© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草化学成分初步分析
赵雪梅1,张 辉2,苏延友1,韩小娟1,毕研平1,马 腾1
(11泰山医学院药学院,山东泰安271016;21科技部中国农村技术开发中心,北京100045)
摘要 目的:与天然冬虫夏草做对比,对泰山虫草菌丝体的多糖、水溶性蛋白、核苷类成分及无机元素进行了
分析。方法:采用硫酸2苯酚法、Folin2酚试剂法、双波长薄层扫描法、原子吸收分光光度法、凯氏定氮法及荧光光谱
法测定了上述各成分的含量。结果:泰山虫草菌丝体中多糖的含量为3114%,低于冬虫夏草中多糖含量(5189%);
水溶性蛋白的含量二者相当,分别为01795%和01783%;泰山虫草菌丝体中核苷类成分腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷
和次黄嘌呤含量分别为01230%、01908%、01515%和01097%,明显高于冬虫夏草中核苷类成分的含量,分别是冬
虫夏草的8121、3175、1117、517倍;钙、铁、锌、硒和锰微量元素的含量分别为100、5316、1212、0112和1150μg/g,其
它无机元素氮、磷、镍的含量高于冬虫夏草样品,铝、汞等有害元素含量接近或低于冬虫夏草样品。结论:泰山虫草
菌丝体中富含多糖、蛋白质、核苷类成分及微量元素等营养物质,尤其泰山虫草菌丝体中主要有效成分核苷类成分
明显高于冬虫夏草,是很有开发利用价值的食品或药物新资源。
关键词 泰山虫草;子实体;菌株;核苷类成分;液体发酵
中图分类号:R28411/R28412 文献标识码:A 文章编号:100124454(2008)1221828203
基金项目:泰安市科技发展计划项目(2007251);泰山医学院2006年重点科研基金项目资助作者简介:赵雪梅(19702),女,教授,从事天然药物化学及中药药理研究;E2mail:zhaoxuem@eyou1com。 冬虫夏草[Cordycepssinensis(Berk1)Sacc1]为
麦角菌科真菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫虫草蝙蝠蛾幼虫
上的子座及幼虫尸体的复合体〔1〕,其性平,味甘,入
肺、肾经,具补肺益肾、止咳化痰之功效,是我国传统
滋补强壮的名贵中药〔2〕。泰山虫草(Paecilomyceste2
nuipes)为细脚拟青霉属,生长在海拔1500m的泰山
上,生态环境的不同,使其各成分在含量上势必存在
一定的差异。虫草是一种复型真菌,由有性型(子
实体)与无性型(菌丝体)组成。菌丝体是产生活性
物质的基础,开发利用菌丝体是作为药物和保健食
品的虫草资源开发的重要途径〔3〕。本研究通过比
较分析这两种虫草的化学成分,探讨泰山虫草菌丝
体营养价值和作为食品资源的可能,为进一步开发
利用提供参考数据。
1 材料与仪器
111 材料
11111 泰山虫草菌株:由泰山医学院药学院苏延
友教授提供;冬虫夏草:青海玉树产,均由笔者鉴定。
11112 试剂:对照品:腺苷、尿苷(天津一方科技有
限公司);次黄嘌呤核苷(上海伯奥生物科技有限公
司,批号:030208);次黄嘌呤(Lancaster公司,批号
10061487)。牛血清白蛋白(BR,国药集团化学试剂
厂);其他试剂均为色谱纯或分析纯。
112 仪器 DESAGA-CD60薄层扫描仪及配套
定量点样毛细管(1/2/5μl)及分析软件(德国DE2
SAGA公司);WFX2120型原子吸收分光光度计,AF2
610A型原子荧光光谱仪(北京瑞利公司);高压蒸汽灭菌锅(上海申安医疗器械厂LDZX240BI型);超
净工作台(苏州安泰空气技术有限公司SW2DJ22F
型);恒温摇床(太仓市实验设备厂DHZ2DA型);
RE254A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);
SpectrumLab54型紫外分光光度计(上海棱光技术有
限公司);离心机;电热恒温干燥箱;分析天平;超声
波清洗器。
2 方法
211 泰山虫草菌丝体的制备 采用正交表L9(34)
对泰山虫草菌丝体液体发酵培养基进行优化,得到
优化后的培养基:玉米粉3%,黄豆粉1%,葡萄糖
1%,酵母膏018%,127℃,115Mpa,灭菌20min,冷
却后接种,以发酵2d的液体发酵液为母种,250ml
锥形瓶装量100ml,接种量5%,发酵7d,离心
(5000r/min,5min)得菌丝体,菌丝体每次以100ml
蒸馏水冲洗,重复3次,50℃烘干备用。
212 各成分含量测定
21211 多糖的含量测定:采用硫酸苯酚法〔4〕。
21212 水溶性蛋白的含量测定:采用Folin2酚试剂
法〔5〕。
21213 核苷类成分的含量测定:采用双波长薄层
扫描法,其薄层色谱条件:GF254硅胶板活化后以定
量毛细管每隔1cm点样,展开剂为三氯甲烷2甲醇2
乙酸乙酯2异丙醇2浓氨水(8∶3∶3∶3∶019),展开约
715cm,取出薄层板吹干残留溶剂,在紫外灯254
nm下观察荧光淬灭色谱图象后,描出欲测斑点轮
廓,用薄层扫描仪在254nm处扫描积分,狭缝宽度:・8281・JournalofChineseMedicinalMaterials 第31卷第12期2008年12月© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net810mm,狭缝高度:核苷类011mm,次黄嘌呤012
mm。以Rf值定性,以峰高h定量。
21214 无机元素的含量测定:P、K、Na、Ca、Mg、
Cu、Fe、Zn、Mn、Ni、Cr、B、Mo、Se、Hg采用原子吸收
法进行测定(其中Se采用氢化物发生2原子吸收分
光光度法测定、Hg采用冷原子吸收分光光度法测
定);N元素用凯氏定氮法测定;Al用荧光光谱法测
定。
3 结果与分析
311 泰山虫草菌丝体与冬虫夏草中多糖的含量
以葡萄糖浓度C(μg/ml)为横坐标,吸光度A为纵
坐标,绘制标准曲线,得回归方程:y=01008x+010187,r=019986;线性范围:916～4312μg/ml。
样品连续测定5次,RSD分别为2177%和2112%。
泰山虫草菌丝体中多糖含量为3114%;冬虫夏草中
多糖含量为5189%。
312 泰山虫草菌丝体与冬虫夏草中水溶性蛋白的
含量 以标准蛋白牛血清白蛋白(μg/μl)为横坐
标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:y
=015992x+011172,r=019910;线性范围:011～
019μg/μl。平行测定3次,结果分别是:01445±
01013μg/μl和01438±01015μg/μl。泰山虫草菌
丝体中水溶性蛋白的含量为01795%,冬虫夏草中
水溶性蛋白含量为01783%。
表1 泰山虫草菌丝体与冬虫夏草中核苷类成分含量
腺苷冬虫夏草泰山虫草尿苷
冬虫夏草泰山虫草次黄嘌呤核苷
冬虫夏草泰山虫草次黄嘌呤
冬虫夏草泰山虫草
峰高(h)1601449193174015512251881772100172718618607613201181340
标准曲线y=280178x+621266y=95123x+131118y=169180x+91012y=222104x+291338
组分量(μg)0135001468114921184501540110470121101401
点样量(μl)62326262
供试液中组分浓度(mg/ml)0105801234014970192201090015230103501200原料质量(g)110267015077110267015077110267015077110267015077百分含量(%)0102801230012420190801044015150101701097
313 泰山虫草菌丝体与冬虫夏草中核苷类成分的
含量 由表1可知:泰山虫草菌丝体中核苷成分腺
苷、尿苷、次黄嘌呤核苷和次黄嘌呤含量分别为
01230%、01908%、01515%和01097%,泰山虫草菌
丝体中核苷类成分含量明显高于冬虫夏草中的含
量。
314 泰山虫草菌丝体与冬虫夏草中无机元素的含
量 从表2结果可以看出,泰山虫草菌丝体样品中
N、P、Ni元素的含量高于冬虫夏草样品;泰山虫草菌
丝体样品中Ca、Fe、Al、Se、Hg的含量接近于冬虫夏
草样品;泰山虫草菌丝体样品中其它元素含量均低
于冬虫夏草样品。这可能与泰山虫草菌丝体液体培
养中培养基配方和冬虫夏草样品在自然环境下生长
有关。适当调节培养基配方,可提高菌丝体中有益
元素的含量,降低有害元素的含量。
4 讨论
冬虫夏草系我国传统的名贵中药,其所含多糖
对单核巨噬细胞、T、B淋巴细胞和NK细胞均有作
用,是一种作用面较广的免疫增强剂〔6〕。实验表
明,显色后的溶液室温放置30min后,其吸光度可
达到最大,6h内显色稳定。另外,由于样品的多糖
提取液为淡橙色,在490nm处有吸光度,影响测定,
故必须在测定前加少许颗粒状活性炭脱色。 表2 泰山虫草菌丝体与冬虫夏草中无机元素含量
元素泰山虫草菌丝体冬虫夏草元素泰山虫草菌丝体冬虫夏草
氮(N)4148%2136%
磷(P)01631%01391%钾(K)01192%1173%钙(Ca)100μg/g120μg/g镁(Mg)498μg/g1260μg/g铜(Cu)2101μg/g1110μg/g锌(Zn)1212μg/g5917μg/g铁(Fe)5316μg/g601
7μg/g锰(Mn)1150μg/g1913μ
g/g硼(B)1140μg/g5161μg/g钠(Na)170μg/g1623μg/g镍(Ni)6111μg/g3112μg/g铬(Cr)1148μg/g2214μg/g钼(Mo)1112μg/g3143μg/g铝(Al)1157μg/g2140μg/g硒(Se1)0112μg/g<011μg/g汞(Hg)<011μg/g<011μg/g
Folin2酚试剂法灵敏度高,操作简便、迅速,不需
要复杂和昂贵的设备,适合一般实验室的要求,为蛋
白质含量测定的首选方法。本实验在样品制备中采
用30℃浸提6h,然后超声20min,结果测得泰山虫
草菌丝体和冬虫夏草中水溶性蛋白含量分别为
01795%和01783%,与相关文献报道差异较大,提
取工艺有待进一步优化。
泰山虫草菌丝体中核苷类成分含量明显高于冬
虫夏草中的含量。两种虫草中核苷类成分的含量均
表现为尿苷>次黄嘌呤核苷>腺苷>次黄嘌呤。由
于核苷类成分是虫草的主要有效成分之一,且药典
中多以腺苷含量来控制虫草质量〔7〕,这为泰山虫草
作为冬虫夏草代用品提供了理论基础。・9281・JournalofChineseMedicinalMaterials 第31卷第12期2008年12月
