岛津蒸发光散射检测器
ELSD-LT II
- 常见问题问答-
Ver. 1.0 (July, 2006)
International Marketing Division
Shimadzu Corporation
FAQ about ELSD-LTII
目录
基知 (4)
ELSD础识
什是ELSD检测器? (4)
Q1.么
Q2.ELSD检测器有何特点? (4)
器在灵敏度上有何区? (4)
Q3.ELSD检测器和RID检测别
器的灵敏度在什水平? (4)
Q4.与其他HPLC检测器相比，ELSD检测处么
Q5.ELSD检测领应
器在哪些域用广泛? (5)
Q6.哪些化合物不适合用ELSD检测进
器行分析? (5)
器不能使用不性的冲溶液? (5)
Q7.为么
什ELSD检测挥发缓
器的常 (7)
关于 ELSD-LT II 检测见问题
”的写表示什? (7)
Q8.“ELSD-LT II缩么
型相比有何区? (7)
Q9.与ELSD-LT别
“低温蒸”是什意思? (7)
Q10.发么
“低温蒸”技能来什好? (7)
Q11.ELSD-LT II检测器的发术带么处
器是否可以使用低温蒸技? (7)
其他公司生的ELSD检测发术
Q12.产
器有何区? (8)
器与其他争手的ELSD检测别
Q13.ELSD-LT II检测竞对
有哪些主要的争手? (8)
Q14.竞对
硬件 (10)
问题
Q15.ELSD-LT II检测器的安装条件? (10)
于化气有何要求? (10)
Q16.对雾
Q17.选择雾
如何化气气源? (10)
如何定化气力? (11)
Q18.设雾压
化气的流量如何定? (11)
Q19.雾应该设
Q20.对统
于排气系有何要求? (11)
漂移管蒸温度如何定? (11)
Q21.发设
器中哪些是温控元? (12)
Q22.ELSD-LT II检测单
Q23.ELSD-LT II检测级设
器可以有几灵敏度定? (12)
器可以定的品度范是多少? (12)
Q24.ELSD-LT II检测测样浓围
流相流速灵敏度是否有影响? (12)
Q25.动对检测
是否具有自零功能? (13)
Q26.动调
器校准曲的形状? (13)
Q27.使用ELSD-LT II检测时线
Q28.积现
峰面的重性是多少? (13)
常数如何定? (13)
Q29.时间应该设
器的体和重量? (13)
Q30.ELSD-LT II检测积
于和故障排除的 (14)
关维护问题
化器的玻璃管多一次宜? (14)
Q31.对雾长时间维护为
基出噪声尖峰（鬼峰）了如何解决? (14)
Q32.线现应该
Q33.如果灵敏度下降，ELSD-LT II检测检查进
器的灵敏度如何行? (14)
如果化器玻璃管的虹吸管部分不能正常的收集流相，如何? (15)
Q34.雾动应该检查
其它 (16)
问题
器是否可以通算机从外部控制? (16)
Q35.ELSD-LT II检测过计
采取什措施? (16)
Q36.如果ELSD-LT II检测时间长
器一段期不用应该么
ELSD 基础知识
Q1. 什么是ELSD 检测器?
A1. ELSD 即蒸发光散射检测器是HPLC 检测器之一，首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在漂移管中蒸发溶剂，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。
Q2. ELSD 检测器有何特点?
A2. ELSD 检测器具有如下特点：
1) 质量型通用检测器, 具有比示差折光检测器 (RID)更高的灵敏度。 2) 能够测量无紫外吸收或可产生荧光的化合物 ---> 与 RID 检测器相似。 3) 可用于梯度洗脱。 ---> RID 检测器则不可以。
4) 对于非挥发性的化合物均有几乎相等的响应，与质量大小有关而与结构无关。从而可以对样品中的每一组分进行定量分析。--->与 RID 检测器相似。
Q3. 检测器和检测器在灵敏度上有何区别ELSD RID ?
A3. 不同分析条件下灵敏度有所区别，以糖分析为例 (正相模式下)， ELSD 检测器灵敏度比RID 检
测器高5到10倍(参见下图及 Application News L294 (LA-190-E016)).
Q4. 与其他检测器相比，检测器的灵敏度处在什么水平HPLC ELSD ?
A4. 常见的HPLC 检测器种类及其灵敏度的对应关系如下图所示。
min
012345
6789101112
ELSD?
Q5. 检测器在哪些领域应用广泛
A5. 对于紫外检测器或荧光检测器不能检测的化合物，以及由于缺乏选择而使用示差折光检测器进行分析的化合物，ELSD检测器都可以提供有效的解决方案。将ELSD串接在紫外检测器之后，为测定紫外检测器无法检测的有关物质(例如杂质)提供了一个有效手段。ELSD检测器可以使用和LC-MS 完全一致的流动相条件，因此易于对LC-MS分析的色谱条件进行评估并提供更为丰富的补充信息。因此，对于 ELSD检测器的需求主要来自以下分析领域：
(1) 药物研发部门、制药公司和生物技术公司
用于新合成未知化合物纯度确证或粗略定量。
(2) 化工行业的研发部门
GPC分析中合成高分子化合物的分子量分布测定或表面活性剂分析。
(3) 政府机关、科学院和其他科研机构
用于多种化合物的检测分析，仅仅依靠常规的示差折光检测器不能够满足检测所有目标
化合物的需要。
ELSD?
Q6. 哪些化合物不适合用检测器进行分析
A6. ELSD检测器不能分析可以随流动相同时蒸发的化合物 (低沸点挥发性化合物). 另外, ELSD检测器也不适用于热不稳定性化合物的分析。基本上，ELSD检测器仅适用于可以在流动相蒸发后余下不挥发性溶质颗粒的化合物分析。
ELSD?
Q7. 为什么检测器不能使用不挥发性的缓冲溶液
A7. 因为ELSD检测器的工作原理是测定细小颗粒的散射光强度，因此流动相中使用的酸、碱或盐（缓冲溶液）必须可以蒸发或气化。如果不可挥发的话，会造成以下问题：
(1) 缓冲溶液中不可挥发的盐颗粒在光散射池中产生响应，引起基线漂移或背景噪音。
(2) 附着在漂移管或其他位置的缓冲盐会导致噪音尖峰。
(3) 盐层会阻碍雾化气出口从而使流动相不能完全蒸发，导致灵敏度下降。
通常情况下，ELSD对于流动相组成的要求与LCMS一致。
一般地，ELSD可以使用的流动相改性剂包括氨水、醋酸、三氟乙酸或二乙胺。也可以使用醋酸铵或甲酸铵缓冲盐溶液。如果仪器将长时间不使用，推荐在最后一次分析后用水冲洗流路。
关于 ELSD-LT II 检测器的常见问题
Q8. “ELSD-LT II 的缩写”表示什么?
A8. “ELSD-LT ”是“ Evaporative Light Scattering Detector – Low Temperature ”的缩写，表示
岛津“蒸发光散射检测器－低温型”， “II” 代表第二代产品。 Q9. 与ELSD-LT 型相比有何区别?
A9. ELSD-LT II 检测器拥有诸多改进之处，以下两点尤为关键：
(1) 通过改良检测单元中的设计来减小峰展宽，因此灵敏度大大增加。 (2) 对光源和雾化气单元，增加了可自动控制的开关装置从而节省操作成本。 当然，这款产品也延续使用了ELSD-LT 所独有的低温蒸发技术。 Q10. 低温蒸发“”是什么意思?
A10. 以往的ELSD 检测器在超过60°C 的温度下使流动相蒸发。然而，ELSD-LT 和ELSD-LT II 采
用的低温蒸发技术，使得在蒸发管温度低于40度的情况下，流动相也能够有效的蒸发。 从而在低温下也能分析样品，解决了半挥发性和热不稳定性化合物的测定问题。
Q11. ELSD-LT II 检测器的 “低温蒸发”技术能带来什么好处?
A11. 低温蒸发技术拥有如下优势：
(1) 对于半挥发性、易升华或热不稳定性化合物具有高灵敏度。 (2) 不必为每一次分析设定专门的操作温度。 (3) 节省开关机所需等待时间。 (4) 操作维护安全性高。
(5) 大部分被蒸发的流动相溶剂重新变成液体。因此，对于环境的影响很小。
Q12. 其他公司生产的检测器是否可以使用低温蒸发技术ELSD ?
A12. 由于采用低温蒸发技术的ELSD 检测器在检测易挥发性和热不稳定性化合物时大大优于传统
ELSD 检测器，一些竞争对手推出了声称同样具有低温蒸发能力的ELSD 检测器 。然而，这些产品是通过一个简单的分流技术，使得只有部分雾滴才能够进入漂移管，这种不区分雾滴大小的技术使得大粒径雾滴也进入到漂移管内，导致检测器噪音增大。ELSD-LT II 检测器的低温蒸发设计能够同时满足高灵敏度和低噪音的要求，而竞争对手的产品无法达到这一点。
Q13. ELSD-LT II 检测器与其他竞争对手的ELSD 检测器有何区别?
A13. ELSD-LT II 检测器采用了独有的雾化后低温蒸发技术， 使之成为一款高灵敏度的通用型检测
器。下图说明了蒸发光检测器的工作原理：流动相经过细导管进入喷雾头，与气体混合喷成雾滴，雾滴经过加热的漂移管，流动相被蒸发，溶质颗粒最终在光散射检测池中被检测。然而，通过喷雾头（Nebulizer ）产生的雾滴粒径大小分布较宽， 通常情况下需要增加漂移管的温度来保证将所有的雾滴完全蒸发。ELSD-LT II 检测器利用如图所示构造的雾化器，为在低温下高效率的蒸发流动相提供了保证。流动相雾化后，小粒径的雾滴会随着载气通过雾化器的玻璃管（Glass Cell ）进入漂移管（Drift Tube ）；但是，大粒径的雾滴不会随载气进入漂移管，而是在玻璃管壁上冷凝下来，顺着管壁流下经虹吸管收集后排出。这样，由于选择性的去除了引起基线噪音的大颗粒雾滴，从而实现高效率的低温下蒸发。
Q14. 有哪些主要的竞争对手?
A14. 目前市场上ELSD 的主要竞争对手为Alltech (USA)， Polymer Laboratories (UK)，和 Waters (USA)。各
家公司的产品型号和竞争特点如下：
1) ELSD 2000ES (Alltech)
Alltech 公司的ELSD 2000ES 是ELSD 2000的改进型，号称通过对光学系统的优化提高了灵敏度，但实质上没有大的改变。I ELSD 2000ES 采用了“撞击器”分流技术，Alltech 的销售资料上声称这是唯一的可以在低温模式和高温模式之间进行切换的ELSD 检测器。但是在其低温模式(撞击器开模式) 下，是通过减少进入到漂移管内雾滴的量，来保证蒸发的完全性。实际上这种方式会导致灵敏度下降和重现性较差。 2) PL-ELS 2100 (Polymer Laboratories)
PL-ELS 2100型检测器是Polymer Laboratories 公司推向市场的第一款低温型蒸发光散射检测器，采用了与Alltech ELSD 2000ES 型同样的分流技术。而且，相比于Alltech 的产品，PL-ELS 2100型无法选择不分流的模式，因此灵敏度大打折扣。 3) 2420ELSD (Waters)
Nebulizer Gas
Eluant from Column
2420ELSD是Waters公司开发的一款蒸发光散射检测器，没有什么创新的技术和特点，因而在市场上不具有影响力。
硬件问题
II检测器的安装条件?
Q15. ELSD-LT
A15. 除ELSD-LT II 主机外，还应具备以下安装条件：
1) HPLC系统 (LC-2010HT不可以)
2) LC 工作站 (LCsolution/CLASS-VP) 或积分仪
3) 雾化气源 (空气压缩机，气体钢瓶，等) --->参见 Q17
4) 管路连接器 ---> 参见 Q12
5) 带0.01 μm滤芯的二级减压阀 (P/N 228-45525-91)
注意：不是气体钢瓶的节流阀！ --->参见 Q16
6) 实验室型排气系统(通风橱) 或溶剂阱系统。 --->参见 Q20
Q16. 对于雾化气有何要求?
A16. 可使用氮气、空气或其他惰性气体。不可以使用易燃或具有氧化性的气体如氢气或氧气。气体中的杂质会导致基线噪音，所以必须安装带0.01 μm滤芯的二级减压阀。二级减压阀滤芯 (P/N 228-41595-02) 是消耗品，大约需要每年更换一次。
Q17. 如何选择雾化气气源?
A17. 随ELSD-LT II主机提供两根分别为1m和2m长的气源线（规格：6mm O.D.×4mmI.D.）。请按下列要求选配气源。另外，必要的话请购买相应的连接器。
1)氮气钢瓶 (工业级即可)
请确认使用气体出口螺纹为外螺纹的氮气钢瓶。市场上也有内螺纹的氮气钢瓶，因此请与氮气钢瓶供应商确认出口螺纹规格及钢瓶容量。如使用气体钢瓶需要以下附件：
y氮气用气体钢瓶节流阀 (P/N 221-35999-01)
y气路螺母 (右手螺纹) (GL Science公司提供， P/N 3001-55415)
y孔式接头 6CF4型 (GL Science公司提供， P/N 3006-41662)
y快速接头，单头活接头型OT-62M (GL Science公司提供，P/N 3006-72162)
2) 集中式气源气体管路
如果采用集中式气源系统为ELSD供气，则需要以下连接附件。 ELSD检测器的气路端口是塑料材质，请确认使用Teflon套管。
y附带接头锁紧螺母型转接器(P/N 228-25975-92)
y转换接头， 1/8”到 1/4” (GL Science公司提供， P/N 3006-43245)
注意：包含一套不锈钢管路用螺母和套管。
y Teflon套管，双环 (GL Science公司提供， P/N 3006-67740)
3) 氮气发生器
推荐使用符合下列参数的氮气发生器。
流量： 5 mL/min 或以上
压力： 0.5MPa或以上
纯度： 99% 或以上
4) 空气压缩机
为保证稳定的雾化气压力，须使用气量 10 L/min 以上的空气压缩机。
Q18. 如何设定雾化气压力?
A18. 不必根据分析参数设定雾化气压力值，通常设定分析时雾化气压力为350 kPa。 ELSD-LT II 的雾化器形状设计使得流动相可以在350 kPa的雾化气流量下高效率的蒸发。雾化气压力上限为450 kPa，请注意避免长期在上限压力条件下操作，以免损坏检测器光路系统。
Q19. 雾化气的流量应该如何设定?
A19. 常规的气体压力设置为350 kPa, 雾化气流量为2.8L/min。对于工业用氮气钢瓶 (7 m3)来说意味着可连续运行3天时间。
Q20. 对于排气系统有何要求?
A20. ELSD-LT II检测器随机配有1.5m长排气管（规格：20mm O.D.×18mmI.D.）。在仪器使用前，将检测器背面的排气管与废气管路连接。
另外，对于那些不能安装排气装置的用户，岛津推荐安装一套冷阱系统来收集废气。
推荐符合如下技术规格的冷阱系统：
捕集能力： 1kg(水)
阱温度： -50°C 带玻璃冷凝器
(除湿能力:500mL 或更高)
如果在ELSD-LT II检测器之后安装了冷阱系统，不必使捕集的溶剂从冷阱的出口处流出，例如通过使用真空泵。使溶剂流出可能引起基线波动。(相关问题：Q29) 根据所使用的溶剂选择独立的玻璃冷凝器是必要的。更多冷阱系统相关信息，请和生产厂家联系。
Q21. 漂移管蒸发温度如何设定?
A21.一般而言，流动相为水溶液时蒸发温度设为40°C，有机溶剂时设为35°C，合适的蒸发温度与流动相的沸点有关。如果目标化合物对热不稳定，则可尽可能的降低蒸发温度以避免化合物热分解。例如尿素容易在高温下分解，从下图可以看出，在30°C 的蒸发条件下可以获得更高的检测灵敏度，优于35°C 以及40°C的条件。
尿素的分析例
Q22. ELSD-LT
II检测器中哪些是温控单元?
A22. 在检测器主机中，玻璃管出口处连接的不锈钢漂移管部分是可以设定温度的单元。色谱柱洗脱液被雾化气(空气，氮气等)喷成雾状物，进入加热的漂移管中使溶剂蒸发。余下的目标化合物颗粒，随气流进入光散射检测单元。
II检测器可以有几级灵敏度设定?
Q23. ELSD-LT
A23. 一共有12级增益设定，根据所分析化合物的浓度来设定相应的增益值。对于低浓度样品的高灵敏度分析，设定增益为较大值；对于高浓度样品的分析，设定增益为较小值。
Q24. ELSD-LT
II检测器可以测定的样品浓度范围是多少?
A24. 不同的增益设定下的动态范围是不一样的。ELSD 的线性范围略微窄于紫外检测器或示差折光检测器，大概2个数量级左右。
Q25. 流动相流速对检测灵敏度是否有影响?
A25. 即便是同样的流动相组成条件，过高的流速可能导致流动相的不完全蒸发并且造成噪音增加或灵敏度下降。例如，当使用水相流动相时如流速为 1.5 mL/min 或更高，在某些情况下，漂移
管温度设定比通常的40°C高1～2°C，可以提高灵敏度。
Q26. 是否具有自动调零功能?
A26. 虽然 ELSD-LT II是独立型检测器，但是依然具有可外部激发的自动调零功能。因此，该检测器可以在分析开始前自动执行零点校正功能。使用主机附件中的电缆可以与开关或其他类似设备联接。
Q27. 使用 ELSD-LT II检测器时校准曲线的形状?
A27. 与其他检测器不同，ELSD检测器的响应(l)与样品浓度(C)之间不呈线性关系，而是具有如下列方程所示的关系：
l = a x C b(a和b为常数)
将上式取对数后可以得到I 和C具有双对数线性关系。利用双对数坐标校正曲线可以进行化合物定量分析。相关系数一般为 0.999。
Q28. 峰面积的重现性是多少?
A28. 峰面积的重现性RSD值为 2～ 3％。
Q29. 时间常数应该如何设定?
A29. 时间常数指检测单元内部数字过滤器的响应速度。根据输出信号，通过旋转仪器背面的“TIME CONSTANT”旋钮设定时间常数。
设置时间常数备注
0 0 秒不使用过滤器
1 1 秒常规设置
2 6 秒噪声接近于零，但峰高也会降低。
LT II?
Q30. ELSD-检测器的体积和重量
A30. ELSD-LT II 检测器体积为 360 × 500 × 504 mm (宽 x 长x高)。重量为 20 kg.
关于维护和故障排除的问题
Q31. 对雾化器的玻璃管多长时间维护一次为宜?
A32. 雾化器的玻璃管即使是用户也可以很方便的拆下清洗。玻璃管被污染后不会导致灵敏度下降。
更多的是因为漂移管污染导致的灵敏度下降。参见Q 33如何解决灵敏度下降问题。
Q32. 基线出现噪声尖峰（鬼峰）了应该如何解决?
A32. 灵敏度下降或噪声尖峰的出现很有可能是漂移管污染引起的。可以遵循下面的方法冲洗检测器整个流路。
1) 取下分析柱并设置雾化气压力为 350 kPa。
2) 设置漂移管温度为40°C ，以水作为流动相，流速2 mL/min冲洗10 min。
3) 流动相换为乙醇，同样条件下冲洗30 min。
4) 冲洗结束后，检查是否还有噪声尖峰出现。
如果没有解决噪声尖峰的问题，那么遵循下面的方法再次进行清洗。
5) 流动相由乙醇换为水，冲洗10 min。
6) 流动相换为 5 mmol/L三氟醋酸水溶液，漂移管温度40°C条件下冲洗10 min。
7) 将漂移管温度设为80°C，再冲洗10 min。
8) 流动相换为水，漂移管温度40°C条件下冲洗20 min。
Q33. 如果灵敏度下降， ELSD-LT II检测器的灵敏度检查如何进行?
A33. 通过下列条件和步骤可以对灵敏度进行检查。
1) 灵敏度认证条件
设置：温度50°C, 增益 12, 时间常数1, 雾化气压力350 kPa
注意：虹吸管部分应充满水。
阻尼盘管：0.13 mm I.D. x 2 m阻尼盘管(P/N 228-32722-91)
流动相：水
流速： 1.0 mL/min
样品葡萄糖/水溶液 (5 mg/L和250 mg/L)
2) 认证步骤
1) 基线稳定后自动调零。
2) 取5 mg/L葡萄糖/水溶液进样20 μL，平行进样3次，计算平均峰高应高于标准值70 mV。
3) 接下来，增益由12改为6 。
4) 取250 mg/L葡萄糖/水溶液进样20 μL，平行进样6次，计算峰面积的相对标准偏差
(RSD)，应低于标准值3.0%。
如果仪器不能达到上述标准，应由岛津维修人员进行检查维修。
Q34. 如果雾化器玻璃管的虹吸管部分不能正常的收集流动相，应该如何检查?
A34. 连接在检测器后部的排气管起到排放废气的作用。通常排气管出口置于通风橱内，但是如果通风橱抽力太强的话，会在玻璃管中造成负压并导致虹吸管内的液体被吸入到漂移管。注意检查通风橱的抽力强度以避免此现象的发生。
其它问题
II检测器是否可以通过计算机从外部控制?
Q35. ELSD-LT
A35. 如果使用LC工作站软件，则通过检测器背面的全量程为10 mV 或1 V的输出端口与计算机联接。若使用积分仪，则通过检测器背面的全量程为1 V的输出端口与积分仪联接。
Q36. 如果ELSD-LT II检测器一段时间长期不用应该采取什么措施?
A36.如果ELSD-LT II检测器将停止使用超过一周的时间，请取下雾化器玻璃管并用封口膜封好。操作时注意小心避免破碎。
蒸发光散射检测器(ELSD)3300 原理与操作 一.操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理包括以下三个步骤:首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 雾化(Nebulization)： 雾化(Nebulization) 经HPLC 分离的柱洗脱液进入雾化器, 在此与稳定的雾化气体(一般为氮气)混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成,液滴大小取决于分析中采用的气体流量.气体流量越低形成的液滴越大,液滴越大则散射的光越多,从而提高了分析灵敏度,但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为 2.1mm 的微径柱代替内径为4.6mm 标准型分析柱,能大大降低流动相流速,因而提高分析的灵敏度。 蒸发(Evaporation)： 蒸发(Evaporation) 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发.为特定应用设置适当的漂移管温度,取决于流动相组成和流速,以及样品的挥发性.高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度,以获得最佳灵敏度.最佳温度需要通过观察各温度时的信号噪音比率来确定。在ELSD 3300 漂移管中,距离雾化器3 英寸处有一个PTFE 涂层的不锈钢撞击器.气溶胶与撞击器相遇,大的液滴从废液管排出。余下的液滴从撞击器周围通过并经过漂移管进入到光散射检测池被检测。除去大的液滴就允许在低温模式下操作ELSD3300,适用于分析半挥发性样品。流动相和雾化气体中的非挥发性杂质会导致噪音。采用高品质的气体,溶剂和挥发性缓冲液(经过过滤的) ,会很大程度上降低基线噪音.若流动相没有完全挥发会导致基线噪音上升。仔细选择设置检测器的参数保证流动相完全挥发。 检测(Detection)： 检测(Detection) 悬浮于流动相蒸汽中的样品颗粒从漂移管进入到光散射检测池。在检测池中,样品颗粒散射激光光源发出的光而蒸发的流动相不散射。散射光被硅光电二极管检测,产生电信号输送模拟信号输出端口, 被用于模拟输出的数据采集.。ELSD 3300 光路元件的先进设计为您的HPLC 分析提供了优异的灵敏度。 二.软件界面指导 (Navigating the Software Interface) 3300 软件界面的特点是位于液晶显示屏左上角有一个可展开的菜单。下面的部分将详细描述这个软件菜单. 2.1 主菜单(Main Screen) 操作界面是在仪器使用期间显示的主界面。主界面为当前载入方法提供如下信息: 1. 谱图(Chart):当处于"运行"和"清洁"模式时，谱图显示被激活,界面显示谱图长度可达60min. 2.方法名称(Method Name) :当前载入方法的名称. 3.温度(Temperature):漂移管温度的设定值和实际读数,用"℃"表示。温度范围是从25 至120℃.。注: 漂移管共有两个加热区, 分别位于漂移管前端和后端。主界面显示的是这两个区的平均值。
蒸发光散射检测器ELSD 蒸发光散射检测器(ELSD)的原理及特点 蒸发光散射检测器(Evaporative Light-scattering Detector)是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。1993才由Alltech公司商业化生产。 一、ELSD原理: 洗脱液的雾化——流动相的蒸发——含有待测物的剩余颗粒的光散射检测 恒定流速的色谱仪(高效液相、逆流色谱、高效毛细管电泳等)洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管，drift tube)，流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。 当载气从雾化室把液滴运送到加热漂多管时，蒸发开始。在加热漂移管溶剂被除去，产生微粒或纯溶质的小滴，为了维持颗粒大小的均匀性，在这个步骤中尽量采用低的温度是相当重要的。此外，低温蒸发增强溶质结晶化，溶质颗粒越大，检测光散射的强度就越大。还有，这已被清楚的证明，相同大小的固体颗粒比液体颗粒对散射光更有效。在高的温度下，太剧烈的溶剂挥发会导致颗粒的大小不均匀，或者抑制结晶的形成，反过来又影响液体散射过程。 在这个阶段，洗脱液颗粒或液滴从加热漂移管出来进入检测池，散射入射光从光源到达这里。散射光通过光检测器(光电倍增管或光电二极管)加以定量。光检测器产生的电信号与通过检测池的颗粒数量和大小成比例。在Chromachem检测器，通过居中在可见区的多色光源(卤素灯)产生入射光束。这入射光束集中在光检测池的中间，使光检测器的灵敏度最优化。光检测器是强大的光电倍增管，与入射光束
E L S D蒸发光散射检测器 的原理 Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998
HPLC蒸发光散射检测器的原理 简介 蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化，并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定，与梯度洗脱不相容。另外，示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰，并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器，ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线，使得分辨率更好、分离速度更快。另外，因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为，首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 步骤1：雾化 雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器，在此与稳定的雾化气体（一般为氮气）混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成，液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大，液滴越大则散射的光越多，从而提高了分析灵敏度，但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为的微径柱代替内径为标准型分析柱，能大大降低流动相流速，因而提高分析的灵敏度。 步骤2：蒸发 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度，取决于流
XXXXXXXXXXXXX仪器设备标准操作规程 1 目的：建立ELSD 2000ES蒸发光散射检测器标准操作规程。 2 范围：ELSD 2000ES蒸发光散射检测器。 3 责任：化验室操作者。 4 内容： 4.1 接通电源：打开仪器后面板上的电源开关，接通ELSD2000ES电源。操作窗口出现，窗口给出仪器为“待机状态”，并有一个计时器显示仪器在此状态下有多少时间。仪器将自动显示上一次运行关机前最后所采用的方法设置。 4.2 操作窗口：操作窗口是仪器运行时主显示窗口。此窗口提供当前运行方法的以下信息： ·方法：当前加载方法的名称。 ·漂移管温度：漂移管的设定温度及当前实际温度读数，单位为℃。 ·气体流量：雾化器气体的设定流量及当前实际流量，单位为L/min。 ·放大系数：当前放大系数的设定值（可能的数值为1、2、4、8和16）。设定为1代表信号没有放大，随每次放大系数的增大信号基于原数值放大两倍。 ·撞击器：当前撞击器的位置，依据当前使用的方法为开或关。 ·输出值：当仪器处于“运行”状态时，显示以mV为单位的信号值。当仪器处于“待机”状态时，显示“Standby”和待机时间。
·满量程电压：满量程电压的设置（根据所用数据采集系统设定为10mV或1000mV）。 ·出错总数：当前发生的操作错误的总数（如果有的话）。 ·窗口键：用于改变仪器状态或进入其他窗口的功能。 【Edit】：快捷键，从“运行”窗口直接切换到“编辑方法”窗口。 【Menu】：从“待机”或“运行”窗口切换到“菜单”窗口。 【Standby】：将仪器从“运行”窗口切换到“待机”状态。 【Zero】：在“运行”窗口下将输出信号调零。 【Run】：运行当前方法的设置，将仪器从“待机”状态切换到“运行”状态。 4.3 仪器状态：ELSD 2000ES有两种不同的操作状态：“待机”（‘Standby’）和“运行”（‘Run’），仪器当前的状态显示在操作窗口上。 4.3.1 待机状态：检测器通电后立即进入“待机”状态。在此状态下，激光，气流，和漂移管加热器都处于关闭状态。操作窗口显示“待机”字样和计时器表示的待机时间。可执行的窗口键是【Menu】和【Run】。 4.3.2 运行状态：在运行状态下，激光，气流，和漂移管加热器都处于打开状态，撞击器状态与设置状态相吻合。输出信号值会有显示。操作窗口会以mV 为单位显示信号输出值。【Edit】，【Menu】，【Standby】和【Zero】窗口键是可执行的。 5日常操作： 5.1 安全： 请遵守以下条例保证ELSD 2000ES操作安全： 1. 实验室保持良好通风以防止溶剂蒸汽积聚。 2. 使用通风柜或其他通风设备以防止吸入排气管逸漏的溶剂烟雾。
蒸发光散射技术讨论 1、蒸发光检测器属于质量检测器，理论上可以检测到挥发性低于流动相的任何物质，但对有紫外吸收的 样品组份检测灵敏度比较底，重现性比较差（出厂要求重现性RSD<6%即可），现常用于检测没有紫外吸收的物质。 主要原理是，流动相及组份在蒸发室，先被雾化，流动相蒸发，组份形成气溶胶，然后进入检测室，用激光照射照射气溶胶而产生光散射，测定光散射的光强而获得信号。 组份质量（m）与散射光强（I）的关系为：lgI=b·lgm+lgk k和b是与蒸发室温度及流动相性质等试验条件有关的常数。 剩下的就是一些注意事项和简单保养的问题，比如流动相中不能有盐，使用前先升温给气，再进流动相，使用完后先停流动相，后降温，最后停气，光机。 最后说明一下，使用完毕后可将流动相改为水及甲醇，调节温度及气流量冲洗蒸发室，这样可以增加使用寿命，降低噪音。 2、zzz79朋友所说“我们有一台Alltech ELSD 2000，也许是因为蒸发光散射技术本身的问题，重现性特别 差。在方法学学研究时，更是没法做。” 我想您指的重现性较差，可能是说峰面积的重现性比较差吧。如果在每天测定中均采用随行对照品进行校对，含量的重现性还可以说得过去。 我个人认为气体的流速对峰面积的影响非常大，所以如果您使用纯净的气源，精准的气体流速控制，至少在一天内的重现性不成问题。 根据ELSD的工作原理，必须使用对数方程外标两点法进行计算。但是，在实际应用过程中，如果对照品浓度和被测样品浓度较为接近，直接采用峰面积计算也不会有显著性的影响（尽管其不是合理的方法）。 3、比较赞成楼主的说法，ELSD很多人都说它重现性很差，其实我根据我自己的经验，重现性差一般应该 是指其峰面积重现性较差（和UV比较），但其色谱条件的重现性还是比较稳定的。至于标准曲线的做法，我曾经做过一系列的比较实验，也查询了一些资料，目前尚没有定论到底以峰面积和浓度直接做线性还是用自然对数还是以常用对数，三种方法都有。至于我们在实验中应该如何做线性，个人认为：不必拘泥，首先用峰面积和浓度直接做线性，如果相关系数不好，再尝试用对数关系（自然对数或常用对数）。一般都可以解决问题，不象那位同学说的方法学根本没法做，应该还是可以做的。至于楼主所说的，对照品和供试品溶液接近时可直接用峰面积计算，我不是很认同，当很接近时，可以考虑做一个比较窄的范围做线性，你如果直接用两点法做计算的话，必须得有一些数据支持，否则文章是很难发表的，也没有说服力，很容易被人质问，至于做随行对照的问题，按正规要求，不只ELSD，其他检测器的液相也应该这样做，只是因为仪器相对的稳定性所以大家都不做，对于ELSD当然做随行对照最好，至于是否一定要做，我觉得如果是仪器一直都是你一个人在用，而且条件没有变，预热也够充分，那么不做也行，但是这只是考察了自己的一个实验而已，不敢建议大家都不做，在您自己做实验时建议你还是做随行对照的好，也好心里面有底，免得造成不好的影响，呵呵。建议做随行对照。 谈到ELSE仪器的使用上，也有一些体会，但一时难以细细道来，主要就是雾化温度和气体流速的设置上，如果这两个参数设置合理，一般情况下都不会有什么问题，大部分的问题都是出在温度和流速设置不合理上。基线噪音的出现也多是因为两个参数设置不合理而导致雾化器漂移管污染那就只好清洗了，也有个别人因为操作失误而导致问题的但不多见，一般仪器厂商提高的参数设置只能用来参考，实际实验时很少完全和他提供的条件一致的，多比他提供的参数稍微高些，开始设置温度建议高些，
HPLC蒸发光散射检测器的原理 简介 蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化，并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定，与梯度洗脱不相容。另外，示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰，并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器，ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线，使得分辨率更好、分离速度更快。另外，因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为，首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。
步骤1：雾化 雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器，在此与稳定的雾化气体（一般为氮气）混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成，液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大，液滴越大则散射的光越多，从而提高了分析灵敏度，但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为2. 1mm的微径柱代替内径为4.6mm标准型分析柱，能大大降低流动相流速，因而提高分析的灵敏度。 步骤2：蒸发 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度，取决于流动相组成和流速，以及样品的挥发性。高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度，
一、目的：规范PL-ElS2100型蒸发光散射检测器的使用。 二、依据：PL-ElS2100型蒸发光散射检测器说明书。 三、责任人：仪分操作人员 四、内容： 4.1系统组成：本系统由1个溶剂输送泵、7725i手动进样阀、PL-ElS2100型蒸发光散射检测、N2000色谱数据工作站和电脑等组成。 4.2工作准备：PL-ElS2100型蒸发光散射检测器要求氮气纯度98%以上。打开氮气供给装置，设定压力为60-100psi。 4.2.1打开PL-ElS2100型蒸发光散射检测器电源开关，仪器开启时处于“STANDBY”模式，加热块关闭，雾化气流速设定为较低的1.2SLM。此模式下可设定仪器参数（EVAP、NEB、GAS）或者加载合适的方法； 4.2.2将工作模式设定为“RUN”，使仪器加热平衡在加热或冷却过程中，仪器会显示“NOT READY”。仪器平衡完毕后会显示“READY”并检查基线。在洗脱液未接入是噪音应低于0.2mv，这表明雾化气洁净干燥。如基线毛刺一般是由于雾化气中的粒子或水分造成的。引入洗脱液并待其平衡15min。 4.2.3再次检查基线，应不超过1mv。如是纯水应不超过0.25mv，纯有机溶剂也应不超过1mv。缓冲体系和稳定剂会明显增加噪音。 4.2.4连接色谱柱，旋开“排气阀”，“purg”键排气至管路无气泡，点击“pump”键停止排气，“排气阀”旋紧，点击“pump”键使泵运行，点击“func”功能键由低至高设定流速。 4.2.5接通电脑和ELSD检测器，然后设定实验分析所需的条件(温度和气体流速) “MODE”键为仪器运行模式；“METHOD”键显示和改变仪器方法；“EVAP”键显示和改变蒸发温度（0-120℃）；“NEB”键显示和改变雾化温度（0-90℃）；“GAS”键显示和改变雾化气流速（0.80-3.25SLM）或者加载合适的方法；将工作模式切换为“RUN”，仪器平衡完毕后会显示“READY”。 4.3进样 4.3.1色谱柱连接到ELSD检测器上且系统已达到平衡。 4.3.2 进样点击检测器“ZERO”键调零，工作站中“零点校正”按钮校正基线零点，再按一下查看基线。 4.3.3 用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以注入进样阀，扳下进样阀，工作站采集数据。 4.4清洗管路及进样口 4.4.1分析完毕后，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后以甲醇-水用分析流速冲洗，特殊情况应延长冲洗时间。 4.4.2冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。 4.4.3 关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、使用时间，仪器完好状态等。 4.5注意事项 4.5.1 应用ESLD检测器时禁止用含盐的流动相,气源调节开关一旦调整好就不要随便调动。 4.5.2随时注意排气管口和液体收集瓶。
应用蒸发光散射检测器的含量计算 1.检测器响应和定量分析 响应是随着散射范围的变化而变化，我们假设样品的范围很大，测得的峰面积与样品的质量有如下关系： A=am b（1） a、b是相关系数，它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。等式1反应出A和m是非线性关系；等式1取对数得到等式2，等式2中㏒A和㏒m是线性关系： ㏒A=b㏒m＋㏒a （2） 2.标准曲线的计算： 例如：称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中，定容，其含量为310ug/ml。 进样量5ul，得X1：310 ug/ml×5/1000＝1.55×10-6，其得到的面积为Y1=79.50。 进样量10ul，得X2：310ug/ml×10/1000＝3.10×10-6，其得到的面积为Y2=203.61。 将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积，分别取对数列表如下： _ _ _ ∑（m i－m）（A i－A）∑m i A i－m∑A i 回归系数：b=---------------------------------- = ----------------------------- （1） _ _ ∑（m i－m）2∑m i2－m∑m i 1.496149－0.340845×4.20917 0.061474 b= --------------------------------------------- = ----------------- = 1.356757 0.2776605－0.340845×0.68169 0.0453095 _ _ 截距：a= A－b m （2） a=2.104585－1.356757×0.340845 = 1.64241 设：Y = ㏒Y1=194.35A , X = b㏒m , C = ㏒a , 得：Y = X + C 已知称取供试品0.5330g至25ml容量瓶中，加溶剂至刻度，其含量为213.2ug/ml。 进样量10ul，得X1：21.32×10/1000＝21320×10-6，其得到的面积为Y1=194.35。 Y1=194.35 , ㏒2.288585 = 1.356757㏒m ＋1.64241 2.288585 －1.64241 0.646175 ㏒m = ------------------------------- = ----------------- = 0.476264 1.356757 1.356757
ELSD检测器原理 2.1蒸发光散射检测器原理 ELSD原理适用所有待测物的挥发性低于流动相的分离，事实上，新一代ELSD检测器在操作上提供更低的温度，允许半挥发性被分析物的定量，即使检测器的灵敏度可能较低。不挥发溶质，在分析柱的检测极限可以达到毫微克(ng)水平。 采用SFC，超临界流体（通常是二氧化碳）在周围环境大气压和温度条件大气中进行减压和膨胀，不像HPLC，流动相在减压作用下蒸发，形成气流，运载样品以微小颗粒喷雾的形式采用光散射检测。 应用于SFC的限制和其它形式的液相相同，也就是说，溶剂修饰物必须比被分析物具有更高的挥发性。 图1阐明蒸发光散射检测器依次发生的三个主要步骤： 色谱洗脱液的雾化 色谱流动相的蒸发 对含有待测物的剩余颗粒的光散射 每个步骤都具有明确的功能但也会改变，或者是受其它步 骤的影响，所有市场上的蒸发光散射检测器都包含以上步 骤，但在他们操作方法上会有所不同。 因为ELSD易受非线性响应的影响，所以这篇文章的 一部分专门谈到检测器的响应和定量。 图1 2.1.1雾化 这个步骤把大量体积的液体流动相转变成细小的液滴，从而溶剂更易于蒸发；较大的液滴，在蒸发步骤中需要更高的温度。剩余溶质颗粒越大，散射光的强度就更大。 在所有商业上的ELSD，雾化都是用惰性载气通过文丘里管流动，采用载气同轴包装柱洗脱液，使之通过小孔。液滴的大小和均匀性对于检测的灵敏度和重复性非常重要。在一些型号的ELSD，雾化洗脱液立即进入加热的蒸发管，一般情况下是漂移管，在这里开始进行第二步骤。但是，另一型号的则包含一个雾化室（图1）它被认为可以在三个方面增强检测器的操作。 可形成一个窄的液滴尺寸分布，最大的液滴通过在室的内壁冷凝，然后直接到废物出口或排出，在这里连续地虹吸冷凝液体。所以，用于蒸发保留的液滴所需要的蒸发温度大大降低。 柱洗脱液直接通过蒸发管的比例变化为，以纯水溶液作为淋洗液的小于10%，以有机溶剂混合液作为正相色谱洗脱液的为90-100%。这个比例与原子光谱和连接红外光谱（FTIR）和感应耦合等离子体（ICP）不同检测系统的液相作出的雾化情况非常一致。 雾化过程的温度与漂移管的蒸发温度可以各自进行独立的调节。这使得检测器很容易与SFC系统结合，在SFC系统流动相的快速减压具有很大的吸热性，通常会造成固态二氧化碳的形成。通过准确的调节雾化室的温度，可以避免由于大的温度波动影响重现性和流动相的沉淀。采用HPLC，半挥发性分析物的定量检测也可通过降低雾化室的温度来得以增强。相反的，在凝胶渗透色谱（GPC）中，高温度允许采用非常低挥发性的溶剂。雾化室的加入使得检测器的清洁简单化。 2.1.2 蒸发 当载气从雾化室把液滴运送到加热漂多管时，蒸发开始。在加热漂移管溶剂被除去，产生微粒或纯溶质的小滴，为了维持颗粒大小的均匀性，在这个步骤中尽量采用低的温度是相当重要的。此外，低温蒸发增强溶质结晶化，溶质颗粒越大，检测光散射的强度就越大。还有，这已被清楚的证明，相同大小的固
蒸发光散射检测器的工作原理和主要优势 点击次数：407 发布时间：2009-6-9 10:22:27 蒸发光散射检测器已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测。 蒸发光散射检测器工作原理 雾化： 液体流动相在载气压力的作用下在雾化室内转变成细小的液滴，从而使溶剂更易于蒸发。液滴的大小和均匀性是保证检测器的灵敏度和重复性的重要因素。 UM 3000蒸发光散射检测器，通过对气压和温度的精确控制，确保在雾化室内形成一个较窄的液滴尺寸分布，使液滴蒸发所需要的温度大大降低。 蒸发： 载气把液滴从雾化室运送到漂移管进行蒸发。在漂移管中，溶剂被除去，留下微粒或纯溶质的小滴。UM 3000蒸发光散射检测器采用低温蒸发模式，维持了颗粒的均匀性，对半挥发性物质和热敏性化合物同样具有较好的灵敏度。 检测： 光源采用650nm激光，溶质颗粒从漂移管出来后进入光检测池，并穿过激光光束。被溶质颗粒散射的光通过光电倍增管进行收集。溶质颗粒在进入光检测池时被辅助载气所包封，避免溶质在检测池内的分散和沉淀在壁上，极大增强了检测灵敏度并极大地降低了检测池表面的污染。 蒸发光散射检测器主要优势 1）可检测挥发性低于流动相的任何样品；
2）流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度；3）广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰； 4）辅助载气提高了检测灵敏度，保持检测池内的清洁，避免污染； 5）高精度雾化和蒸发温度控制，保证高精度检测； 6）可与任何HPLC系统连接。 ELSD与几种常用的检测器之间的对比 ELSD UV RID MS 应用范围通用有光吸收的化合物通用通用 响应质量相关化学相关折光度相关质量相关 灵敏度高高低高 未知物检测能不能能能 流动相影响/梯度不影响本底影响影响不影响 基线稳定性好较好差好
1. 简介 蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD ELSD的应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化，并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定，与梯度洗脱不相容。另外，示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰，并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器，ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线，使得分辨率更好、分离速度更快。另外，因为ELSD 的响应不依赖于样品的光学特性，所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 1.3 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为，首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 步骤1：雾化 步骤2：蒸发 步骤3：检测
雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器，在此与稳定的雾化气体（一般为氮气）混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成，液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大，液滴越大则散射的光越多，从而提高了分析灵敏度，但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。 流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为2.1mm的微径柱代替内径为4.6mm标准型分析柱，能大大降低流动相流速，因而提高分析的灵敏度。 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度，取决于流动相组成和流速，以及样品的挥发性。高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度，以获得最佳灵敏度。最佳温度需要通过观察各温度时的信号噪音比率来确定。 检测 悬浮于流动相蒸汽中的样品颗粒从漂移管进入到光散射检测池。在检测池中，样品颗粒散射激光光源发出的光而蒸发的流动相不散射。散射光被硅光电二极管检测，产生电信号输送模拟信号输出端口，被用于模拟输出的数据采集。
◆目的：制定ELSD-UM3000蒸发光散射检测器标准操作规程。 ◆范围：适用于ELSD-UM3000蒸发光散射检测器操作。 ◆职责：检验人员对本规程的实施负责。 ◆内容 1仪器组成、电源 1.1仪器组成：ELSD-UM3000蒸发光散射检测器，配件：XWK-Ⅲ型空气压缩机，相关 连接设备：岛津LC-15C泵、ZW色谱柱柱温箱。 1.2接通电源：将各仪器电源插头插入插座内，依次打开检测器、柱温箱、压缩机、 泵及计算机开关。 2操作 2.1开空气压缩机电源，阀门开一圈半，压力调为指定值。 2.2接柱子：褐色管接柱子入口，透明管接检测器，内部干燥珠必须保持干燥状。 2.3如果使用单泵，开岛津A泵“power”键，仪器由红灯转换为绿灯，更换所需要的流动相，然后将排液阀旋钮逆时针旋转180°以打开排液阀。 2.4按“purge”键运行，开始冲洗。如果排液阀旋钮旋转的度数超过180°，任何排出的流动相都可能包含气泡。这是正常现象。 2.5清洗完成后，以顺时针方向尽量旋转排液阀旋钮，关闭排液阀。按下“pump”键，开始泵的运行。 2.6如果使用双泵，打开两个泵的电源开关，分别更换所需要的流动相、冲洗、运行。 2.7设定泵的最高压力及流速，将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏，初始平衡时间一般需30分钟。
2.8开蒸发光散射器检测电源，设置仪器参数。 2.8.1MENU:设温度（T），室温最高到130℃。用方向键的上、下、左、右进行调节。设置完成后按“Enter”。 2.8.2 设流量（F）：雾化器流量（1-4L）；一般设为每分钟2.5，设置完成后按“Enter”。 2.9设置完成上面步骤后，按“RUN”键运行，“RUN”指示灯亮，再按“VALVE”键，“VALVE”指示灯亮。 2.10设置完成。 3工作站 3.1 打开电脑启动N2000在线工作站，选择通道1，OK。 3.2 设实验信息，方法，条件，保存路径。 3.3方法：采集时间第一次可设长些（默认60分钟），但是必须先设定，之后能够调节，设定后的到时间会自动停止。采集也可以手动停止。采样后勾选自动积分。3.4 文件保存名字：自动方式：前缀+计数。保存路径设置 3.5积分：最小面积500-100.设置完成后点击右下角的“采用”完成设置。 3.6报告编辑：勾选系统评价，谱图显示，网格线（背景），实验简介，完成后点击采用。 3.7谱图显示：设定时间，电压。 4 数据采集 4.1点击“查看基线”，待基线平衡后，点击“零点校正”，调整时间，电压到合适范围。 4.2 进样：吸取不少于60μl的样品，插入进样口，打开进样阀至“load”，将样品全部摄入进样口，打下进样阀至“inject”。在电脑上点击“采集数据”，即完成采集。 4.3采集时间完成后。点击“停止采集”，输入实验名称保存即可。 5 谱图处理（离线） 5.1打开离线工作站，打开文件，设置坐标，点击“显示设置”，设置电压时间。 5.2 积分方法：设最小面积，除去杂峰点采用，如有杂峰没有去处，点击“手动”—删除峰。最后调节峰的起落点。
中黄芪甲苷的含量 【摘要】 目的建立高效液相-蒸发光散射检测法测定龙生蛭胶囊中黄芪甲苷的含量。方法色谱柱为Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流动相为乙腈 -水(33∶67),流速1.0 ml/min。ELSD参数：漂移管温度105℃，气体流量2.8 ml/min。结果黄芪甲苷在2.45～10.64 μg的线性关系良好(r=0.999 2,n=5)。结论方法简便准确，重现性好，灵敏度高。 【关键词】蒸发光散射检测高效液相色谱；龙生蛭胶囊；黄芪甲苷 Determination of Astragaloside in Longshengzhi Capsules by ， (Xianyang Buchang Pharmaceutical Co., Ltd. 712000, China) Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for determining the contents of astragaloside in Longshengzhi capsules.MethodsThe chromatographic column was Diamosil C18(250 mn×4.6 mm,5 μm). The mobile phase was ace tonitrile- water(33∶67)and the flow rate was 1.0 ml/min.The drift tube temperature was at 105℃.The gas flow rate was at 2.8 ml/min.ResultsWithin the range of 2.45～10.64 μg, the content of astragaloside had a good linear ratationship (r=0.999 2,n=5).ConclusionThe method is easy,reliable,sensitive and reproducibile. Key words：HPLC-ELSD； Longshengzhi capsules； Astragaloaside 龙生蛭胶囊是由黄芪、地龙、水蛭、赤芍等药材组成，具有补气活血、逐 淤通络的功效。黄芪为其君药，所含黄芪甲苷为其主要活性成分。目前质量标 准多采用薄层扫描法，考虑到薄层扫描操作繁琐，引起误差环节比较多，本文
应用蒸发光散射检测器 的含量计算 标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]
应用蒸发光散射检测器的含量计算 1.检测器响应和定量分析 响应是随着散射范围的变化而变化，我们假设样品的范围很大，测得的峰面积与样品的质量有如下关系： A=am b（1） a、b是相关系数，它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。等式1反应出A和m是非线性关系；等式1取对数得到等式2，等式2中㏒A和㏒m是线性关系： ㏒A=b㏒m＋㏒a（2） 2.标准曲线的计算： 例如：称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中，定容，其含量为310ug/ml。 进样量5ul，得X1：310ug/ml×5/1000＝1.55×10-6，其得到的面积为Y1=79.50。 进样量10ul，得X2：310ug/ml×10/1000＝3.10×10-6，其得到的面积为Y2=203.61。 将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积，分别取对数列表如下： ___ ∑（m i －m）（A i －A）∑m i A i －m∑A i 回归系数：b=----------------------------------=-----------------------------（1） __ ∑（m i －m）2∑m i 2－m∑m i 1.496149－0.340845×4.209170.061474 b=---------------------------------------------=-----------------=1.356757 0.2776605－0.340845×0.681690.0453095 __ 截距：a=A－bm（2） a=2.104585－1.356757×0.340845=1.64241 设：Y=㏒Y1=194.35A,X=b㏒m,C=㏒a,得：Y=X+C 已知称取供试品0.5330g至25ml容量瓶中，加溶剂至刻度，其含量为213.2ug/ml。 进样量10ul，得X1：21.32×10/1000＝21320×10-6，其得到的面积为Y1=194.35。 Y1=194.35,㏒2.288585=1.356757㏒m＋1.64241 2.288585－1.642410.646175 ㏒m=-------------------------------=-----------------=0.476264 1.3567571.356757 ㏒m=0.476264取反函数得：m=2.994084 2.994084 供试品的含量％＝------------------×100%=1.404%
应用蒸发光散射检测器的含量计算1.检测器响应和定量分析 响应是随着散射范围的变化而变化，我们假设样品的范围很大，测得的峰面积与样品的质量有如下关系： A=am b（1） a、b是相关系数，它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。等式1反应出A和m是非线性关系；等式1取对数得到等式2，等式2中㏒A和㏒m是线性关系： ㏒A=b㏒m＋㏒a（2） 2.标准曲线的计算： 例如：称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中，定容，其含量为310ug/ml。 进样量5ul，得X1：310ug/ml×5/1000＝1.55×10-6，其得到的面积为Y1=79.50。 进样量10ul，得X2：310ug/ml×10/1000＝3.10×10-6，其得到的面积为Y2=203.61。 将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积，分别取对数列表如下： ___ ∑（m i－m）（A i－A）∑m i A i－m∑A i 回归系数：b=----------------------------------=-----------------------------（1） __ ∑（m i－m）2∑m i2－m∑m i 1.496149－0.340845×4.209170.061474 b=---------------------------------------------=-----------------=1.356757 0.2776605－0.340845×0.681690.0453095 __ 截距：a=A－bm（2） a=2.104585－1.356757×0.340845=1.64241 设：Y=㏒Y1=194.35A,X=b㏒m,C=㏒a,得：Y=X+C 已知称取供试品0.5330g至25ml容量瓶中，加溶剂至刻度，其含量为213.2ug/ml。 进样量10ul，得X1：21.32×10/1000＝21320×10-6，其得到的面积为Y1=194.35。 Y1=194.35,㏒2.288585=1.356757㏒m＋1.64241 2.288585－1.642410.646175 ㏒m=-------------------------------=-----------------=0.476264 1.3567571.356757 ㏒m=0.476264取反函数得：m=2.994084 2.994084 供试品的含量％＝------------------×100%=1.404% 213.2
蒸发光散射检测器(ELSD)简介 前期，在「talk」和「Applications」上介绍了蒸发光散射检测器，许多读者来信要求「进一步介绍ELSD」。这次，就ELSD进行谈话。 ■使用ELSD？ ELSD（Evaporative Light Scattering Detector）是柱洗脱液进行喷雾，流动相溶剂蒸发，留下的不挥发成分用光照射，检测它的散射光的检测器。也就是说，与流动相在一起但未蒸发的物质基本上都可检测，因此称为「Universal Deteetor」。实际上，这种ELSD，早在20多年前已经出现，但由于存在灵敏度和稳定性等难点，未能广泛普及。近年来，特别是由于药品部门的需求提高，经过多次改良，性能也显著提高，再次受到注目。 ■ELSD的原理 图1表示的是岛津ELSD-LT的检测原理。ELSD的检测过程分①柱洗脱液的喷雾，②流动相的蒸发和③不挥发成分散射光的检测三步。柱洗脱液在喷雾器中用氮或空气进行喷雾。然后进入称为漂移管的温度调节管中，流动相蒸发去除，只将不挥发成分送入检测器。在检测器用光照射这些成分，它的散射光用光电倍增管进行检测。图2是检测部的构造图。 ■ELSD vs RID 没有UV吸收，也都能检测……这句话，想起示差折光检测器（RID）。RID是利用试样成分与流动相的折射率的差进行检测，而通常由于它们的折射率多少都有些差，基本上什么都能检测。然而，如果检测原理完全不同的ELSD与RID相比较，会是怎样呢？[ELSD的优点] 首先是灵敏度。利用糖类分析进行比较时，ELSD高5-10倍S/N。其次，使用RID时易产生烦恼的基线漂移。由于RID是检测流动相与试样的极小的折射率差，流动相的折射率必须经常固定，处于稳定状态。但是由于折射率受微小的温度变化和流量变化的影响，即使最新的装置在高灵敏度分析时也很难取得笔直的基线。何况，梯度洗脱还有许多意想不到的情况。而ELSD就没有这些烦恼的事情。特别是适用于梯度洗脱，这点是没有UV吸收的多成分分析中强有力的检测手段。还有，使用RID在试样溶剂与流动相不同时，有时它的溶剂峰会干扰目标成分的峰，但是，ELSD没有这个问题。 [ELSD的注意点] RID上使用的流动相不受特殊的制约，但是，ELSD由于以流动相挥发为大前提，限定为挥发性物质。即，不能使用磷酸缓冲液等。还有，由于尘埃、不溶物，要注意，流动相中的杂质和柱填充剂洗脱物等是产生噪声的原因。其中还有一点……。RID可在宽广的范围内取得直线性，而ELSD由于原理上物质量与散射强度成为指数关系，必需采用双对计算使工作曲线线性化。 ■ELSD所对应领域 ELSD从过去就是用于UV检测困难的糖类和脂质有关的分析，但最近，用作药品领域的杂质确认受到注目。 图1 检测原理（ELSD-LT）图2 检测部的构造12
高效液相色谱-蒸发光散射检测法 同时测定四君子丸中的5种有效成分 四君子丸为四君子汤的现代剂型，由党参、白术、茯苓、炙甘草组成，被《中华人民共和国药典》(2005版)收载［1］。现代药理学研究证明，四君子汤可增强机体的抵抗力，调节机体各方面的功能，对垂体、心血管功能、消化道运动功能和免疫功能有明显的改善作用［2］。四君子丸含有党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ等主要活性成分［3－7］。对于党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的定量分析方法，已有的文献报道均是对其中的一种或两种成分进行测定［8－14］，尚未见对上述5种活性成分同时测定的报道。按照药典［1］的规定，对四君子丸的鉴定仅依靠薄层色谱法进行，结果比较粗放。本文对四君子丸中的上述5种活性成分同时进行了含量测定，可为四君子丸的全面质量控制提供实验依据。 1实验部分 1.1仪器与试药 LC7000高效液相色谱仪(海能仪器)，包括LC7011输液泵，LC7070蒸发光散射检测器;HanonClatity色谱工作站。HIQ SIL C18V色谱柱(250mm× 4.6mm，5μm)。甲醇(色谱纯)，二次蒸馏水(自制)，冰醋酸(分析纯);党参炔苷、苍术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、茯苓酸和甘草酸铵对照品;党参、白术、茯苓、甘草均购于济南漱玉平民药店;用于方法优化的四君子丸样品为自制，每丸平均质量为3.0g，符合中国药典对丸剂的各项规定要求。测定的四君子丸实际样品分别为5个药品生产厂家的产品。 1.2对照品溶液的制备 分别精密称取党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ对照品适量，分别配制质量浓度为6. 03，3.78，12.24，3.62，7.80g/L的储备液。将上述5种储备液各取500μL混合、摇匀，即得含党参炔苷1.21g/L、茯苓酸0.76g/L、甘草酸2.45g/L、苍术内酯Ⅲ0.72g/L和白术内酯Ⅰ1.56g/L的混合对照品储备液。 1.3供试品溶液的制备 取丸剂研碎，并称取1.00g，加入乙醇15mL，超声提取30min，过滤。滤渣再重复提取2次。合并提取液并浓缩，转移至10mL容量瓶中，用乙醇定容，摇匀;取其中1mL于16000r/min速率下离心10min，上清液作为供试品溶液。 1.4色谱条件 色谱柱:HIQ SIL C18V柱(250mm× 4.6mm，5μm);流动相:0.5%冰乙酸水溶液为流动相A，甲醇为流动相B;梯度洗脱程序:0－40min，80%A－20%A;流速: 1.0mL/min;进样量:10μL;漂移管温度:55℃;喷雾器加热级别:60%;载气:氮气，压力0.2MPa;信号增益值:50。 2结果与讨论 2.1色谱条件的优化 2. 1.1检测器的选择 由于欲测定的样品中苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的紫外吸收比较弱，且苍术内酯Ⅲ含量较低，为了提高检测的灵敏度，本文采用蒸发光散射检测器检测。以信噪比(S/N)为指标，分别对蒸发光散射检测器的漂移管温度和载气压力进行了优化。结果在漂移管温度55℃、载气压力0.2MPa(30psi)时，可以获得最佳的信噪比。 2. 1.2流动相及洗脱程序的优化 本文的前期研究工作发现，四君子丸提取物的组成复杂，干扰成分多，欲测定的各组分的保留因子范围较宽，不适宜等度洗脱，因此选择了梯度洗脱。流动相分别选择甲醇-水(含冰乙酸)、甲醇-水(含磷酸)体