 因此应根据不同种类的徽生物. 将培养基调节到一定的pH值范围。

培养基配制后还必须进行灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微生物, 包括营养体、孢子和芽孢。

灭菌的方法很多，可分为物理方法与化学方法两大类。

物理方法包括湿热灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学方法主要是利用化学药品对接种室空间、用具和其它物体表面进行灭菌与消毒。

消毒一般是指消灭有害微生物的营养体和病原菌。

(一) 培养基的配制方法一般培养基的配制方法如下 (各种天然培养基的配制方法略有不同)：l. 按照配方的组分及用量先分别称量并配成液体；2. 根据要求调到一定的酸碱度(pH值)；3. 若要制成固体则加入2%琼脂并加热融化；4. 根据需要的数量分装入试管或三角瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；5. 包扎好灭菌后备用。

配制斜面培养基的一般操作步骤为：称量→ 溶解→ 调pH值→ 加琼脂→ 过滤→ 分装→ 加棉塞→ 包扎→ 灭菌→ 摆斜面→ 无菌检查。

(图9-7)(二) 培养基及常用器皿的灭菌培养微生物常用的玻璃器具主要有试管、三角瓶、培养皿、吸管等, 在使用前必须先进行灭菌, 使容器中不含任何杂菌；培养微生物用的营养基质(培养基), 在接入纯种前也必须先行灭菌, 使培养基呈无菌状态。

培养基的配制和灭菌实验报告(共8篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。

（2）N源：包括无机氮和有机氮。

（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。

微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。

3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。

（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。

除病菌需更小。

五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。