ABI7500 Fast PCR作业指导书

ABI 7500 FAST荧光定量PCR仪简明操作规程1. 双击桌面图标，或从Start >All Programs > Applied Biosystems >7500 Software > 7500 V2.0开启软件。

进入主界面后选择Advaneed Setup 。

2. 默认进入Setup 下的Experiment Properties 界面2.1 输入实验名称 (Experiment Name)2.2 确认仪器型号2.3 在实验类型中，选择Quantitation-Comparative CT ( CT)2.4 选择试剂种类2.5 确认运行模式3. 进入Setup下的Plate Setup界面，编辑基因(Target)及样本( Sample)；3.1 在“ define targets and samples'界面中设置基因3.2在“ assign targets and samples 中进行样品板的排布。

4. 在“ Select relative quantitation setting”中设置内参基因及对照样本。

5. 进入Run Method 界面，设定反应条件及反应体积。

6. 点击“ save” 按钮，文件储存成Experiment Doeument Single Files(*.eds)格式，然后在Run界面按下按钮，反应即开始进行。

7. 实验结束后，点击界面右上角的Analyze按钮，软件将会显示实验结果：7.1 在扩增图中(见上图)，可通过更改Plot Settings 来改变扩增图的显示方式。

如果想查看阈值线或基线，请将Threshold 及Baseli ne 打勾。

7.2查看相对表达量结果时，利用Plot Settings 选项，可以以不同方式显示相对表达量的结果。

7.3对于SYBR Gree法实验，可以在Melt Curve界面中查看熔解曲线。

分子生物操作手册版本号：B修订号：0发布日期：文件标题：ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序文件编号：LAB-SOP-FZSW-011生效日期：编写人：审核人：发布部门：中心主任：批准人：其他：页码：第 1 页，共 4页【】ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序-LAB-SOP-FZSW-0111.目的：确保ABI7500仪器的正确使用及正常运行2.适用范围：美国应用生物系统公司生产的ABI7500实时荧光定量PCR仪3.运行环境：电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。

通风：仪器的通风应该没有阻挡。

温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10～30℃之间。

湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。

空间：易于操作，安全。

4.操作程序：开关机程序：开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开ABI7500系统软件，进行实验。

关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭ABI7500系统软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。

创建绝对定量反应板文件：依次选择 Start > Programs > Applied Biosystems 7500 >Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )，以启动 SDS 软件;或在桌面双击Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )图标。

选择 File （文件） > New （新建）。

在 New Document Wizard （新建文件向导）窗口中，从 Assay （实验）下拉列表中选择Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）。

接受 Container （反应板类型）和 Template （模板）字段中的默认设置（即分别为 96-Well Clear（空白96 孔板）和 Blank Document（空白反应板））。

PCR实验室7500SOP【】ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使⽤、维护、校准程序-LAB-SOP-FZSW-0111.⽬的：确保ABI7500仪器的正确使⽤及正常运⾏2.适⽤范围：美国应⽤⽣物系统公司⽣产的ABI7500实时荧光定量PCR仪3.运⾏环境：电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。

通风：仪器的通风应该没有阻挡。

温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10～30℃之间。

湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。

空间：易于操作，安全。

4.操作程序：4.1开关机程序：开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机⾯板上的绿灯亮后即可打开ABI7500系统软件，进⾏实验。

关机顺序：确认实验已经结束后，⾸先关闭ABI7500系统软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。

4.2 创建绝对定量反应板⽂件：4.2.1依次选择 Start > Programs > Applied Biosystems 7500 >Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )，以启动 SDS 软件;或在桌⾯双击Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )图标。

4.2.2选择 File （⽂件） > New （新建）。

4.2.3在 New Document Wizard （新建⽂件向导）窗⼝中，从 Assay （实验）下拉列表中选择Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）。

接受 Container （反应板类型）和 Template （模板）字段中的默认设置（即分别为 96-Well Clear（空⽩96 孔板）和 Blank Document（空⽩反应板））。

4.2.4在 Default Plate Name （默认反应板名）字段中输⼊反应板⽂件名，或接受默认⽂件名。

1、目的规范该型号ABI7500Fast荧光定量PCR仪操作程序，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行，操作人员人身安全和设备安全。

2、适用范围适用于ABI7500Fast荧光定量PCR仪的使用操作与维护。

3、职责3.1 操作人员按照本规程使用仪器，对仪器进行日常维护。

3.2 保管人员负责对仪器进行定期维护、保养。

3.3 科室负责人监督检查本操作程序的执行。

4、操作程序4.1启动笔记本电脑，进入Windows XP系统。

4.2待电脑桌面图标出现后，打开ABI7500Fast荧光定量PCR仪主机电源。

4.3待主机电源指示灯亮后，双击电脑桌面7500 SDS图标，打开软件。

4.4新建文件：在Quick Startup document窗口点击Create New Document 按钮，出现New Document Wizard窗口，在Assay菜单中选择Standard Curve （Absolute Quantification），点击Finish按钮后打开一个空白96孔板文件。

4．5探针设置：双击任意一个孔打开Well Inspector窗口。

4．6点击Add Detector按钮，打开Detector Manager窗口，选择Detector List中的探针，例如用的是TaqMan-FAM标记探针，在列表中选择Reporter：FAM，Quencher：TAMRA；如果用的是SYBR Green I，则在列表中选择Reporter：SYBR，Quencher：（none）。

选择所需探针，按住Ctrl键可选择多个探针，再点击Add To Plate Document 按钮，最后点击Done按钮关闭Detector Manager窗口。

此时Well Inspector窗口仍然是打开的。

填样品表：在96孔表中选择有样品的一个或者多个孔，然后在Well Inspector窗口的Sample Name输入样品的名称，在探针列表中的Use项下的方框中打钩选择要用的探针，在Task栏中选择指定样品类型：未知样品选择Unknown，阴性对照选择NTC，标准品选择Standard。

1. 目的为规范使用人正确和正常的使用ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪，保证扩增及结果分析的标准化、规范化，特制定本规程。

2. 适用范围适用于本公司ABI7500荧光定量PCR仪的操作。

3. 职责3.1使用人员负责本规程的实施。

3.2 设备使用人负责设备维护保养工作；设备责任人负责设备的定期维护保养工作。

3.3 质量监督员负责监督本规程的实施。

4.内容4.1 程序设置4.1.1 打开电脑及仪器电源，待仪器电源项显示power绿色状态。

4.1.2 双击电脑桌面上的7500 software V2.3 图标打开程序，打开程序单击OK，待软件连接仪器并测试校准状态后（若有出现连接失败可尝试重启电脑，检查USB线接口），出现如下界面，单击Design Wizard选项，红色箭头指示位置有个下拉菜单，如下图所示。

下拉菜单中有一个Advanced Setup（高级设置）选项，如箭头所示：点击这个选项，可以进入下面这个界面，①②③如上图所示，红色箭头从上到下指示的分别是①实验名称、②仪器型号和③反应程序类型。

（带*号的必需填）此图是上面图的延续（自己电脑显示不完全），红色箭头从上到下指示的分别是①Plate Setup 选项、②探针类型和③程序应用速度类型，一般使用的探针就是TaqMan 探针，速度类型选择默认就可以了（如果是7500fast 的话则有快速模式可以选择）。

下一步我们可以看到左上角的红色箭头指示的一个Plate Setup 选项，点击这个选项，就可以进入下一个设置界面。

红色箭头①和②指的是设定反应探针和反应样品名称，箭头③处可以填写反应探针名称（如P1,HBV ,HCV ）。

箭头⑤是选择报告荧光，一般使用的发光基团是FAM ，箭头⑥是选择粹灭荧光，达安现在使用的是TAMRA 荧光，科华现在使用的是BHQ ，在这个仪器中无此选择项，那么就选择none 。

箭头⑧处可以填写样品名称。

点击箭头④和箭头⑨处可以添加反应探针体系名称和样品名称。

7500Fast Real Time PCR简易操作流程（供参考）
1.打开电脑，等待WinXP桌面完全显示后打开7500Fast主机电源。

2.等待7500Fast主机“Power”指示灯稳定后，打开SDS软件。

3.创建绝对定量反应板文件：
a.选择Create New Document；
b.从Assay下拉列表中选择Absolute Quantification，然后单击
Next；
c.选择（或创建）所需探针加入到反应板文件中，然后单击Next；
d.为每个反应孔指定探针和任务，为标准品赋值，然后单击Finish；
4.选择Setup选项卡，选中样品对应的反应孔，在Well Inspector窗口
中输入样品名，并检查探针和任务设置；
5.选择Instrument选项卡，设定PCR条件、反应体系；
6.选择File 〉Save as，保存反应板文件为***.sds；
7.放入样品板（管），单击Start开始反应程序（八连管、单管请使用
光学平盖），等待软件倒计时开始后再离开。

8.程序运行结束后，选择Results选项卡〉Amplification plot选项卡，
选择Auto Ct分析方法，点击Analysis 〉Analyze进行分析，选择Report选项卡查看结果。

9.选择File 〉Export，导出所需结果。

10.关机顺序：关闭SDS软件，关7500Fast主机，关电脑。

ABI7500说明书1 4版一中文ABI7500说明书第一章产品简介1.1 产品概述本说明书是ABI7500实时荧光定量PCR仪的详细介绍，旨在帮助用户了解并正确使用该仪器。

1.2 产品特点1.2.1 准确可靠：ABI7500采用先进的光学系统和控制技术，确保高精度和可靠的实时荧光定量PCR结果。

1.2.2 高通量：该仪器支持多通道扩展，满足不同规模实验需求，最多可容纳96孔板。

1.2.3 快速高效：ABI7500具有快速升温和降温功能，大大缩短PCR 反应时间，提高实验效率。

1.2.4 用户友好：仪器操作简便，配备直观的触摸屏界面和友好的软件，使实验操作更加方便快捷。

第二章产品配置2.1 主机及配件ABI7500主机、电源线、数据传输线、安装光盘、用户手册、试剂盖、盖板、96孔板等。

第三章仪器安装与连接3.1 安装步骤1.将ABI7500主机放置在干燥、通风良好的实验室台面上。

2.连接电源线和数据传输线。

3.2 连接示意图（图略）第四章仪器操作4.1 打开仪器按下ABI7500主机上的电源按钮，待仪器启动成功后，进入操作界面。

4.2 设置实验参数根据实验需求，在仪器上设置反应温度、时间、通道数等参数。

4.3 添加样品和试剂按照实验方案，取适量的PCR模板DNA或cDNA，并添加相应的PCR Master Mix等试剂。

4.4 启动PCR反应将PCR反应混合液加入96孔板中，将孔板放入ABI7500中，启动PCR反应程序。

4.5 数据获取与分析待PCR反应结束后，ABI7500会自动采集并记录实时荧光信号。

用户可使用附带软件对数据进行分析和图像处理。

第五章维护与保养5.1 清洁定期清洁仪器表面和孔板槽，使用干净的布擦拭。

5.2 保养定期检查仪器线缆、接口和连接器的牢固性，如有发现损坏或松动，及时修复或更换。

第六章故障排除6.1 仪器无法启动6.1.1 检查电源线是否插入稳定，是否有电源供应。

6.1.2 检查电源开关是否处于开启状态。

ABI 7500型荧光定量核酸扩增仪作业指导书1.目的：使ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。

2.范围：ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪。

3.性能参数：详见说明书4.程序：4.1.依次打开电脑显示器及电脑主机电源，进入windows XP 界面4.2.打开PCR主机电源4.3.点击桌面7500 software V2.0.6 图标，打开软件4.4.主界面点击SET UP 菜单下ADVANCED SETUP4.4.1.在试验属性界面：选择正确的机器型号，试验类型及试剂类型（探针法/染料法）4.4.2.在plate setup 界面，首先设定试验使用的探针，及样品名称，然后按照事先加样的位置顺序设定样品名称、类型，包括待检样本、阴性对照、阳性对照、阳性标准品、阳性室内质控样本。

4.4.3.在run method界面，编辑与试剂盒提供的温度程序相同的温度程序，包括温度与时间，及循环数4.5.将预先加好的0.2ML样品管按照设定顺序放置到仪器里面，进入到RUN界面，点击绿色START 按钮，弹出保存试验对话框，设定保存后，试验立即开始运行。

界面显示运行倒计时。

运行过程中在amplification plot界面可以查看实时的扩增曲线，在temperature plot界面可以查看实时的温度变化情况。

温度循环结束后试验自动结束。

5.结果分析5.1.在analysis setup里面修改各个探针的baseline与threshold数值，点击绿色analyze图标，软件及完成自动分析。

5.2.在amplification plot界面查看所有样品的扩增曲线。

6.整体曲线的观察,将所有曲线选中进行整体观察。

6.1.观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一 Ct值出现上涨的情况。

6.2.观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。

ABI7500实时荧光定量操作程序ABI7500实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）操作程序是用于检测目标DNA的数量的一种实验方法。

在该操作程序中，使用ABI7500实时荧光定量PCR系统的仪器和相关试剂来进行PCR反应，然后通过荧光信号的变化，对PCR反应中目标DNA的数量进行定量。

下面是ABI7500实时荧光定量PCR操作程序的详细步骤：1.实验前准备a.准备所需试剂，包括PCR引物、PCR酶、荧光探针等。

b.预备PCR工作站，如PCR工作台、离心机、PCR仪等。

c.准备PCR反应管，标记每管的样品编号。

2.反应体系构建a.准备PCR反应液，根据实验需要，将反应组分如PCR引物、PCR酶、模板DNA、dNTPs等加入PCR反应管中。

b. 加入SYBR Green或荧光探针，用于在PCR反应过程中检测目标DNA。

3.试剂混合与装样a.将PCR反应液和样品混合均匀。

b.装样到ABI7500实时荧光定量PCR系统中的反应孔中，注意避免气泡的产生。

4.设置PCR程序a.打开ABI7500实时荧光定量PCR系统的软件界面，选择合适的PCR 模板。

b.设置PCR程序，包括温度、时间和荧光信号的检测。

5.PCR反应a.开始PCR反应，系统会根据设置的程序进行温度循环，在每个循环中，会记录荧光信号的变化。

b.实时监测荧光信号，根据荧光信号的变化来判断PCR反应的进行情况。

6.数据分析a.实时记录荧光信号的数值，生成实时荧光曲线。

b.通过计算机软件对实时荧光曲线进行数据分析，计算目标DNA的相对定量值。

7.结果解读a.根据相对定量值来判断样品中目标DNA的数量。

b.结果的解读可以通过进行标准曲线法或内部参照法进行。

8.结束实验a.关闭ABI7500实时荧光定量PCR系统。

b.清理和消毒实验区域和实验工具。

总结：ABI7500实时荧光定量PCR操作程序包括实验前准备、反应体系构建、试剂混合与装样、设置PCR程序、PCR反应、数据分析、结果解读和结束实验等步骤。

人民医院基因扩增实验室ABI7500实时荧光定量PCR仪操作、维护及校准操作规程1 ABI7500实时荧光定量PCR仪概述7500型荧光定量PCR仪是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。

7500型将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可实时定量观察PCR每一循环各反应管中PCR扩增产物的情况。

PCR实验结束后即刻得到定量结果，无需凝胶电泳分析，无需纯化PCR产物，无需进行任何实验操作。

7500型实时荧光定量PCR仪具有节省时间，灵敏度高，准确性好和避免产物污染等优点。

2 主要技术参数样品孔数：96孔样品基座，温度范围：4.0-99.9℃温度显示：经计算机计算的实际样品温度，精确到0.1℃加热冷却速度：平均温度变化速度1℃/秒温度准确性：正负0.25℃，35－100℃范围升降温重现性：任意温度达到时间误差小于5秒3 操作说明3.1 实验程序运行：3.1.1 首先打开电脑，进入操作系统后，打开7500仪器电源；3.1.2 双击桌面上的7500快捷方式，进入以下界面：3.1.3 点击，进入以下操作界面，按照默认设置，直接点击“完成”（Finish）：3.1.4 在96孔板中选择所放置样本对应的区域，如下图：3.1.5 点击按钮，在弹出的对话框中选择FAM-TAMRA荧光-淬灭基团，点击“Add To Plate Document”：3.1.6 点击按钮，如图所示，在弹出的对话框中勾选FAM荧光，内参荧光选择，点击“Close”：3.1.7 在选项下，逐个双击所选样本，设置样本类型和标准点定量值：3.1.8 点击选项，按照试剂盒说明书设置相应的扩增程序：3.1.9 点击按钮，为使用结果文件设定保存路径和名称。

3.1.10 点击“Start”开始运行扩增程序。

3.2 实验结果分析：3.2.1 点击按钮，打开使用结果文件；3.2.2 点击选项，进入结果分析操作界面。

点击下面的选项，双击纵坐标，选择Linear项，调整为线性坐标，点击“OK”确定：3.2.3 选取所有样本，手动设定阈值为最大荧光值的5%左右为宜。

ABI7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程1. 目的：使ABI 7500 型核酸扩增荧光检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。

2. 范围：适用于ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用操作。

3. 职责：操作人按照规程进行仪器的操作使用。

4. 程序：4.1 开机。

连接好所有连线，打开接线板开关，然后依次打开主机开关（在主机侧面），电脑显示器开关（按屏幕下方开关按钮），电脑开关（主机前面按钮）。

使用鼠标双击桌面上一体化仪3.2图标，连机后打开应用程序。

4.2 编辑样品板。

在区域选择界面中进行样品板编辑，同时输入待检样品的相关信息。

4.3 编辑实验程序。

在温度控制界面中进行程序编辑。

4.4 进行实验。

设定完成样品板和实验程序后，将实验样品按样品板设定的位置放入样品槽内，然后将样品槽放入主机内，在程序主界面下点击开始读图标开始运行实验。

实验过程中屏幕的下半部分同步显示实验的运行状态。

4.5 实验中仪器将实时显示每次的样品检测结果：在实验进行中间或实验结束后，均可组合界面中查看实时的检测结果：4.6 定量分析：实验结束后，可以点击定量图标进入定量分析功能。

4.7 打印报告单：定量完毕后，用鼠标单击文件（F）菜单中的刷新病历数据信息，用鼠标单击文件（F）菜单中的打印，系统将自动生成检测报告单，并进行打印。

4.8 关机。

实验全部结束后，可先点击Files菜单Save Data File保存实验结果，然后关闭Opticon Monitor。

依次关闭计算机主机，显示器，ABI 7500主机。

5. 相关文件：无6.相关记录：仪器设备使用、维护保养和清洁记录。

ྜྷඡᒎฉ安装和维护美国应用生物系统公司 7300/7500 实时定量 PCR 仪拆开包装并安装仪器执行目标区 (ROI) 校正安装和设置软件执行背景校正执行纯荧光校正验证仪器性能关闭 7300/7500 PCR 仪©Copyright 2004, Applied Biosystems. All rights reserved.For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.Information in this document is subject to change without notice. Applied Biosystems assumes no responsibility for any errors that may appear in this document. This document is believed to be complete and accurate at the time of publication. In no event shall Applied Biosystems be liable for incidental, special, multiple, or consequential damages in connection with or arising from the use of this document.NOTICE TO PURCHASER:PLEASE REFER TO THE APPLIED BIOSYSTEMS 7300/7500 REAL TIME PCR SYSTEM GETTING STARTED GUIDES (FOR ABSOLUTE QUANTIFICATION, ALLELIC DISCRIMINATION, PLUS/MINUS DETECTION, OR RELATIVE QUANTIFICATION) FOR LIMITED LABEL LICENSE OR DISCLAIMER INFORMATION.TRADEMARKS:Applied Biosystems is a registered trademark of Applera Corporation or its subsidiaries in the U.S. and/or certain other countries. AAB (Design), Applera, ABI P RISM, Celera Genomics, FAM, iScience, and iScience (Design) are trademarks of Applera Corporation or its subsidiaries in the U.S. and/or certain other countries.All other trademarks are the sole property of their respective owners.Part Number 4347967 Rev. B3/2004安装工作流程期间期间7300/7500 实时定量 PCR 仪安装和维护入门指南iii目录前言vii如何使用本指南 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . vii如何获取更多信息 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . viii如何获取支持 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . viii安全和电磁兼容性 (EMC) 规范信息ix本文档中使用的安全惯例 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ix仪器上的符号标志 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . x仪器上的安全标签 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xi使用仪器的一般安全注意事项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .xiii化学品安全注意事项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xiv化学品废料安全注意事项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .xv电气安全注意事项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xvi人身危险安全注意事项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xvii生物危险安全注意事项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xvii工作场所安全注意事项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xvii产品符合的安全规范和电磁兼容性 (EMC) 标准 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .xviii第 1 章拆开包装并安装仪器1概述 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1开始之前 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2选择附加硬件和软件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3选择电气保护设备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3在网络中使用 7300/7500 PCR 仪. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3选择备份存储设备. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4向 7300/7500 PCR 仪安装软件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4计划安装 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5放置 7300/7500 PCR 仪 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6检查货运材料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8安装 7300/7500 PCR 仪 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10第 2 章安装和设置软件13概述 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13开始之前 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14设置计算机 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15显示设置和电源选项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17iv7300/7500 实时定量 PCR 仪安装和维护入门指南安装 7300/7500 PCR 仪系统软件. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19执行初始系统测试 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21第 3 章执行目标区 (ROI) 校正27概述 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .27开始之前 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28准备 ROI 校正. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30执行 ROI 校正. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34第 4 章执行背景校正39概述 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39开始之前 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40准备背景反应板 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42创建背景校正反应板文件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44运行背景反应板 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45分析背景数据 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46执行 7500 PCR 仪的荧光校正 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52第 5 章执行纯荧光校正57概述 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57开始之前 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .58准备校正 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .60准备纯荧光反应板文件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61运行纯荧光反应板 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .62分析纯荧光数据 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .65第 6 章验证仪器性能73概述 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73开始之前 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .74准备 RNase P 验证反应板 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .76准备反应板文件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .77运行 RNase P 反应板 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .78分析 RNase P 数据 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .797300/7500 实时定量 PCR 仪安装和维护入门指南v第 7 章关闭 7300/7500 PCR 仪85概述 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .85执行短期关机 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .86执行长期关机 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .87附录 A仪器维护89建议维护计划 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .89归档和备份 SDS 文件. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .90去除样本块中的污染物 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .91整理硬盘碎片 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .94移动 7300/7500 PCR 仪 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .95更换卤素灯 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .96更换仪器保险丝 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .99更新操作系统软件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .101更新 SDS 软件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .102封底vi7300/7500 实时定量 PCR 仪安装和维护入门指南前言如何使用本指南关于本指南本指南为负责安装和维护美国应用生物系统公司 7300/7500 实时定量 PCR 仪的主要研究人员及实验室人员而编写。

7500荧光定量PCR 仪使用说明注意事项：●实验过程必须戴干净的一次性乳胶手套进行操作。

● PCR 反应所用的96孔板、8联管或单管必须为ABI7500专用，凸盖PCR 管禁止使用。

● 使用8联管两侧需用空管支撑，使用单管四角需用空管支撑，以防止板槽受力不均。

● 实验数据用光盘刻录，禁止U 盘拷取，数据可暂存于本机电脑硬盘中，各实验室D 盘中有指定文件夹，中心外部人员数据存于FUWU 文件夹下的子文件夹中。

操作步骤➢开机➢ 放入反应板注：关闭仪器托盘时，应按一个角度推压托盘的右侧。

（以下过程按字母顺序a →q 进行操作）➢ 创建反应板文件双击电脑桌面上SDS 软件图标打开SDS 软件；a. 从 Assay 下拉列表中选择反应板类型c. 单击Next 反应板文件类型有以下几种：1. Relative Quantification (ddCt) Plate （相对定量）2. Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）3. Allelic Discrimination （等位基因鉴别）4. Plus/Minus （阳性/ 阴性实验）d. 选择要添加到反应板文件的探针（引物），单击Add 添加选中探针e. 如果在列表中未列出所需探针，请单击New Detector 创建新探针f. 单击Nextb. 为反应板文件命名➢为反应孔设置样品名g.选取探针相同的反应孔h.点击反应孔对应的探针。

i.单击Task栏的下边指定探针任务。

j.选择Use （使用）。

k.单击Finish （完成）。

ghijkl.选取反应孔，直接输入相应样品名（也可右键，调出反Well Inspector对话框，在Sample Name中进行修改）设定PCR循环参数、运行程序1.实验结束后关闭软件。

（确认反应板文件数据已保存）2.打开拖盘，将反应板取出，关闭拖盘。

3.按下7500仪器电源开关关闭机器。

ABI 7500荧光定量PCR
一、简介
7500型荧光定量PCR仪是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。

7500型将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可实时定量观察PCR 每一循环各反应管中PCR扩增产物的情况。

PCR实验结束后即刻得到定量结果，无需凝胶电泳分析，无需纯化PCR产物，无需进行任何实验操作。

7500型实时荧光定量PCR仪具有节省时间，灵敏度高，准确性好和避免产物污染等优点。

二、主要技术参数
1. 样品孔数：96孔样品基座，
2. 温度范围：4.0-99.9℃
3. 温度显示：经计算机计算的实际样品温度，精确到0.1℃
4. 加热冷却速度：平均温度变化速度1℃/秒
5. 温度准确性：正负0.25℃，35－100℃范围
6. 升降温重现性：任意温度达到时间误差小于5秒
三、仪器性能:
1.电脑图表式PCR扩增方法，填表式PCR编程，程序运行可闪烁显示当前状态。

2.样品基座基本配置为可更换型96孔基座，可满足不同PCR反应管，不同孔数以及不同类型PCR实验的要求。

3.计算机计算不同样品体积的实际样品温度，控温精确，扩增效果重现性更好。

4.软件容量大，可储存100个完整的PCR方法，软件自动计算引物解链温度。

5.自动断电保护，恢复供电后自动执行未完成循环，保证扩增全过程安全运行。

四、主要功能
利用荧光染料和探针标记跟踪PCR产物，对反应进行实时监控；不仅可以对产物进行溶解曲线分析，而且可以通过加入已知浓度的标准样品做标准曲线，确定待测样品的浓度。

可应用于基因表达分析，突变检测；细菌、病毒等致病微生物的检测；食品卫生检疫等。

分子生物操作手册版本号：B修订号：0发布日期：文件标题：ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序文件编号：LAB-SOP-FZSW-011 生效日期：编写人：审核人：发布部门：中心主任：批准人：其他：页码：第 1 页，共 4页【】ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序-LAB-SOP-FZSW-0111.目的：确保ABI7500仪器的正确使用及正常运行2.适用范围：美国应用生物系统公司生产的ABI7500实时荧光定量PCR仪3.运行环境：电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。

通风：仪器的通风应该没有阻挡。

温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10～30℃之间。

湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。

空间：易于操作，安全。

4.操作程序：4.1开关机程序：开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开ABI7500系统软件，进行实验。

关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭ABI7500系统软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。

4.2 创建绝对定量反应板文件：4.2.1依次选择 Start > Programs > Applied Biosystems 7500 >Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )，以启动 SDS 软件;或在桌面双击Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )图标。

4.2.2选择 File （文件） > New （新建）。

4.2.3在 New Document Wizard （新建文件向导）窗口中，从 Assay （实验）下拉列表中选择Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）。

接受 Container （反应板类型）和 Template （模板）字段中的默认设置（即分别为 96-Well Clear（空白96 孔板）和 Blank Document（空白反应板））。

7500Fast Real Time PCR简易操作流程（供参考）
1.打开电脑，等待WinXP桌面完全显示后打开7500Fast主机电源。

2.等待7500Fast主机“Power”指示灯稳定后，打开SDS软件。

3.创建绝对定量反应板文件：
a.选择Create New Document；
b.从Assay下拉列表中选择Absolute Quantification，然后单击
Next；
c.选择（或创建）所需探针加入到反应板文件中，然后单击Next；
d.为每个反应孔指定探针和任务，为标准品赋值，然后单击Finish；
4.选择Setup选项卡，选中样品对应的反应孔，在Well Inspector窗口
中输入样品名，并检查探针和任务设置；
5.选择Instrument选项卡，设定PCR条件、反应体系；
6.选择File 〉Save as，保存反应板文件为***.sds；
7.放入样品板（管），单击Start开始反应程序（八连管、单管请使用
光学平盖），等待软件倒计时开始后再离开。

8.程序运行结束后，选择Results选项卡〉Amplification plot选项卡，
选择Auto Ct分析方法，点击Analysis 〉Analyze进行分析，选择Report选项卡查看结果。

9.选择File 〉Export，导出所需结果。

10.关机顺序：关闭SDS软件，关7500Fast主机，关电脑。