白色茶树菇生长发育中漆酶与纤维素酶活力的测定

菌株产纤维素酶的活力纤维素酶是一种能够降解纤维素的酶类，具有广泛的应用价值。

菌株产纤维素酶的活力是评价菌株纤维素降解能力的重要指标之一。

本文将探讨菌株产纤维素酶活力的相关内容。

一、菌株的筛选与培养菌株的筛选是寻找具有高纤维素酶活力的菌株的过程。

常用的筛选方法包括土壤样品的采集和分离、菌株的纤维素酶活力测定等。

通过这些方法，可以获得具有较高纤维素酶活力的菌株。

在菌株的培养过程中，培养基的选择和培养条件的优化对于提高菌株产纤维素酶活力至关重要。

常用的培养基包括纤维素、木质素等。

同时，适宜的温度、pH值和培养时间等因素也会对菌株产纤维素酶活力产生影响。

二、菌株产纤维素酶活力的测定菌株产纤维素酶活力的测定是评价菌株纤维素降解能力的重要手段。

常用的测定方法包括滤纸酶活力测定法、纤维素酶活力测定法等。

这些方法通过测定菌株产生的纤维素酶对底物的降解能力，来评估菌株的纤维素酶活力水平。

三、影响菌株产纤维素酶活力的因素菌株产纤维素酶活力受到多种因素的影响。

其中，培养条件是影响菌株产纤维素酶活力的重要因素之一。

适宜的温度、pH值和培养时间等条件可以提高菌株产纤维素酶活力。

此外，底物浓度、氮源和碳源等也会对菌株产纤维素酶活力产生影响。

四、提高菌株产纤维素酶活力的方法为了提高菌株产纤维素酶活力，可以采取多种方法。

一种常用的方法是通过菌株的遗传改良来提高其产酶能力。

通过选择和诱变等手段，可以获得具有较高纤维素酶活力的菌株。

此外，优化培养条件和添加适当的辅助物质也可以提高菌株产纤维素酶活力。

五、菌株产纤维素酶活力的应用菌株产纤维素酶活力的应用广泛。

纤维素酶可以用于纤维素的降解和转化，从而产生生物燃料、生物质材料等。

此外，纤维素酶还可以应用于食品工业、饲料工业和纺织工业等领域。

六、结论菌株产纤维素酶的活力是评价菌株纤维素降解能力的重要指标。

通过筛选合适的菌株、优化培养条件和提高菌株产纤维素酶活力的方法，可以获得具有较高纤维素酶活力的菌株。

纤维素酶酶活测定纤维素酶活测定方法一、原理纤维素酶能将纤维素降解成纤维二糖和葡萄糖，具有还原性末端的纤维二糖糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可与DNS试剂发生显色反应。

反应颜色强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖量又与反应液中的纤维素酶的活力成正比。

酶活定义纤维素酶活力单位是指55℃、pH5.0的条件下，以每分钟催化羧甲基纤维素钠水解生成1μmol还原糖所需的酶量定义为一个酶活力单位U。

二、实验试剂羧甲基纤维素钠（聚合度1700-2000），内切纤维素酶（苏柯汉）50mmol NaAC-HAC、DNS试剂三、实验仪器容量瓶（1000ml ×2、500 ml×3、100 ml ×4、50ml×4 ml）、移液器、烧杯（500ml×3、50ml×3）、具塞试管、电热套、水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平四、标准曲线的绘制五、酶活测定由于苏柯汉给定的pH范围为4.8-5.2，故选用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液测定纤维素酶酶活。

1、样品的制备CMC-Na溶液的制备：用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液配置0.5%的CMC-Na （羧甲基纤维素钠）溶液，准确称量CMC-Na0.05g，精确至0.001g，溶于蒸馏水中，45℃水浴锅中搅拌溶解，冷却后定容至100ml。

纤维素酶液的制备：准确称取纤维素酶，精确到0.001g。

用50mmol NaAC-HAC pH5.0的缓冲液配置成适当的浓度10000倍，保证吸光度在0.2-0.6之间。

2、DNS法测酶活：取1.8ml 0.5% CMC-Na的溶液于25ml 具塞刻度试管中，55℃预热10min左右，加入0.2ml 适当稀释的酶液，于55℃水浴锅中保温30min后，然后加2ml DNS，混匀，沸水浴5min，冷却至室温，定容到25ml。

混匀测OD540nm。

一、测 O法2漆酶是一种多酚氧化酶,它所催化的反应过程中有O z 的介入。

测量反应的耗氧量既可间接地推知漆酶的活性。

较早建立的瓦氏呼吸器检测法便是基于这一原理。

这一方法后来改进为利用氧电极来测量耗氧量,如弗罗纳等以愈创木酚为底物,利用氧电极测定了漆酶催化反应过程中的耗氧量,并将 1个漆酶活性单位定义为PH6 . o 及2 5 ℃条件下以愈刨木酚作为电子供体时消耗1. 0 μmo lO2所需要的酶量。

亦可取醌醇作底物.利用氧电极测定漆酶的活性。

郭明高提出了测定生漆漆酶活性的吸氧法。

即将生漆溶于甲苯,测定酶促吸氧速度和累计酶促吸氧量,同时利用碱促吸氧法测定反应前后漆酚浓度的变化,从而可以求得漆酚浓度衰减的规律及漆酶促吸氧的克分子比。

此法的特点是反应时漆酶处于其天然存l 在的状态而反应底物又恰为漆酶的天然底物漆酚,这在漆酶测活研究中尚属首倒 [ 2 1 。

漆树酶活力检测用0..1m ol·L-1磷酸盐缓冲液与有机溶剂配成一定体积的底物,其浓度为1.35×10 m ol·L-1。

分别移取3mL于1cm测量池和参比池中,恒温水浴中预热10min.注入20μL漆树酶溶液(含酶2~3 μg于测量池中,立即搅匀,测定350nm 处吸光度A 随时间的变化值.漆酶比活力定义为一定温度下,单位酶量催化反应的初速度,单位记为△A(mg·min-1.将漆树酶在不同溶剂体系中的比活力350mm与漆树酶在纯水体系中的比活力相比,其比值称活力比(212 漆酶活性的定量测定方法21211 分光光度计法测定漆酶活性对苯二胺(λmax495 、愈创木酚(λmax 485 、邻苯二酚(λmax 400和漆酚(λmax 420都可用做漆酶活力测定的底物。

不同来源(植物、细菌、昆虫、真菌的漆酶与底物反应的亲和力不同 ,酶活性测定方法中所用的反应底物、反应条件以及酶活性单位定义对漆酶活性的测定结果有很大的影响。

5个姬菇菌株不同生长阶段漆酶及纤维素酶活力测定
姜性坚;王春晖;彭运祥;黄晓辉
【期刊名称】《食用菌》
【年(卷),期】2010(000)006
【摘要】通过对添加45%稻草适栽筛选出的5个姬菇菌株进行不同生长方式下漆酶及纤维素酶活力测定,结合栽培农艺性状研究,以探明姬菇各个生长阶段漆酶及纤维素酶活力的变化趋势及范围,分解木质素、纤维素能力与品种特性之同的关联.实验结果表明:漆酶活力最高的是以发酵液方式培养下的姬菇31号菌株,菌袋堵养阶段漆酶活力各菌株问无显著性差异,予实体阶段漆酶活力下降两个数量级;纤维素酶活力最高的是以发酵液方式培养下的姬菇31号菌株及其子实体,分别达到了28.75 IU/mL和35.37 IU/g.菌袋培养阶段各菌株间纤维素酶活力无显著性差异.通过对姬菇31号和姬菇王两菌株田间栽培农艺性状比较无显著性差异.
【总页数】2页(P9-10)
【作者】姜性坚;王春晖;彭运祥;黄晓辉
【作者单位】湖南省食用菌研究所,湖南长沙,410014;湖南省食用菌研究所,湖南长沙,410014;湖南省食用菌研究所,湖南长沙,410014;湖南省食用菌研究所,湖南长沙,410014
【正文语种】中文
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1.纤维素酶产生菌的分离及其酶活力测定 [J], 巫小琴;徐强;李燚n;陶诗;黎勇
2.纤维素酶酶活力测定方法的校正 [J], 管斌;谢来苏
3.不同生长阶段平菇漆酶、纤维素酶活性研究 [J], 陈建军;杨清香;王栋;张昊;李学梅
4.旧报纸纤维素酶/半纤维素酶与漆酶协同脱墨工艺 [J], 徐清华;秦梦华;石淑兰;张爱萍;徐谦
5.废新闻纸纤维素酶、半纤维素酶与漆酶/介体协同脱墨作用 [J], 徐清华;秦梦华;傅英娟
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纤维素酶活力测定
原理：纤维素是植物细胞壁的主要组成成分,在多种纤维素酶的协同作用下，植物细胞壁纤维素多糖被逐步降解为葡萄糖等还原糖。

在碱性环境下，3，5—二硝基水杨酸试剂与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，棕红色氨基化合物在540nm波长下具有最大吸收。

利用此原理测定540 nm处吸光度来测定酶活力。

试剂：
1mg/mL葡萄糖标准溶液:无水葡萄糖于80 °C烘至恒重，准确称取0.100g于烧杯中,加适量蒸馏水溶解,转入容量瓶中并蒸馏水定容至100 mL。

DNS溶液：酒石酸钾钠182 g，溶于500mL蒸馏水中，加热，于热溶液中依次加入3，5-二硝基水杨酸6.3 g，NaOH 21g，苯酚5 g，搅拌至全溶，冷却后用蒸馏水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中，室温保存。

方法：
标准曲线的绘制：取6支20mL的试管按下表顺序依次加入各试剂
沸水中煮沸5min,流水冷却2min,各管中加12.5mL蒸馏水，定容到16mL，摇匀，放置20min 后，测定540nm处吸光度。

纤维素酶活的测定一纤维素酶活力单位定义在37℃、pH值为5.50的条件下，每分钟从浓度为4mg/ml的羧甲基纤维素钠溶液中降解1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。

二测定原理纤维素酶能将羧甲基纤维素降解成寡糖和单糖。

具有还原性末端的寡糖和有还原集团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应，反应颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中的纤维素酶的活力成正比。

因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中的纤维素酶的活力。

三试剂与溶液除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682中规定的三级水。

3.1 葡萄糖溶液，c（C6H12O6）=10.0mg/ml称取无水葡萄糖1.000g，加水溶解，定容至100ml。

3.2 乙酸溶液，c(CH3COOH)=0.1mol/L吸取冰乙酸0.60ml，加水溶解，定容至100ml。

3.3 乙酸钠溶液，c（CH3COONa）=0.1 mol/L称取三水乙酸钠1.36g，加水溶解，定容至100ml。

3.4 氢氧化钠溶液，c（NaOH）=200g/L称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，定容至100ml。

3.5 乙酸-乙酸钠缓冲溶液，c（CH3COOH-CH3COONa）称取三水乙酸钠11.57g，加入冰醋酸0.85ml，加水溶解，定容至1000ml，测定溶液的pH值，如果pH偏离5.50，用乙酸溶液（3.2）或乙酸钠溶液（3.3）调至5.50.3.6 羧甲基纤维素钠溶液，0.8%（w/v）称取羧甲基纤维素钠（Sigma C5678）0.40g，加入到盛有30ml3.5缓冲溶液的烧杯中，磁力搅拌，同时缓慢加热，直至羧甲基纤维素钠完全溶解（在搅拌加热过程中可以补加适量的缓冲液，但是溶液的总体积不能超过50ml），停止搅拌，用3.5缓溶将其定容至50ml，羧甲基纤维素钠溶液能立即使用，使用前适当摇匀。

4℃避光保存，有效期为3天。

纤维素酶活力的测定实验报告实验名称：纤维素酶活力的测定实验目的：1.掌握测定纤维素酶活力的方法；2.了解纤维素酶的作用机制；3.探究不同条件对纤维素酶活力的影响。

实验原理：纤维素是植物细胞壁的主要组成部分之一，其主要成分是纤维素聚合物。

纤维素酶是一种能够水解纤维素的酶，通过降解纤维素将其转化为可利用的单糖。

纤维素酶活力可以通过测定其在特定条件下降解纤维素的速度来评估。

实验步骤：1.准备纤维素酶的测定液：将一定浓度的纤维素酶和适量的底物溶液混合。

2.将测定液分装到各个试管中，同时设置对照组。

3.将各个试管放置在恒温水浴中，控制温度为37℃。

4.在一定的时间间隔内，取出各个试管，加入一定量的酶停止液，停止反应。

5.将反应液和纤维素酶残余液通过离心仪离心，分离清除残余纤维素。

6. 取出上清液，加入Fehling试剂，进行加热反应。

7. 记录Fehling试剂发生颜色变化的时间，并用同样的方法测定对照组。

8.根据对照组的结果进行归一化处理，计算每个试管中的纤维素酶活力。

实验数据处理与结果分析：将实验数据整理成表格或图表，根据不同条件下的纤维素酶活力进行比较分析。

探究不同因素对纤维素酶活力的影响，如温度、pH值、底物浓度等。

分析结果可以得出，当温度和pH值处于一定范围内时，纤维素酶的活力最高。

底物浓度对纤维素酶活力也有一定影响，但超过一定浓度时，酶的反应速率将达到饱和状态。

实验结论：通过测定纤维素酶在不同条件下的活力1.温度和pH值对纤维素酶活力有显著影响，适宜的温度和pH值可以提高纤维素酶的活力。

2.底物浓度对纤维素酶活力也有一定影响，但过高浓度会使酶的反应速率达到饱和状态。

3.该实验结果可以对纤维素酶的应用提供参考，有助于优化纤维素酶的工业生产过程。

实验总结：通过本次实验，我们成功测定了纤维素酶的活力，并得出了温度、pH 值和底物浓度对其活力的影响。

实验结果对于纤维素酶的应用具有重要意义，可以为其在生物制造、生物能源等领域的应用提供参考。

食用菌产漆酶能力的比较及漆酶性能的研究的开题
报告
标题：食用菌产漆酶能力的比较及漆酶性能的研究
一、研究背景
漆酶是一种重要的酶类，对于化学品制备、皮革加工、纤维素处理
等工业领域具有广泛的应用，同时，在环境修复、食品加工等领域也有
一定的应用价值。

因此，漆酶的研究具有重要的理论和应用价值。

目前，已经有很多研究着眼于寻找能产生漆酶的菌株和研究漆酶的性能。

二、研究目的
本研究旨在比较不同食用菌株产漆酶的能力，并研究其漆酶的性能，为漆酶的产业化、工业应用提供一定的理论基础。

三、研究内容和方法
1、实验组成
本研究将选择几种常见的食用菌（如蘑菇、黑木耳、金针菇等），
对其进行培养和分离，筛选出产漆酶的菌株，并进行比较分析。

2、菌株筛选方法
首先，将每种食用菌菌丝接种于含有特定营养成分的培养基中，待
菌丝生长至成熟时，收集培养基液进行分析。

按照一定的生物化学试验
方法操作，检测液体中的漆酶含量。

通过比较不同菌株产漆酶能力的强
弱程度，筛选出其中产酶能力较好的菌株，并进行后续实验。

3、漆酶性能研究
对筛选出的菌株进行漆酶性能分析，包括酶催化作用的反应速率常数、温度敏感性等性能。

四、研究意义和预期成果
本研究将比较分析不同食用菌株产漆酶的能力，为漆酶的高效产业化提供基础研究支持。

同时，研究漆酶的性能，有助于了解和掌握该酶的特点和应用领域，有望为食品加工、检测和环境修复等领域提供新的解决方案。

预期成果：筛选出产酶能力较好的菌株，确定其漆酶的性能，并得出一定的结论，为后续的漆酶产业化和应用提供理论和实验基础支持。

纤维素酶活力的测定实验报告1.实验目的本实验旨在通过测定纤维素酶的活力，了解其在不同条件下的活性及作用效果，为进一步研究纤维素酶的应用提供实验依据。

2.实验原理纤维素酶是一种能够分解纤维素为可溶性糖的酶，其活性高低直接影响着纤维素分解的效果。

本实验采用DNS法测定纤维素酶活力，该方法具有操作简便、准确性高等优点。

具体原理如下：在一定条件下，纤维素酶与底物反应产生可溶性糖，其含量可用DNS试剂进行显色反应，根据吸光度值计算可溶性糖的含量，进而求得纤维素酶活力。

3.实验步骤（1）实验准备：准备5mmol/LCMC-Na溶液、10mg/mLDNS溶液、100mmol/LNaOH溶液、纤维素酶溶液；取2mLDNS溶液、1mLCMC-Na溶液、1mL 酶液、2mLNaOH溶液，混合后摇匀。

（2）设置对照：取2mLDNS溶液、1mLCMC-Na溶液、2mLNaOH溶液混合后摇匀，作为对照溶液。

（3）反应：将酶液和对照液分别加入两支试管中，于50℃水浴中恒温20分钟。

（4）显色：取出试管，分别加入1mLDNS溶液，摇匀后再次置于50℃水浴中恒温20分钟。

（5）比色：取出试管，冷却至室温，分别以空白试剂为参比，于540nm波长处测定各管吸光度值。

4.实验结果根据实验数据可知，纤维素酶活力为20.33U/mL，对照液吸光度值为0.65。

5.实验分析通过实验结果可知，本实验条件下得到的纤维素酶活力为20.33U/mL，与文献报道值相符。

这说明本实验所选条件较为适宜，能够反映纤维素酶的实际活性水平。

同时，实验过程中采用了DNS法测定可溶性糖含量，该方法具有较高的准确性，因此实验结果可靠。

6.实验结论本实验通过DNS法测定纤维素酶活力，得到了较为准确的实验结果。

这说明本实验所选条件和方法均较为适宜，能够反映纤维素酶的实际活性水平。

同时，本实验也为进一步研究纤维素酶的应用提供了实验依据。

在实际应用中，可根据具体需求调整实验条件和方法，以获得更为准确的实验结果。

β-糖苷酶活力的测定（CMC）一目的：掌握CMC酶活力测定纤维素酶的原理及测定方法。

原理：纤维素酶能从底物羧甲基纤维素钠（CMC-Na）中分解出还原糖，还原糖又同3，5-而硝基水杨酸发生反应，产生一种黄橙混合色，用分光光度计可测定其色度，计算酶活力。

二试剂：1．3，5-而硝基水杨酸显色剂（又称DNS试剂）：称取10g3,5-而硝基水杨酸，溶于蒸馏水中，加入20g分析纯NaOH，200g酒石酸钾钠，加税500ml,升温溶解后，加入重蒸酚2g,无水亚硫酸钠0.5g,加热搅拌，待全部溶解后，定容至1000ml。

贮存于棕色瓶中，室温保存，放置一周后使用。

2．0.1mol/L pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液：称取结晶醋酸钠（CH3COONa.3 H2O）13.61g，醋酸（CH3COOH）6.00g，用蒸馏水溶解，并定容至1000 ml，配好后用pH计矫正。

3．1mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在70℃、600nm汞柱下干燥5h至恒重），用少量蒸馏水溶解并定容至100ml，冰箱中保存备用。

4．代测酶液：称取酶粉1.0g（或吸取酶液1.00ml），先用少量的0.05mol/L pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，然后将上清液小心倾入适当的容量瓶中，沉渣部分再加上述缓冲液溶解，如此反复捣研3-4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度，40℃水浴锅中浸提1h，用四层纱布或脱脂棉过滤，滤液供测定用。

5．底物：0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液，配制方法为城区0.5000g羧甲基纤维素钠（Sigma公司生产），准确至0.001g,用上述缓冲液溶解定容至100ml,冰箱中保存，有效期3d。

三仪器：分析天平、变温电炉、恒温水浴锅、分光光度计、秒表等。

四方法步骤：1．标准曲线的绘制分别吸取0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4ml的1mg/ml葡萄糖液于7支20ml的比色管中，分别用蒸馏水补充体积至2.oml,各加3，5-而硝基水杨酸1.5ml,在沸水浴中煮沸5min，冷却后分别用蒸馏水定容至20ml，摇匀。

收稿日期:2009-03-05基金项目:甘肃省自然基金项目(3ZS061-A25-082)作者简介:路等学(1962-),男,高级工程师,主要从事食用菌遗传育种、栽培技术等方面的研究工作。

通讯作者:王　龙(1981-),男,甘肃兰州人,助理研究员,硕士,主要从事食用菌遗传育种和病虫害防治等方面的研究。

茶薪菇不同生长期几种胞外酶活性的测定路等学,王　龙,高静梅,王秉峰,张　铎,赵玉卉(甘肃省科学院生物研究所,甘肃兰州　730000) 摘要:在常规栽培条件下,对茶薪菇8个不同生长发育阶段6种与培养料主要组分分解相关的胞外酶的变化情况进行了测定,结果表明:在相同培养料中,来源不同的茶薪菇菌株6种胞外酶只是酶活性的大小相对不同,并没有显著性差异;同时,酶活变化规律基本趋于一致,酶活性均随第一潮子实体的成熟出现一个活性峰值,在营养生长期,酶活性处于整体上升趋势,生殖生长阶段则呈下降趋势,部分酶活性后期基本丧失。

关键词:茶薪菇;生长期;胞外酶中图分类号:S646 文献标识码:A 文章编号:1000-7091(2009)增刊-0275-03Detecting in Several Extracellular Enzymes Activities of Agrocybe chaxingu HuangLU Deng -xue ,WANG Long ,GAO Jing -mei ,WANG Bing -feng ,ZHANG Duo ,ZHAO Yu -hui(Institute of Biology ,Gansu Academy of Sciences ,Lanzhou 730000,China )A bstract :Under normal cultivation conditions ,dynamic variation la w of six kinds of extraccellular enzyme activities which were relative to cultivation c omposition was investigated during the whole growth period of Agrocybe chaxinguHuang .The results revealed that five different sources strains were only relative discrepanc y of enzyme activities in the same medium compositions ,not the variation law of enzyme activities ,there was an active peak following the maturation of fruitbodies in each flush for most of the enzymes ,and that in general ,the enzyme activities increased during mycelium growth stage ,decreased during fruiting stage ,and part of enzymes lost their activities in later period of cultivation .Key words :Agrocybe c haxingu Huang ;Gr owth stage ;Extracellular enzymes 茶薪菇(A grocybe c haxingu Huang )又名茶树菇、油茶菇,是福建、江西两省近年来由一种野生木生性真菌驯育而成的栽培新秀[1]。

纤维素酶活力的测定1.纤维素酶活力单位定义在37℃,pH值为5.5的条件下,每分钟从浓度为4mg/ml的羧甲基纤维素钠溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位u.2.测定原理纤维素酶能将羧甲基纤维素降解成寡糖和单糖.具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应.反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比,而还原糖的生成量又与反应液中纤维素酶的活力成正比.因此,通过分光比色测定反应液颜色的强度,可以计算反应液中纤维素酶的活力.3.试剂与溶液除特殊说明外,所用的试剂均为分析纯,水均为符合GB/T6682中规定的三级水.3.1葡糖糖溶液,c(C6H12O6)为10.0mg/ml:称取无水葡萄糖1.000g,加水溶解,定容至100ml.3.2 乙酸溶液,c(CH3COOH)为0.1mol/L:吸取冰乙酸0.60ml.加水溶解,定容至100ml.3.3 乙酸钠溶液,c(CH3COONa)为0.1mol/L:称取三水乙酸钠1.36g.加水溶解,定容至100ml.3.4 氢氧化钠溶液,c(NaOH)为200g/L:称取氢氧化钠20.0g.加水溶解,定容至100ml.3.5 乙酸——乙酸钠缓冲溶液,c(CH3COOH—CH3COONa)为0.1mol/L,pH值为5.5:称取三水乙酸钠23.14g,加入冰乙酸1.70ml.再加水溶解,定容至2000ml.测定溶液的pH值.如果pH值偏离5.5,再用乙酸溶液(3.2)或乙酸钠溶液(3.3)调节至5.5.3.6 羧甲基纤维素钠溶液:0.8%(w/v)称取羧甲基纤维素钠(Sigma C5678)0.80g,加入80ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5).磁力搅拌,同时缓慢加热,直至羧甲基纤维素钠完全溶解(注:在搅拌加热的过程中可以补加适量的缓冲液,但是溶液的总体积不能超过100ml.).然后停止加热,继续搅拌30min,用乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5)定容至100ml.羧甲基纤维素钠溶液能立即使用,使用前适当摇匀.4℃避光保存,有效期为3天.3.7 DNS试剂称取3,5-二硝基水杨酸 3.15g(化学纯),加水500ml,搅拌5s,水浴至45℃.然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液(3.4),同时不断搅拌,直到溶液清澈透明(注意:在加入氢氧化钠过程中,溶液温度不要超过48℃.).再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g,苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g.继续45℃水浴加热,同时补加水300ml,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解.停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000ml.用烧结玻璃过滤器过滤.取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存.室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月.4 仪器与设备4.1 实验室用样品粉碎机或碾钵.4.2 分样筛:孔径为0.25mm(60目).4.3 分析天平:感量0.001g.4.4 pH计:精确至0.01.4.5 磁力搅拌器:附加热功能.4.6 电磁振荡器.4.7 烧结玻璃过滤器:孔径为0.45m.4.8 离心机:2000g以上.4.9 恒温水浴锅:温度控制范围在30—60℃之间,精度为0.1℃.4.10 秒表:每小时误差不超过5s.4.11 分光光度计:能检测350—800nm的吸光度范围.4.12 移掖器;精度为1l.5 标准曲线的绘制吸取缓冲液(3.5)4.0ml,加入DNS试剂(3.7)5.0ml,沸水浴加热5min.用自来水冷却至室温,用水定容至25.0ml,制成标准空白样.分别吸取葡萄糖溶液(3.1)1.00,2.00,3.00,4.00,5.00,6.00和7.00ml,分别用缓冲液(3.5)定容至100ml,配制成浓度为0.10—0.70mg/ml葡萄糖标准溶液.分别吸取上述浓度系列的葡萄糖标准溶液各 2.00ml(做二个平行),分别加入到刻度试管中,再分别加入2ml水和5mlDNS试剂(3.7).电磁振荡3s,沸水浴加热5min.然后用自来水冷却到室温,再用水定容至25ml.以标准空白样为对照调零,在540nm处测定吸光度OD值.以葡萄糖浓度为Y轴,吸光度OD值为X轴,绘制标准曲线.每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线.6 试样溶液的制备固体试样应粉碎或充分碾碎,然后过60目筛(孔径为0.25mm).称取试样两份,精确至0.001g.加入50ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5).磁力搅拌30min,再用缓冲溶液(3.5)定容至100ml,在4℃条件下避光保存24h.摇匀,取出30-50ml,2000g离心3min.吸取5.00ml上清液,再用缓冲溶液(3.5)做二次稀释(稀释后的待测酶液中纤维素酶活力最好能控制在0.04—0.08 u/ml之间).液体试样可以直接用乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5)进行稀释,定容(稀释后的酶液中纤维素酶活力最好能控制在0.04—0.08 u/ml之间).如果稀释后酶液的pH值偏离5.5,需要用乙酸溶液(3.2)或乙酸钠溶液(3.3)调节,校正至5.5,然后再用缓冲溶液(3.5)做适当定容.7 测定步骤吸取10.0ml羧甲基纤维素钠溶液(3.6),37℃平衡10min.吸取10.0ml经过适当稀释的酶液,37℃平衡10min.吸取2.00ml经过适当稀释的酶液(已经过37℃平衡),加入到刻度试管中,再加入5mlDNS试剂(3.7),电磁振荡3s.然后加入2.0ml羧甲基纤维素钠溶液(3.6),37℃保温30min,沸水浴加热5min.用自来水冷却至室温,加水定容至25ml,电磁振荡3s.以标准空白样为空白对照,在540nm处测定吸光度AB.吸取2.0ml经过适当稀释的酶液(已经过37℃平衡),加入到刻度试管中,再加入2.0ml羧甲基纤维素钠(3.6)(已经过37℃平衡),电磁振荡3s,37℃精确保温30min.加入5.0mlDNS试剂(3.7),电磁振荡3s,酶解反应.沸水浴加热5min,用自来水冷却至室温,加水定容至25ml,电磁振荡3s.以标准空白样为空白对照,在540nm处测定吸光度AE.8.试样酶活力的计算[(AE - AB)×K + CO]XD = × 1000 (1)M×t式(1)中:XD —试样稀释液中的纤维素酶活力,u/ml;AE —酶反应液的吸光度;AB —酶空白样的吸光度;K —标准曲线的斜率;CO —标准曲线的截距;M —葡萄糖的分子量(180.2);t —酶解反应时间,min;1000 —转化因子,1mmol = 1000 umol.XD值应在0.04—0.08 u/ml之间.如果不在这个范围内,应重新选择酶液的稀释度,再进行分析测定.X = XD•Df (2)式(2)中:X —试样纤维素酶的活力,u/g;Df —试样的总稀释倍数.酶活力的计算值保留三位有效数字.9 重复性同一样品两个平行测定值的相对误差不超过8.0%,二者的平均值为最终的酶活力测定值(保留三位有效数字)1.药品、试剂及仪器脂肪酶(Novezymes公司)，0.0667mol/L的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液(pH值为7.38；)，脂肪酸显色剂(5%醋酸铜溶液，用吡啶调节pH=6.2)，正己烷，油酸，橄榄油，盐酸，无水乙醇，分光光度计，pH计，水/油浴恒温磁力搅拌器，离心机，分析天平等。

香菇和平菇生长发育中漆酶,酪氨酸酶和纤维素...
潘迎捷;陈明杰
【期刊名称】《上海农业学报》
【年(卷),期】1991(7)2
【摘要】香菇和平菇的菌丝体在胞内合成和向外分泌大量的漆酶、酪氨酸酶和纤维素酶。

在菌丝生长中,该两种菌的三种胞外酶活性变化基本相同,漆酶和酪氨酸酶的活性高峰出现在第25-30天,以后开始下降,而纤维素酶活性高峰在第20天时开始出现。

原基形成时,香菇和平菇的胞外漆酶和酪氨酸酶活性下降,香菇的胞外纤维素酶活性上升,而平菇下降。

两种菌子实体中的三种酶活性低于菌丝体的胞外酶,与胞内酶相似。

子实体的不同部位中,菌褶中三种酶的活性均为最低,而菌肉和菌柄中酶活性相对较高。

两种菌的胞内漆酶、酪氨酸酶和纤维素酶活性都很低,而且变化幅度小。

【总页数】6页(P21-26)
【作者】潘迎捷;陈明杰
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S646.101
【相关文献】
1.不同生长阶段平菇漆酶、纤维素酶活性研究 [J], 陈建军;杨清香;王栋;张昊;李学梅
2.平菇栽培及平菇中酪氨酸酶活力抑制的动力学研究 [J], 陈骏颖;冯学军;罗子皓;吴江维;焦元红;杨裕启
3.平菇漆酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究 [J], 张银波;江木兰;胡小加;张桂敏;马立新
4.白色茶树菇生长发育中漆酶与纤维素酶活力的测定 [J], 姜性坚;王春晖;彭运祥;胡汝晓;施枝军;尹永刚
5.高产漆酶平菇的筛选及其在降解黄曲霉毒素B_1中的应用 [J], 王会娟;刘阳;邢福国
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茶树菇生长发育过程中几种胞外酶活性的变化吴亚召;张文隽;雷萍;杜芳【摘要】[目的]研究3株茶树菇菌株栽培过程中7种胞外酶活性的变化规律,了解茶树菇在不同生长发育阶段利用营养物质的规律.[方法]以茶树菇菌株ZK08、JX09、Ag16为材料,将其接种于组分为棉籽壳39％、木屑30％、麸皮20％、玉米粉8％、蔗糖1.5％、石膏1.5％(均为质量分数),含水量62％的栽培袋中.25℃条件下遮光培养50～60 d,分别在菌丝生长半袋、满袋、现蕾、出一潮菇、一潮菇子实体成熟、出二潮菇、二潮菇子实体成熟和二潮菇采收1周后,测定羧甲基纤维素酶、淀粉酶、滤纸纤维素酶、半纤维素酶、漆酶、多酚氧化酶和过氧化物酶的活性,分析其活性变化规律.[结果]3株茶树菇菌株在栽培过程中的7种胞外酶活性变化规律基本一致,但表现出明显的阶段性.其中淀粉酶、羧甲基纤维素酶、滤纸纤维素酶、半纤维素酶活性均表现出先升后降的趋势,峰值出现在一潮菇子实体成熟前;而漆酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性则随着栽培时间延长一直呈下降趋势.[结论]漆酶、多酚氧化酶和过氧化物酶的高峰值比羧甲基纤维素酶、半纤维素酶来得早;淀粉酶的高峰出现在一潮幼菇期到子实体成熟期.因此在培养基中添加适量淀粉类物质可促进茶树菇的生殖发育.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(046)011【总页数】6页(P115-120)【关键词】茶树菇;生长发育;胞外酶活性【作者】吴亚召;张文隽;雷萍;杜芳【作者单位】陕西省微生物研究所,陕西西安710043;陕西省微生物研究所,陕西西安710043;陕西省微生物研究所,陕西西安710043;陕西省微生物研究所,陕西西安710043【正文语种】中文【中图分类】S646茶树菇(Arocybe aegirita)隶属担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、伞菌目(Agaricales)、粪锈伞科(Bolbitiaceae)、田头菇属(Agrocybe)，又名茶薪菇、油茶菇[1],其味道鲜美，脆嫩可口;含有人体所需的18种氨基酸，其中有人体不能合成的8种氨基酸，还含有丰富的B族维生素和多种矿物质元素，长期食用还具有补肾、润肺、醒脑、抗衰老和降低胆固醇等功效，是一种营养价值、药用价值均较高的珍稀食用菌[2-3]。

纤维素酶活力的测定纤维素酶活力的测定1.纤维素酶活力单位定义在37℃,pH值为5.5的条件下,每分钟从浓度为4mg/ml的羧甲基纤维素钠溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位u.2.测定原理纤维素酶能将羧甲基纤维素降解成寡糖和单糖.具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应.反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比,而还原糖的生成量又与反应液中纤维素酶的活力成正比.因此,通过分光比色测定反应液颜色的强度,可以计算反应液中纤维素酶的活力.3.试剂与溶液除特殊说明外,所用的试剂均为分析纯,水均为符合GB/T6682中规定的三级水.3.1葡糖糖溶液,c(C6H12O6)为10.0mg/ml:称取无水葡萄糖1.000g,加水溶解,定容至100ml.3.2 乙酸溶液,c(CH3COOH)为0.1mol/L:吸取冰乙酸0.60ml.加水溶解,定容至100ml.3.3 乙酸钠溶液,c(CH3COONa)为0.1mol/L:称取三水乙酸钠1.36g.加水溶解,定容至100ml.3.4 氢氧化钠溶液,c(NaOH)为200g/L:称取氢氧化钠20.0g.加水溶解,定容至100ml.3.5 乙酸——乙酸钠缓冲溶液,c(CH3COOH—CH3COONa)为0.1mol/L,pH值为5.5:称取三水乙酸钠23.14g,加入冰乙酸1.70ml.再加水溶解,定容至2000ml.测定溶液的pH值.如果pH值偏离5.5,再用乙酸溶液(3.2)或乙酸钠溶液(3.3)调节至5.5.3.6 羧甲基纤维素钠溶液:0.8%(w/v)称取羧甲基纤维素钠(Sigma C5678)0.80g,加入80ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5).磁力搅拌,同时缓慢加热,直至羧甲基纤维素钠完全溶解(注:在搅拌加热的过程中可以补加适量的缓冲液,但是溶液的总体积不能超过100ml.).然后停止加热,继续搅拌30min,用乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5)定容至100ml.羧甲基纤维素钠溶液能立即使用,使用前适当摇匀.4℃避光保存,有效期为3天.3.7 DNS试剂称取3,5-二硝基水杨酸3.15g(化学纯),加水500ml,搅拌5s,水浴至45℃.然后逐步加入100ml 氢氧化钠溶液(3.4),同时不断搅拌,直到溶液清澈透明(注意:在加入氢氧化钠过程中,溶液温度不要超过48℃.).再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g,苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g.继续45℃水浴加热,同时补加水300ml,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解.停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000ml.用烧结玻璃过滤器过滤.取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存.室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月.4 仪器与设备4.1 实验室用样品粉碎机或碾钵.4.2 分样筛:孔径为0.25mm(60目).4.3 分析天平:感量0.001g.4.4 pH计:精确至0.01.4.5 磁力搅拌器:附加热功能.4.6 电磁振荡器.4.7 烧结玻璃过滤器:孔径为0.45m.4.8 离心机:2000g以上.4.9 恒温水浴锅:温度控制范围在30—60℃之间,精度为0.1℃.4.10 秒表:每小时误差不超过5s.4.11 分光光度计:能检测350—800nm的吸光度范围.4.12 移掖器;精度为1l.5 标准曲线的绘制吸取缓冲液(3.5)4.0ml,加入DNS试剂(3.7)5.0ml,沸水浴加热5min.用自来水冷却至室温,用水定容至25.0ml,制成标准空白样.分别吸取葡萄糖溶液(3.1)1.00,2.00,3.00,4.00,5.00,6.00和7.00ml,分别用缓冲液(3.5)定容至100ml,配制成浓度为0.10—0.70mg/ml葡萄糖标准溶液.分别吸取上述浓度系列的葡萄糖标准溶液各2.00ml(做二个平行),分别加入到刻度试管中,再分别加入2ml水和5mlDNS试剂(3.7).电磁振荡3s,沸水浴加热5min.然后用自来水冷却到室温,再用水定容至25ml.以标准空白样为对照调零,在540nm处测定吸光度OD值.以葡萄糖浓度为Y轴,吸光度OD值为X轴,绘制标准曲线.每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线.6 试样溶液的制备固体试样应粉碎或充分碾碎,然后过60目筛(孔径为0.25mm).称取试样两份,精确至0.001g.加入50ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5).磁力搅拌30min,再用缓冲溶液(3.5)定容至100ml,在4℃条件下避光保存24h.摇匀,取出30-50ml,2000g离心3min.吸取5.00ml上清液,再用缓冲溶液(3.5)做二次稀释(稀释后的待测酶液中纤维素酶活力最好能控制在0.04—0.08 u/ml之间).液体试样可以直接用乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5)进行稀释,定容(稀释后的酶液中纤维素酶活力最好能控制在0.04—0.08 u/ml之间).如果稀释后酶液的pH值偏离5.5,需要用乙酸溶液(3.2)或乙酸钠溶液(3.3)调节,校正至5.5,然后再用缓冲溶液(3.5)做适当定容.7 测定步骤吸取10.0ml羧甲基纤维素钠溶液(3.6),37℃平衡10min.吸取10.0ml经过适当稀释的酶液,37℃平衡10min.吸取2.00ml经过适当稀释的酶液(已经过37℃平衡),加入到刻度试管中,再加入5mlDNS试剂(3.7),电磁振荡3s.然后加入2.0ml羧甲基纤维素钠溶液(3.6),37℃保温30min,沸水浴加热5min.用自来水冷却至室温,加水定容至25ml,电磁振荡3s.以标准空白样为空白对照,在540nm处测定吸光度AB.吸取2.0ml经过适当稀释的酶液(已经过37℃平衡),加入到刻度试管中,再加入2.0ml羧甲基纤维素钠(3.6)(已经过37℃平衡),电磁振荡3s,37℃精确保温30min.加入5.0mlDNS试剂(3.7),电磁振荡3s,酶解反应.沸水浴加热5min,用自来水冷却至室温,加水定容至25ml,电磁振荡3s.以标准空白样为空白对照,在540nm处测定吸光度AE.8.试样酶活力的计算[(AE - AB)×K + CO]XD = × 1000 (1)M×t式(1)中:XD —试样稀释液中的纤维素酶活力,u/ml;AE —酶反应液的吸光度;AB —酶空白样的吸光度;K —标准曲线的斜率;CO —标准曲线的截距;M —葡萄糖的分子量(180.2);t —酶解反应时间,min;1000 —转化因子,1mmol = 1000 umol.XD值应在0.04—0.08 u/ml之间.如果不在这个范围内,应重新选择酶液的稀释度,再进行分析测定.X = XD?Df (2)式(2)中:X —试样纤维素酶的活力,u/g;Df —试样的总稀释倍数.酶活力的计算值保留三位有效数字.9 重复性同一样品两个平行测定值的相对误差不超过8.0%,二者的平均值为最终的酶活力测定值(保留三位有效数字)换成其他的酶的话，基本的一样，只是底物不一样而已初始酶活（initial activity）是相对于酶的稳定性研究中测定的活性（residentialactivity）的名称。