生化分离
1.动物脏器DNA提取实验中，加入NaCl-SSC缓冲液的原因
答：①形成等渗液②PH中性，维持DNA稳定③抑制DNA酶活
2.动物脏器DNA提取实验中，如何鉴定分析DNA的纯化
答：当A260/A280=→DNA最纯，<混有Pro，>混有RNA，～→较纯
3.DNA提取实验中，加氯仿-异戊醇的作用是什么震荡离心后，分几层每一层的
主要成分是什么
答：使核蛋白质变性、乳化；分三层；上层为DNA和核蛋白的水层，中层为变性蛋白凝胶，下层为氯仿二异戊醇的有机溶剂层。
4.在DNA提取时，RNP（脱氧核糖核蛋白）是如何去除的
答：用氯仿一异戊醇剧烈震荡10min，使其乳化，然后离心除去变性蛋白。
5.茶叶咖啡因提取实验中，加生石灰的作用
答：①吸水②吸收单宁酸③使提取液受热均匀（热缓冲）
6.索氏提取和传统提取有何不同
答：传统提取耗时，效率低。索氏提取利用溶剂回流、虹吸原理，反复多次纯萃取，减短提取时间，节省材料，效率高。
7.茶叶咖啡因提取的原理是什么
答：利用咖啡因易溶于乙醇，易升华等特点，以95%乙醇作溶剂，通过索氏提取、浓缩、焙炒、升华得到纯化咖啡因。
8.离子交换柱层析实验中，离子交换剂为什么要进行预处理
答：①使离子交换剂充分溶胀②酸碱除杂③把活性离子（反离子）转型为clˉ。
9.离子交换柱层析实验中，TCA和丙酮的作用是什么
答：在PH在±时，TCA：使杂质蛋白变性，多得黏蛋白。丙酮：沉淀黏蛋白10.离子交换柱层析实验中，加TCA后，为什么要将PH调
答：①TCA变性能力与PH值密切相关；PH↑，TCA变性能力减弱；PH↓，TCA 变性能力增强
②当PH在时，黏蛋白是最稳定的，卵清蛋白等杂质蛋白不稳定易沉淀，可得到相对较纯的黏蛋白。
11.离子交换柱层析实验中，为什么要维持PBS的PH在
答：黏蛋白的PI值约，小于，蛋白质带负电，又由于大多杂蛋白PI值约为10，不易于转型的离子交换剂交换而被洗脱时利用交换剂与蛋白结合程度不同而把它们分离开来，达到纯化的目的。
12.请画出离子交换柱层析分离鸡蛋卵黏蛋白的预期实验结果图，并对该图作合
理分析。
答：分析：第一个波峰：稀土ode杂蛋白；第二个波峰：目标蛋白洗脱
13.简述大蒜SOD提取中，SOD活性测定原理。
答：邻苯三酚在碱性条件下自氧化释放O2ˉ，生成有色中间产物，初始阶段中间产物积累在滞留30~45s后，与时间成线性关系（4min内），在420nm有强烈吸光值。当SOD，它催化O2ˉ与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止中间产物积累，因此，通过计算可求出SOD酶活。
14.栀子黄色素提取实验中，吸附前为什么滤液PH调制3
答：藏红花素结构中带R-COOH，在溶液中发生电离R-COOH=（可逆符号）R-COOˉ＋H﹢，将PH调至3时，溶液中的H+增多，反应向逆向进行，使藏红花素不被电离
15.栀子黄色素提取实验中，如何鉴定栀子黄色素中栀子苷的去除情况
答：根据吸附前后A238/A440比值确定，比值越变越小，去除就越来越干净。当比值小于时，可以避免变绿现象。
16.栀子黄提取实验中，说明D101树脂的性质以及主要吸附何种物质
答：D101性质：疏水性、非极性、聚合物吸附剂，具有较大表面比与合适孔径。主要吸附藏红花素。
17.反胶团萃取甘薯中的淀粉酶的实验中，反胶团萃取的主要步骤是什么答：①甘薯中淀粉酶提取（切块、搅碎、抽滤）②反胶团系统制备③前萃取（取上层）④反萃取（取下层）⑤淀粉酶活测定
18.反胶团萃取甘薯中的淀粉酶的实验中，简述淀粉酶活性测定的原理
答：一定量淀粉酶在适宜条件下会分解淀粉产生还原糖，用DNS测还原糖A540光吸收量，从而求得酶活
19. 反胶团萃取甘薯中的淀粉酶的实验中，反萃取中加入3MKCl溶液有何作用
答：破坏水池外的水膜和表面活性剂极性头，使蛋白质又回到水相中，从而分离纯化。
20．反胶团萃取甘薯中的淀粉酶的实验中，简述反胶团萃取的原理
答：表面活性剂在有机相中自发形成反胶团，其内部有稳定的水池，蛋白质溶解于小水池中，其周围有一层水膜及表面活性剂极性头的保护，使其避免与有机溶剂接触而失活。改变PH、盐浓度等条件蛋白质又可回到水相（反萃），实现了蛋白质的萃取分离、纯化的目的。
