细胞增殖、分化、凋亡和癌变之间的关系？
细胞是生命体结构和功能的基本单位，细胞的各种生命活动的进行受到各种机制的共同严格调节，从而保证生命有机体正常的生命活动有条不紊的进行。（1）分裂
体内能正常分裂的细胞当受到某些因素（如生长因子）的刺激后，通过细胞的信号级联反应，促使细胞进入M期，M-周期蛋白的立即合成，与Cdc2结合形成促成熟因子MPF,并在CDK的作用下，完成细胞的分裂过程。在原癌基因和抑癌基因的共同作用下，通过细胞内的信号级联反应，借以Cdc2蛋白—周期蛋白的引擎作用，保证细胞周期的正常运转。这种调节机制一旦失控，便会导致细胞周期的紊乱，甚至导致细胞的癌变和死亡。
（2）癌变
癌变是指。。。。。。。主要由原癌基因和抑癌基因调控。
①原癌基因：概念。。。。。。
一旦原癌基因被激活，抑癌基因失活则会引起细胞的癌变。原癌基因与细胞的增殖与分化、迁移有重要的调节作用。其表达产物主要有生长因子、转录因子、蛋白质激酶等。激活的原癌基因会过多表达蛋白质，细胞的生命活动就会不受控制，不断的进行细胞的分裂，最终引起癌变。
②抑癌基因：概念。。。。。。
抑癌基因主要是遏制细胞的增殖，其表达的产物主要是调节或抑制细胞周期通过特定阶段的细胞内蛋白，有如下几类：
a.RB，p16；针对分泌激素和发育信号的受体和信号转导物，对细胞增殖起抑制作用；
b.监控点调控蛋白，如果DNA或染色体受到损伤和异常，调控蛋白可使细胞周期停止；
c.促凋亡蛋白；参与DNA修复的酶。
一旦抑癌基因失去活性，就会引起细胞癌变。例如，p53发生了基因突变，p53蛋白的表达就会受到减少，从而对p21基因的调控作用就会减弱，表达出的P21（一种CDKI）就会减少， S周期蛋白-CdK复合物则不受抑制地引导含有损伤DNA的细胞进入S期，进行细胞分裂，这就提高了细胞后代的突变频率，引起细胞癌变。
抑癌基因的失活会引起细胞癌变还表现在抑癌基因表达的Rb蛋白，Rb蛋白的作用主要是在细胞分裂周期中起刹车作用，通过磷酸化和去磷酸化作用来调节细胞周期活动。去磷酸化RB蛋白具有活性，可同特定基因调节蛋白结合，抑制基因调节蛋白，使与细胞增殖有关的基因不能进行转录。抑癌基因的失活，则RB蛋白就会减少，基因调控蛋白会被释放而活化，使基因不受控制的表达，导致细胞癌变。
（3）凋亡
当细胞受到内外死亡信号（如损伤无法修复的DNA）的诱导，就会通过细胞的信号级联反应，激活了细胞内的自杀程序。在细胞凋亡过程中，线粒体起着关键性的作用，线粒体释放出AIF和细胞色素c，细胞色素c与Apaf_1结合，激活casp8，后者又进一步激活casp3、6、7，进而激活DNA酶、促进蛋白质的降解，导致死亡程序的下游变化，引起核凋亡。
（4）分化
在细胞分化的过程中，需要多种转录因子的共同调控。首先需要基因组表达
出各种蛋白质，形成的蛋白质再进一步对新细胞的基因表达进行调控，翻译出特定功能的蛋白质组。经过基因组和蛋白质组的相互作用，经多次循环，细胞完成分化过程，形成行使特定的生理功能的功能细胞。
四者的关系。。。。。。。
高三生物二轮复习练习——细胞增殖与分化 1．细胞周期包括G1期、S期、G2期和M期。抑素是细胞释放的、能抑制细胞分裂的物质，主要作用于细施周期的G2期。M期细胞的细胞质中含有一种促进染色质凝集为染色体的物质。下列有关叙述正确的是 A．S期时间较长的细胞更适合做“观察细胞有丝分裂”实验的材料 B．如果缺少氨基酸的供应，动物细胞一般会停留在细胞周期的S期 C．抑素抑制DNA复制所需蛋白质的合成，阴断细胞分裂 D．M期细胞与G1期细胞融合，可能不和于G1期细胞核中的DNA表达 2．关于豌豆细胞有丝分裂过程中相关细胞器作用的叙述，正确的是A．在间期，核糖体上合成DNA聚合酶B．在前期，由中心粒发出纺锤丝形成纺锤体 C．在中期，线粒体为DNA的复制提供能量D．在末期，高尔基体与赤道面形成有关 3．细胞周期的运转是十分有序的，是基因有序表达的结果。基因的有序 表达，使
进行有丝分裂的细胞按G1－S－G2－M时期的顺序周而复始地进行。 下图显示周期中的某种生理变化与其对应时期的关系，其中表示正确的是B 4．用32P标记了玉米体细胞（含20条染色体）的DNA分子双链，再将这些细胞转入不含32P的培养基中培养，在第二次细胞分裂的中期、后期，一个细胞中的染色体总条数和被32P标记的染色体条数分别是 A．中期20和20、后期40和20 B．中期20和10、后期40和20 C．中期20和20、后期40和10 D．中期20和10、后期 40和10 5．某种植物细胞减数分裂过程中几个特定时期的显微照片如下。下列叙述正确的是 A．图甲中，细胞的同源染色体之间发生了基因重组
B．图乙中，移向细胞两极的染色体组成相同 C．图丙中，染色体的复制正在进行，着丝点尚未分裂 D．图丁中，细胞的同源染色体分离，染色体数目减半 6．某动物体细胞基因型为AaX B X b， 甲图为该生物体细胞的细胞周期示意图， 乙图为该生物产生的一个卵细胞，不考虑 基因突变。下列说法错误的是 A．图甲中的④时期会出现染色体数目加倍的现象 B．完整减数分裂周期可用①→②→③→④表示 C．图乙中细胞产生过程中可能发生了交叉互换 D．与图乙中细胞同时形成的极体基因型可能是aX B X b 7．某生物的一个精原细胞经减数分裂后形成的其中一个精细胞如图所示。下列解释不正确的是 A．减数第一次分裂中发生了同源染色体的交叉互换 B．通过减数分裂形成的4个精细胞中有两个基因型为Aa C．该变异类型属于染色体结构变异 D．减数第一次分裂中这对同源染色体没有分离 8．一个基因型为AaBb的细胞（基因A和a，B和b分别位于两对同源染色体上），当进入有丝分裂后期时，两对基因随染色体移向细胞
细胞的增殖、分化、癌变、衰老和凋亡 一、单项选择题： 1．下图为人体细胞的分裂、分化、衰老和凋亡过程的示意图，图中①—⑥为各个时期的细 胞，a —c 表示细胞所进行的生理过程。据图分析，下列叙述正确的是 A ．⑤与⑥的基因型相 同，蛋白质的种类也相同 B ．细胞的衰老与凋亡就会引起人体衰老与死亡 C ．若⑤⑥已失去分裂能力，则其细胞内遗传信息的流动方向为DNA →RNA →蛋白质 D ．与①相比，②的表面积与体积的比值增大，与外界环境进行物质交换的能力增强 2．下列关于观察减数分裂实验的叙述中，错误．． 的是 A ．可用蝗虫卵母细胞、蚕豆花粉母细胞的固定装片观察减数分裂 B ．用桃花的雄蕊比用桃花的雌蕊制成的装片中，容易观察到减数分裂现象 C ．能观察到减数分裂现象的装片中，可能观察到同源染色体联会现象 D ．用洋葱根尖制成装片，能观察同源染色体联会现象 3．动物和人体内具有分裂和分化能力的细胞称为干细胞。对下图的相关叙述中，错误的是 A ．a 过程表示干细胞能自我更新 B ．b 、c 过程表示干细胞具有分化能力 C ．a 、b 、c 过程中细胞的遗传信息表达情况不同 D ．b 过程形成的细胞直接组成器官，可供器官移植使用 4．为了观察减数分裂各时期的特点，实验材料选择恰当的是 ①蚕豆的雄蕊 ②桃花的雌蕊 ③蝗虫的精巢 ④小鼠的卵巢 A ．①② B ．③④ C ．①③ D ．②④ 5．下列关于植物组织培养的叙述中，错误．． 的是 A ．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B ．培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C ．离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织 D ．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同 6．关于细胞生命历程的说法，错误．． 的是 A ．细胞分化由遗传物质控制 B ．细胞癌变过程中遗传物质发生改变 C ．细胞衰老过程中部分酶活性改变 D ．人在胚胎发育后期尾的消失是通过尾部细胞衰老死亡而实现的 二、多项选择题： 24．下列关于细胞衰老的说法正确的是 A ．生物体内绝大多数细胞都要经过未分化、分化、衰老和死亡这几个阶段 衰老、凋亡 a b b c c ① ② ③ ④ ⑤上皮细胞 ⑥骨骼肌细胞
在组织中检测细胞增殖、分化和凋亡的方法一、检测细胞增殖的方法 （1）直接方法：通过直接测定进行分裂的细胞来评价细胞的增殖能力 1、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR ）渗入法 胸腺嘧啶核苷（TdR ）是DNA 特有的碱基，也是DNA 合成的必需物质。用同位素3H 标记TdR 即3H-TdR 作为DNA 合成的前体能掺入DAN 合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN 的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。 2、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE ）检测法 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE ）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使CFSE 成为一种良好的细胞标记物。CFSE 进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm 激发光和荧光检测通道可对其进行分析。 3、Brdu 检测法 Brdu 中文全名5- 溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA 合成期（S 期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu 单克隆抗体，ICC 染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义 4、增殖标志检测 有些抗原只存在于增殖细胞中，而非增值细胞缺乏这些抗原，您也可以通过特异性的
单抗来对细胞增殖进行检测。例如，在人体细胞中，Ki-67 抗体识别同名蛋白，在细胞周期 S 期、G2 期和M 期表达，而在G0 期和G1 期（非增殖期）不表达。用针对Ki-67 蛋白的单抗就可以检测细胞的增值情况。由于需要组织切片，这种方法无法进行高通量分析。不过这一方法颇受癌症研究者们的青睐，因为它能够用来检测体内肿瘤细胞的增殖。其他普遍使用的细胞增殖或细胞周期调控标志还包括，增殖细胞核抗原PCNA 、拓扑异构酶IIB 和磷酸化组蛋白H3 。 （2）间接方法：通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力 1、MTT 检测法 MTT 检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT 分解成兰紫色的甲 （Formazan ），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比。 2、ATP 检测 细胞内的ATP 含量受到了严格调控，检测ATP 也可以得到细胞增殖的信息。死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含ATP ，在细胞溶解物或提取物中测得的ATP 浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。利用荧光素酶luciferase 及其底物荧光素luciferin 的ATP 检测以生物发光为基础，能够为您提供非常灵敏的结果。如果有ATP 存在荧光素酶就会发光，而且其发光强度与ATP 浓度成正比，用能读取发光信号的光度计和酶标仪都可以方便的进行检测。这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测和筛选。 二、检测细胞分化的方法 1 、流式鉴定细胞表面标志，以判断细胞是否分化 2、观察细胞形态，与已分化的细胞进行对比 3、分化诱导评估其分化能力
四种甘草对人乳腺癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用 的比较研究 [ 08-05-16 15:17:00 ] 作者：马淼编辑：studa20 【摘要】目的比较新疆四种野生甘草活性成分对人乳腺癌细胞的增殖 抑制作用，以期筛选出药效最佳的甘草种类。方法采用MTT法检测不同样品对BCAP37细胞的增殖抑制作用，Hoechst33258荧光染色法检测各样品诱导BCAP37细胞凋亡的作用。结果4种甘草的活性成分对人乳腺癌BCAP37 细胞具有显著的增殖抑制与诱导凋亡的作用，且存在显著的种间与产地间差 异。结论抗癌药效最佳的甘草种类为阿拉尔甘草。 【关键词】甘草活性成分人乳腺癌BCAP 37细胞 Comparative Study on the Anti-proliferation and Apoptosis- inducing Effects of Active Components from Four Glycyrrhiza Species on Human Breast Cancer BCAP-37 Cell Abstract:ObjectiveTo select the optimal glycyrrhiza species for medicinal utilization by comparing the anti-proliferation and apoptosis-inducing effects of active components from four wild glycyrrhiza species in Xinjiang on human breast cancer BCAP37 cell. MethodsThe anti-proliferation effects of different samples on BCAP 37 cell were measured by MTT assay. The cell apoptotic rate was detected by Hoechst 33258 stain.ResultsActive components of four Glycyrrhiza species inhibited the proliferation of BCAP37 cells and induced apoptosis significantly. What's more, there were significant interspecific and spatial variations in the anti-proliferation and apoptosis-inducing effects. ConclusionThe optimal Glycyrrhiza species for anticancer utilization is Glycyrrhiza alalensis L. Key words:Glycyrrhiza; Active Component; Human breast cancer BCAP37 Cell 甘草是我国十分重要的中药材，素有“十方九草”的美誉。近年来，随着对甘草开发利用的不断深入，甘草被广泛用于药品、食品、保健品、化妆品 等领域［1］，甘草的市场需求量剧增。我国是世界上甘草出口大国，其中 80％为野生甘草，仅有20％为栽培甘草。我国甘草储量锐减，由建国初期 200～250万吨下降到50～70万吨［2］。现存的野生甘草资源已无法满足日益 增长的市场需求，因此，人工栽培甘草势在必行，野生优质甘草品种的筛选显
第九章细胞增殖与分化的分子机制?细胞的增殖（proliferation）与分化（differentiation）是生物体整个生命活 动中的两个重要事件，与生物体的生长、发育、衰老以及疾病密切相关。 第一节细胞增殖的分子基础 ?（一）概念: ?细胞增殖（cellproliferation）：指细胞通过生长和分裂使细胞数目增加，子细胞获得和母细胞相同遗传特性的过程，是细胞生命活动的重要体现。 ?生物体生长包括细胞数目增多、细胞体积增大和细胞外基质的合成。细胞的增多就是细胞增殖的过程。 ?(二）细胞增殖的意义： ?1、生命的延续、繁衍依靠细胞增殖。 ?低等的单细胞生物依靠细胞增殖分裂繁殖，高等生物依靠细胞减数分裂产生生殖细胞。 ?2、生物体生长发育依赖细胞增殖。 ?3、补充生命活动中衰老和死亡的细胞。 ?4、创伤的修复。 ?（三）细胞增殖的方式 ?无丝分裂：没有纺锤体形成，无核膜核仁的消失和重建。 ?减数分裂：有性生殖中生殖细胞形成过程中发生，连续两次分裂DNA只复制一次。?有丝分裂：有纺锤丝形成，细胞核先分裂再发生胞质分裂，是真核细胞的主要增殖方式。 二、细胞周期 ?细胞周期（cellcycle）：是指细胞从上一次分裂结束开始到下一次分裂结束为止所经历的整个过程。 细胞周期的划分 ?一个细胞周期可以分为间期（interphase）和分裂期（metaphaseM期）两个大阶段。 ?间期可以分为G1期、S期和G2期。 ?细胞周期各期主要特征 ?G1期：从有丝分裂完成到DNA复制之前的一段时期。特点：大量RNA和蛋白质合成，蛋白质磷酸化，细胞膜转运功能加强。 ?G1期的后期细胞的自身监控机制可以根据内外环境是否适于细胞增殖而决定是否进入下一阶段S期。这一特定时期在酵母细胞中称为起始点，哺乳动物细胞中称为限制点（R点）。 ?如环境适于细胞增殖则进入S期，不适合细胞增殖则细胞可能延迟通过G1期或者进入休眠状态。进入休眠状态的细胞蛋白质合成急剧下降（仅有正常的20%），这期细胞。 种细胞称为G
在组织中检测细胞增殖、分化与凋亡得方法 一、检测细胞增殖得方法 (1)直接方法:通过直接测定进行分裂得细胞来评价细胞得增殖能力 1、胸腺嘧啶核苷(3H-ＴｄR)渗入法 胸腺嘧啶核苷(TdR)就是ＤNA特有得碱基,也就是DＮＡ合成得必需物质、用同位素３H 标记TdＲ即3H—TdR作为ＤNA合成得前体能掺入DAN合成代谢过程,通过测定细胞得放射性强度,可以反映细胞DＡN得代谢及细胞增殖情况。但就是具有放射性、 2、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CＦＳE)检测法 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(ＣFＳE)就是一种可穿透细胞膜得荧光染料,具有与细胞特异性结合得琥珀酰亚胺脂基团与具有非酶促水解作用得羟基荧光素二醋酸盐基团,使ＣFＳE成为一种良好得细胞标记物。ＣFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内得氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时,CＦsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度就是亲代细胞得一半。这样,在一个增殖得细胞群中,各连续代细胞得荧光强度呈对递减,利用流式细胞仪在48８nm激发光与荧光检测通道可对其进行分析、 3、Ｂｒdu检测法 Brｄｕ中文全名５—溴脱氧尿嘧啶核苷,为胸腺嘧啶得衍生物,可代替胸腺嘧啶在DＮＡ合成期(S期),活体注射或细胞培养加入,而后利用抗Brdu单克隆抗体,IＣＣ染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞得种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义 ４、增殖标志检测 有些抗原只存在于增殖细胞中,而非增值细胞缺乏这些抗原,您也可以通过特异性得单抗来对细胞增殖进行检测、例如,在人体细胞中,Ki—６7抗体识别同名蛋白,在细胞周期S期、G2期与M期表达,而在Ｇ0期与Ｇ1 期(非增殖期)不表达、用针对Ki-６7蛋白得单抗就可以检测细胞得增值情况、由于需要组织切片,这种方法无法进行高通量分析。不过这一方法颇受癌症研究者们得青睐,因为它能够用来检测体内肿瘤细胞得增殖。其她普遍使用得细胞增殖或细胞周期调控标志还包括,增殖细胞核抗原PCＮA、拓扑异构酶IIB与磷酸化组蛋白H3。 (2)间接方法:通过检测样品中健康细胞得数目来评价细胞得增殖能力 １、MTT检测法 MTT检测法主要反映细胞得能量代谢,就是检测细胞增殖活力得一种简便准确得方法,其原理就是在活细胞生长与增殖过程中,线粒体内得脱氢酶可将黄色得MTT分解成兰紫色得甲(Foｒmazａn),生成得甲量得多少与细胞得数量与细胞得活力成正比。 2、ATP检测 细胞内得ATＰ含量受到了严格调控,检测ＡTP也可以得到细胞增殖得信息。死亡细胞或即将死亡得细胞几乎不含ATP,在细胞溶解物或提取物中测得得ATP浓度与细胞数之间存在严格得线性关系。利用荧光素酶ｌuｃifeｒaｓｅ及其底物荧光素lucｉferin得ＡＴＰ检测以生物发光为基础,能够为您提供非常灵敏得结果。如果有ATＰ存在荧光素酶就会发光,而且其发光强度与ＡＴP浓度成正比,用能读取发光信号得光度计与酶标仪都可以方便得进行检测。这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测与筛选。 二、检测细胞分化得方法 1、流式鉴定细胞表面标志,以判断细胞就是否分化 2、观察细胞形态,与已分化得细胞进行对比 3、分化诱导评估其分化能力 三、检测细胞凋亡得方法 (1)形态学检测
第二章细胞的增殖和分化 1、（了解）细胞周期 定义：连续分裂的细胞从一次分裂结束到下次分裂结束所经历的整个过程。 不同生物或同一生物不同种类的细胞，细胞周期长短不一。 2、（理解）动、植物细胞有丝分裂的过程、各时期分裂图 3、（理解）动、植物细胞有丝分裂异同及意义
细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞有丝分裂的重要意义（特征），是将亲代细胞的染色体经过复制以后，精确地平均分配到两个子细胞中去，因而在生物的亲代和子代间保持了遗传性状的稳定性，对生物的遗传具重要意义。 4、（理解）“观察细胞的有丝分裂：目的要求、材料用具、方法步骤、实验现象和结果、讨论 5、（理解）“制作并观察植物细胞有丝分裂的临时装片”：目的要求、材料用具、方法步骤、实验现象和结果、讨论(见课本) 6、（理解）细胞分化的概念和生物学意义 特点：分化是一种持久的、稳定的渐变过程。 细胞分化的意义：一般多细胞生物体的发育起点是一个细胞（受精卵），细胞的分裂只能繁殖出许多相同的细胞，只有经过细胞分化才能形成胚胎、幼体，并发育成成体，细胞分化是生物个体发育的基础。细胞分化使多细胞生物体中的细胞趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。 细胞分化的实例：如根尖的分生区细胞不断分裂、分化，形成成熟区的输导组织细胞、薄壁组织细胞、根毛细胞等；胚珠发育成种子，子房发育成果实；受精卵发育成蝌蚪，再发育成青蛙；骨髓造血；皮肤再生等都包涵着细胞的分化。 细胞分化过程：细胞通过有丝分裂数量越来越多，这些细胞又逐渐向不同个方向变化 定义：在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态，结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。 实质：基因选择性表达的结果 7、（了解）癌细胞的主要特征 （1）能够无限增殖。（2）癌细胞的形态结构发生了变化。（3）癌细胞的表面也发生了变化。癌细胞表面的糖蛋白减少, 细胞彼此之间黏着性减小，导致在有机体内容易分散和转移。8、（理解）细胞发生癌变的原因 （1）内因：人体细胞内有原癌基因和抑癌基因 （2）外因：①物理致癌因子；②化学致癌因子；③病毒致癌因子。 恶性肿瘤的防治：远离致癌因子。做到早发现早治疗 9、（理解）细胞的全能性 （1）概念：已经分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能 （2）体细胞具有全能性的原因 由于体细胞一般是通过有丝分裂增殖而来的，一般已分化的细胞都有一整套和受精卵相同的DNA分子，因此，分化的细胞具有发育成完整新个体的潜能。 （3）全能性大小：受精卵>生殖细胞>体细胞 （4）植物细胞全能性高度分化的植物细胞仍然具有全能性。
第10卷 第1期中 华 男 科 学 Vol.10 No.1 2004年1月 National Journal of Andrology Jan.2004 ?论著? survivin 蛋白在前列腺癌中的表达及其与 肿瘤细胞凋亡的关系 高吴阳1,胡传义1,易慕华2 (三峡大学仁和医院,1.泌尿外科,2.病理科,湖北宜昌443001) 摘要: 目的:探讨新的凋亡基因survivin 蛋白在前列腺癌(PCa )的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。 方法:采用免疫组化SP 法和DNA 原位未端标记T UNE L 法分别测定42例PCa 组织及10正常前列腺(NP )组织中survivin 蛋白的表达和细胞凋亡。 结果:survivin 蛋白在PCa 中的阳性表达为80.59%,与病理分级、临床分期和淋巴结转移密切相关(P <0.05),而NP 中无阳性表达;PCa 组织及NP 组织中细胞凋亡指数(AI )分别为3.03±1.33、1.07±0.77,其差异有显著意义(P <0.05);survivin 蛋白的表达与细胞AI 呈负相关(r =-0.679,P <0.001)。 结论:survivin 蛋白的异常表达而引起的细胞凋亡抑制,在PCa 的发生、发展中起一定的作用;联合检测survivin 蛋白和AI ,有助于对肿瘤细胞的分化程度作出正确评价,以指导临床治疗及估计预后。关键词:survivin 蛋白;凋亡;前列腺癌;免疫组化 中图分类号:Q255;R737.25 文献标识码:A 文章编号:100923591(2004)0120012203 Expression of survivin Protein in Prostatic Carcinoma Tissues and Its Correlation with Apoptosis of Cancer Cells G ao Wuyang ,Hu Chuanyi ,Y i Muhua Department o f Urology (Gao WY ,Hu CY ),Department o f Pathology (Yi MH ),Rehe Hospital ,Three Gorges Univer sity ,Yichang ,Hubei 430031,China Correspondence to :Gao Wuyang Abstract : Objective :T o investigate the expression of survivin protein in the tissues of prostatic carcinoma and its correlation with apoptosis of cancer cells. Methods :Expression of survivin protein and apoptosis index (AI )were detected by immunohistochemical and terminal de 2oxynucleotidyl transterase 2mediated dUTP biotin nich end labeling (T UNE L )technique in the tissues of 42cases of prostatic carcinima (PCa )and 10cases of normal prostate (NP ). Results :Survivin prosteins were expressed in 34of the 42(80.59%)cases of PCa.The positive rate of survivin was strongly ass ociated with pathological grades ,clinical stages and lymphmetastasis in PCa (P <0.05).In contrast ,NP did not express survivin.Survivin protein expressioin was negatively correlated with AI in PCa (r =-0.679,P <0.001). Conclusions :Apop 2tosis inhibition by survivin may participate in the onset and progression of PCa ,and the detection of survivin protein and AI in PCa may help to evaluate the degree of cell diferentiation ,decide therapeutic strategies and estimate prognosis. Natl J Androl ,2004,10(1):12214K ey w ords :survivin protein ;apoptosis ;prostatic carcinoma ;immunohistochemistry 前列腺癌(prostatic carcinoma ,PCa )是男性泌尿生殖系肿瘤中最重要的一种,其病因和发病机制尚 ?21?收稿日期:2003207215;修回日期:2003210208 作者简介:高吴阳(19622),男,湖北宜昌市人,副主任医师,本科,从事泌尿男科学专业。通讯作者:高吴阳
细胞的增殖与分化集团文件发布号：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-
细胞增殖与分化 1．什么是细胞周期 指连续分裂的细胞从上一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的整个过程。由分裂间期和分裂期组成。间期历时长，在前，分为G1期（主要是蛋白质合成，核糖体增生）S期（主要发生DNA的复制）和G2期（主要发生有丝分裂所必需的一些蛋白质的合成）；分裂期（M期）在后，历时较短，人为分为前中后末四个时期。 2．有丝分裂的过程、特征和意义分别是什么 有丝分裂的过程及特征：
有丝分裂的意义：亲代细胞内的染色体经过复制后，平均分配到两个子细胞中，从而使细胞的亲代与子代之间保持遗传性抓观念的稳定性3．动植物细胞有丝分裂的主要不同 4．核DNA、染色体、每条染色体上DNA含量变化曲线 5．什么是细胞分化本质特点意义 细胞分化：细胞的后代在形态结构、功能上发生差异的过程。 本质：基因在特定时间和空间条件下有选择的表达（同一个体的不同细胞遗传物质是相同的） 特点：持久性；稳定性；普遍性 意义：使多细胞生物体的细胞趋于专门化，有利于提高各种生理功能的功率，生物个体发育就是通过细胞分化来实现。 6．细胞的全能性含义动植物举例比较与分化程度的关系同一生物体内全能性的比较 细胞的全能性：已分化的细胞仍具有发育成完整个体的能力 植物细胞的全能性：eg：组织培养脱分化再分化
（外植体——愈伤组织——胚状体——完整植株） 动物细胞核的全能性：eg：核移植 与分化程度的关系：细胞全能性高低与分化程度负相关，分化程度越大，全能性越低 同一生物体内全能性比较：受精卵＞生殖细胞＞体细胞 7．细胞的凋亡与衰老 细胞凋亡：原因：细胞凋亡是一种编程性细胞死亡，是由某种基因引发的，属于正常生命现象。例如：蝌蚪的尾和鳃的消失，人神经细胞数量的调整。 细胞衰老特征：（1）细胞内多种酶的活性降低；（2）细胞呼吸变慢 （3）随细胞年龄增大，线粒体数量减少，体积增大 （4）细胞核体积增大、核膜不断向内折叠等 8．细胞的癌变 含义：由于受到致癌因素的作用，变成不受控制而无限增殖的恶性增殖细胞 特征：（1）有无限增殖的能力（2）能在体内转移，与正常细胞相比，癌细胞表面的粘连蛋白很少或缺失 致癌因素：各种射线，许多种无机或有机化合物，许多种病毒等9．对比细胞的凋亡、衰老与癌变
虿袃羂膃螁蚆芁膂蒁 细胞分化细胞分化示意图目录第2节细胞的分化 在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态结构和生理功能上发生安定性的差异的过程称为细胞分化（cellulardifferentiation）。细胞分化是一种持久性的变化，细胞分化不仅发生在胚胎发育中，而是在一生都进行着，以补充朽迈和死亡的细胞．如：多能造血干细胞分化为例外血细胞的细胞分化过程。大凡来说，分化了的细胞将一直保持分化后的状态，直到死亡。 导言 也可以说，细胞分化是同一来源的细胞逐渐发生各自特有的形态结构、生理功能和生化特征的过程。其结果是在空间上细胞之间出现差异，在时间上同一细胞和它以前的状态有所例外。细胞分化是从化学分化到形态、功能分化的过程。 从分子水平看，细胞分化意味着各种细胞内合成了例外的专一蛋白质（如水晶体细胞合成晶体蛋白，红细胞合成血红蛋白，肌细胞合成肌动蛋白和肌球蛋白等），而专一蛋白质的合成是通过细胞内一定基因在一定的时期的选择性表达实现的。因此，基因调控是细胞分化的核心问题。特点 正常情况下，细胞分化是安定、不可逆的。一旦细胞受到某种刺激发生变化，开始向某一方向分化后，即使引起变化的刺激不再存在，分化仍能进行，并可通过细胞分裂不断继续下去。 胚胎细胞在显示特有的形态结构、生理功能和生化特征之前，需要经历一个称作决定的阶段。在这一阶段中，细胞虽然还没有显示出特定的形态特征，但是内部已经发生了向这一方向分化的特定变化。细胞在整个生命进程中,在胚胎期分化达到最大限度. 细胞决定的早晚，因动物及组织的例外而有差异，但大凡情况下都是渐进的过程。例如，在两栖类，把神经胚早期的体节从正常部位移植到同一胚胎的腹部还可改变分化的方向，不形成肌肉而形成肾管及红细胞等。但是到神经胚晚期移植体节，就不能改变体节分化的方向。
第一章细胞的增殖与分化 §4-1 细胞的增殖 一.细胞增殖的意义 单细胞生物:通过细胞增殖而繁殖后代 多细胞生物:补充衰老、死亡的细胞 是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础 二.细胞增殖方式————细胞分裂 生殖细胞 细胞 体细胞 有丝分裂：是真核生物体细胞增殖的主要方式 减数分裂：与真核生物产生生殖细胞有关 三.有丝分裂： （一）细胞周期 1、定义：连续分裂的细胞从一次分裂结束到下次分裂结束所经历的整个过程。 2. 有丝分裂需要 3、不同生物或同一生物不同种类的细胞，细胞周期长短不一。 （二）有丝分裂的过程
（三）有丝分裂过程 前期：膜仁消失现两体中期：形定数清赤道齐后期：粒裂数加均两极末期：两消两现重开始(四)有丝分裂过程中染色体、DNA、染色单体的变化规律 （五）有丝分裂的特点和意义 特点：⑴（间期）染色体复制一次⑵（分裂期）染色体平均分配 结果：亲、子代细胞染色体数目保持恒定 意义：保证了子细胞能得到和母细胞一样的一套遗传物质，从而保证了遗传性状的稳定性
§4-2 细胞的分化 一、细胞分化 （一）概念：由一个或一种细胞增殖产生的后代,在形态、结构和功能上发生稳定性差异的过程。 （二）细胞分化的结果：形成不同的细胞和组织 （三）特点：持久性、稳定性、不可逆性 （四）意义：细胞分化是生物个体发育的基础，细胞分化使多细胞生物体中的细胞趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率 二．细胞的全能性 1.概念：已分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能 2.原因：生物体每个细胞都含有该物种特有的全套遗传物质，都有发育成个体的全部遗传信息 3.全能性的表现： 条件：离体 高低：分化程度越高的细 胞全能性越低 细胞的癌变 一）癌细胞：在某些致癌因素的作用下，有的细胞变得不受控制而无限增殖，这种细胞就是癌细胞。二）癌细胞的特点及癌变原因：
细胞的增殖、分化、衰老和凋亡 1.内容： （1）细胞的生长和增殖的周期性Ⅰ （2）细胞的无丝分裂Ⅰ （3）细胞的有丝分裂Ⅱ （4）细胞的分化Ⅱ （5）细胞的全能性Ⅱ （6）细胞的衰老和凋亡与人体健康的关系Ⅱ （7）癌细胞的主要特征及防治Ⅱ （8）植物细胞的质壁分离和复原Ⅱ 细胞细 胞 的 增 殖 有 丝 分 裂 细胞周期：连续分裂的细胞，从一次分裂结束开始到下一次分裂结束为止。 分裂间期 G1期：DNA合成前期相关RNA和蛋白质的合成 S期：DNA合成期DNA的复制 G2期：DNA合成后期相关RNA和蛋白质的合成 分裂期 前期 染色质高度螺旋化形成染色体 核仁核膜解体 出现纺锤丝，形成纺锤体 中期 染色体的着丝点整齐的排列在赤道板上 染色体形态固定，数目清晰，是观察染色体的最佳时期 后期 子染色体平均分配到两极 末期 染色体解旋形成染色质，纺锤丝消失 核膜、核仁重新出现，形成2个子细胞 动植物细胞有丝分裂的区别 前期：纺锤丝形成方式不同 后期：子细胞形成方式不同 无丝分裂 特点：无纺锤体和染色体的出现 过程：核延长缢裂、整个细胞从中部缢裂，形成两个细胞 代表：蛙的红细胞、原核细胞 减数分裂：与配子细胞的形成有关 细 胞 的 分 化 功能上发生一系列稳定性差异的过程 特征:具有持久性、稳定性和不可逆性。 意义：是生物个体发育的基础
第一课时 细胞的增殖 一、细胞不能无限长大 1.相对表面积决定：表面积/体积 体积越大相对表面积越小，物质运输速率就越低。 2.核质比 二、细胞通过分裂进行增殖 1.意义：是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础。 2.过程：包括物质准备和细胞分裂整个连续的过程。 3.方式：真核细胞的分裂方式包括：有丝分裂、无丝分裂、减数分裂三种。 三、有丝分裂 1.细胞周期：连续分裂的细胞，从一次分裂完成开始到下一次分裂完成为止，为一个细 细胞全能性 概念：已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能 原因：以分化的细胞具有本物种全套的遗传物质 实例：已分化的植物细胞具有发育成完整个体的全能；高度分化的动物细 胞无全能性，但细胞核具有全能性。 干细胞：动物和人体内保留着少量具有分裂和分化能力的细胞。 全能性比较：植物细胞>动物细胞；受精卵>配子细胞>体细胞 细胞的衰老 细胞衰老与个体衰老的关系：单细胞生物细胞衰老即为个体的衰老；多细胞生物，细胞衰老不代表个体的衰老，只有绝大多数细胞衰老，生物体才衰老。 特征 1. 细胞内水分减少，细胞萎缩，体积变小，新陈代谢的速率减慢 2. 细胞内多种酶的活性降低 3. 细胞内色素逐渐积累 4. 细胞内呼吸速率减慢，细胞体积增大，核膜内折，染色质收缩、染色加深 5. 细胞膜通透性改变，物质运输功能降低 细胞的凋亡 概念：由基因决定的细胞自动结束生命的过程 意义：对于多细胞生物体完成正常发育，维持内部环境的稳定，以及抵御外界各 种因素的干扰都有非常关键的作用 细胞的癌变 概念：有的细胞受到致癌因子的作用，细胞中的遗传物质发生变化，就变成不受 机体控制的、联系分裂的恶性增值细胞。是细胞畸形分化的结果 主要特征 1. 适宜条件下，无限增殖 2. 细胞的形态发生显著变化 3. 癌细胞的表面发生了变化：糖蛋白减少 4. 酶的活性升高 致癌因子 1.致癌因子：紫外线、 X 射线等 2.致癌因子：亚硝胺、黄曲霉毒素 3.致癌因子：如Rous 内瘤病毒等 细胞癌变的原因：致癌因子使原癌基因和抑癌基因发生突变
第四章细胞的增殖和分化 第一节细胞的增殖 浙江省定海第一中学赵生、刘敏敏 一、教学目标 【知识目标】 1、说出什么是细胞周期。 2、描述分裂间期细胞的主要特点。 3、描述分裂期细胞不同阶段的主要特点，概述有丝分裂的主要特征。 4、制作植物细胞的有丝分裂装片，观察动植物细胞的有丝分裂过程。 【能力目标】 1、通过有丝分裂实验中熟练使用显微镜，装片的制作过程培养学生的动手能力及绘生物图的能力。 2、通过对动植物细胞有丝分裂过程比较，培养学生比较、类比推理等思维能力。 3、通过细胞周期内染色体变化图像的观察，培养学生视图、分析、判断能力。并使学生掌握从图像、文字、数字三方面三位一体地去理解有丝分裂的学习方法。 【情感态度与价值观】 1、通过细胞有丝分裂过程中染色体变化特点的学习，使学生客观地认识生命现象，建立科学的世界观。增强学生用辩证唯物主义观点去认识生命现象的意识。 2、通过实验、观察、讨论、绘图等一系列活动，使学生养成严谨求实的科学态度，培养勇于探索新知识的精神。 二、教材分析 【教材的地位作用】 本节教材的内容主要涉及有丝分裂。在介绍了细胞周期的概念和分裂间期后，教材安排了“观察细胞的有丝分裂”永久装片活动，使学生对细胞有丝分裂过程有一定的感性认识，并提出相应的问题。在此基础上，教材重点阐述了动、植物细胞有丝分裂的过程和意义。最后通过“观察植物细胞的有丝分裂”的活动，巩固所学的有丝分裂知识，体会人们研究细胞有丝分裂过程的方法和手段，培养熟练制作植物细胞有丝分裂临时装片的技能。 细胞增殖是细胞生命历程的重要阶段。作为生物体的重要生命特征，是生物体生长、发育、繁殖的基础。有丝分裂的内容是学习减数分裂、配子生成和融合、合子发育的重要基础，也是学习DNA复制及遗传信息传递的重要基础。同时对培养学生的动手能力，使学生树立宏观与微观相统一、结构与功能相适应的观念起重要作用。 【教学重点难点】 1、教学重点：有丝分裂的过程和意义、活动“观察植物细胞有丝分裂”。 通过教材的地位作用的分析可知有丝分裂知识的重要性。而细胞周期是学生正确理解和记忆有丝分裂过程的桥梁和保证，因此学生掌握细胞周期的概念是学好有丝分裂的关键之一。有丝分裂中染色体的行为变化是重中之重，因为有丝分裂过程中染色体的复制和平均分配的规律性变化是有丝分裂的本质性特征，体现了有丝分裂在生物遗传中的意义。 观察植物细胞有丝分裂的实验是学完有丝分裂过程后的验证性实验，通过该实验有利于
（1）直接方法：通过直接测定进行分裂的细胞来评价细胞的增殖能力 1、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法 胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。 2、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使CFSE成为一种良好的细胞标记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。 3、Brdu检测法 Brdu中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义 4、增殖标志检测 有些抗原只存在于增殖细胞中，而非增值细胞缺乏这些抗原，您也可以通过特异性的单抗来对细胞增殖进行检测。例如，在人体细胞中，Ki-67抗体识别同名蛋白，在细胞周期S期、G2期和M期表达，而在G0期和G1 期(非增殖期)不表达。用针对Ki-67蛋白的单抗就可以检测细胞的增值情况。由于需要组织切片，这种方法无法进行高通量分析。不过这一方法颇受癌症研究者们的青睐，因为它能够用来检测体内肿瘤细胞的增殖。其他普遍使用的细胞增殖或细胞周期调控标志还包括，增殖细胞核抗原PCNA、拓扑异构酶IIB和磷酸化组蛋白H3。 （2）间接方法：通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力 1、MTT检测法 MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比。 2、ATP检测 细胞内的ATP含量受到了严格调控，检测ATP也可以得到细胞增殖的信息。死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含ATP，在细胞溶解物或提取物中测得的ATP浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。利用荧光素酶luciferase及其底物荧光素luciferin的ATP检测以生物发光为基础，能够为您提供非常灵敏的结果。如果有ATP存在荧光素酶就会发光，而且其发光强度与ATP浓度成正比，用能读取发光信号的光度计和酶标仪都可以方便的进行检测。这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测和筛选。 二、检测细胞分化的方法 1、流式鉴定细胞表面标志，以判断细胞是否分化 2、观察细胞形态，与已分化的细胞进行对比 3、分化诱导评估其分化能力
细胞的增殖与分化 (201509) 7?下列关于细胞生命活动的叙述，正确的是 A. 癌细胞容易转移 B.植物细胞不具有全能性 C.衰老的动物细胞呼吸变快 D.蝌蚪尾的消失是通过细胞增殖实现的 (201509)21.下列关于高等植物细胞周期和有丝分裂的叙述,正确的是 A. S期进行DNA复制并有大量的核糖体增生 B. 中期可观察到核膜解体形成的小泡 C. 后期中心体发出的纺锤丝将染色体拉向两极 D. 末期赤道面向四周扩展形成新的细胞壁 201510 (201510)10.受精卵经多次分裂产生形态、结构和功能不同的后代细胞，发生这种差异的过程称 为 A. 细胞分化 B.细胞癌变 C.细胞衰老 D.细胞凋亡 (201510)16.下列关于高等动物细胞的细胞周期的叙述，错误的是 A. 分裂间期进行DNA复制 B.前期开始出现染色体和纺 锤体 C.中期是观察染色体形态的最佳时期 D.末期进行着丝粒的分裂 201604 (201604)12.蝌科在发育过程中，尾和鳃在一定时期消失。这属于 A .细胞调亡 B .组胞癌变 C .细胞衰老 D .组胞分裂(201604) 22.下列关于制作并观察植物细胞有丝分裂的临时装片”活动的叙述，正确的是 A ?用稀盐酸解离可使细胞间的果胶质层松散 B ?用水漂洗可洗去碱性染料以保持细胞活性 C. 常用苏丹川染液使染色体着色以利于观察 D. 可用高倍镜观察植物细胞连续的分裂过程 (201604) 26.【加试题】下列关于高等动物体细胞的细胞周期的叙述，错误的是 A .细胞处于S期时，显微镜下能观察到核仁 B ?蛙胚卵裂球细胞周期变短，子细胞体积变小 C. 蛙胚卵裂期细胞G2期显著缩短，细胞分化变快 D. 在缺乏营养物质的培养液中培 养细胞，可得到大量的G1期细胞 201610 (201610) 4.在实验条件下，矮牵牛叶片细胞能能发育成完整植株。这说明该细胞具有 A. 普遍性 B.统一性 C.全能性 D.特异性 (201610) 13.下列关于高等动物细胞有丝分裂的叙述，正确的是 A. 前期核膜解体成磷脂分子和蛋白质分子 B. 中期染色体的显微照片可制作染色体组型图 C. 后期着丝粒断裂导致染色单体数目加倍 D. 末期囊泡聚集成的细胞板形成新的膜