冰冻切片染色步骤

HE染色法是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）的首个字母缩写。苏木精是碱性染料，使细胞核染色质和胞质内的核糖体呈紫蓝色。伊红是酸性染料，使细胞质和细胞外基质中带较强碱基的蛋白质成份着红色。

常规he染色步骤：

(1)二甲苯（Ⅰ） 15min

(2) 二甲苯（Ⅱ） 15 min

（3）二甲苯：无水乙醇=1:1 2min

(4)100%乙醇（Ⅰ） 5min

(5)100%乙醇（Ⅱ） 5 min

(6)80%乙醇 5min

(7)蒸馏水 5 min

(8)苏木精液染色 5 min

(9) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s

(10) 1%盐酸乙醇 1-3 s

(11) 稍水洗 10-30 s

(12)蒸馏水过洗 1-2 s

(13) 0.5%伊红液染色 1-3 min (14) 蒸馏水稍洗 1-2 s

(15) 80%乙醇稍洗 1-2 s

(16) 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s

(17) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 s

(18) 无水乙醇 5-10 min

(19) 石炭酸二甲苯 5-10 min

(20) 二甲苯（Ⅰ） 2 min

(21) 二甲苯（Ⅱ） 2 min

(22) 二甲苯（Ⅲ） 2 min

(23) 中性树胶封固

注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。

②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

冷冻切片HE染色步骤：

（1）冰冻切片固定 10～30 s

（2）稍水洗 1～2 s

（3）苏木精液染色（60℃） 30～60 s （4）流水洗去苏木精液 5～10 s

（5）1%盐酸乙醇 1～3 s

（6）稍水洗 1～2 s

（7）促蓝液返蓝 5～10 s

（8）流水冲洗 15～30 s

（9）0.5%曙红液染色 30～60 s

（10）蒸馏水稍洗 1～2 s

（11）80%乙醇 1～2 s

（12）95%乙醇 1～2 s

（13）无水乙醇 1～2 s

实验技术：组织切片的制备

点击次数：350 发布日期：2009-11-9 来源：长沙赢润 仅供参考，谢绝转载，否则责任自负

组织切片的制备

二）切片方法-细节注意

1 切片方法的选择

光镜和免疫组化研究的切片一般为5μm，而神经组织切片为20-100μm，有利于追踪神经纤维的走行。

1.1 冰冻切片

是免疫组织化学中最常用的一种切片方法，能够最大量的保存抗原、操作简便，主要适用于不稳定的抗原（如检测细胞膜的某些抗原成分），但标本来源受限。冰冻切片时,组织中水分易形成冰晶,影响抗原定位。冰晶小而多，对组织结构损害大。因此可采用以下措施减少冰晶的形成：①速冻，缩短组织从-33～-43℃的时间。具体方法是：⑴干冰-丙酮（乙醇）法：将150-200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不冒气泡时，温度可达-70℃。用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（乙醇）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。将组织（约1cm×0.8cm×0.5cm）t投入异戊烷内速冻30-60s后取出，置-80℃低温保存或置恒冷冰箱内以备切片；⑵液氮法：将组织块平放于软塑料瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾。此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。取出组织块后立即置入-80℃冰箱贮存或作恒冷切片。②将组织置于20%-30%蔗糖溶液中1-3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。

冰冻切片一般用恒冷切片机。切片后如不染色，必须将切片吹干，贮存于低温冰箱内，

进行短暂预固定干燥后贮存于低温。

【目的】

组织标本必须首先被制成组织切片，再经过染色处理，然后才能在显微镜下进行临床诊断和科学研究。

【原理】

苏木素染色结合伊红染色是常规组织学染色技术，也称为H & E染色。苏木素是碱性染色，细胞核被染成深紫或兰色，常用作核染色；伊红是酸性染色，细胞浆染呈红色，常用作胞浆染色。

小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？ 0

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焦油紫染液的配制：

焦油紫/0.1g

蒸馏水/99ml

1%冰醋酸1ml

冰冻切片氯仿中1分钟；

无水酒精中1分钟；

95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；

进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；

95%酒精分色；

常规脱水、透明、封片。

尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。 000

mickeyzq wrote:

焦油紫染液的配制：

焦油紫/0.1g

蒸馏水/99ml

1%冰醋酸1ml

冰冻切片氯仿中1分钟；

无水酒精中1分钟；

95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；

进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；

95%酒精分色；

常规脱水、透明、封片。

尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。000

你的没有经过复染，对比也可以这么鲜明啊

我用的是1％的甲苯胺蓝，具体步骤是：

常规石蜡切片，二甲苯透明，酒精梯度复水，入1％甲苯胺蓝室温下染3min，自来水冲洗，95％酒精分化，

0.5％伊红复染1s，水洗，透明封片，但是结果不好，伊红复染后颜色很深，原来的蓝色被覆盖的很严重，

不知道该怎么改进 000

换焦油紫看看,焦油紫着色比较深.000

（二）神经细胞尼氏体染色

正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形，

有的为椭圆形。这些物质能被大部分的蓝色染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresyl fast violet）亚

甲蓝（methylene blue）甲苯胺蓝（toluidine blue）硫董（thionin）等钭其染为蓝色。但是，当神经

细胞受伤后，胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。

焦油坚牢紫显示尼氏体

焦油坚牢紫 1g

蒸馏水 100ml

*作方法：

1、切片脱蜡至水

脂肪组织冰冻切片步骤

脂肪组织冰冻切片的步骤如下：

1. 取材：在合适的环境下获取脂肪组织，一般大小为1.5×1.5×0.5cm，注意应尽量剔除脂肪组织、钙化、骨质等影响切片质量的成分。

2. 速冻：使用液氮或干冰-丙酮（乙醇）法将组织速冻。液氮法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内，然后将其放入盛有液氮的小杯内，注意小盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，10~20s组织即迅速冰结成块。干冰-丙酮（乙醇）法是将150~200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，然后使用异戊烧进行速冻。

3.

切片：将速冻后的组织块固定在切片机上，调整切片的厚度为4~6μm，然后进行切片。

4. 贴片：将切好的组织切片立即放入冰冻固定液中固定10~20秒，然后取出贴片。

5. 染色：使用苏木精染液进行染色，室温下染色1分钟，如果室温较低，则需要适当延长染色时间。

6. 水洗：染色后进行水洗，洗去多余的染液。

7. 封片：将切片晾干后，使用合适的封片剂进行封片。

注意，在整个过程中，都需要保持组织的冷冻状态，以防止组织内的冰晶形成和细胞结构的破坏。同时，切片和染色的过程中，也需要注意避免切片过厚或过薄，以及染色过深或过浅，以保证切片的质量。

以上信息仅供参考，具体操作可能会因实际情况和设备的不同而有所差异。