2012血液检验复习指导：酯酶染色的概述

α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE 法)简介：酯酶主要分为非特异性酯酶(non-specific esterase)、酯酶(lipase)、胆碱酯酶(choli-esterase)。

每一种酯酶常能水解许多不同的底物，多种不同的酯酶又能水解相同的底物，因此这一系列酯酶被称为非特异性酯酶。

非特异性酯酶的最适pH 为5.0～8.0，定位于溶酶体和内质网，在肝脏、肾脏、胰和小肠具有较高的酶活性。

单核-吞噬细胞系统的单核巨噬细胞、树突细胞也含有丰富的非特异性酯酶。

Leagene α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE 法)又称非特异性酯酶染色液，其原理是细胞中的非特异性酯酶将α-乙酸萘酚水解产生α-萘酚，α-萘酚再与重氮盐偶联，生成不溶性有色沉淀，定位于细胞质。

本染色液对酯酶染色无特异性，故又称作非特异性酯酶染色液，可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片的非特异性酯酶染色，亦可作氟化钠抑制试验。

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 载玻片、湿盒2、 显微镜操作步骤(仅供参考)：1、 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切入α-NAE 固定液固定。

2、 水洗，晾干。

3、 入配制好的α-NAE 孵育液，放入湿盒中，避光孵育，水洗。

4、 入甲基绿染色液复染，水洗，镜检。

编号 名称DE0038 3×10ml DE0038 3×20ml Storage 试剂(A): NAE 固定液 10ml 20ml RT 避光 试剂(B):α-NAE 孵育液 B1: α-NAE solution0.2ml 0.4ml 4℃ 避光 B2: FBB solution5ml 10ml -20℃ 避光 B3: α-NAE buffer5ml10mlRT临用前，B1:B2:B3混合，即为α-NAE 孵育液，即配即用。

试剂(C): 甲基绿染色液 10ml 20ml RT 避光 试剂(D): NaF solution 0.2ml0.4ml RT 避光使用说明书1份染色结果：细胞质灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀细胞核绿色氟化钠抑制实验：按NaF solution：α-NAE孵育液=1：25的比例，在α-NAE孵育液中加入NaF solution，其余按上述染色法进行。

一、 铁 染 色 （ferric stain）
原理
铁 ＋亚铁氰化钾
酸性环境 普鲁士蓝 反应
亚铁氰化铁
(蓝色沉淀在含Fe部位)
骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁） 骨髓中贮存铁 幼红细胞内的Fe（细胞内铁）
二、结果判断
1. 细胞外铁(骨髓小粒－含铁血黄素)
铁颗粒、铁小珠、铁团块
细胞外铁(低倍镜观察)
映机体储存铁的金标准。
外铁：反映骨髓中铁的储存量； 内铁：反映骨髓中可利用的铁量。
二、过氧化物酶染色 （peroxidase,POX）
一、原 理
粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含 有过氧化物酶(POX)，它可分解H2O2释放出新生 态的氧，后者氧化二氨基联苯胺，形成金黄色不 溶性沉淀，定位于胞质内酶所在的活性部位。 二甲基联苯胺法（DAB）原理
（1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法： A、蒸气固定：甲醛
B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙
酮。
2. 显示：有色沉淀反应
（1）偶氮偶联法：酯酶染色
（2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）希夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB
3. 复染：使各种细胞能显示出来
胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。
铁粒红细胞(siderocyte)：
胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。 环形铁粒幼红细胞(ringed sideroblast) 幼红细胞胞质内铁颗粒>6个，围绕 核周2/3以上者。
绿色箭头示：环形铁粒幼红细胞；蓝色箭头示：铁粒红细胞
三、参考范围
1. 细胞外铁： （ + ） ~（ ++ ） 2. 细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率大约

医院检验中心酯酶染色---中性非特异性脂酶(α—NAE)染色操作规程[方法学]酯酶染色的方法很多，根据与pH底物等不同作用，将常用的酯酶染色法分为两大类，即特异性酯酶染色和非特异性酯酶染色。

后者又可分为3类：①中性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。

②酸性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。

②碱性非特异性酯酶染色法：α—丁酸菜酯酶。

中性非特异性酯酶染色是单核细胞与粒细胞白血病区别的重要方法，一般实验室可选用此法。

[原理]α—乙酸萘酚经酯酶水解产生萘酚，萘酚与重氮盐偶联，生成灰黑或棕黑色沉淀物，定位于胞浆中。

[试剂]1．α—醋酸萘酯丙酮液：α—醋酸萘酯1g，加丙酮和蒸馏水混合液100m1，溶解后贮于磨口带塞三角瓶内，4℃保存，可使用半年。

2.pH7．4磷酸盐缓冲液：0．07MNa2HPO4(即Na2HPO4)3．基质液：磷酸盐缓冲液82ml，缓慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1．6ml(滴速约每分钟40滴)，边加边用力振摇。

根据5分钟后，加坚牢蓝B80mg，剧烈振摇10分钟，立即过滤，滤液两杯，各40ml。

4．氟化钠基质液：称取氟化钠(NaF)61mg加入上述其中基质液1杯内，混匀后，标上标记。

[操作](1)新鲜涂片两张，分别标上NSE和NaF记号，滴加10％甲醛生理盐水，固定5分钟，用自来水轻轻冲洗，当心血膜脱落，晾干。

(2)两张涂片同时放入各自染色杯内，37℃水浴1小时。

(3)取出后水洗，晾干后镜检。

不用复染。

[结果观察]在胞浆内若有棕黑色或灰黑色弥漫性颗粒沉淀者为阳性，细胞脑浆为黄色者为阴性。

[临床意义]1．阳性：单核细胞和组织细胞呈强阳性，但可被氟化钠抑制；巨核细胞及血小板呈阳性；早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性，且不受氟化钠抑制。

2．弱阳性及阴性：粒细胞、淋巴细胞一般为阴性，若有弱阳性也可被氟化钠抑制。

3．临床鉴别：主要用于鉴别急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病，前者NSE阳性，且受氟化钠(NaF)抑制；而后者NSE阴性，若有阳性也不受氟化钠抑制。

酯酶染色---中性非特异性脂酶(α—NAE)染色[方法学]酯酶染色的方法很多，根据与pH底物等不同作用，将常用的酯酶染色法分为两大类，即特异性酯酶染色和非特异性酯酶染色。

后者又可分为3类：①中性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。

②酸性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。

②碱性非特异性酯酶染色法：α—丁酸菜酯酶。

中性非特异性酯酶染色是单核细胞与粒细胞白血病区别的重要方法，一般实验室可选用此法。

[原理]α—乙酸萘酚经酯酶水解产生萘酚，萘酚与重氮盐偶联，生成灰黑或棕黑色沉淀物，定位于胞浆中。

[试剂]1．α—醋酸萘酯丙酮液：α—醋酸萘酯1g，加丙酮和蒸馏水混合液100m1，溶解后贮于磨口带塞三角瓶内，4℃保存，可使用半年。

2.pH7．4磷酸盐缓冲液：0．07MNa2HPO4(即Na2HPO4)3．基质液：磷酸盐缓冲液82ml，缓慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1．6ml(滴速约每分钟40滴)，边加边用力振摇。

根据5分钟后，加坚牢蓝B80mg，剧烈振摇10分钟，立即过滤，滤液两杯，各40ml。

4．氟化钠基质液：称取氟化钠(NaF)61mg加入上述其中基质液1杯内，混匀后，标上标记。

[操作](1)新鲜涂片两张，分别标上NSE和NaF记号，滴加10％甲醛生理盐水，固定5分钟，用自来水轻轻冲洗，当心血膜脱落，晾干。

(2)两张涂片同时放入各自染色杯内，37℃水浴1小时。

(3)取出后水洗，晾干后镜检。

不用复染。

[结果观察]在胞浆内若有棕黑色或灰黑色弥漫性颗粒沉淀者为阳性，细胞脑浆为黄色者为阴性。

[临床意义]1．阳性：单核细胞和组织细胞呈强阳性，但可被氟化钠抑制；巨核细胞及血小板呈阳性；早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性，且不受氟化钠抑制。

编写：谢平制定日期：2011.12.12．弱阳性及阴性：粒细胞、淋巴细胞一般为阴性，若有弱阳性也可被氟化钠抑制。

3．临床鉴别：主要用于鉴别急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病，前者NSE阳性，且受氟化钠(NaF)抑制；而后者NSE阴性，若有阳性也不受氟化钠抑制。