药物急性半数致死量（LD50）的测定
【目的】
了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定方法和计算过程。
【原理】
LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。
LD50的测定方法很多，例如目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss氏法）、寇氏法（Karber氏法）及序贯法等，其中Bliss氏法最常用。此法要求剂量按等比级数排列，每组小鼠数相等（不应太少，一般10-20只），剂量范围接近或等于0%-100%死亡率之间，一般分5-8个剂量组。
【实验材料】
1、动物：小白鼠，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁食12小时，不禁水。
2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。
3、器械：小鼠笼，天平，注射器（1mL），电子计算器。
【方法和步骤】
（一）预备实验
1、探索剂量范围：
先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（Dm及Dn）。方法是先取出小鼠9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或文献资料定出）给药，如3只小鼠全死则降低剂量一半，如全不死则增加剂量一倍，如部分死亡，则按2：1的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。
2、确定组数，计算各组剂量：
确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，一般分5-8个剂量组。
计算各组剂量：要求各组剂量按等比级数排列，在找出Dm及Dn和确定组数后，可按下列公式求出公比r：
r =（G-1）√D m/D n
再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……Dm，其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1r; D3=D2r; D4=D3r; D5=D4r; ……DG=DG-1r。r值一般以~之间为宜。
计算举例：已知某药在致死毒性实验中，Dm= mg/kg; Dn= mg/kg, 确定组数G=5，求r及各组剂量。先代入公式求r=，再计算各组剂量D1=Dn= mg/kg, D2==96 mg/kg, 依次计算D3，D4，及DG(D5)分别为120，150， mg/kg。
3、配制等比稀释药液系列，使每只小鼠给药容量相等，一般为 mL/10g。母液浓度C= Dm/等容注射量，如某药的Dm= mg/kg，等容注射量为 mL/10g，则母液浓度C=（mg/kg）/（mL/10g）=%。按此配制母液25mL放入5号小烧杯，即为5号液；从中吸出20 mL 放入4号小烧杯，加水至25mL，即为4号液；再吸出20mL 4号液放入3号杯中，加水至25mL，即为3号液，如此类推，配制出2号液和1号液。
（二）正式实验
1、分组编号：称各小鼠体重，将体重相同小鼠放一笼，分别用苦味酸做好标记。再按确定组数（5组）分层随机分组，使各组平均体重及性别分布尽可能一致，每组一般用小鼠10只（5只雄性，5只雌性）。
2、给药：先计算各体重组小鼠腹腔等容注射药量（10g），取相应的等比稀释药液，给各组小鼠腹腔注射。给药顺序：如分为5组，先按2、
3、4组顺序给药，再根据实验结果决定是向下或向上注射。