葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖
【原理】
葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】
1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定
3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。
5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。2h 以后方可使用。
7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】
1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2 ．手工操作法取试管
3 支，按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
【计算】
【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。
【临床意义】
1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。
2 ．病理性高血糖
(1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
(2) 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。
(3) 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
(4) 脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3 ．生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动。
4 ．病理性低血糖 ( 特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等 )
(1) 胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。
(2) 对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。
(3) 严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
【注意事项】
1 ．葡萄糖氧化酶对β- D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约 36% 为α型，64% 为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置 2h 以上 ( 最好过夜 ) ，待变旋平衡后方可应用。
2 ．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。
3 ．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾 6g ，氟化钠 4g 。加水溶解至 100ml 。吸取 0.1ml 到试管内，在 80 ℃以下烤干使用，可使 2 ～
3ml 血液在 3 ～ 4 天内不凝固并抑制糖分解。
4 ．本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠。
5 ．严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。【评价】线性范围至少可达 22.24mmol/L ，回收率 94% ～ 105% ，批内 CV 为0.7% ～ 2.0% 。批间 CV 为 2% 左右，日间 CV 为 2% ～ 3% 。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较， 73 份标本葡萄糖氧化酶法均值为 8.31mmol/L ，已糖激酶法均值 8.21mmol/L ，相关系数为 0.998
6 ，回归方程 y=1.0026x － 2.29 。本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达 10g/L ，黄疸标本胆红素浓度达 342 μ mol /L ，维生素 C 小于 30mg/L ，均不影响测定结果。氟化钠浓度达 2g/L 不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达 46.7mmol/L ，尿酸浓度达 2.95mmol/L ，肌酐浓度达 4.42mmol/L 。半胱氨酸浓度达 3.30mmol/L ，甘油三酯浓度达 5.6mmol/L ，胆固醇 4.40 mmol/L ，对测定结果均无显著影响。
左旋多巴 100mg/L ，维生素 C 5mg/L 以上，谷胱甘肽 100mg/L 时，可引起负误差；半胱氨酸达 10mmol/L 时，产生相当 0.72mmol/L 葡萄糖的正误差。
实验十三 葡萄糖含量的测定——碘量法 一、实验目的 1、 学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法原理，进一步掌握返滴定法技能。 2、 进一步熟悉酸滴定管的操作，掌握有色溶液滴定时体积的正确读法。 二、实验原理 I 2与NaOH 作用可生成次碘酸钠(NaIO)，次碘酸钠可将葡萄糖(C 6H 12O 6)分子中的醛基定量地氧化为羧基。未与葡萄糖作用的次碘酸钠在碱性溶液中歧化生成NaI 和NaIO 3，当酸化时NaIO 3又恢复成I 2析出，用Na 2S 2O 3标准溶液滴定析出的I 2，从而可计算出葡萄糖的含量。涉及到的反应如下： 1、I 2与NaOH 作用： I 2+2NaOH=NaIO+NaI+H 2O 2、C 6H 12O 6和NaIO 定量作用： C 6H 12O 6+ NaIO=C 6H 12O 7+NaI 3、总反应式： I 2+C 6H 12O 6+2NaOH=C 6H 12O 7+2NaI+H 2O 4、C 6H 12O 6作用完后，过量的NaIO 发生歧化反应： 3NaIO=NaIO 3+2NaI 5、在酸性条件下NaIO 3和NaI 作用： NaIO 3+5NaI+6HCl=3I 2+6NaCl+3H 2O 6、析出过量的碘用Na 2S 2O 3标准溶液滴定： I 2+2Na 2S 2O 3=Na 2S 4O 6+2NaI 实验还涉及到Na 2S 2O 3和 I 2溶液的标定 1、Na 2S 2O 3的标定 Cr 2O 72-+6I -+14H +=2Cr 3++3I 2+7H 2O I 2+2S 2O 32-=S 4O 62-+2I - Cr 2O 72-~3I 2~6S 2O 32- 32232272232200.256)(6O S Na O S Na O Cr K O S Na V c V cV c ??=?= 2、碘的标定 I 2+2S 2O 32-=S 4O 62-+2I - V V c 322322O S Na O S Na c 2/1= 3、葡萄糖注射液中葡萄糖的含量 计算式：%100506126?=L g O H C W 标示量葡萄糖含量 三、实验仪器及材料 1、 仪器 称量瓶、电子台秤、分析天平、容量瓶（250ml ）、移液管（25ml ）、量筒（10ml ）、锥形瓶（25ml ，3个）、酸式滴定管（50ml ）、烧杯（50ml ）、玻璃棒、碘量瓶 2、 药品 K 2Cr 2O 7（S ）、盐酸（6mol/L ）、KI 溶液（100g/L)、淀粉（5g/L)、Na 2S 2O 3溶液（0.1mol/L ）、I 2溶液（0.05mol/L ）、NaOH 溶液（1mol/L ）、葡萄糖注射液（5%） 四、 实验步骤 1、 0.1mol/L Na 2S 2O 3标准溶液的标定 ()()()()())(100000.25100021101612632232222-??????????-?L g O H C M O S Na v O S Na c I v I c 葡萄糖含量＝
葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶法) 适用范围：本试剂盒用于体外定量检测人血清中葡萄糖的含量。 1.1包装规格： 试剂1：10ml×10（干粉复溶后的体积）；试剂2：100ml×1。 1.2组成成份： 试剂1：4-AAP 0.77mmol/L，葡萄糖氧化酶≥13000U/L，过氧化物酶≥ 900U/L； 试剂2：磷酸盐缓冲液（Na2HPO4，NaH2PO4）pH7.0，苯酚0.5g/L。 2.1 外观：试剂1为干燥粉末，试剂2为澄清溶液，外包装完整。 2.2 净含量：不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度：A＜0.05（波长505nm，光径10mm）。 2.4 分析灵敏度：浓度为5.55mmol/L时,吸光度变化△A≥0.20。 2.5 线性区间 2.5.1线性相关系数：[2.2，27.75]mmol/L范围内，线性相关系数r≥ 0.9900。 2.5.2线性偏差：[2.2，5.55]mmol/L时，绝对偏差不超过±0.555mmol/L；（5.55,27.75]mmol/L时，相对偏差不超过±10%。 2.6 精密度 2.6.1重复性：重复测定高、低两个水平浓度的质控血清，变异系数（CV）≤5.0%。 2.6.2批内瓶间差：用高、低两个水平浓度的质控血清重复测试同一批号及同一瓶试剂，CV≤5.0%。 2.6.3批间差：用同一质控血清测试3个不同批号的试剂，相对极差≤10%。
2.7 准确度：测定国家标准物质，如所用标准物质浓度≤4.16mmol/L，绝对偏差应不超过±0.833mmol/L；如所用标准物质浓度＞4.16mmol/L，相对偏差应不超过±10%。 2.8 稳定性 2.8.1效期稳定性：试剂盒在2℃～8℃贮存，有效期为24个月。保存至有效期末进行测定，试验结果满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.6.2、2.7的要求。 2.8.2复溶稳定性：工作液18℃～25℃可稳定2天，2℃～8℃可稳定7天。试验结果满足2.5、2.7的要求。
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定 摘要 运用氧化还原滴定的原理设计葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定方案并具体实施。从而进一步掌握Na 2S 2O 3及I 2标准溶液的配制和标定方法，巩固氧化还原滴定的操作技能。学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法和原理，进一步掌握返滴定法技能。其中，葡萄糖分子中含有醛基，能被IO -定量地氧化为羧基。故可将一定量过量的I 2在碱性条件下加入葡萄糖溶液中，使醛基完全转化为羧基。再将其酸化，用Na 2S 2O 3标准溶液滴定析出的I 2。所用指示剂为淀粉。根据所加I 2标准溶液的量及滴定所耗Na 2S 2O 3标准溶液的量结合反应式中各物质之间的计量关系，便可计算葡萄糖的含量。该方法简便易行且准确度高，基本符合实验要求。 关键词 葡萄糖注射液 间接碘量法 返滴定法 1引言 葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定目前有以下几种方法 方案一：旋光测定法 根据葡萄糖分子结构中的五个碳都是手性碳原子，具有旋光性，可采用旋光法测定含量。取出旋光计的测定管，先用蒸馏水为空白对仪器进行校正。用供试液体（5％葡萄糖注射液）冲洗数次，缓缓注入供试液体适量（注意勿使发生气泡）。置于旋光计内，读取旋光度，连续测定3次，取平均值。 方案二：间接碘量法。 碘与NaOH 作用能生成NaIO ，而C 6H 12O 6能定量地被NaIO 氧化。在酸性条件下，未与C 6H 12O 6作用的NaIO 可转变为I 2析出，只要用标准Na 2S 2O 3溶液滴定析出的I 2，便可计算C 6H 12O 6的含量。 本实验采用第二种方案进行葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定。 2实验原理 在碱性溶液中，碘与氢氧化钠作用可生成次碘酸钠（NaIO),葡萄糖能定量的被次碘酸钠氧化成葡萄糖酸（C 6H 12O 7）。过量的NaIO 可以转化为NaIO 3和NaI 。在酸性条件下，NaIO 3和NaI 作用析出I 2，然后用Na 2S 2O 3标准溶液滴定析出的I 2，便可计算出葡萄糖的含量。其反应如下： 1、I 2与NaOH 作用： I 2+2NaOH=NaIO+NaI+H 2O 2、C 6H 12O 6和NaIO 定量作用： C 6H 12O 6+ NaIO=C 6H 12O 7+NaI 3、总反应式： I 2+C 6H 12O 6+2NaOH=C 6H 12O 7+2NaI+H 2O
DNS法测定发酵液中葡萄糖浓度 一、实验原理 在碱性条件下，葡萄糖与DNS（3，5-二硝基水杨酸）试剂反应，葡萄糖被氧化成糖酸及其他产物，DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，葡萄糖的量与棕红色物质颜色的深浅相关，利用分光光度计，在550nm波长下测定吸光度值，查标准曲线并计算便可求出样品中葡萄糖的含量。 二、材料与试剂 1．仪器：50ml容量瓶，1000ml容量瓶，500ml烧杯，小烧杯，试管（带刻度25ml更好）10根，棕色瓶 2.试剂： 1）葡萄糖 2）2mol/LNaOH溶液 3）酒石酸钾钠（C4H4O6KNa﹒4H2O，Mr=282.22） 4）结晶酚（C6H5OH,Mr=94.11） 5）无水亚硫酸钠（Na2SO4,Mr=126.04） 6）蒸馏水 7）DNS 8）DNS试剂配制：准确称取DNS 6.3g于500ml烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，加入2mol/LNaOH溶液262ml，再加到500ml含有酒石酸钾钠185g的热水溶液中，再加结晶酚5g和无水亚硫酸钠5g，搅拌溶解，冷却后移入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至，充分混匀。贮于棕色瓶中，室温放置一周后使用。 9）葡萄糖标准溶液配制：取适量葡萄糖装入称量瓶，再85°C烘箱烘至恒重，放入干燥器冷却。精确称取干燥后的葡萄糖0.5g加蒸馏水溶解，至50ml容量瓶定容，制成10g/L的葡萄糖溶液。分别取蒸馏水稀释成葡萄糖标准液，浓度为 0.2g/L,0.4g/L,0.6g/L,0.8g/L,1.0g/L,1.2g/L,1.4g/L,1.6g/L,1.8g/L,2.0g/L。 三、实验步骤 1.标准曲线制作 分别取标准液1.0ml于25ml刻度试管中，按下表加入试剂，沸水中显色5min。用 冷水冷却到室温后，加水至25ml，摇匀，再550nm处用分光光度计测定上述各溶 液的A550值。以葡萄糖浓度为纵坐标，A550值为横坐标，作出标准曲线并回归出标
标准准葡萄糖DNS比色法测定的方法 采用3，5-二硝基水杨酸比色法测定水解液中还原糖含量，用752型分光光度计进行比色测定。 1葡萄糖DNS比色法的测定原理 3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被的还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。 2测试药品 （1）1mg/mL葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 3测试方法 （1）葡萄糖标准曲线制作 ①按下表制备9个试管。 ②向9支试管中分别加入DNS试剂0.5ml，充分混合。 ③将9支试管放入沸水浴中加热煮沸5min。 ④将试管放入盛有冷水的烧杯中冷却。 ⑤向各管中分别加入4mL蒸馏水，充分混合。 ⑥以空白（1＃）管做对照，用分光光度计于540nm波长下分别测定各管溶液的OD值。 ⑦以每管在540nm下的吸光值为纵坐标，每管所含的葡萄糖浓度为横坐标作图，即可得到一条通过零点的直线。如果直线不通过零点则需重做。 标准葡萄糖曲线浓度的量取 Tab.2.2 Preparation on standard curve of glucose 试管编号标准葡萄糖溶液(mL) 蒸馏水(mL) 最终浓度(mg/mL) 1 0 0.5 0 2 0.05 0.45 0.1 3 0.1 0. 4 0.2 4 0.1 5 0.35 0.3 5 0.2 0.3 0.4 6 0.25 0.25 0.5 7 0.3 0.2 0.6
实验一、果蔬样品中葡萄糖含量的测定（碘量法） 一、目的要求 1、复习碘量法的原理及操作。 2、掌握还原糖的测定方法。 3、学习样品的前处理方法。 二、原理 果蔬中的葡萄糖可用水提取，除去干扰物质后，其中的葡萄糖可用碘量法测定。 碘与NaOH 作用能生成NaIO （次碘酸钠），而C 6H 12O 6（葡萄糖）能定量地被NaIO 氧化。在酸性条件下，未与C 6H 12O 6作用的NaIO 可转变成I 2析出，析出的I 2可用Na 2S 2O 3标准溶液滴定。反应示意如下： 46应用2: 碘量法测定葡萄糖含量 (返滴定法) 基本单元：1/2(葡萄糖） 三、试剂 I 2标准溶液（0.05 mol ·L -1） Na 2S 2O 3标准溶液(0.1 mol ·L -1) NaOH 溶液（2 mol ·L -1）； HCl 溶液（6 mol ·L -1）；淀粉指示剂(w 为0.01)。 四、实验步骤 1、样品准备 水果样品去皮、去核后搅碎、匀浆；称量适量的匀浆于250 mL 容量瓶中定容。于40~50 ℃ 的水浴中提取30 min 后用干滤纸抽滤，弃去前面的少量滤液，保留后面的滤液。 2、葡萄糖含量的测定 用移液管吸取25 mL 滤液置于碘量瓶中，准确加入25 mL I 2 标准溶液。一边摇动，一边慢慢滴加2 mol /L NaOH 溶液，直至溶液呈淡黄色（加碱速度不能过快，否则过量NaIO 来不及氧化C 6H 12O 6而歧化为不与葡萄糖反应的NaIO 3和NaI ，使测定结果偏低）。将碘量瓶加塞于暗处放置10~15 min 后，加2 mL 6 mol ·L -1 HCl 溶液酸化，立即用Na 2S 2O 3标准溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1 mL 淀粉指示剂，继续滴定到蓝色消失。记录读数。再重复测定二次。计算样品中葡萄糖的质量分数。
葡萄糖测定试剂盒-氧化酶法 Glucose使用说明书（液体双试剂） 【用途】： 用于自动生化分析仪体外测定血清葡萄糖含量。 血糖增高：糖尿病、垂体前叶功能亢进、肾上腺皮质功能亢进、脑膜炎、胰癌等。 血糖降低：饥饿、胰岛素分泌过多、甲减、急性肝损害、原发性肝癌等。 【方法学原理】： 葡萄糖＋O2＋H2O 葡萄糖氧化酶 ?→ ????葡萄糖酸＋H2O2 H2O2＋4-氨基安替比林＋苯酚 过氧化物酶 ?→ ????醌亚胺染料＋H2O 【使用方法】： [仪器要求]：适用于各类全自动生化分析仪或半自动生化分析仪。 [标本要求]：标本在30分钟内分离血清，否则由于糖酵解使结果降低；用草酸钾—氟化钠为抗凝剂可抑制糖分解，分离血清(浆)标本在2-8℃可稳定24小时，-20℃冷冻可稳定30天。 [稳定性与保存]：试剂2～8℃贮存可稳定一年；单试剂工作液在2～8℃贮存可稳定一个月。 【结果计算】： GLU含量(mmol/L)=标准 C A A S T? 【正常参考值】： 3.89-6.11mmol/L (70-110mg/dl) 低血糖症临界水平2.7-3.89mmol/L 高血糖症临界水平6.11-7.22mmol/L 建议各实验室建立自己的正常参考值范围 【注意事项】： 1、试剂与样品的用量可按其比例放大缩小，计算公式不变。 2、谷胱甘肽，10mg/dl左旋多巴可能引起负偏差。 3、双试剂法可有效消除维生素C、胆红素等的干扰。 【性能特征】： 1、试剂空白：<0.300 2、线性范围：0-23mmol/L 3、准确度：与质控血清靶值相对偏差应≤10％ 4、精密度：n=20 批内CV≤5% 批间极差≤6% 【医疗器械生产企业许可证】：沪药管械生产许2004 【产品注册号】：沪食药监械（准）字号 【执行标准】：YZB/沪0840-40-2005 上海容铸诊断产品有限公司 上海浦东电话：02190761
1DNS DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。 2试剂制备 将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。 3标准曲线 分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。 4样品测定 样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。
pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml 3.0 18.6 1.4 5.0 8.2 11.8 3.2 17.2 2.8 5.2 7.3 12.7 3.4 16.0 4.0 5.4 6.4 13.6 3.6 1 4.9 5.1 5.6 5.5 14.5 3.8 1 4.0 6.0 5.8 4.7 15.3 4.0 13.1 6.9 6.0 3.8 16.2 4.2 12.3 7.7 6.2 2.8 17.2 4.4 11.4 8.6 6.4 2.0 18.0 4.6 10.3 9.7 6.6 1.4 18.6 4.8 9.2 10.8 C6H8O7·H2O分子量＝210.14 0.1M溶液含21.01g/L Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 0.1M溶液含29.41g/L
葡萄检测方法汇总 与葡萄糖检测相关的国家地方标准汇总： GB/T 30390-2013 油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定高效液相色谱法 DB41/T 321-2003 食品添加剂.?葡萄糖含量测定方法 NY/T 2279-2012 食用菌中岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露醇、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、核糖的测定离子色谱法 GB/T 淀粉水解产品还原力和葡萄糖当量测定 GB/T 20379-2006 淀粉衍生物葡萄糖浆、果糖浆和氢化葡萄糖浆成分的测定 GB/T 16285-2008 食品中葡萄糖的测定酶-比色法和酶-电极法 CNS 2874-N5083 葡萄糖浆及干葡萄糖浆 GB/蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法液相色谱示差折光检测法 GB/T22221-2008食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定高效液相色谱法 YC/T252-2008烟用料液?葡萄糖、果糖、蔗糖的测定?离子色谱法 国家地方标准检测方法汇总表
葡萄糖的应用范围 葡萄糖作为人体的基本元素和最基本的医药原料，其作用和用途十分广泛。尤其是随着广大人民生活水平的提高，葡萄糖作为蔗糖的替代用糖应用于食品行业，为葡萄糖的应用开拓了更广阔的领域。 （一）发酵工业 微生物的生长需要合适的碳氮比，葡萄糖作为微生物的碳源，是发酵培养基的主料，如抗生素、味精、维生素、氨基酸、有机酸、酶制剂等都需大量使用葡萄糖，同时也可用作微生物发酵多聚糖和有机溶剂的原料。 1.抗生素发酵 葡萄糖是医药工业的重要原料，尤其是抗生素发酵必不可少的原料，抗生素中最主要的品种是青、链霉素，而这两种抗生素发酵都是以葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液)为碳底物。链霉素发酵以结晶葡萄糖为主，也可用高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液)；其他如利福平也以葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液)为主要碳源；沽霉素、红霉索、麦迪霉
葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法） 适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中葡萄糖的含量。 1.1 产品型号/规格 1.2. 产品组成 葡萄糖氧化酶15KU/L，过氧化物酶1.5KU/L，变旋酶2.0KU/L，苯酚0.75mmol/L，4-氨基安替比林0.25mmol/L。 2.1 外观 试剂为无色或略带红色透明溶液；试剂盒各组分齐全、完整，液体无渗漏，包装标签文字符号清晰牢固不易脱落，外包装完整无破损。 2.2 装量 液体试剂的净含量应不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在500nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.10。 2.4 分析灵敏度 测定10.2mmol/L葡萄糖时，吸光度的变化在0.408±0.1001范围内。 2.5准确度 测定标准品，当浓度≤4.16mmol/L，实测值与标示值偏差应不超过± 0.833mmol/L；当浓度＞4.16mmol/L时，实测值与标示值的偏差应在±10%范围内。 2.6 精密度
2.6.1 重复性 用血清样品或质控样品重复测试所得的变异系数（CV）应不大于2.0%。 2.6.2 批间差 试剂（盒）批间相对极差应不大于3.0%。 2.7 线性区间 测试血清样本，试剂线性在[0.1，27.8] mmol/L区间内： a) 线性相关系数|r|应不小于0.990； b) [0.1，3.0] mmol/L区间内，线性绝对偏差应不超过±0.3mmol/L；（3.0， 27.8] mmol/L区间内，线性相对偏差应不超过±10%。 2.8稳定性 原包装试剂2～8℃避光保存有效期18个月，到效期末的样品检测，检测结果应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法） 【目的】 体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。 【临床意义】 葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。 【原理】 样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。 【器材】 紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管 【药品】 葡萄糖测定试剂盒，试剂盒主要成分与浓度： 【样本】 新鲜无溶血血清。
【步骤】 将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液。 分别混合均匀，37℃水浴10～15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm、比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。 【计算】 【参考值】 血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L (70—110 mg/dl)。 此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。 【参考文献】 1．全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997，P616. 2．Trinder P. Ann Clin Biochem，1969，6: 24-27. 血糖测定实验所需器材： 1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm）， 2.恒温水浴箱（能调温度的，37℃）， 3.移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20μl 6个），枪头各100个 4.试管50支，6个试管架 5.烧杯100ml一个，50ml（或25ml）6个 6.记号笔6支 7.蒸馏水1瓶
葡萄糖注射液的含量测定 一、目的要求 ? 1.掌握旋光法测定葡萄糖注射液含量的原理、方法及计算。 ? 2.学会使用自动旋光仪。 二、仪器与试剂 ? 仪器 自动旋光仪，旋光管，移液管（50ml ），容量瓶(100ml)。 ? 试剂 葡萄糖注射液（含量在16%以上）， 氨试液（取浓氨溶液400ml ，加水使成1000ml ）。 三、方法原理 ? 葡萄糖分子结构中有多个不对称碳原子，具有旋光性，为右旋体。一定条件下的旋光度是旋光性物质的特性常数，测定葡萄糖的比旋度，可以鉴别药物，也可以反映药物的纯杂程度。 ? 旋光度（α）与溶液的浓度（c ）和偏振光透过溶液的厚度（L ）成正比。当偏振光通过厚1dm 且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，使用光线波长为钠光D 线（589.3nm ），测定温度为t ℃时，测得的旋光度称为该物质的比旋度，以[α]Dt=α/Lc 。 ? 2.0852的由来：+52.75为无水葡萄糖的比旋度，按下式计算无水葡萄糖的浓度： ? 无水葡萄糖浓度（c ）=100 α /[α]D20l ? 如果换算成一水葡萄糖浓度（c ˊ）时，则应为： ? c ˊ = c × = α× × =α×2.0852 ? 所以，测定葡萄糖溶液的旋光度可以求得其含量。 四、旋光仪的工作原理 1.光源 2.小孔光栏 3.物镜 4.滤光片 5.偏振镜 6.磁旋线圈 7.样品室8.偏振镜9.光电倍增管10.前置放大器 11.自动高压12.选频放大器13.功率放大器 14.伺服电机15.蜗轮蜗杆16.计数器 ? 使用方法 （1）将仪器电源插头插入220V 交流电源，并将接地脚可靠接地。 （2）打开电源开关，这时钠光灯应启亮，需经5min 钠光灯预热，使之发光稳定。 （3）打开电源开关（若光源开关打开后，钠光灯熄灭，则再将光源开关上下重复打开1到2次，使钠光灯在直流下点亮，为正常）。 （4）打开测量开关，这时数码管应有数字显示。 （5）将装有蒸馏水或其他空白溶剂的试管放入样品室，盖上箱盖，待示数稳定后，按清零按钮。试管中若有气泡，应先让气泡浮在凸颈处。通光面两端的雾状水滴，应用软布揩干。试管螺帽不宜旋得过紧，以免产生应为，影响读数。试管安放时应注意标记的位置和方向。 （6）取出试管，将待测样品注入试管，按相同的位置和方向放入样品室内，盖好箱盖。仪器数显窗将显示出该样品的旋光度。 （7）逐次按下复测按钮，重复读几次数，取平均值作为样品的测定结果。 （8）如样品超过测量范围，仪器在±45 处来回振荡。此时，取出试管，打开箱盖按箱内回零按钮，仪器即自动)(16.180)(17.198无水葡萄糖的分子量一水葡萄糖的分子量175.52100 16.18017.198
葡萄糖氧化酶活力测定（分光度法） 1.原理 （1）葡萄糖氧化酶的催化特性：葡萄糖氧化酶的每个酶分子中含有两单位FAD （黄素腺嘌呤二核苷酸），作为受氢体催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。 C6H12O6+O2=氧化酶C6H12O7+H2O2 在一定时间内葡萄糖经氧化酶催化发生反应后，测定其反应液的过氧化氢浓度即可算出葡萄糖氧化酶的活力。 （2）葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢在一定pH值的缓冲溶液中和加热条件下能使靛蓝胭脂红发生褪色反应，并且其反应速度在一定范围内和过氧化氢浓度成正比，据此测定出产生的过氧化氢的量，进而计算出葡萄糖氧化酶活力。 （3）首先利用一系列浓度的过氧化氢标准溶液与靛蓝胭脂红反应，在615nm波长处测定吸光度，建立标准曲线。然后，作葡萄糖氧化酶催化葡萄糖反应，再取其反应液与一定浓度的靛蓝胭脂红溶液反应随后测定其在615nm波长处测定吸光度，将吸光度值代入标准曲线方程后可推算出氧化酶活力。 2药品 （1）0.2mol/L葡萄糖溶液:称取3.96g一水葡萄糖定容于100.00mL冷藏3小时备用，2天内有效。 （2）1．0×10-3mol/L靛蓝胭脂红溶液：称取0.466g靛蓝胭脂红定容于1000mL。（2）0.2M醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH=5.2)：称取16.16g三水醋酸钠及2.48g冰醋酸定容至1000mL （4）12mg/L过氧化氢标准溶液：准确称取0.040g 30%的过氧化氢溶液（过氧化氢需事先标定取实际值）定容于1000mL。 3实验方法 （1）标准曲线的绘制 准确吸取0、1、2、3、4、5、6mL过氧化氢标准溶液(12mg/L)，分别置于
葡萄糖氧化酶法测量血糖浓度的详细介绍 ? 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L 盐酸)调pH至7.0，用蒸馏水定容至1L。 2．酶试剂称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/L NaOH调pH至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。 3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L。
6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2．手工操作法取试管3支，按下表操作。 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 加入物(ml)空白管标准管测定管 血清－－0.02 葡萄糖标准应用液－0.02－ 蒸馏水0.02－－ 酶酚混合试剂 3.03.03.0 混匀，置37℃水浴中，保温15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。 【临床意义】 1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。2．病理性高血糖 (1)糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
药物分析 方法名称：右旋糖酐40葡萄糖注射液—葡萄糖的测定—氧化还原滴定法。 应用范围：该方法采用滴定法测定右旋糖酐40葡萄糖注射液中葡萄糖的含量。 该方法适用于右旋糖酐40葡萄糖注射液。 方法原理：供试品精密加碘滴定液后，边振摇边滴加氢氧化钠滴定液，在暗处放置30分钟，加稀硫酸，用硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用右旋糖酐40作空白试验校正，根据滴定液使用量，计算葡萄糖的含量。 试剂： 1、碘化钾 2、碘滴定液（0.05mol/L） 3、盐酸 4、氢氧化钠滴定液（0.1mol/L） 5、甲基橙指示液 6、硫酸滴定液（0.5mol/L） 7、硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L） 8、稀硫酸 9、碳酸氢钠 10、淀粉指示液 11、酚酞指示液 12、甲基红-溴甲酚绿混合指示液 13、基准三氧化二砷 14、基准邻苯二甲酸氢钾 15、基准无水碳酸钠 16、基准重铬酸钾 试样制备：1.碘滴定液（0.05mol/L） 配制：取碘13.0g，加碘化钾36g与水50mL溶解后，加盐酸3滴与水适量使成1000mL，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。 标定：取在105℃干燥至恒重的基准三氧化二砷约0.15g，精密称定，加氢氧化钠滴定液（1mol/L）10mL，微热使溶解，加水20mL与甲基橙指示液1滴，加硫酸滴定液（0.5mol/L）适量使黄色转变为粉红色，再加碳酸氢钠2g、水50mL与淀粉指示液2mL，用本液滴定至溶液显浅蓝紫色。每1mL碘滴定液（0.05mol/L）相当于4.946mg的三氧化二砷。根据本液的消耗量与三氧化二砷的取用量，算出本液的浓度。 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L） 配制：取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6mL，加新沸过的冷水使成1000mL，摇匀。标定：精确称取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.6g，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解，加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg 的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。 贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。 甲基橙指示液 取甲基橙0.1g，加水100mL使溶解。 硫酸滴定液（0.5mol/L）
实训二：水果中葡萄糖含量测定 一、目的要求 1.学会剩余碘量法测定水果中葡萄糖含量的原理及方法 2.学会标准溶液的配制及标定方法 3.严格控制滴定条件 二、实验原理 三、实验步骤 1.Na2S2O3标准溶液的标定 （1）精密称取基准物K2Cr2O7约1.2g，搅拌使完全溶解，定量转移至250ml容量瓶中，稀释定容 （2）准确移取K2Cr2O7溶液20.00ml3份分别于锥形瓶中，各加蒸馏水25ml，4ml硫酸，碘化钾7.5ml，摇匀，密封，在暗处放置10min。 （3）各加蒸馏水50ml用Na2S2O3标准溶液滴定至近终点时（淡黄色），加淀粉指示剂2ml，继续滴定至蓝色消失，溶液呈亮绿色，即为终点。记录所消耗的Na2S2O3标准溶液的体积。 2.I2标准溶液的配制和标定 （1）准确移取20ml每份的I2溶液3份于锥形瓶中，加25ml蒸馏水稀释，加2ml淀粉溶液，用Na2S2O3标准溶液滴定至近终点（蓝色消失）。 3.葡萄糖含量测定
准确吸取已制备好的滤液20ml于锥形瓶中，加0.5mol/ml的NaOH溶液调至中性，加入I2标准溶液25.00ml，在不断振摇的情况下滴加0.5mol/ml的NaOH溶液5ml，密封，在暗处放置10分钟，然后加0.5mol/ml硫酸溶液6ml，摇匀，用标准溶液滴定至近终点时，加淀粉指示剂2ml，继续滴定至蓝色消失，即为终点。记录所消耗标准溶液的体积。平行三次。 四、计算公式 m K2Cr2O7×20.00/250.00 C Na2S2O3= _______________________________________________ V Na2S2O3×M K2Cr2O7/6000 1/2C Na2S2O3V Na2S2O3×10-3 C I2= _______________________________________________ 20.00×10-3 [C(I2)V(I2)－1/2C(Na2S2O3)V (Na2S2O3) ] M (C6H12O6)×10-3 ρ葡萄糖= ___________________________________________________________ 100.00×20.00/250.00 五、数据记录与处理
葡萄糖氧化酶法测空腹血糖（标准管法） 实验目的： 1.了解自动生化分析仪的工作原理 2.熟悉糖尿病相关生化的检测项目及检测方法 3.掌握糖尿病相关生化检测项目的临床意义。 实验原理： 葡萄糖氧化酶法测空腹血糖:葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者与苯酚及4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下产生红色化合物。在505nm波长测定该红色化合物的吸光度，能计算出葡萄糖含量。 实验操作： 1.将准备好的酶工作液（葡萄糖氧化酶和过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替 比林）加入空白管、浓度标准管、测定管各3ml，再向标准管加20μl 葡萄糖标准液（5.55mmol/L），再向测定管加入20μl血清。 2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟 3.调节分光光度计波长505nm,透光度T至100%，将空白管酶工作液对光的 吸收调节为0，再用空白管调“零”点测定其他各管的吸光度。 实验结果： 分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品血糖值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.55 分析讨论： 酶酚混合液变成了红色是否还可以继续使用？ 不可以。酶酚混合液应为无色，如酶酚混合液已经变为红色，说明试剂污染，不可使用。 思考题： 1.高血糖对机体的影响有哪些？ 1)引起血管、神经并发症。糖尿病患者长期高血糖会使血管、神 经并发症发生和发展使病 情加重。
2)β细胞功能衰竭。长期高血糖对胰岛β细胞不断刺激，使其功 能衰竭，胰岛素分泌更 少。 3)电解质紊乱。高血糖时大量排尿，从尿带走电解质，使电解质 紊乱。 4)严重失水。高血糖引起渗透性利尿，尿量增加，机体失水。 5)渗透压增高。高血糖时，细胞外液渗透压增高,细胞内液向细胞 外流动，导致细胞内失 水。当脑细胞失水时，可引起脑功能紊乱，临床上称高渗性昏迷。 6)全身乏力。血糖过高，葡萄糖不能很好地被机体吸收利用而从尿中排出。 7)视力减退。血糖升高时，眼睛视力往往减退。 2.糖尿病患者为何会出现尿糖阳性？ 糖尿病患者的血糖超过肾糖阈（8.96～10.08mmol/L）时，近端小管对葡萄糖的重吸收达到极限，尿中开始出现葡萄糖。 3.胰岛素对人体有哪些生理作用？ 1）对血糖代谢的调节：促进细胞摄取葡萄糖。血糖浓度升高时,迅速引起胰岛素的分泌,使全身各组织加速摄取和储存葡萄糖,尤 其能加速肝细胞和肌细胞摄取葡萄糖,并且促进它们对葡萄糖的 贮存和利用。肌肉组织在无胰岛素作用时，几乎不能摄取葡萄糖。 肝细胞和肌细胞大量吸收葡萄糖后, -方面将其转化为糖原贮存 起来，或在肝细胞内将葡萄糖转变成脂肪酸，转运到脂肪组织贮 存;在肝脏,胰岛素使进食后吸收的葡萄糖大量转化成糖原,并促 进葡萄糖转变成脂肪酸,转运到脂肪组织贮存.此外胰岛素还抑 制糖原异生。胰岛素不但可使葡萄糖迅速转运入肌细胞,而且可 加速葡萄糖的利用和肌糖原的合成,从而使血糖浓度降低。胰岛 素缺乏时糖不能被贮存利用。另一方面促进葡萄糖氧化生成高能 磷酸化合物作为能量来源,结果使血糖水平下降。 2）对脂肪代谢的调节：胰岛素对脂肪合成和贮存起着非常重要的作
设计性实验报告 题目：葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定课程名称： 姓名： 学号： 系别： 专业： 班级： 指导教师（职称）： 实验学期：至学年第学期
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定 （，，班，学号） 摘要 运用氧化还原滴定的原理设计葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定方案并具体实施。从而进一步掌握 223Na S O 及2 I 标准溶液的配制和标定方法，巩固氧化还原滴定的操作技能。学会间接碘量法测定葡萄糖含量 的方法和原理，进一步掌握返滴定法技能。其中，葡萄糖分子中含有醛基，能被IO-定量地氧化为羧基。故可将一定量过量的2I 在碱性条件下加入葡萄糖溶液中，使醛基完全转化为羧基。再将其酸化，用223Na S O 标准溶液滴定析出的2I 。所用指示剂为淀粉。根据所加2I 标准溶液的量及滴定所耗223Na S O 标准溶液的量结合反应式中各物质之间的计量关系，便可计算葡萄糖的含量。该方法简便易行且准确度高，基本符合实验要求。 关键词 葡萄糖注射液样品（5%）2I (0.05mol/L)标液 223Na S O (0.1mol/L) 标液 间接碘量法 返滴定法 1 引言 目前已知测定葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法有两种： 第一种方案：间接碘量法：移取一份稀释10倍后的葡萄糖溶液25.00mL ，再加入25.00mL 2I 标准溶液。一边摇动，一边缓慢加入1mol/LNaOH 溶液，直至溶液呈浅黄色。将碘量瓶加塞 放置10～15min 后，用少量水冲洗瓶盖及碘量瓶内壁，然后加入2mL 、6mol/LHCl 使溶液成酸性，立即用223Na S O 标准溶液滴定至溶液呈淡黄色时，加入3mL 、5g/L 淀粉指示剂，继续滴定蓝色恰好消失且半分钟内不褪色即为终点[1] 。根据滴定消耗223Na S O 溶液的体积计算试样中葡萄糖的含量。这种方法简便易行，且准确度较高。 第二种方案:旋光法：由于葡萄糖分子结构中的五个碳都是手性碳原子，具有旋光性，可采用旋光法测定含量。操作方法：取出旋光计的测定管，先用蒸馏水为空白对仪器进行校正。用供试液（5％葡萄糖注射液）冲洗数次，缓缓注入供试液适量（注意勿使发生气泡）。置于旋光计内，读取旋光度，连续测定3次，取平均值。在一定温度下，根据[2]计算试样中葡萄
如何测血糖-葡萄糖氧化酶法 如何测血糖？测血糖的方法。葡萄糖氧化酶法，本文由广西吴唐糖尿病研究院提供。 原理 葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢： 在色原性氧受体(如联大茴香胺，4—氨基安替比林偶联酚)的存在下，过氧化物酶催化过氧化氢，氧化色素原，生成有色化合物。 试剂 推荐应用有批准文号的优质市售试剂盒。以下试剂配制仅供参考。 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7．0)：溶解无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5．3g 于800ml蒸馏水中，用lmol/L氢氧化钠或盐酸调节pH值至7．o，然后用蒸馏水稀释至1L； 2．酶试剂：取葡萄糖氧化酶1200U，过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林l0mg，叠氟钠100mg，加上述磷酸盐缓冲液至80ml左右，调节pH值至7．0，加磷酸盐缓冲液至100ml，置冰箱保存，至少可稳定3个月； 3．酚溶液；重蒸馏酚100mg溶于l00ml蒸馏水中，贮存于棕色瓶中； 4．酶酚混合试剂：酶试剂及酚溶液等量混合，在冰箱内可以存放1个月； 5．葡萄糖标准贮存液(100mmol／L)：称取无水葡萄糖(预先置80'C烤箱内于燥恒重，移置于干燥器内保存)1．802g，以12mmol儿苯甲酸溶液溶解并移入100ml容量瓶内，再以12 mmol ／L苯甲酸溶液稀释至l00ml刻度处，放置至少2h后方可应用； 6．葡萄糖标准应用液(5mmol/L)：吸取葡萄糖标准贮存液5ml，于l00ml容量瓶中，用l2 mmol 儿苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 手工操作 取数支16mmXl00mm试管，按下表进行操作。
混匀，置37'C水浴中，保温15min，用分光光度计，波长505nm，比色杯光径1.0cm，以空白管调零，分别读取标准管及测定管吸光度。 计算 参考值 空腹血清葡萄糖为3.89-6.11mmo/L（70一110mg／dl）。 附注 1．葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64％为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应．国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用。 2．过氧比物酶的特异性要比葡萄糖氧化酶的特异性低得多，一些还原性物质如尿酸、抗坏血酸、胆红质和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白浓度达l0g／L，黄疽标本胆红质浓度达342μmol／L，均不影响测定结果．氟化钠浓度达3g／L不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达46.7mmol／L(280mg／dl)，尿酸浓度达2.95mmol／L(50mg／dl)，肌酐浓度达4.42mmol／L(50mg／dl)，半胱氨酸浓度达50mg／dl，甘油三酯浓度达500mg ／dl，对测定结果均无显著影响。 3．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。