浅谈免疫佐剂的研究进展
自1798 年英国医生琴纳(Jenner)创立应用牛痘脓疱制成疫苗预防天花以来, 疫苗的研究和应用已经有了200 多年的历史, 其间经历了经典减毒疫苗、细胞疫苗、分子水平疫苗的发展历程。无论是以感染组织或鸡胚的胚液制备的疫苗还是以人工感染的细胞培养物制成的疫苗, 都曾经也正在对预防人类和动物传染病发挥重要作用。1926 年, Glenny等注意到明矾沉淀白喉毒素, 产生一种微粒能相当大地增强机体对抗原的特异性免疫应答, 从而拉开了使用佐剂的序幕。如今合成肽疫苗、基因工程亚单位疫苗、抗独特型抗体疫苗以及核酸疫苗等新型疫苗虽具有良好的抗原性和低毒等优点, 但其免疫原性较弱, 有必要配合高效的佐剂使用, 进一步推动了免疫佐剂的研究。
“Adjuvant”, 即佐剂, 最早来源于希腊语”adjuvare”, 也就是帮助的
意思. 免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用, 能增强机体针对抗原的免疫应答
能力, 或改变免疫反应类型的物质.早在1920 年，佐剂就用于提高疫苗的功效。其功能主要有：增强抗体应答；增强疫苗的黏膜传递；增进免疫接触；增强弱免疫原的免疫原性，减少抗原接种剂量和接种次数；促进疫苗在免疫应答能力弱的群体中的免疫效果；加快免疫应答的速度和延长持续时间等。
近年来，新型免疫佐剂近年来日益受到人们的重视。随着抗原提纯技术和基因工程技术的迅速发展，出现了多种DNA 重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗。这些新型疫苗的抗原具有纯度高、分子量小、特异性强、安全性好等优点，但存在免疫原性弱的缺点，只有与免疫佐剂合用才可引起有效的细胞和体液免疫应答。而目前唯一通过FDA 批准的能用于人的佐剂———铝胶佐剂只能激发体液免疫, 不能诱导细胞介导的免疫反应而后者对于机体对细胞内寄生病原体(病毒、原虫等)以及肿瘤产生免疫力尤为必要。由于铝胶佐剂对人免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、单纯疱疹病毒(HSV)、流感病毒以及血吸虫病、百日咳和伤寒等。常用的佐剂主要有不溶性铝盐类胶体、油水乳剂、微生物及其代谢产物、核酸及其类似物、细胞因子、免疫刺激复合物、蜂胶、脂质体等。这些佐剂主要通过免疫系统受到抗原物质刺激后, 抗原可被抗原提呈细胞( APC)如巨噬细胞、树突状细胞摄取, 加工处理, 降解为多肽片断, 通过MHC或MHC 类分子途径提呈给T 淋巴细胞. T淋巴细胞被激活、复制、增殖、分化, 成为效应T淋巴细胞, 主要包括CTL和CD4+ Th细胞. 前者分泌细胞毒素及诱导细胞凋亡以杀死带抗原的靶细胞. 后者受细胞因子、抗原特性等因素的影响, 向Th1细胞或Th2细胞分化.Th1细胞偏向分泌白介素- 2( IL - 2)、干扰素- γ( IFN-γ), 与介导迟发型超敏反应的TDTH 细胞和CTL细胞的增殖、分化、成熟有关, 可促进细胞介导的免疫应答, 也可辅助特异性IgG2a亚类抗体的产生, 即Th1应答. Th2细胞偏向分泌IL- 4、IL- 5、IL- 6、IL- 10与B细胞增殖、成熟和促进IgG1亚类和IgE 抗体生成有关, 可增强抗体介导的免疫应答, 即Th2应答发挥作用。
几种常用的佐剂
一弗氏佐剂
弗氏佐剂(Freund' s Adjuvant ,FA)分为弗氏完全佐剂(FCA)和弗氏不完全佐剂(FIA)两种。FCA 是标准的诱生体液免疫和细胞免疫的佐剂, 它诱导Th1 型细胞因子, 而FIA 则是典型的只诱导Th2 型细胞因子, 诱生抗体的佐剂。FA 的高度佐剂活性是其它佐剂难以相比的, 因而广泛应用于科学研究工作中, 但其剧烈
的副作用限制了它们在临床上的应用, 除少数兽用疫苗如口蹄疫疫苗使用FIA
外, 很少用于动物免疫,更不能用于临床。
二脂质体
脂质体是人工制备的类脂质小球体，由1 个或多个酷似细胞单位膜的类脂双分子层包裹水相介质组成。这种结构使其能够携带各种亲水的、疏水的和两性的物质，它们被包入脂质体内部，或插入类脂质体双分子层，或吸附、联接在脂质体的表面作为模拟细胞膜和药物载体。MPL 是一种毒性较低的具有佐剂活性的脂多糖衍生物。可促进T 细胞产生IFN-γ，间接辅助抗体生成。MPL 刺激巨噬细胞产生TNF 并与产生的TNF 共同促使NK 细胞产生IFN-γ。IFN-γ能抑制Th2 细胞增殖，并与巨噬细胞联合诱导Th1 细胞分化，表明MPL 能够选择性激活Th1 细胞。Childers 等[5] 将MPL 的液相佐剂型(MPL-AF) 加到脂质链球菌突变体的粗制
葡萄糖转移酶(C-GTF) 或脂质膜结合后通过口或是鼻内免疫小鼠，发现小鼠鼻内IgA 和IgG 抗体水平明显升高，有效地刺激黏膜和系统免疫应答。
三铝盐佐剂
铝盐佐剂是一类含Al3+的无机盐, 主要有Al(OH)3 、AlPO5 ,目前已用于兽用疫苗、重组乙肝疫苗以及疟疾疫苗。氢氧化铝胶, 简称铝胶, 成本低廉, 使用方便, 基本无毒, 因而成为兽医生物制品生产中应用最广的一种佐剂, 而且也是至今唯
一被FDA 批准可用于人类疫苗的佐剂。
四细胞因子佐剂
细胞因子是具有重要生物学活性的细胞调节蛋白, 它包括淋巴因子和单核因子。细胞因子在许多动物模型系统中都是有效的免疫佐剂, 能增强和保护机体免受
病毒、细菌和寄生虫的侵袭, 对肿瘤免疫和临床应用也有增效作用。虽然大多数情况下细胞因子没有FCA 和皂苷有效, 但它可用于人体, 佐剂效率也有望得到
改进。细胞因子作为免疫佐剂的研究主要集中在白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(INF)、集落刺激因子(CSF)及转移生长因子(TCF)。IL 2 是细胞免疫应答过程中的一个初始因子, 对NK 或LAK 细胞具有多种促进作用, 能抑制
Th2 型细胞发育, 选择性增强Th1 型细胞分化、增殖, 诱导IFN 分泌, 产生特异性免疫应答, 并可诱导Th2 向Th1 型细胞应答的转变。IFN 能激活Th细胞, 增强IL 2 的释放和MHC 亚类抗原在APC上的表达, 从而增强抗原递呈作用。用IFN γ
作为疟疾疫苗佐剂和水泡性口炎病毒亚单位疫苗佐剂, 均取得很好的效果。免疫缺陷是由于某些细胞因子减少引起的, 因此, 细胞因子用于增强免疫缺陷者的
免疫能力有特别重要的意义。
五 CpG序列
CpG 寡核苷酸(CpG OligoDeoxyNucleoties，CpG ODN) 是人工合成以未甲基化的CpG 二核苷酸为核心的寡核苷酸以未甲基化的CpG 二核苷酸为核心的寡核苷酸
序列。CpG ODN 模拟了细菌DN 的结构，具有与天然CpG 模式识别受体相似的免疫反应，有很强的黏膜佐剂活性。Moldoveanu 等[10] 在1998 年最早报道CpG ODN 联合灭活流感病毒经鼻内免疫小鼠所诱导产生的血清特异性抗体是不加CpG ODN 组的7 倍。近年来，针对病毒和细菌抗原，对CpG ODN 的黏膜佐剂效应进行了大量的研究，所涉及的病毒有乙肝病毒、生殖道疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)、呼吸道合胞病毒等，细菌有链球菌、嗜血流感杆菌等。结果表明，CpG ODN 是一种高效新型的黏膜佐剂，可诱导产生Th1 型免疫应答。
六Quil A
Quil A 系从南美皂树(Quil laja saponaria Mol ina)树皮中筛选到具有佐剂活性的成分Qui A 。大量研究表明:Quil A 为目前唯一能使外源性抗原既能刺激机
体Th1免疫应答,又能诱导CTL 应答的佐剂。这一独特的性质使其成为亚单位疫苗、细胞内病原体疫苗及癌症疫苗的理想佐剂。然而,Quil A 存在严重的毒副作用, 可引起溶血、局部组织坏死, 甚至全身不良反应或中毒。其对小鼠致死量为
100 ～ 125 μg ,引起50 %溶血浓度为10 μg/ml。Quil A 用在人用药物制剂中是不安全的, 目前除了用于为某些绝症设计的疫苗如癌症疫苗和人免疫缺陷病
重组疫苗等人用疫苗外, 仍主要限用于口蹄疫疫苗、狂犬疫苗等兽用疫苗。
七纳米粒子佐剂
纳米是一种度量单位，1 nm 为10-9 m，相当于10 个氢原子并排起来的长度。纳米佐剂是将抗原物质或能编码免疫原多肽的DNA 或RNA 包裹于纳米粒子内部或
是吸附在纳米粒子表面，也可通过化学连接作用与纳米粒子结合，从而持久地释放被包裹的抗原。纳米粒子佐剂可有效提高细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫[15]。美国密歇根州大学生物纳米科技中心，对小鼠的鼻黏膜免疫5×105 pfu 流感病毒A 和纳米乳剂的混合物，免疫20 d 后，用致死剂量的流感病毒2×105 pfu 经鼻感染小鼠。结果免疫动物受到了完全的保护，而接种了甲醛灭活病毒或纳米乳剂的小鼠，用致死剂量的流感病毒2×105 pfu 经鼻感染小鼠后，发展为病毒性肺炎，6 d 后死亡。小鼠接种了流感病毒A和纳米乳剂的混合物，迅速发生细胞因子反应，产生高水平的特异性流感IgG 和IgA 抗体。通过评价脾细胞的增殖，检测脾细胞内细胞因子的产生，证明有特异的免疫反应发生。研究表明，纳米乳剂是一种对黏膜无毒性的佐剂，可应用于流感病毒疫苗。
预防接种是保护机体免受病原微生物侵袭，避免其导致的经济损失和死亡的有效途径之一。在公共医疗卫生不断发展的今天，接种疫苗被认为是药物进入体内控制和根除感染性疾病最为有效的方式之一。疫苗研究在过去几十年发展十分迅速，产生了一大批疾病特异性疫苗，且在提高疫苗免疫效力、合理优化免疫程序方面取得了重大进展。随着免疫学的发展，它还将扩展到更广泛的领域。增强疫苗的免疫原性和提高机体的免疫应答水平以及引导淋巴细胞向更合理的方向
发展，是摆在研究者面前的重要课题。而研究佐剂的作用机理有助于人们应用佐剂增强免疫应答，诱导机体选择性地产生特异性免疫应答和减少副反应。随着研究的深入, 今后免疫佐剂研究的主要发展趋势: 进一步开展对化学结构明确、低分子量、低毒、高效的新型免疫佐剂的研究; 在体液免疫水平、细胞免疫水平及分子免疫水平上, 探讨了新型免疫佐剂的作用机制,为进一步开发研究及安全、有效、合理地使用免疫佐剂提供理论依据的研究;开展诱导黏膜免疫应答的相关佐剂的研究;天然药物免疫佐剂开发研究;免疫佐剂新用途研究. 免疫佐剂的应
用范围不断扩大, 包括了免疫治疗药物、肿瘤疫苗, 增强机体对细菌、病毒、真菌、寄生虫及一些转移瘤的抵抗力和免疫应答.
姓名：唐小慧
班级：药物12-1班
学号：20120232
佐剂的研究现状 【摘要】随着免疫学研究的不断深入和基因工程技术的迅速发展,对佐剂的研究显得越来越重要，本文通过查阅近几年相关文献，综合免疫佐剂研究多方面资料和最新观点，就免疫佐剂研究概况作一综述，着重介绍几种新型的佐剂的特点，并就其发展趋势提出自己的见解，为开发研制高效、低毒、结构新颖的免疫佐剂提供参考。 【关键字】免疫佐剂研究 佐剂是先于抗原或同时注射于动物体内，能非特异性地改变机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质，又称免疫佐剂。从巴斯德至今近百年来已开发了许多菌苗和疫苗，但传统的菌疫苗一般多为全菌或全病毒制成，其中含有大量非免疫原性物质，这些物质除具有毒副作用外也有佐剂作用，所以一般不需要外加佐剂。因此,在这段时间里免疫佐剂并未引起人们广泛的注意，直到1925年，法国免疫学家兼兽医Gaston Ramon发现在疫苗中加入某些与之无关的物质可以特异地增强机体对白喉和破伤风毒素的抵抗反应[1]，从此许多国家都不同程度的开展了这方面的研究。现在,由于高度纯化的新型疫苗的生产技术不断取得突破，而常规的佐剂由于其自身的缺陷使之很难适应新型疫苗的发展，因此新的研究工作已经逐渐引起科研工作者的注意。 20世纪60年代，原苏联喀山医学院就对蜂胶影响动物机体免疫活性方面进行了观察，通过对小鼠、豚鼠、家兔等实验证明应用蜂胶或配合抗原进入机体，能促进机体免疫过程。1981年Kreuter首次将纳米材料应用于疫苗佐剂，证明纳米粒子佐剂既能提高细胞免疫，又能提高体液免疫。1998年Moldoveanu 等最早报道CpG ODN 联合灭活流感病毒免疫小鼠能诱导产生比常规佐剂更高的血清特异性抗体。这些新型佐剂能克服常规佐剂的一些缺陷，因而受到国内外学者越来越多的关注。目前我国常用的佐剂有铝盐、油乳、蜂胶、多糖、微生物、氟氏（FA）佐剂、γ- 干扰素（IFN-γ）、白细胞介素(Interleuki-ns，ILs)、免疫刺激复合物（ISCOMs）、糖苷及复方中药佐剂等，新型免疫佐剂有核酸、CpG、补体、纳米、脂质体（LIP）等。下面就几种免疫佐剂的研究现状和应用前景进行简要的综述。 1 佐剂作用机理 Cox[2]等提出了佐剂增强免疫应答5种可能的机制: 1.1 免疫调节作用 众多佐剂具有调节细胞因子网络的能力。不同的佐剂诱导抗原提呈细胞分泌不同的细胞因子，促使Th前体细胞向Th1或Th2不同的亚型分化。 1.2 抗原提呈作用 某些佐剂能保持抗原构象的完整性，并将其呈递给合适的免疫效应因子。当佐剂与抗原以更有效的维护构象表位的方式结合时，可提高抗原的体内作用,延长抗原屏蔽时间. 1.3 诱导CD8+细胞毒性T细胞(CTL) 应答通过与细胞膜融合或保护抗原肽，佐剂可促进相应肽掺入MHC类分子并维持二者结合，同时期望通过诱导IFN-γ和TNF-α来提高肽MHC类分子的表达。
免疫佐剂：疫苗研究中的首要问题 摘要：2009年7月欧洲委员会在布鲁塞尔召开了免疫佐剂研讨会，这次研讨会的主要目的是确定科学研究中需要优先考虑的问题。他们属于研发有效疫苗中的一部分，这些疫苗主要用于预防那些威胁生命的疾病，特别是与贫困有关的疾病，诸如：艾滋病病毒∕艾滋病、疟疾、肺结核以及被忽视的传染病。免疫佐剂和相关技术的新进展以及潜在挑战、障碍的排除，认为六个问题是加快人用新型免疫佐剂发展需要优先考虑的问题。 1.对新型免疫佐剂的迫切需求 当前迫切需要预防那些威胁生命的疾病特别是与贫困有关疾病的疫苗。 当前调查研究中的大部分疫苗抗原是有高纯度的重组分子和病原体亚单位组成，所以通常缺少病原体的一些特征，包括刺激固有免疫反应的特性。因此这些疫苗通常不能诱导强烈的免疫反应，尽管对大量的佐剂都有评价，但是以铝为基础的矿物盐（明矾）佐剂依旧是当前世界范围内人类广泛使用的佐剂。通过过去的记录可知明矾的安全性很好，在预防传染病所用的疫苗中，通常用明矾作为佐剂。通过抗体反应可以阻止传染病的发生，因此在许多已经批准的疫苗中明矾佐剂效果很好。然而，明矾也存在着一些局限性，对于小分子肽以及某些疫苗（如伤寒疫苗、流感疫苗）不能增强抗体应答反应。 尤其是明矾在诱导细胞毒性T细胞和辅助性T细胞反应时作用甚微，而细胞毒性T细胞和辅助性T细胞是预防阻止对生命造成威胁的感染所必须的。因此当前的迫切任务是开发新型佐剂辅助疫苗解决那些至今不能用传统方法解决的病原体，以及克服已批准可应用佐剂的局限性。 2. 粘膜佐剂：最需优先考虑的问题 大部分病原体，包括艾滋病病毒和分枝结核杆菌侵入人类宿主，在粘膜表面建立感染。然而，现存的大多数疫苗都是注射途径来进行免疫的。通过诱导局部特定病原体免疫反应，粘膜免疫接种具有在入口处阻止粘膜转移病原体侵入的潜力，因此可以增强疫苗的免疫功效。把粘膜诱导点作为目标在其他距离远的粘膜表面也能诱导免疫反应。粘膜免疫与通过注射接种的疫苗相比有潜在的优势，如
疫苗佐剂的研究进展 一、佐剂的定义 佐剂（Adjuvant）又称免疫调节剂（Immunomodulator）或免疫增强剂（Immunomodulator），是指先于抗原或与抗原混合或同时注入动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥辅助作用的一类物质。佐剂的英文名adjuvant来源于拉丁文“adjuvare”,意思为“帮助”。药物佐剂，即某种可以加强药物疗效的物质。 二、佐剂的作用 佐剂可增强抗原的免疫原性、免疫应答速度及耐受性，可调节抗体对抗原的亲和性与专一性，可刺激细胞介导的免疫，可促进肠胃粘膜对疫苗的吸收。佐剂的作用机制当前了解的很少，阻碍了设计新的佐剂化合物，佐剂常激活多个免疫链，其中只有少数与抗原特异应答相关，要想确切地知道佐剂的作用很困难。 佐剂能增加对细胞的渗入性，防止抗原降解，能将抗原运输到特异的抗原呈递细(APC5)，增强抗原的呈递或诱导细胞因子的释放。在注射抗原后，抗原可直接被APC5吸收，与B细胞表面抗体结合或发生降解，抗原的吸收途径主要取决于抗原的特征，但也受佐剂影响。被APC5吸收的抗原通过两种途径MHCI或MHCII而呈递于CD8+或CD4+T细胞上。根据注射疫苗后分泌细胞因子方式的不同，可分为Th1应答与Th2应答。Th1应答主要通过诱导分泌IFN-γ, IL-2和IL-12，而Th2应答是通过诱导分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-12，不同的细胞因子分泌模式是相互拈抗的，促进一种
应答形式常会抑制另一种应答形式，产生I g G2a抗体被认为是Th1应答，然而诱导产生I g G1常与Th2应答有关。不同的佐剂虽然可诱导相似的抗体水平，但是细胞因子应答的方式可能不同，Th1或Th2应答方式对于疫苗的功效有显著的影响。 评价佐剂质量的优劣或能否适用于人用疫苗疫苗的主要因素为： ①能使弱抗原产生满意的免疫效果； ②不得引起中等强度以上的全身反应和严重的局部反应，在局部贮留的硬结必须逐渐被吸收； ③不得因其对佐剂本身的超敏反应，不应与自然发生的血清抗体结合而形成有害的免疫复合物； ④不得引起自身免疫性疾病； ⑤既不能有致癌性，也不得有致畸型性； ⑥佐剂的化学组成应明确，物理和化学性质稳定； ⑦在一定的保存期内的疫苗佐剂,应该稳定有效。 这些因素必须权衡考虑，但是副作用是其中最重要的一个因素，应考虑是局部反应还是全身反应，以及副反应的程度是否能被使用者接受；免疫促进作用可能刺激体液免疫和细胞免疫，或者两者均有，并且与不同疫苗的抗原成分和免疫途径有关；经济方面应考虑佐剂的来源，材料及制造工艺的价格。还应考虑到使用佐剂后是否能减少疫苗的免疫剂量及次数，以及免疫力持续的时间长短等。 在疫苗中应用免疫佐剂的潜在优点包括： 1.能优化免疫应答；
不完全福氏佐剂是指羊毛脂和石蜡油的混合物，一般常规使用的比例是：2.5份羊毛脂：7.5份石蜡油，加热混合均匀即可。 完全福氏佐剂在不完全福氏佐剂中加入终浓度为6mg/ml的灭活卡介苗。 免疫佐剂（immunoadjuvant）又称非特异性免疫增生剂。本身不具抗原性，但同抗原一起或预先注射到机体内能增强免疫原性（见抗原）或改变免疫反应类型。种类很多，目前尚无统一的分类方法，常用的佐剂可分为4类：无机佐剂，如氢氧化铝，明矾等；有机佐剂，微生物及其产物如分枝杆菌（结核杆菌、卡介苗）、短小杆菌、百日咳杆菌、内毒素、细菌提取物（胞壁酰二肽）等；合成佐剂，如人工合成的双链多聚核苷酸（双链多聚腺苷酸、尿苷酸）、左旋咪唑、异丙肌苷等；油剂，如费氏佐剂、花生油乳化佐剂、矿物油、植物油等。费氏佐剂目前在实验动物中最常用，又可分为费氏不完全佐剂和完全佐剂两种。不完全佐剂是油剂（石蜡油或植物油）与乳化剂（羊毛脂或吐温（Tween）80）相混合而成，当其再与抗原混合，即成油包水乳剂，可用于免疫注射。在不完全佐剂中加入死的分枝杆菌，即成为费氏完全佐剂。完全佐剂的免疫强度大于不完全佐剂。该佐剂主要用于动物实验，不适宜于人类使用。而且动物多次注射后也常会发生佐剂病。免疫佐剂的生物作用包括：（1）抗原物质混合佐剂注入机体后，改变了抗原的物理性状，可使抗原物质缓慢地释放，延长了抗原的作用时间；（2）佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；（3）佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；（4）佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作用；（5）可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。故免疫佐剂的作用可使无免疫原性物质变成有效的免疫原；（6）可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴变；（7）改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。
疫苗佐剂综述 近三十年来，人用疫苗佐剂发展迅速，已经研发出了能诱发更强，更持久的人用疫苗佐剂。但是还存在一些不足之处，理想的疫苗佐剂应该更适于临床应用，毒副作用更小。本文总结了当前疫苗佐剂的发展状况，其中包括疫苗佐剂的监管建议，理想佐剂的标准，以及详细介绍了诸如矿物盐类佐剂，毒素类佐剂，微生物衍生物类佐剂，油乳剂，细胞因子佐剂，多糖类佐剂，以及核酸佐剂。同时本文还讨论了最近新发现的Toll样受体的生物学作用以及在免疫激活中发挥的作用。 关键词：疫苗；佐剂；Toll样受体； 1 引言 免疫接种的目的就是要获得对疾病持久的免疫保护反应。与弱毒疫苗不同，灭活疫苗或亚单位疫苗通需要疫苗佐剂的参与才能更好的发挥作用【1】。“佐剂”一次来自于拉丁语“Adjuvare”一词，为“帮助”或“辅助”之意【2】。免疫佐剂的生物作用包括：（1）抗原物质混合佐剂注入机体后，改变了抗原的物理性状，可使抗原物质缓慢地释放，延长了抗原的作用时间；（2）佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；（3）佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；（4）佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作用；（5）可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。故免疫佐剂的作用可使无免疫原性物质变成有效的免疫原；（6）可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴变；（7）改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。人们正是因为观察到疫苗接种位点处形成的脓肿协助机体产生了针对特异性抗原更强的免疫反应，从而形成了疫苗佐剂的理念。更有甚，与接种抗原不相关的物质形成的脓肿坏死也能增强疫苗的特异性免疫反应【3,4】。 1926年，通过吸附于铝盐类化合物的白喉类毒素首次证明了铝盐类佐剂的免疫增强作用。至今，铝盐类佐剂（主要指氢氧化铝和磷酸铝）依然是唯一人用疫苗佐剂。其原因是什么呢？尽管大量事实证明，弗氏完全佐剂和脂多糖类佐剂具有更强的佐剂活性，但由于其能引发局部和全身性的毒副作用而不适于人用。这也正是铝盐类佐剂作为人用疫苗佐剂80余年的原因所在。在今后的80年中，铝盐是否依然是人用的唯一疫苗佐剂？答案是肯定的。自批准铝盐作为人用疫苗佐剂以后，管理部门对人用疫苗佐剂的要求提高了很多。而且，用于评价疫苗佐剂安全性的后期临床试验花费日益昂贵。一旦通过200至500人安全性和效用性实验后，在疫苗佐剂审批注册之前还需要进行5000至25000人数的临床试验。正因为如此，在接下来的10至20年之间，几乎没有哪种佐剂能通过疫苗佐剂审批。 2 理想的疫苗佐剂 免疫接种时需要考虑以下几点：抗原种类，接种动物种类，免疫途径，以及可能产生的免疫副作用【10,11】。理想的佐剂半衰期长，生物体内可以降解，生产成本低，能诱导产生合适的免疫反应（也就是根据感染病原的不
免疫佐剂研究进展 字号: 小中大| 打印发布: 2007-11-05 00:00 作者: 沈克飞，曹兰来源: 《动物医学进展》 |吉林大学人兽共患病研究所 （1.，人兽共患病教育部重点实验室，吉林长春130062；2.重庆市畜牧研究 院检测中心，重庆402460） 摘要：佐剂的主要作用是提高抗原(免疫原)的免疫原性和免疫反应的可持续性，它能引导机体的免疫系统对抗原产生体液免疫或细胞免疫反应。对佐剂的选择取决于免疫的目的，从用途上分，佐剂可分为试验用佐剂和疫苗用佐剂。前者主要用于特异性抗体的制备，而后者则作为疫苗的必要成分。文章主要介绍目前常用的几种佐剂包括铝盐佐剂、弗氏佐剂、免疫刺激复合物(ISCOM)、脂质体和CpG及其在科研和疫苗中的应用。 关键词：佐剂；免疫应答反应；疫苗 佐剂(免疫佐剂或免疫调节剂)在免疫中的作用主要是提升机体免疫系统(体液或细胞免疫系统)对抗原或免疫原的免疫应答反应，包括增强免疫反应强度和反应的持久性。随着人们对各种病原的抗原成分及免疫机理的深入了解和越来越多的亚单位疫苗成分被纳入免疫学研究过程，对佐剂的研究和应用将会越来越深入和广泛。佐剂的作用原理主要包括3个方面：①激活先天性免疫应答反应，如弗氏佐剂、免疫刺激复合物和CpG佐剂等；②提高抗原对免疫系统的递呈和刺激作用，如脂质体类佐剂和免疫刺激复合物(ISCOM)；③延长抗原(免疫原)在机体内的存在时间和保持对免疫系统的持续激活作用。很多佐剂中的矿物油成分主要是起到缓释作用。除了弗氏佐剂兼具这3种特性以外，大多数佐剂在功能上都存在一定的缺陷。根据来源不同，佐剂分为化学合成类佐剂和生物成分类佐剂。很多病原生物的组成成分本身就是天然的佐剂，如弗氏完全佐剂中的结核分支杆菌，乙型肝炎病毒表面膜蛋白及细菌的LPS和CpG序列等。传统的佐剂多与抗原混合成乳胶(emulsion)的形式注射使用。乳胶有“油包水”和“水包油”两种形式。前者有利于延长抗原在体内的存在时间和提高抗原的免疫原性，但对局部组织具有很强的刺激反应。后者有利于抗原的快速吸收，副作用小，但免疫反应可能弱且持续的时间短。
粘膜免疫佐剂的研究进展 摘要：黏膜免疫在机体抵抗病原入侵时发挥着重要的作用，疫苗通过黏膜免疫可以引起局部和全身的免疫应答。但是疫苗经过消化道黏膜时常受到消化液的降解，而且常常会引起免疫耐受，为了克服这些困难，人们设计了大量的黏膜免疫佐剂以增强机体对抗原的黏膜免疫力和全身的免疫应答水平。这里将近年来粘膜免疫佐剂的研究进展做一下叙述。 关键词：粘膜免疫；佐剂；类型；研究进展 机体约有80％以上的细菌、病毒和寄生虫的感染都起始于粘膜表面。粘膜免疫可以诱导局部粘膜产生分泌性IgA(sIgA)、IgM和IgG等保护性抗体，并可诱导其它部位的粘膜也产生sIgA，这是粘膜免疫保护作用的主要机制。此外，粘膜免疫还诱导粘膜CTL反应，并且产生分泌IFN-γ的CD4+T细胞，这对于病原体侵入的预防和清除是非常重要的[1]。因此粘膜免疫是保护机体免于病原体侵犯的重要屏障，在疫苗的设计中具有重要意义。 目前机体粘膜免疫的机制还不完全清楚。现有研究表明，基于粘膜免疫的疫苗由于诱导的免疫往往反应较弱，持续时间短，难以取得理想的免疫保护效果。目前认为，如重组蛋白、合成多肽和DNA等抗原的免疫原性较弱是重要原因之一，因此需要设法提高免疫反应的强度，并且还有一些疫苗需要转变免疫反应类型，以突出粘膜免疫等。这些方面的问题使佐剂的使用显得尤为迫切和重要，因此对于粘膜免疫佐剂的研究已经成为感染免疫和疫苗领域的一个研究热点[2]。目前，已报道的粘膜免疫佐剂主要分为四类：第一类是细菌性物质；第二类是各种细胞因子；第三类是某些无机成分；第四类是可增强抗原递呈的相关载体[3]。 1 细菌性物质 大多数细菌来源的蛋白、核酸或者其它成分均能增强免疫，其原因大多是它们的保守成分可与模式识别受体(Pattern-recognition receptor，PRR)结合。PRR主要分为两种：Toll样受体(Toll-1ike receper，TLR)和核苷酸结合的寡聚化结构域(Nucleotide-binding oligomerization domain，NOD)。其中TLR识别胞外配体，NOD针对胞内病原体及其产物引发级联信号转导。 1.1 细菌毒素和其衍生物 1.1.1 霍乱毒素(CT)和大肠杆菌不耐热肠毒素(LT) CT和LT都属于A-B型细菌蛋白毒素家族，而且两者的氨基酸序列有80％的相同。晶体结构分析显示两者有很相近的结构特征，也很好地说明两者具有同源性。 CT是由A、B两种亚单位组成的AB5型结构的六聚体蛋白，A亚单位(CTA)有240个氨基酸，在第192位氨基酸附近被蛋白酶裂解后可以生成CTA1和CTA2两个多肽，二者以二硫键相连。CTAl具有ADP-核糖基转移酶的作用；CTA2的主要功能是连接CTAl和B亚单位(CTB)。 与CT相同，LT的A亚单位(LTA)是酶活性单位，B亚单位(LTB)具有与靶细胞结合的功能，LTB除可与神经节苷脂l(GMl)结合，还可与GM2、非GM糖脂类受体等结合。与CT引起的致死性腹泻相比，LT引起的腹泻要温和的多，而且与CT相比，LT同样具有很好的粘膜佐剂作用，基本上不诱生IgE，却能有效地启动机体局部和全身的体液和细胞免疫。因此，LT 作为佐剂可能比CT更胜一筹。 CT(LT)发挥毒素的大致作用过程为CTB通过GMl的结合位点与细胞表面的GMl受体结合，经过吞噬作用CT分子进入细胞，主动转运至内质网，CTA与CTB分离，进入细胞质。CTAl通过结合NAD，ADP-核糖转移酶作用于GTP结合蛋白，引起腺苷酸环化酶长久活化，
免疫佐剂： 基本描述：--见到客户时可以背诵下来从而吸引感兴趣的客户 与常规使用的弗氏佐剂相比，QuickAntibody免疫佐剂具有极大的优势：（1）无需乳化；（2）免疫周期短，与常规免疫相比可以节省3-5周免疫时间；（3）抗原用量少，仅为弗式佐剂的1/10；（4）不破坏抗原天然构象，易获得针对天然构象的抗体；（5）不含任何蛋白成分，佐剂本身不刺激机体产生抗体；（6）肌肉免疫；（6）无毒。 展开描述--针对客户就上述几个问题的提问，基本可以从以下几方面回答 为什么无需乳化？QuickAntibody系列佐剂为水溶性佐剂，抗原与佐剂仅需用移液器吹打几下，即可混匀；弗式佐剂为油性佐剂，需要繁琐的乳化，形成油包水的稳定结构。因此与弗式佐剂繁琐的乳化相比，QuickAntibody佐剂可节省大量时间与精力。现在的学生事情比较多，不喜欢乳化，因此这条可以吸引他们的注意，工业客户因为免疫动物多，乳化（即使使用乳化仪）需要大量的时间，因此对这点也会有极大的兴趣。 免疫周期短？QuickAntibody佐剂有二周快速小鼠多抗制备佐剂、三周快速小鼠单多抗制备佐剂以及五周标准小鼠单多抗制备佐剂三种。若多抗即可满足客户需求，可以建议客户制备小鼠多抗，使用我们的佐剂最快仅需2周即可制备高滴度的小鼠多抗，最慢也只需5周即可制备成功，比常规弗式佐剂8周的制备时间相比，可节省3-6周的时间，从而大大提升了客户实验效率；若客户制备单抗，可以使用我们三周佐剂或五周佐剂，与常规使用弗式佐剂免疫时间8周相比，可以节省3-5周时间，也大大提升了客户实验效率。尤其对于实验进度要求比较着急的客户，在这一点上会产生浓烈的兴趣！另外，很多客户的动物为外包饲养，饲养成本较高，也会感兴趣！ 抗原用量少？QuickAntibody免疫佐剂通过减少免疫针次（常规弗式佐剂免疫需要至少4针，QuickAntibody佐剂仅需免疫2针）以及每针次抗原用量，降低抗原使用量。每针次抗原用量真核细胞表达仅需1-10ug每针，原核细胞表达仅需10-20ug，病毒源颗粒仅需1-5ug每针。若客户抗原为直接购买抗原、真核表达抗原（真核表达量低）、抗原表达量极低、或抗原为天然组织纯化（如从植物组织或动物组织中纯化的天然抗原），因抗原贵重或产量较低，此处会极大吸引客户。 不破坏抗原天然构象？弗式佐剂为油性佐剂，在与抗原乳化时，需要形成油包水的稳定结构，而蛋白一般亲水基团暴露在外侧，疏水基团在内侧未暴漏，形成油包水的稳定结构，必然伴随着疏水基团的外翻，从而导致抗原天然构象的改变。QuickAntibody佐剂为水溶性佐剂，不会导致疏水基团外翻，保留抗原的天然构象，因此可以获得针对构象性表位的抗体。若客户需要针对构象性表位的抗体，此优点会很感兴趣！对于诊断试剂公司，因为检测的蛋白基本为天然抗原，需要针对构象性表位的抗体，具有极大的吸引力。
疫苗佐剂的现状和未来发展趋势 当今使用的单纯重组和人工合成抗原制成的疫苗存在一些不足，这些抗原的免疫原性远不及传统活疫苗或灭活疫苗。因此，这类疫苗的使用就需要功能强大的疫苗佐剂的辅助。毫无疑问，目前在世界范围内大部分国家铝佐剂依然是唯一可用于人的疫苗佐剂。虽然铝佐剂能诱导产生体液免疫反应，但是对细胞免疫的刺激几乎不起任何作用，而细胞免疫对许多病原体的免疫保护至关重要。另外，铝佐剂引起剧烈的局部和全身性副作用，能引起肉芽肿、嗜伊红血球过多和肌筋膜炎，但是这些剧烈副作用很少发生。也有人担心铝佐剂能引起诸如老年痴呆症之类的神经退化性疾病。因此，当前急需安全、高效，适合人类使用的疫苗佐剂，特别是能激发细胞免疫的安全无毒佐剂。鉴于当前的新型疫苗技术，需要适合黏膜递呈类疫苗、DNA疫苗、癌症和自身免疫类疫苗的佐剂。这些领域中，每一种疫苗的发展都与之相应的佐剂技术密切相关。本文回顾了疫苗佐剂的当前现状，探求未来的发展方向，最后提出人类疫苗佐剂发展和审批的障碍和阻力。 关键词：佐剂，免疫反应，黏膜免疫，疫苗 佐剂起源 免疫接种的目的是诱发机体产生对接种抗原强大的免疫反应，以保护机体免受相应病原体的侵袭。为了达到此目的，和减毒疫苗相比，灭活疫苗需要佐剂的协助。佐剂是一类能增强针对一同接种的抗原特异性免疫反应的物质。“佐剂”一词来源于拉丁语“adjuvare”，是协助和增强之意。佐剂概念最早起源于二十世纪二十年代，Ramon等人发现接种白喉类毒素疫苗部位形成脓肿的马产生更高的特异性抗体。随后他们发现，脓肿的形成能增强机体对类毒素的免疫反应，脓肿则是接种时引入与白喉类毒素不相关的物质引起。1926年Glenny等人通过吸附于铝佐剂的白喉类毒素证明了铝佐剂的佐剂活性。至今，铝盐类复合物（主要是磷酸铝和氢氧化铝胶）依然是人用疫苗的只主要佐剂。1936年，Freund开发出含有分枝杆菌的水和矿物油乳剂，从而研制出目前所知佐剂中效力最最强的佐剂——弗氏完全佐剂。尽管复试弗氏完全佐剂作为佐剂的黄金标准，但是此种佐剂能引起剧烈的局部反应，不能作为人用疫苗佐剂。不含分分枝杆菌的水包油乳
佐剂的研究进展 “Adjuvant”,即佐剂,最早来源于希腊语“adjuvare”,也就是帮助的意思[1]。随着DNA重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗不断涌现,免疫佐剂研究越来越受到人们的关注.近年来佐剂的发展迅猛,多种新型佐剂层出不穷,人们对佐剂的作用机理亦有更深入的认识. 佐剂的概念及发展简史 佐剂（Adjuvants）是先于抗原或与抗原同时应用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质，又称免疫佐剂或抗原佐剂。佐剂被用来增强疫苗的免疫反应已有近80年的历史，1925年，法国兽医免疫学家Ranmon发现疫苗中某些物质的佐剂作用，1926年Glenny证明明矾具有佐剂作用，1951年Freund研制成弗氏佐剂。目前我国对蜂胶佐剂、油乳佐剂、核酸佐剂、细胞因子佐剂等新型佐剂的研究也有迅速发展。 1免疫佐剂的功能 佐剂可选择性地改变免疫应答的类型，产生体液和\或细胞免疫。如：弗氏完全佐剂（FCA）是细胞免疫的强刺激剂，也能刺激体液免疫；弗氏不完全佐剂（FIA）仅能刺激体液免疫。改变体液抗体的种类IgG 亚类和抗体的亲和性，如壳聚糖、氧化甘露聚糖。佐剂还可改变抗原的构型，使疫苗诱导T辅助细胞和细胞毒T淋巴细胞(CHL)反应。如免疫刺激复合物。佐剂可改变免疫反应为MHCⅠ型或MHCⅡ型。如：白细胞介素4（IL-4）能上调MHCⅠ类抗原,IL-1可诱导MHCⅡ类反
应。佐剂还能改变T辅助细胞(Th1和Th2)的免疫反应。FCA可诱导Th1型细胞因子，IL-18、IL-12也可强烈诱导Th1型细胞因子产生;FIA则是典型的只诱导Th2型细胞因子。 2免疫佐剂的分类 目前,经动物实验证实有佐剂作用的物质多达百种以上,按佐剂作用可将其分为2类:①贮存型佐剂,即能以吸附成其他方式粘着抗原物质,注入机体后,可使抗原存留在一定的接种部位,并逐渐往周围释放,以延长抗原的作用时间,如铝佐剂。②中枢作用型佐剂,即能与抗原一起直接对免疫细胞呈现刺激或激活作用,如细菌内毒素、卡介苗等。按佐剂性质也可将其分为2类:(1)微生物及其亚细胞成分。(2)非微生物类成分:①不溶性铝盐胶体;②油脂类包括福氏完全佐剂(CFA)和不完全佐剂(IFA);③植物提取物;④生化佐剂和细胞因子。 3免疫佐剂作用机理 佐剂增强免疫应答的机制尚未完全阐明，其作用机制包括：①在接种部位形成抗原贮存库，使抗原缓慢释放，延长抗原在局部组织内的滞留时间，较长时间使抗原与免疫细胞接触并激发对抗原的应答。 ②增加抗原表面积，提高抗原的免疫原性，辅助抗原暴露并将能刺激特异性免疫应答的抗原表位递呈给免疫细胞。③促进局部的炎症反应，增强吞噬细胞的活性，促进免疫细胞的增殖与分化，诱导细胞因子的分泌。 4几种常用的佐剂 4. 1铝佐剂铝佐剂[2]（aluminum-containing adjuvants）包括：氢
核酸疫苗的免疫学原理及 植物多糖作为核酸疫苗佐剂的可行性分析 核酸疫苗不仅引起体液免疫反应,而且诱导高水平的细胞免疫应答, 尤其是细胞免疫T淋巴细胞反应,被认为在病毒、胞内菌、寄生虫等病原体感染的防治中具有更大的优势。核酸疫苗作为近年来发展起来的一项新的生物技术, 已经成为疫苗研究领域的热点之一, 并获得了迅速的发展。实验结果表明,核酸疫苗既可作为病毒、细菌或寄生虫的预防疫苗, 也可作为非感染性疾病如肿瘤病的治疗用疫苗。通过介绍近年来核酸疫苗在病毒、细菌、寄生虫等感染性疾病的预防和治疗等领域的研究进展情况, 表明随着分子生物技术的不断发展, 核酸疫苗的进一步研究和实践为改善人类和动物健康显示出新的希望。 而本文将从核酸疫苗的免疫学原理以及植物多糖作为核酸疫苗佐剂的可行性分析两个方面对核酸疫苗的简单情况及应用进行介绍。 一、核酸疫苗的免疫学原理 核酸疫苗又称基因疫苗或 DNA 疫苗,包括DNA 疫苗和 RNA 疫苗, 是指把外源基因克隆到真核质粒表达载体上, 然后将重组的质粒 DNA 直接注射到动物体内, 使外源基因通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白, 激活机体的免疫系统, 引发免疫反应。 核酸疫苗由外源抗原编码基因和作为真核表达载体的质粒构成。表达载体依靠特有的病毒启动子外源基因在动物细胞内高水平表达。通常认为,DNA 疫苗进入真核细胞, 仅有少量被细胞所摄取,其中少量进入细胞核后, 在载体上的启动子调控下, 转录出抗原基因 mRNA。后者进入胞浆而转译出相应的抗原蛋白[9]。抗原呈几种方式呈递到免疫系统: (1)细胞内经加工后与 MHCI 分子结合呈递到细胞表面, 刺激细胞毒性 T 淋巴细胞;(2)细胞中释放出来与 B 细胞受体结合, 刺激 B 细胞;(3)放出的蛋白质被抗原呈递细胞所吸收、降解, 然后与 MHCII 分子结合后刺激辅助性 T 细胞。最终引发了免疫系统的响应。免疫系统的响应程度与不同的免疫部位、细胞的表达程度和是否增加免疫调节基因有关。
免疫佐剂的生物作用： (1)抗原物质混合佐剂注入机体后，改变了抗原的物理性状，可使抗原物质缓慢地释放，延长了抗原的作用时间； (2)佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬； (3)佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理； (4)佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作用； (5)可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体，故免疫佐剂的作用可使无免疫原性物质变成有效的免疫原； (6)可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度； (7)改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。 免疫佐剂广义上是指免疫系统的调节剂，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，增强该抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质。 随着研究的不断深入，越来越多的物质被发现有佐剂功能，大致可以分为以下几类。 1.矿物质类佐剂 矿物质佐剂是传统佐剂中的一类，包括氢氧化铝胶和磷酸铝等，一直广泛用于人用和兽用疫苗的制备。主要诱导体液免疫应答，抗体以IgG1类为主，刺激产生Th2型反应。铝佐剂可刺激机体迅速产生
持久的高抗体水平，也比较安全，对于胞外繁殖的细菌及寄生虫抗原是良好的疫苗佐剂。但仍存在缺点，皮下注射时常有肿胀或结块，抗原免疫原性弱时，不足以提高其免疫原性，特别是保护性免疫机制要求T细胞活性介导的免疫参加时，应使用其他佐剂。 2.油类佐剂 主要有佛氏佐剂和可降解的油类佐剂。佛氏佐剂(freund,s adjuvant，FA)是免疫学上广泛应用的油类佐剂，并应用于很多兽医疫苗中，分为佛氏完全佐剂(FCA)和佛氏不完全佐剂(FIA)两种，佛氏不完全佐剂是由低引力和低粘度的矿物油及乳化剂组成的一种贮藏性佐剂。佛氏完全佐剂是在不完全佐剂的基础上加一定量的分枝杆菌而成。虽然FCA尚有一定的副作用，但其高度佐剂活性是其它物质难于相比的。进一步的研究是用分枝杆菌片段，如胞壁酰二肽(MDP)、胞壁酰三肽(MTP)、蜡质D等代替分枝杆菌，以减少副作用，更有效地应用于兽医临床。FA可使在正常状态下没有免疫原性的物质成为免疫原。先作用于Th1细胞，后是Th2细胞，并能启动细胞免疫而发挥作用。 佐剂MF59由可降解的鲨烯油和两种表面活性剂及山梨聚糖酐单油酸酯、山梨聚糖酐二油酸酯构成水包油型佐剂，它可以刺激动物及人产生对亚单位抗原的体液和细胞免疫应答。乳化复合油佐剂的效力高于FA，而且出现抗体与弱毒苗一样早。 3.微生物佐剂
免疫佐剂研究进展 摘要：随着疫苗研究的飞速发展，如重组DNA疫苗、合成肽段疫苗等，免疫佐剂的研究越来越受到人们的关注。佐剂可以导致快速而强烈的免疫反应。分析了常用佐剂的应用及其各自的优缺点，并综述了两种新型的免疫佐剂的研究进展。 关键词：免疫；佐剂；疫苗 早在70年前，免疫佐剂就被广泛地应用于生产和研究。佐剂与特异性免疫原本无关，但可非特异性地通过物理的或化学的方式与特异性免疫反应物质结合，从而诱发机体产生长期、高效的特异性免疫反应，提高机体保护能力，同时能减少抗原的用量，节约成本。随着疫苗研究的不断深入，特别是分子生物学技术的迅速发展，研制出的新型基因工程疫苗纯度高、特异性强，但分子小，免疫原性相对较差，难以产生有效的免疫应答，需要佐剂来增强其免疫原性或宿主对抗原的保护性应答。本文就常用佐剂以及最近深入研究、比较的两种免疫佐剂的研究进展进行了综述。 1 常用免疫佐剂 1.1 铝盐佐剂 铝盐是一种含有Al3+的无机盐，主要有Al(OH)3、AlPO4等。铝盐佐剂的应用非常广泛，是现在唯一被FDA批准的人、兽均可应用的佐剂。铝盐与抗原结合形成抗原贮存库，使抗原得以缓慢稳定地释放。铝盐的应用已有八十年的历史，实践证明是一种有效的诱导免疫反应的佐剂，而且氢氧化铝成本低廉，使用方便、无毒，是胞外繁殖的细菌及寄生虫抗原的良好免疫佐剂。但它也存在明显的缺陷，主要的不足之处是铝盐佐剂仅能诱导、激发体液免疫，对由胞内病毒如人免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、单纯疱疹病毒(HSV)等引起的病毒性疾病无法产生有效的细胞免疫[1]。 1.2 氟氏佐剂 氟氏佐剂分为氟氏完全佐剂(FCA)和氟氏不完全佐剂(FIA)两种。FCA是在FIA的基础上加一定量灭活的分枝杆菌而成的，是Th1亚型细胞强有力的激活剂。FCA既能刺激体液免疫，还是细胞免疫的强刺激剂。FIA则仅刺激体液免疫。但弗氏佐剂在使用中可引起慢性肉芽肿和经久不愈的溃疡，造成严重的组织损伤。Wagland等[2]实验证明：在用FCA作为佐剂为猪做免疫时，尽管产生了较高的抗体滴度，却降低了免疫效果。弗氏佐剂的代表性替代品有乳胶类佐剂Ribi和Titer Max，采用了可代谢和无毒的鲨烯作为油剂，以减轻炎症反应。但其实验效果并不稳定[3]。除少数兽用疫苗如口蹄疫疫苗使用FIA外，很少用于动物免疫，更不能用于临床医学。
100 Chinese Veterinary Public Health Association，CAA V 兽用疫苗常用免疫佐剂的概况和发展趋势 李茂1，刘天强1，肖丹1，史子学2 （1.通威股份有限公司动物保健研究所，成都 610041；2.中国农科院上海兽医研究所，上海 200241) 摘要：免疫佐剂也称佐剂或抗原佐剂，是一类单独使用时一般无免疫原性，但与抗原物质合并使用时能增强抗原物质免疫原性，增强机体免疫应答，或改变机体免疫应答类型的物质。佐剂种类很多，如铝盐佐剂、油乳佐剂、微生物佐剂、中草药类佐剂、细胞因子、化学合成类和其他佐剂等。本文介绍了各种佐剂的研究应用概况，以期为开发研制高效、低毒和结构新颖的免疫佐剂提供参考。 关键词：免疫佐剂；免疫应答 THE PROGRESS AND DEVELOPMENT TREND OF THE COMMONLY USED IMMUNE ADJUVANT IN VETERINARY VACCINES LI Mao1，LIU Tian-qiang1，XIAO Dan1，SHI Zi-xue2 （1.Animal Health Research Institute of Tongwei Co.,LTD,Chengdu 610041，China；2.Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China） Abstract: Immune adjuvant，also known as adjuvant or antigen adjuvant, immunogenicity generally alone,but when combine with antigenic material can enhance the antigen substance immunogenicity ,enhance immune response, or alter the immune response type substances. Many different types of adjuvant, such as aluminum adjuvant, oil emulsion adjuvant, Chinese herbal medicine,cytokines,chemical synthesis and other adjuvants. This article describes the research and application of a variety of adjuvants,in order to provide a reference for the development of efficient, low toxicity and structure of the novel adjuvants. Key words: Immune adjuvant; Immune response 1 非油乳佐剂 1.1 铝盐佐剂铝盐佐剂是传统佐剂中的一类，包括氢氧化铝胶和磷酸铝等，一直广泛用于人用和兽用疫苗的制备。主要诱导体液免疫应答，抗体以IgG1类为主，刺激产生Th2型反应[1]。铝佐剂可刺激机体迅速产生持久的高抗体水平，也比较安全，对于胞外繁殖的细菌及寄生虫抗原是良好的疫苗佐剂。但仍存在缺点，皮下注射时常有肿胀或结块，抗原免疫原性弱时，不足以提高其免疫原性，特别是保护性免疫机制要求T细胞活性介导的免疫参加时,应使用其他佐剂。 1.2 微生物佐剂微生物佐剂主要有脂多糖、分枝杆菌等。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂蛋白，由多糖和脂质A组成，脂质A是LPS的活性分子，可引起动物特异性应答。大量的试验结果证明LPS具有增强对细菌、病毒、真菌、寄生虫等感染的抵抗力，延长体液免疫的作用，可提高人和动物抗疟原虫感染的能力。LPS可以单独使用，也可结合脂质体使用。脂质A经去掉一个磷酸基，则产生单磷酸酰脂质A(MPL)，MPL 受体介导的活性抗原呈递细胞可促进单核因子的分泌，抑制Th2细胞，选择性地诱导Th1的增殖，分泌产生IL-2和INF-γ，并选择性产生IgG2抗体亚型，降低LPS的毒性[2]。分枝杆菌在兽医中广泛地应用于疫苗, 如牛分枝杆菌卡介苗是早期应用成功的一种。分枝杆菌经化学和物理方法处理，可获得具有佐剂活性的片段，包括MDP、MTP、蜡质D等，其中对MDP、MTP研究的较多。MDP是从分枝杆菌细胞壁上提取的一种免疫活性成分，可刺激免疫细胞如T细胞的增殖，调节及活化单核巨噬细胞，吸引吞噬细胞，进一步增强吞噬细胞和淋巴细胞活性，使其易捕获抗原,MDP单独使用也可激活机体的非特异防御机制。MTP已用在疟疾疫苗中并取得了良好效果[3]。 1.3 中药草类佐剂 1.3.1 蜂胶蜂胶是一种天然的免疫增强剂和刺激剂，具有增进机体免疫功能和促进组织再生的作用。据报道，应用蜂胶或配合抗原能增强免疫功能以及补体和吞噬细胞活力，增加白细胞的产生和抗体产量，并使特异性凝集素的产生大大增加[4]。 1.3.2 皂苷与免疫刺激复合物皂苷(QuiA)是一种表面活性剂，在低剂量时具有佐剂活性，用于多种兽用病毒、细菌和寄生虫疫苗。它的主要成分QS21是水溶性的，并可用于乳剂或非乳剂型疫苗，可诱导鼠的Th1型反应，刺激IgG2a和IgG2b抗体的产生，并可诱导MHCI型
QuickAntibody系列免疫佐剂使用说明 规格：1ml保存温度：2~8oC 产品描述 QuickAntibody系列免疫佐剂包括四种具有自主知识产权、独特配方的新型免疫佐剂，分别用于制备小鼠单克隆和多克隆抗体以及兔子多克隆抗体，与常规使用的弗氏佐剂相比，具有免疫针次少、抗原用量低、抗体产生快、抗体滴度高、抗体亲合力高、不破坏抗原天然构象和使用方便等多方面优点。 重要提示 1、QuickAntibody只需两针免疫，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，与弗氏佐剂相比可减少免疫针次。 2、QuickAntibody通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量，从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为（1）免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5~50μg（通常为小鼠5~20μg，兔子20~50μg）；（2）免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1~10μg（通常为小鼠1~5μg，兔子5~10μg）。 3、QuickAntibody抗体产生快，抗体滴度高，抗体亲合力高，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，标准免疫程序只需要在三周内进行两针免疫，通常在第五周即可获得ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）高达1:10000~1:10000000的高亲合力抗体水平。 4、QuickAntibody不破坏抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。 5、QuickAntibody是一类水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可用于免疫动物。 6、QuickAntibody使用肌肉免疫途径，与常规小鼠单克隆抗体制备过程中使用足垫免疫或
免疫佐剂研究进展
免疫佐剂研究进展 字号: 小中大| 打印发布: 2007-11-05 00:00 作者: 沈克飞，曹兰来源: 《动物医学进展》 |吉林大学人兽共患病研究所 （1.，人兽共患病教育部重点实验室，吉林长春130062；2.重庆市畜牧研 究院检测中心，重庆402460） 摘要：佐剂的主要作用是提高抗原(免疫原)的免疫原性和免疫反应的可持续性，它能引导机体的免疫系统对抗原产生体液免疫或细胞免疫反应。对佐剂的选择取决于免疫的目的，从用途上分，佐剂可分为试验用佐剂和疫苗用佐剂。前者主要用于特异性抗体的制备，而后者则作为疫苗的必要成分。文章主要介绍目前常用的几种佐剂包括铝盐佐剂、弗氏佐剂、免疫刺激复合物(ISCOM)、脂质体和CpG及其在科研和疫苗中的应用。 关键词：佐剂；免疫应答反应；疫苗 佐剂(免疫佐剂或免疫调节剂)在免疫中的作用主要是提升机体免疫系统(体液或细胞免疫系统)对抗原或免疫原的免疫应答反应，包括增强免疫反应强度和反应的持久性。随着人们对各种病原的抗原成分及免疫机理的深入了解和越来越多的亚单位疫苗成分被纳入免疫学研究过程，对佐剂的研究和应用将会越来越深入和广泛。佐剂的作用原理主要包括3个方面：①激活先天性免疫应答反应，如弗氏佐剂、免疫刺激复合物和CpG佐剂等；②提高抗原对免疫系统的递呈和刺激作用，如脂质体类佐剂和免疫刺激复合物(ISCOM)；③延长抗原(免疫原)在机体内的存在时间和保持对免疫系统的持续激活作用。很多佐剂中的矿物油成分主要是起到缓释作用。除了弗氏佐剂兼具这3种特性以外，大多数佐剂在功能上都存在一定的缺陷。根据来源不同，佐剂分为化学合成类佐剂和生物成分类佐剂。很多病原生物的组成成分本身就是天然的佐剂，如弗氏完全佐剂中的结核分支杆菌，乙型肝炎病毒表面膜蛋白及细菌的LPS和CpG序列等。传统的佐剂多与抗原混合成乳胶(emulsion)的形式注射使用。乳胶有“油包水”和“水包油”两种形式。前者有利于延长抗原在体内的存在时间和提高抗原的免疫原性，
浅谈免疫佐剂的研究进展 自1798 年英国医生琴纳(Jenner)创立应用牛痘脓疱制成疫苗预防天花以来, 疫苗的研究和应用已经有了200 多年的历史, 其间经历了经典减毒疫苗、细胞疫苗、分子水平疫苗的发展历程。无论是以感染组织或鸡胚的胚液制备的疫苗还是以人工感染的细胞培养物制成的疫苗, 都曾经也正在对预防人类和动物传染病发挥重要作用。1926 年, Glenny等注意到明矾沉淀白喉毒素, 产生一种微粒能相当大地增强机体对抗原的特异性免疫应答, 从而拉开了使用佐剂的序幕。如今合成肽疫苗、基因工程亚单位疫苗、抗独特型抗体疫苗以及核酸疫苗等新型疫苗虽具有良好的抗原性和低毒等优点, 但其免疫原性较弱, 有必要配合高效的佐剂使用, 进一步推动了免疫佐剂的研究。 “Adjuvant”, 即佐剂, 最早来源于希腊语”adjuvare”, 也就是帮助的 意思. 免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用, 能增强机体针对抗原的免疫应答 能力, 或改变免疫反应类型的物质.早在1920 年，佐剂就用于提高疫苗的功效。其功能主要有：增强抗体应答；增强疫苗的黏膜传递；增进免疫接触；增强弱免疫原的免疫原性，减少抗原接种剂量和接种次数；促进疫苗在免疫应答能力弱的群体中的免疫效果；加快免疫应答的速度和延长持续时间等。 近年来，新型免疫佐剂近年来日益受到人们的重视。随着抗原提纯技术和基因工程技术的迅速发展，出现了多种DNA 重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗。这些新型疫苗的抗原具有纯度高、分子量小、特异性强、安全性好等优点，但存在免疫原性弱的缺点，只有与免疫佐剂合用才可引起有效的细胞和体液免疫应答。而目前唯一通过FDA 批准的能用于人的佐剂———铝胶佐剂只能激发体液免疫, 不能诱导细胞介导的免疫反应而后者对于机体对细胞内寄生病原体(病毒、原虫等)以及肿瘤产生免疫力尤为必要。由于铝胶佐剂对人免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、单纯疱疹病毒(HSV)、流感病毒以及血吸虫病、百日咳和伤寒等。常用的佐剂主要有不溶性铝盐类胶体、油水乳剂、微生物及其代谢产物、核酸及其类似物、细胞因子、免疫刺激复合物、蜂胶、脂质体等。这些佐剂主要通过免疫系统受到抗原物质刺激后, 抗原可被抗原提呈细胞( APC)如巨噬细胞、树突状细胞摄取, 加工处理, 降解为多肽片断, 通过MHC或MHC 类分子途径提呈给T 淋巴细胞. T淋巴细胞被激活、复制、增殖、分化, 成为效应T淋巴细胞, 主要包括CTL和CD4+ Th细胞. 前者分泌细胞毒素及诱导细胞凋亡以杀死带抗原的靶细胞. 后者受细胞因子、抗原特性等因素的影响, 向Th1细胞或Th2细胞分化.Th1细胞偏向分泌白介素- 2( IL - 2)、干扰素- γ( IFN-γ), 与介导迟发型超敏反应的TDTH 细胞和CTL细胞的增殖、分化、成熟有关, 可促进细胞介导的免疫应答, 也可辅助特异性IgG2a亚类抗体的产生, 即Th1应答. Th2细胞偏向分泌IL- 4、IL- 5、IL- 6、IL- 10与B细胞增殖、成熟和促进IgG1亚类和IgE 抗体生成有关, 可增强抗体介导的免疫应答, 即Th2应答发挥作用。 几种常用的佐剂 一弗氏佐剂 弗氏佐剂(Freund' s Adjuvant ,FA)分为弗氏完全佐剂(FCA)和弗氏不完全佐剂(FIA)两种。FCA 是标准的诱生体液免疫和细胞免疫的佐剂, 它诱导Th1 型细胞因子, 而FIA 则是典型的只诱导Th2 型细胞因子, 诱生抗体的佐剂。FA 的高度佐剂活性是其它佐剂难以相比的, 因而广泛应用于科学研究工作中, 但其剧烈 的副作用限制了它们在临床上的应用, 除少数兽用疫苗如口蹄疫疫苗使用FIA