内切酶切开 DNA
电泳
印迹转移
印迹法
胶片显影
放射性探针 杂DNA 片断混合物通过电泳分离。 (3)电泳后,通过印迹技术转到酯酰纤维薄膜上, 以便操作。 (4)用已知小片断DNA 作为探针,互补结合需要找 的基因片断。 (5)探针DNA 片断已用放射性元素标记,使胶片感 光后可看出。
先分离纯化目的基因的 mRNA,将其逆转录成单链的 DNA,再经过DNA聚合酶的作用 产生双链的DNA,从而获得目 的基因。
2、目的基因的扩增
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) 简称PCR,是一项在短时间 内大量扩增特定的DNA片段的分子生 物学技术,1984年美国Cetus公司的Kary Millis所发明。
基因枪法
③中间介导法——农杆菌介导 ④微注射法
5、重组体的筛选
根据载体DNA分子 上的筛选标记赋予 受体细胞在筛选平 板上表型的变化来 筛选重组子。
例如由于外源DNA 的插入引起抗药性 失活。
四、基因工程的应用
基因工程技术已经在医学、工业、农业等各个领域得到 了广泛的应用。
1.基因工程药物
将目的基因用DNA重组的方法连接在载体上,然后将 载体导入靶细胞,使目的基因在靶细胞中得到表达,最后 将表达的目的蛋白质提纯及做成制剂,从而成为蛋白类药 或疫苗。
《基因工程》PPT幻灯片PPT
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一、基因工程诞生的背景 1、理论上的三大发现 ①40年代发现了遗传物质—DNA 1944、T·Avery 肺炎双球菌的转化实验。
②50年代搞清了遗传物质的分子机制—1953年 Watson and Crick的DNA结构:双螺旋、半保留复制, 1958年诺贝尔奖。