收稿日期:2010-07-21;修回日期:2010-10-07
基金项目:贵州省科学技术基金资助项目[黔科合J 字(2009)2321号];贵州大学博士基金资助项目[贵大人基合字(2009)008号]作者简介:邓国栋(1972-),男,贵州威宁人,博士,副教授。研究方向:天然产物生化分离。E -m a i l :d e n g g u o d o n g 2@163.c o m
荷叶黄酮类化合物提取工艺研究
＊
邓国栋,庄大海
(贵州大学生命科学学院,贵州贵阳 550025)
摘 要:以总黄酮得率为指标,利用单因素试验确定提取溶剂,通过正交试验法优化提取工艺参数。结果表明:以乙醇为溶剂,回流提取的最佳工艺条件为:提取温度70℃,乙醇体积分数45%,料液比1∶20,提取时间3h ,回流提取2次。在此条件下,总黄酮得率为8.8%,说明该提取工艺设计合理,稳定可行,操作简便,为荷叶黄酮的研究和开发提供了借鉴。
关键词:荷叶;总黄酮;提取工艺;优化
中图分类号:R 248.2 文献标识码:A 文章编号:1008-0457(2010)05-0428-04
T h e E x t r a c t i o n P r o c e d u r e o f T o t a l F l a v o n o i d s f r o m L o t u s L e a f
D E N GG u o -d o n g ,Z H U A N GD a -h a i (C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e s ,G u i z h o uU n i v e r s i t y ,G u i y a n g G u i z h o u 550025,C h i n a )
A b s t r a c t :T o o p t i m i z e t h e e x t r a c t i o np r o c e d u r e o f t o t a l f l a v o n o i d s f r o ml o t u s l e a f ,t h e o p t i m a l e x t r a c t i o ns o l -v e n t s a n d e x t r a c t i o n p r o c e s s w e r e e x a m i n e d b y s i n g l e f a c t o r t e s t a n d o r t h o g o n a l t e s t ,r e s p e c t i v e l y .T h e o p t i m a l p a r a m e t e r s w e r e 45%e t h a n o l ,1∶20s o l i d -l i q u i d r a t i o ,2t i m e s o f e x t r a c t i o n a t 70℃a n d e a c h 3h ,b y w h i c h t h e t o t a l f l a v o n o i d s y i e l d r a t e w a s 8.8%.T h e e x t r a c t i o n p r o c e d u r e w a s r e l i a b l e a n d s i m p l e ,w h i c h p r o v i d e d a b a s i s f o r f u r t h e r e x p l o i t a t i o n o f n a t u r a l r e s o u r c e .
K e yw o r d s :L o t u s l e a f ;T o t a l f l a v o n o i d s ;e x t r a c t i o n p r o c e s s ;o p t i m i z a t i o n
荷叶为睡莲科植物莲(N e l u m b o N u c i f e r aG a e r t n M )的叶片,可“药食两用”[1]
,具有调节血脂、镇咳祛
痰、降低血压、解痉等作用,临床用于治疗高脂血症、肥胖、肺炎、小儿夏季热等症。现代药理研究表明,荷
叶的生物活性和生理功能主要与其含有的生物碱、黄酮类等功能性成分有关
[2]
。
目前,关于荷叶有效成分的黄酮的提取工艺研究报道较多针对浸提、回流提取和超声辅助浸提法。超声辅助浸提法与其他两种方法相比,具有提取效率较高、产品活性也较高的优点,但在生产上难以满足大规模提取的要求,生产成本也较高,难以工业推广;回流提取法与浸提法都能够满足工业规模生产要求,并且具有设备投资较少、生产成本较低的优点,因此,工业提取黄酮等活性物质较多采用上述两种方法;回流提取法与浸提法相比,具有原料提取率和产品纯度都较高的优势,但生产成本也相对较高
[3-7]
。当前,
有关回流提取的研究对于保证提取效果的基础上如何优化工艺降低生产成本研究则较少,为此,本文采用正交试验设计系统研究了回流提取荷叶黄酮的最佳工艺条件,考察了不同提取条件对黄酮得率的影响,以优化工艺降低提取成本,为荷叶黄酮的研究开发提供基础数据。
山地农业生物学报29(5):428～431,2010J o u r n a l o f M o u n t a i n A g r i c u l t u r e a n d B i o l o g y
DOI :10.15958/j .cn ki .sd nys w xb .2010.05.005
1 材料与方法
1.1 材料
干荷叶购自贵阳市中药材市场。该药材经贵州师范大学生命科学学院植物学教研室罗冲教授鉴定为睡莲科植物莲的叶片。1.2 仪器与药品
T U 1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);B C -W 201恒温水浴锅(上海贝瑞生物化工设备有限公司);T D L -60B 台式离心机(上海安亭科学仪器厂);F A-1004电子天平(上海精科天平仪器厂);D H G-9425A 电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);芦丁对照品(中国药品生物制品检定所);氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、甲醇、乙醇等均为市售分析纯。1.3 方法
1.3.1 总黄酮得率的测算方法 参照文献[4]的方法,称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品10.0m g ,置50.0m L 容量瓶内,用体积分数为70%的乙醇溶解并稀释至刻度,即得芦丁对照品溶液。吸取0.4、0.8、1.2、1.6、
2.0、2.5、
3.0m L 芦丁对照品溶液置10.0m L 容量瓶中,分别补加体积分数为70%的乙醇至5.0m L ,顺序加入质量分数5%的N a N O 2溶液0.3m L(放置6m i n ),质量分数10%的A l (N O 3)3溶液0.3m L (放置6m i n ),质量分数4%的N a O H 溶液
4.0m L ,再加入体积分数70%的乙醇溶液至刻度,摇匀,静置15m i n 后在510n m 处测定吸光度值。以吸光度(A )对浓度(C )回归处理得标准曲线方程:A =0.0057C -0.015(r =0.9996)。取各待测样0.1m L ,按上述标准曲线显色方法显色后在510n m 处测定吸光度值,根据上述标准曲线方程计算总黄酮的得率,即:e =Y A V /W 。式中,Y 为黄酮类化合物的质量浓度(g /L );V 为原提取液体积(m L );W 为荷叶粗粉质量(m g );A 为稀释倍数。
1.3.2 正交试验设计与提取工艺优化 以总黄酮得率为指标,采用L 9(34
)正交试验,对回流提取工艺中乙醇浓度、回流时间、回流温度和料液比4个因素进行优化,试验重复2次,结果取平均值。
2 结果与分析
2.1 提取溶剂的影响
分别考察甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等不同溶剂的提取效果,见表1。从表1可知,以甲醇做溶剂的提取效果最高,乙醇次之,水居中,丙酮和乙酸乙酯较差。对甲醇和乙醇而言,乙醇毒性更小,更安全,价格便宜,易回收利用,故选择乙醇作为提取溶剂。2.2 乙醇体积分数对提取效果的影响
称取5g 荷叶粉末置于圆底烧瓶中,分别用不同体积分数的乙醇溶液(40%、50%、60%、70%、80%、90%),在80℃下回流提取3h ,料液比为1∶20。提取液用1.2的试验方法操作,结果如图1所示。
由图1可以看出,当乙醇体积分数为50%时,表1 不同溶剂对总黄酮得率的影响T a b .1 E f f e c t s o f s o l v e n t s o ne x t r a c t i o ne f f i c i e n c y
溶 剂 总黄酮得率(%)
丙酮
4.1
乙醇
5.2乙酸乙酯3.8甲醇
6.4水
4.7
提取的总黄酮类化合物得率最高。因此,体积分数为50%乙醇的提取效果最好。
2.3 提取时间对提取效果的影响
分别称取6份5g 荷叶粉末放入编号为1、2、3、4、5、6的500m L 圆底烧瓶中,都加入体积分数为50%的乙醇溶液100m L ,即料液比为1∶20,在80℃下分别加热回流提取1、1.5、2、2.5、3、3.5h 。提取液用1.2的试验方法操作,结果如图2所示。由图2可以看出,提取时间为2.5h 时提取效果最好,以后随着时间的增加总黄酮得率略有下降,原因可能是由于浸提时间的延长会对一些热量不稳定的黄酮造成破坏。
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第5期 邓国栋,等:荷叶黄酮类化合物提取工艺研究
图1 乙醇体积分数对提取效果的影响F i g .1 E f f e c t o f e t h a n o l v o l u m e o ne x t r a c t i o n e f f i c i e n c
y
图2 提取时间对提取效果的影响
F i g .2 E f f e c t o f e x t r a c t i o n d u r a t i o no n e x t r a c t i o ne f f i c i e n c y
2.4 温度对提取效果的影响
分别称取7份5g 荷叶粉末放入编号为1、2、3、4、5、6、7的500m L 圆底烧瓶中,都加入体积分数为50%的乙醇溶液100m L ,分别在40、50、60、70、80、90、100℃下回流提取3h 。提取液用1.2的试验方法操作,结果如图3所示。由图3可以看出,荷叶黄酮提取的温度以70℃为宜,温度升高后,总黄酮得率反而下降,这可能是高温破坏了某些黄酮类化合物,此外,高温会增加能耗,增加提取成本。
2.5 料液比对提取效果的影响
称取5g 荷叶粉末置于圆底烧瓶中,加入体积分数为60%的乙醇,在70℃下,回流提取2.5h ,料液比分别为1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35。提取液用1.2的试验方法操作,结果如图4所示。由图4可以看出,当料液比达到1∶20时,荷叶黄酮的提取效果最好,再增加乙醇的量会影响总黄酮得率,同时会增加生产成本
。
图3 温度对提取效果的影响
F i g .3 E f f e c t o f t e m p e r a t u r eo ne x t r a c t i o n e f f i c i e n c
y
图4 料液比对提取效果的影响
F i g .4 E f f e c t o f s o l i d -l i q u i dr a t i oo ne x t r a c t i o n e f f i c i e n c y
2.6 正交试验确定提取的最佳条件
为了全面考察影响因素,得到最佳提取工艺,设计了4因素3水平的正交试验,试验因素水平如表2所示,试验结果见表3。由表3可以看出,极差分析A>B>C>D ,提取荷叶黄酮类化合物的最佳条件为A 2B 2C 1D 2,即乙醇体积分数为60%,温度为80℃,料液比为1∶
20,提取时间为2.5h 。表2 正交试验因素水平T a b .2 O r t h o g o n a l e x p e r i me n t d e s i g n
水平A .乙醇体积分数(%)
B .提取温度(℃)
C .料液比
D .提取时间(h )
14565152.025070202.5
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山地农业生物学报
2010年
表3 L 9(
34)正交试验结果T a b .3 R e s u l t s o f o r t h o g o n a l e x p e r i m e n t b yL 9(
34)试验号A 因素B 因素C 因素D 因素总黄酮得率(%)
1
11
1
1
6.0
212227.5313337.3421237.6522317.5623125.8731327.1832136.3933217.3
K 120.820.718.120.8K 220.921.322.420.4K 320.720.421.921.2R
0.2
0.9
4.3
0.8
3 讨论
由表3可以得出,各因素影响顺序依次为C 因素料液比>B 因素提取温度>D 因素提取时间>A 因素乙醇体积分数。由k 值分析可以得知,最佳提取工艺参数组合为A 2B 2C 2D 3,即乙醇体积分数为50%,提取温度为70℃,料液比为1∶20,提取时间为3h 。但从A 因素的k 值分析发现,乙醇体积分数45%和50%
条件下提取效果相当,又因为A 因素对总黄酮得率影响最小,为节约成本,选择乙醇体积分数45%作为优化条件比较适宜。按照优化的工艺参数,对同一药材进行了4次连续提取试验,结果回流提取工艺每次的总黄酮得率分别为7.8%、1.0%、0.4%和0.2%。据此可以看出,此工艺前两次的总黄酮得率分别占4次提取的总黄酮总量的93.4%,从实际生产考虑,以提取2次较为合适。以上研究成果可为利用荷叶工业化生产黄酮类药用成分提供科学依据。
陈海光等
[5]
以荷叶为材料,研究了功能成分黄酮类化合物和生物碱的水提取工艺条件,结果表明,以
水为溶剂来提取荷叶中的黄酮类化合物及生物碱时,较佳的工艺条件为:以30倍的水,于80～90℃提取
1.5h ;康璇等[6]
研究了利用乙醇为溶剂提取荷叶中的黄酮类化合物的优化工艺,较佳的工艺条件为:提取温度为80℃,料液比为1∶20,乙醇体积分数为50%,提取时间为3h 。研究结果与笔者的研究结果相比较,提取温度或提取时间存在一定差异,说明荷叶黄酮提取工艺条件与荷叶的产地、采摘时间及荷叶干燥方式等有关,今后在这些方面还有待进一步研究。此外,丁芳林等[7]
研究了利用超声波技术提取荷叶中黄酮类化合物优化工艺,确定了最佳提取条件为:提取温度35℃,乙醇体积分数50%,料液比1∶20,超声提取20m i n 。与本研究相比,超声波辅助提取工艺提取温度较低,提取时间也较短,这有利于节约成本,更好地保存产品活性,但超声提取应用于工业提取时存在着设备投资较大和难于对大量样品进行处理等问题,在这些方面传统的提取方式具有明显的优势,今后有待发展高效、实用的提取技术与装备应用于黄酮等生物活性物质的生产制备。
参 考 文 献:
[1]王玲玲,刘 斌,石任兵,等.荷叶黄酮类化学成分研究[J ].北京中医药大学学报,2008,31(2):116-118.[2]刘淑萍,樊淑彦,厚海妮,等.荷叶化学成分及药理作用研究进展[J ].河北医科大学学报,2004,25(4):254-256.[3]唐德智.黄酮类化合物的提取、分离、纯化研究进展[J ].中药与天然药物,2009,21(12):101-104.[4]邓胜国,邓泽元,黄 丽.荷叶黄酮体外抗氧化活性的研究[J ].食品科技,2006(7):274-276.[5]陈海光,余以刚,曾庆孝.荷叶黄酮及生物碱的提取研究[J ].食品科学,2003,23(1):69-72.
[6]康 璇,王在贵,高雪英,等.荷叶黄酮的提取工艺研究[J ].安徽农业科学,2009,37(23):11179-11180.[7]丁芳林,彭书练.超声提取黄酮工艺研究[J ].湖南农业科学,2007(6):175-177.
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第5期 邓国栋,等:荷叶黄酮类化合物提取工艺研究
黄酮类化合物提取方法的研究 发表时间：2019-07-23T09:36:27.620Z 来源：《医师在线（学术版）》2019年第10期作者：鲍兴隆[导读] 旨在研究黄酮类化合物的提取分离工艺，为选择合适的方法提供参考依据。 浙江大学校医院浙江杭州310000 摘要：近年来，随着对黄酮研究的深入，国内外对黄酮的研究也越来越重视，本文旨在研究黄酮类化合物的提取分离工艺，为选择合适的方法提供参考依据。通过对比黄酮类化合物传统及新型方法的总黄酮提取率发现，新型提取方法相对于传统提取法而言提取率具有明显优势，但新型提取技术对原料、设备、处理要求也相应提高，目前国内外研究相对偏少。 关键词：黄酮类化合物；微波提取；超临界流体萃取法 黄酮类化合物是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮结构的化合物，泛指两个苯环通过三个碳原子或一个吡喃环或吡喃环连接而成的化合物，主要包括：黄酮和黄酮醇类、二氢黄酮和二氢黄酮醇、异黄酮类及二氢异黄酮类、查尔酮和二氢查耳酮类及花青素类等[1]。黄酮类化合物属植物次生代谢产物，在植物体内大部分与糖结合成苷类，小部分以苷元的形式存在，具有多种生物活性，有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老等药理活性，在医药、保健食品等行业中均有广泛的开发利用。对黄酮类化合物的提取有传统的超声波提取法等；以及新型的：微波提取法、超临界流体萃取法、双水相萃取法等。 1传统提取方法 1.1超声波提取法 超声波空化作用使植物细胞壁及整个生物体破裂，这样有利于黄酮类化合物的释放和溶出，另一方面可加速提取液的分子运动，使得提取液和苎麻叶中的黄酮类化合物快速接触，相互溶合、混合，此外超声波热效应也有利于水溶作用，有效缩短了提取时间。贺波[2]以“华苎4号”苎麻叶为原料，采用超声辅助提取法,通过单因素及正交实验,得出最佳的提取工艺条件是：液固比30:1,乙醇浓度70%,超声功率60W,超声时间30min,超声温度60℃,提取一次。在此工艺条件下苎麻叶中黄酮类化合物得率为4.94%。2新型提取方法 2.1微波提取法 微波提取法是微波转化成热能使细胞内部温度上升，当细胞内部压力超过细胞壁的承受能力，细胞破裂，其有效成分流出，在较低的温度条件下萃取介质捕获并溶解。此外，微波产生的电磁场还能加速被萃取部分成分向萃取溶剂界面扩散速率，缩短萃取组成的分子由物料内部扩散到萃取溶剂界面的时间。张海慧等[3]以黑穗醋栗为试材，进行单因素实验，在此基础上设计了四因素三水平正交试验。最后确定了微波辅助法提取黑穗醋栗黄酮的最佳条件为：以95%乙醇为溶剂，微波功率500W，微波65℃，提取8min，液料比10:1，此时提取率可达到0.738mg/g。张鹏等[4]通过实验得出银杏黄酮微波提取的最佳条件为乙醇浓度50%，料液比1:25，回流温度70℃，微波时间120s，在此条件下总黄酮提取率为11.02%。与传统方法相比，微波提取法具有省时、节约溶剂、提取率高等优点，有较大的推广价值。 2.2超临界流体萃取法 超临界流体萃取分离过程的原理是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。余青等[5]采用单因素与正交试验对超临界CO2萃取具乌饭树叶总黄酮的工艺进行了研究，结果表明，最佳提取条件为：萃取压力18MPa，萃取时间1.5h，萃取温度50℃，夹带剂乙醇浓度75%，CO2流量20kg/h，夹带剂添加量5mL/g在此条件下乌饭树叶总黄酮平均提取率为73.10%（n=3，RSD=3.58%）。谢建华等[6]利用响应面发优化超临界CO2萃取苦瓜总黄酮的工艺参数,在实验的基础上,确定最佳工艺条件:以无水乙醇为夹带剂1.0mL/g，萃取压力33.4MPa，萃取温度46℃，萃取时间53.2min。此条件下苦瓜总黄酮提取率达到84.3%。超临界流体萃取技术萃取速度快，提取率高，流程简单，且对生物活性保留较好，具有一定的应用价值。 除以上的提取方法外，还有双水相萃取分离、双水相—超声耦合、超声—酶法耦合、酶法—高压脉冲电场耦合等技术。总的来说，传统提取方法的总黄酮提取率基本在5%左右，而新型提取方法的提取率在10%以上（有的甚至可达80%-90%），相对于传统提取法而言，新型提取方法的提取率具有明显优势，但对新型提取技术对原料、设备、处理要求也相应提高，目前国内外研究相对偏少。3展望 黄酮类化合物分布范围广、种类多，黄酮类化合物的保健品也早在二十世纪八十年代末就引起国际医药界的注意，而且大部分毒理学研究提示其一般无毒，近年来此类化合物一直是生化制药、保健品生产方面的热门之一，在最近上市的保健产品中也有很大一部分其主要功效成分就属于黄酮类化合物，其涉及的功能食品也很多。最近由于心血管疾病、癌症等疾病死亡人数呈快速增长，而黄酮对心血管系统及防癌抗癌有一定的作用，许多国家和地区正在开发相关的产品，前景较好。由于黄酮类化合物可能存在几种不同的作用机制与合成途径，有些实验结果的解释可能依然存在不足之处。因此今后黄酮类化合物的研究还需要关注的是生物利用度、代谢动力学、体内的氧化损伤及长期服用产生的慢性后果等方面[7]。开发出更加可靠、令人信服的模型或系统，以此来精确评估黄酮类化合物在人体内的代谢作用是非常必要的。 参考文献 [1] TAYLOR L P,GROTEWOLD E. Flavonoids as developmental regulatoes [J].Current Opinion in Plant Biology,2005,3(8)：317-323. [2] 贺波.苎麻叶中黄酮的提取、分离纯化、结构及抗氧化活性研究[D].武汉:华中农业大学硕士学位论文,2010. [3] 张海慧.微波辅助法提取黑穗醋栗中黄酮类物质的研究[J].东北农业大学学报,2008.39(9):32-35. [4] 张鹏.银杏叶黄酮的微波提取及抗氧化性研究[J].安徽农业科学,2009,37(12):5496-5497,5730. [5] 余青,郑小严,黄红霞,等.超临界CO2萃取乌饭树叶总黄酮的工艺[J].2009,38(01):97-102. [6] 谢建华,单斌,彭云.超临界CO2流体萃取苦瓜总黄酮工艺及其抗氧化活性[J].2010,08(1):66-71. [7] 佟永薇.黄酮类化合物提取方法的研究及展望[J].食品研究与开发,2008,29(7):188-190.
黄酮类化合物提取工艺研究 唐鹰1 (1.湖北民族学院湖北恩施445000） 摘要黄酮类化合物是一类存在于高等植物及蕨类植物中的活性物质，具有特殊的保健及治疗功能。本文综述了天然黄酮类物质的多种提取工艺，分别是水提法、碱性水或碱性烯醇提取法、有机溶剂提取法、微波法、超声波法、酶解法、大孔树脂吸附法、超滤法、超临界萃取法，比对各工艺利弊进行了分析。 关键词黄酮类化合物提取工艺研究 The extracting technology of flavonoids compounds Tang Ying1 （1.Hubei institute for nationalities Hubei Enshi 445000） Abstract There is a type of flavonoids in higher plants and ferns of active substances, with special care and treatment function.This paper analyses summarized the natural flavonoids substances respectively,a variety of extraction process was water -extraction and alkaline water or alkaline propylene alcohol extraction, organic solvent extraction,microwave-extraction method, ultrasonic method, enzyme hydrolysis and macroporous resins, ultrafiltration , supercritical fluid extraction, each process than and analyzed the advantages and disadvantages. Keywords Flavonoids extraction technology research 黄酮类化合物在植物界中分布广泛，,属于植物次级代谢产物 ,在植物的叶子和果实中少部分以游离形式存在，大部分与糖结合成苷类以配基的形式存在。黄酮类化合物广泛存在于植物的各个部位 ,尤其是花叶部位 ,主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞性科、银杏科与菊科等。有文献记载 ,约有 20 %的中草药中含有黄酮类化合物。它是以黄酮 ( 2一苯基色酮)为母核，同时黄酮母核上连有羟基、甲氧基、氢氧基等取代基，是植物经光合作用产生的一大类化合物。到目前为止，已发现2000多种。它们包括黄酮(Flavone)、黄烷醇(Fla-vano1)、异黄酮(Isoflavone)、双氢黄酮(Flavanone)、双氢黄酮醇(Flavanono1)、黄烷酮(Flavanone)、花 色素(Anthocynidia)、查耳酮(Chal—cone)、色原酮(Chromarme)等。近年来，科学家们发现其具有抗氧化、降低脂质过氧化反应、预防心血管疾病及抗衰老等作用。随着对其研究方法和技术的不断提高，又发现了许多新的种类和生理作用。特别是抗自由基和抗癌、防癌的
黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景 任红丽2009090141 摘要：对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。在 药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用，为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。 关键词：黄酮类化合物提取工艺药用价值 黄酮类物质是一类低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚类物质[14]，又称生物黄酮或植物黄酮，属植物次级代谢产物，广泛存在于各种植物的各个部位，尤其是花、叶，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。迄今，已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现，人工合成的黄酮类化合物也不断问世。最初这类物质仅用于染料方面，自20世纪20年代，槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后，才开始引起人们的关注，研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性，例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性，改善记忆，抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。 1.提取纯化方法 1．1 传统提取方法 1．1．1 热水提取法 水是最廉价的提取溶剂，是地球最丰富的物质，无色无味无毒，对人体和环境无害，挥发性不大，具有真正的绿色环保意义。但用水作为提取溶剂时，从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多，往往因泡沫或粘液很多，给进一步分离带来许多麻烦，而且浓缩也会很困难。此外，水提取物容易发霉发酵[22]。1．1．2 碱性水、碱性稀醇浸提法 中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物，因其结构中具有酚羟基[7]，故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定，当碱的浓度过高，加热时便破坏黄酮类化合物的母核。 1．1．3 有机溶剂热回流及冷浸提取法 根据杂质极性不同，可选用不同的有机溶剂(如石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮等)，一般采取乙醇为提取溶剂[15]。
槐花中黄酮类化合物分离和鉴定[适用对象] 中药国际交流、中药知识产权、中药制药工程、中药资源专业 [实验学时]9 一、实验目的要求 学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求： （1）了解沸水提取黄酮类化合物的原理和操作。 （2）了解由芸香苷水解制取槲皮素的方法。 （3）掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。 二、实验原理 由槐花中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制。纸色谱的分离原理是利用各种化合物在流动相和固定相中分配系数的不同而达到分离目的。 三、仪器设备 烘箱、水浴锅、铁架台，烧杯，三角烧瓶，滤纸，试管，层析槽，毛细管等。 四、相关知识点 槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含芸香苷（芦丁），含量高达12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。 芸香苷（rutoside），分子式C27 H30 O16，分子量610.51，淡黄色针状结晶，mp.177~178℃。难溶于冷水（1﹕8000），略溶于热水（1﹕200），溶于热甲醇（1﹕7），冷甲醇（1﹕100），热乙醇（1﹕30），
冷乙醇（1﹕650），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。 槲皮素（quercetin ），分子式C 15 H 10 O 7，分子量302.23，黄色针状结晶，mp.314℃（分解）。溶于热乙醇（1﹕23），冷乙醇（1﹕300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，几不溶于水。 O O O H OH OH OH OR 五、实验步骤 （一）芸香苷、槲皮素和糖的纸色谱鉴定 1、点样：取新华一号色谱滤纸，规格20 cm ×20 cm ，在滤纸下端约2 cm 处用铅笔画一直线，间隔2 cm 分别点上下列样品或标准溶液： （1）糖样品溶液 （2）标准葡萄糖溶液 （3）标准鼠李糖溶液 （4）芸香苷样品甲醇溶液 （5）芸香苷标准品溶液 （6） 槲皮素样品甲醇溶液 （7）槲皮素标准品溶液 2、展开剂：正丁醇-醋酸-水（4﹕1﹕5）上层上行展开。 3、显色：展开完毕，将滤纸取出，记录溶剂前沿位置。待溶剂挥尽后，在（3）与（4）点之间剪开，分别显色。 （1）糖的显色：喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，在105℃烘10分钟，
醇法提取荷叶中总黄酮的工艺研究 采用乙醇提取法对荷叶总黄酮进行提取，通过单因素试验分析，确定最佳的荷叶总黄酮提取工艺。荷叶黄酮醇法提取的最佳工艺是：料液比1：25，提取时间1h，提取温度80℃，乙醇浓度60%，验证试验证明实际提取率为3.82%。 标签：总黄酮；荷叶；乙醇提取法 荷叶为睡莲科植物莲的叶。荷叶中所含的黄酮类化合物，其主要成分是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等常见的黄酮类物质。实验研究表明，黄酮类物质具有很高的生物活性，如抗氧化作用、抑菌作用、降血脂、减肥作用等[1]。本课题以荷叶为研究对象，利用乙醇提取法提取总黄酮，从而增加荷叶的附加值，将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 实验设备 电热恒温水浴锅、722型分光光度计、鼓风干燥箱、电子天平、粉碎机、旋转蒸发器等。 1.2 试验材料 原料：荷叶（湖北武汉）：新鲜、无污染荷叶，采摘后洗净，用烘箱60℃烘干。主要试剂：芦丁（生化试剂，国药集团化学试剂有限公司）；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等均为分析纯。 1.3 黄酮测定方法[2] 用NaN02-Al（N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。用NaN02-Al （N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。准确称取芦丁标准品0.625mg，用体积分数30%乙醇定容于100mL容量瓶中，得质量浓度为0.625mg/mL的标准储备液。分别吸取芦丁标准储备液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分别置于0、1、2、3、4、5、6号共7支10mL具塞试管中，用体积分数30%乙醇补充至5mL，分别加入0.3mL质量分数10%硝酸铝溶液，混匀，用体积分数30%乙醇标定至刻度线，放置10min后于510nm处，以0号试剂作为空白参比，测定其吸光度值。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图1所示。 得到回归曲线方程：y=0.5011x+0.0022，R2=0.9997。 式中：y，提取液的吸光度；x，提取液黃酮类物质的浓度，mg/mL。 1.4 荷叶总黄酮单因素试验与分析
毕业设计开题报告 应用化学 山楂中总黄酮的提取工艺的研究 一、选题的背景和意义 总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。 山楂为蔷薇科植物山里红或山楂干燥成熟果实。主要功能为消食健胃，行气散瘀，用于肉食积滞，胃脘胀满，泻痢腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，高血脂症等。对山楂的研究发现其具有丰富的化学成分而且具有重要的药理活性。主要含有机酸和黄酮类化合物 , 随着药理学的发展,对山楂的药理活性研究发现其中有机酸为山楂消食 化积的主要有效成份,黄酮类化合物能扩张冠状动脉,改善微循环,抗动脉粥样硬化,且 可调节血脂、降低胆固醇,预防心血管疾病,临床试验证明其疗效显著且安全无毒副作用。山楂果肉及山楂叶中含有丰富的黄酮类化合物，由于其对心脑血管疾病有显著疗效而被受人们的关注。 山楂在全国各地均有栽培,为药食同源植物。其资源丰富,将其做为保健食品和治疗药品开发有着广阔的前景。 总黄酮的提取方法有很多，包括传统的乙醇提取方法和新型提取技术如超声提取、微波提取、超临界流体提取、酶法提取、半仿生提取法等。不同的提取方法所提取的总黄酮的量会有所不同。 近年来国内外对茶多酚、银杏类黄酮等的药理和营养性的广泛深入的研究和临床试验，证实类黄酮既是药理因子，又是重要的营养因子为一种新发现的营养素，对人体具有重要的生理保健功效。目前，很多著名的抗氧化剂和自由基清除剂都是类黄酮。例如，茶叶提取物和银杏提取物。葛根总黄酮在国内外研究和应用也已有多年，其防治动脉硬化、治偏瘫、防止大脑萎缩、降血脂、降血压、防治糖尿病、突发性耳聋乃至醒酒等不乏数例较多的临床报告。 随着对生物总黄酮与人类营养关系研究的深入，不远的将来可能证明黄酮类化合物
荷叶提取物最佳工艺的研究 摘要：荷叶提取物有较好的调节血脂功效，有药理[1]研究表明其主要活性组分为荷叶生物碱、黄酮类化合物。并且目前荷叶生物碱[2]、黄酮的需求量不断增加，但是缺少方便有效的分离分析荷叶生物碱和黄酮的方法[3]，限制了对荷叶资源进一步的开发和利用。本实验通过对荷叶生物碱、黄酮的提取、分离纯化，寻找荷叶提取物的最佳工艺，以期为荷叶提取物的深入研究和合理开发利用提供参考。 关键词：荷叶提取物;黄酮;生物碱;分离纯化 Abstract: Better regulation of blood lipid effect of the extract from Lotus leaf, pharmacological research has shown that group into the alkaloid from Lotus leaf, its main activity of flavonoid compounds. And Lotus Leaf alkaloids, flavonoids in demand now increasing, but the lack of convenient and effective method of separation and analysis of alkaloids and flavonoids in Lotus leaf, limited the further development and utilization of resources in Lotus leaf. This experiment by alkaloids from Lotus leaves, extraction, isolation and purification of the flavonoids, finding best technology of Lotus leaf extract, for in-depth research and rational development and utilization of Lotus leaf extract of reference. Key words: Lotus leaf extract; flavonoids; alkaloids; isolation and purification 1.前言 荷叶属睡莲科植物(Nelumbo nuxifera Gaerth)的叶片，作为一种天然、安全有效的保健食品和药物[4]，越来越受到人们的青睐。我国荷叶资源丰富，具有发展荷叶产业的有利条件，深入发展荷叶产业能够带来可观的经济效益、社会效益[5]。荷叶作为我国的传统中药在医学中应用不仅历史悠久，而且范围广泛。其性味苦、涩，平。入心、肝、脾经，能清热解暑，散瘀止血，并有降低血脂和降低血压的作用。前人有“荷叶服之，令人瘦劣”的记载，足见其具有良好的降脂减肥功效[7]。荷叶提取物中生物碱类化合物众多，主要活性组分是生物碱和黄酮类化合物[8]，但它们各自的最佳提取分离工艺尚不清楚，且将单味荷叶黄酮、生
正交优选表面活性剂提取山楂黄酮的工艺研究目的：优选用表面活性剂提取山楂中黄酮的最佳工艺条件。方法：以总黄 酮含量为指标，采用单因素试验和正交试验确定最佳提取工艺。结果：山楂中黄酮的最佳提取工艺条件为，采用质量分数为1.5%的吐温80水溶液，在90℃提取1 h，提取2次，料液比为1∶20，提取率为4.55%，比传统的乙醇回流提取山楂黄酮的提取率增加了16.97%。结论：该法以溶有少量表面活性剂的水替代高浓度的醇进行活性成分的提取，能大大降低提取成本，并提高提取率，是较理想的一种提取新工艺。 [Abstract] Objective: To optimum extraction technology of flavonoids from hawthorn fruits with surfactant. Methods: Single factor and orthogonal test were used to study the extraction conditions to extract flavonoids from hawthorn fruits. Results: The optimum extracting condition of extracting flavones from hawthorn was showed as follows, mass fraction of Tween 80 solution 1.5%; temperature of estraction 90℃; time of extraction 1 h; twice and the solid- liquid ratio 1∶40 (g/ml). Conclusion: The method is low cost, high yeild and no need for organic solvent and can be applied multipurposely. [Key words] Surfactan; Hawthorn; Flavones; Orthogonal test 山楂为蔷薇科植物山楂（Crataegus Pinnatifida Bunge）、山里红（Crataegus pinnatifida Bunge vat.Major N.E.Br.）及野山楂（Crataegus cuneata Sieb et Zucc.）的干燥成熟果实。山楂性酸、甘、味温，归脾、胃、肝经，具有消食化积、活血化瘀的功效。山楂含有丰富的黄酮类化合物，对心脑血管疾病有显著疗效，具有降血脂、抗心肌缺血及再灌注损伤、增加冠状动脉流量等作用[1]。 山楂黄酮的提取主要有有机溶剂浸提、微波辅助提取[2]、超声波辅助提取[3]和超临界萃取等。而表面活性剂具有双亲结构，能降低表面张力，增强溶剂对物料的润湿性和渗透性，且对天然产物的有效成分具有增溶作用，从而增加浸出效能和萃取率，目前在天然产物提取中得到较多的应用[4-5]。目前，尚无使用表面活性剂辅助提取山楂黄酮的相关报道。故本实验利用表面活性剂的增溶作用，以溶有少量表面活性剂的水替代高浓度的醇或其他有机溶剂进行活性成分的提取，能大大降低提取成本，并提高提取率，为山楂资源的深度开发利用提供技术支持。 1 材料与仪器 1.1 药物与试剂 山楂，经浙江中医药大学生药教研室姚振生教授鉴定为Crataegus Pinnatifida Bunge的干燥成熟果实；吐温80（Tween-80）温州清明化工有限公司；平平加（Peregal）上海文华化工颜料公司；聚乙二醇（PEG）上海文华化工颜料公司；烷基糖苷（APG）北京信诺久恒料贸有限公司；椰子油脂肪酸二乙醇酰胺（CDEA）
银杏叶黄酮类化合物的提取研究进展 银杏树Ginkgo biloba L.又称白果树、公孙树，是我国古老的树种之一，具有“活化石”的美称。由于其生长规律特殊，抗病能力强而受到国内外的重视。有关银杏叶的有效成分及疗效的研究日益受到重视，已开发出保健品、化妆品、药品等多达100多种，形成国际市场上销售额20多亿美元的新兴产业。银杏叶的化学成分有黄酮类、萜类、内酯类、酚酸类以及生物碱、聚异戊二烯等化合物。黄酮类为银杏叶的主要有效成分之一，含量随品种、产地、树龄、不同的采摘时间而不同。黄酮类化合物优异的抗氧化、抗病毒、防治心血管疾病、增强免疫力等作用而受世人瞩目。 药学研究表明，有38种银杏黄酮类化合物从银杏叶中分离出来，其中黄酮类化合物主要有3类：黄酮(醇)及其昔28种：如槲皮黄酮等；黄烷醇类：如儿茶素等4种；双黄酮：如白果双黄酮等6种(儿茶素)。 1 银杏叶黄酮的提取分离 1.1 溶剂提取法目前国内外掀起了研究开发银杏叶热。国内银杏叶常用溶剂例如乙醇、丙酮、醋酸乙酯、水以及某些极性较大的混合溶剂浸泡银杏叶进行提取，溶剂提取方法一般有：煎煮、冷浸、回流、渗施等经典方法。 1.1.1 水提取树脂分离法有关水浸提银杏黄酮苷的文献报道不多。肖顺昌等报道了用l 6倍量沸水分3次浸提银杏叶，得到的水溶液，经冷藏、分离杂质得溶液，然后用D101型吸附树脂吸附得到浓度达38％的黄酮苷。胡敏等研究水浸提银杏叶黄酮苷并用树脂精制的工艺，探讨了影响黄酮苷浸出的主要因素以及最适的精制方法，结果表明：水为提取剂，在9 0℃水溶回流浸提银杏叶2次，4h／次，经沉淀，过滤，浓缩后，用树脂精制、冷冻干燥后，制得总黄酮苷含量高的提取物、产品得率为银杏叶干重的 1.2％-1.5％。 水提取成本低，没有任何环境污染，产品安全性高，但是水对有效成分的选择性差，提取率低。
第八章三萜类化合物 三萜皂苷结构中多具有羧基，所以又常被称为（）皂苷。 不符合齐墩果烷结构特点的是 A. 属于三萜 B. C23、C24连接在C4位上 C. C29、C30连接在C20上 D. A、B、C、D、E环都是六元环 E. C29、C30分别连接在C19、C20上 E 皂苷多具有下列哪些性质 A. 吸湿性 B. 发泡性 C. 无明显熔点 D. 溶血性 E. 味苦而辛辣及刺激性 ABCDE 不符合皂苷通性的是 A. 大多为白色结晶 B. 味苦而辛辣 C. 对粘膜有刺激性 D. 振摇后能产生泡沫 E. 大多数有溶血作用 A 下列成分的水溶液振摇后能产生大量持久性泡沫，并不因加热而消失的是 A. 蛋白质 B. 黄酮苷 C. 蒽醌苷 D. 皂苷 E. 生物碱 D 某中药水提液，在试管中强烈振摇后，产生大量持久性泡沫，则该提取液中可能含有：A.皂苷 B.蛋白质 C.单宁 D.多糖 A 皂苷在哪些溶剂中溶解度较大
A. 热水 B. 含水稀醇 C. 热乙醇 D. 乙醚 E. 苯 ABC 可以用于皂苷元显色反应的试剂是 A. 醋酐-浓硫酸 B. 冰醋酸-乙酰氯 C. 苦味酸钠 D. 三氯醋酸 E. 五氯化锑 ABDE Liebermann-Burchard反应所使用的试剂是 A. 氯仿-浓硫酸 B. 冰醋酸-乙酰氯 C. 五氯化锑 D. 三氯醋酸 E. 醋酐-浓硫酸 E 有关皂苷的氯仿-浓硫酸反应叙述正确的是 A. 应加热至80℃，数分钟后出现正确现象 B. 氯仿层呈红色或篮色，硫酸层呈绿色荧光 C. 振摇后,界面出现紫色环 D. 氯仿层呈绿色荧光，硫酸层呈红色或篮色 E. 此反应可用于纸色谱显色 D 某天然化合药物的乙醇提取物以水溶解后，用正丁醇萃取，正丁醇萃取液经处理得一固体成分，该成分能产生泡沫反应，并有溶血作用，此成分对呈阴性反应。 A Liebermann反应 B Salkowiski反应 C Baljet反应 D Molish反应 C 鉴别三萜皂苷和甾体皂苷的方法有 A. 三氯醋酸反应 B. SbCl5反应 C. 发泡试验 D. 与胆甾醇反应 E. Liebermann-Burchard反应 ACE
1仪器与药品 台式超声波清洗器；紫外-可见分光光度计；可见分光光度计；SHZ-D循环水式真空泵；万分之一电子分析天平；抽滤瓶等。芦丁标准品（中国药品生物制定检定所）；95%乙醇；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂，所用试剂均为分析纯；山楂。 2 实验部分 2.1对照品及供试品溶液的制备 2.1.1 对照品溶液的制备 精确称取芦丁对照品0.005g，置于小烧杯中，用体积分数70%的乙醇溶解并定量转移至25mL容量瓶中定容，摇匀，即得浓度为0.200mg/mL的芦丁标准品溶液。 2.1.2 供试品溶液的制备 称取干燥至恒重的山楂5.0g，置于100ml带塞锥形瓶中，按实验设计条件进行超声提取，提取液减压抽滤，取其滤液。将滤液定量转移至50ml容量瓶中，加相同浓度的乙醇定容至刻度，摇匀即得。 2.2 山楂中总黄酮含量测定方法的建立 2.2.1 测定波长的选择精密量取芦丁对照品溶液1.50ml，置于10ml容量瓶中，加入体积分数70%乙醇至5ml。加5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，放置6min；再加入10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，放置6min；加入1.0mol/L的氢氧化钠溶液4.00ml，加水至刻度，摇匀，放置15min。以不加芦丁对照品溶液作为空白。选择于紫外分光光度计在 400nm-600nm波长范围内扫描。 2.2.2 线性实验 精密量取芦丁对照品溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL，分别置于25mL容量瓶中，各加入体积分数70%乙醇至10ml。加5%亚硝酸钠溶液1.00mL，摇匀，放置6min；加10%硝酸铝溶液1.00mL，摇匀，放置6min；加4%氢氧化钠溶液10.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15min。以不加芦丁对照品溶液为空白，采用分光光度法在510nm波长处测定吸光度，以芦丁浓度(mg/ml)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线。 2.2.3 精密度实验 准确吸取芦丁对照品溶液2.00ml，置于10ml的容量瓶中，加入一定量体积分数70%乙醇使成5mL。先加入5%的亚硝酸钠溶液0.30mL，摇匀，放置6min；再加入10%的硝酸铝溶液0.30mL，摇匀，再放置6min；加1.0mol/L的氢氧化钠溶液4.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15min。按以上方法连续测六次。 2.3 山楂中总黄酮的超声提取工艺研究 2.3.1 提取中主要影响因素的确定 用水浸提，提取物杂质多，后处理比较麻烦。甲醇、丙酮等作为提取剂，虽然效果不错，但二者有毒。乙醇浸提的选择性好，渗透性强，浸出率较高。本试验选择一定体积分数的乙醇溶液作为提取剂。为了提高有效成分的浸出，同时克服加热提取时产生水解产物的缺 1仪器与药品 台式超声波清洗器；紫外-可见分光光度计；可见分光光度计；SHZ-D循环水式真空泵；万分之一电子分析天平；抽滤瓶等。芦丁标准品（中国药品生物制定检定所）；95%乙醇；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂，所用试剂均为分析纯；山楂。 2 实验部分 2.1对照品及供试品溶液的制备 2.1.1 对照品溶液的制备
一.黄酮类化合物的提取分离方法 按所用溶剂不同分类 (1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取 (2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸 (3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取. 2.按提取条件不同分类 (1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素 (2)索式提取法----------柑橘属类黄酮 (3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物 (4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质 (5)超滤法----------黄岑甙 (6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率 (7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油 PH 梯度萃取法：石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮 高效液相色谱分析法：五味子、葛根 高速逆流色谱分离法：甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位 柱色谱法 （1）硅胶柱色谱：姜黄素 （2）聚酰胺柱色谱：紫锥菊 （3）葡聚糖凝胶柱色谱：回心草、茵陈蒿 （4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙 二. 槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些（设计） 方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法 （1） 槐米粗粉20g 加约120ml 的%硼砂水溶液， 搅拌下加入石灰乳至pH8-9， 并保持该pH 值煮沸20分钟，四层纱布 趁热滤过，反复2次 提取液 药渣 浓盐酸调pH2~3 搅拌，静置放冷，滤过。 滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶 芸香苷结晶 碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图 （2）取30g 槐花米，置于250mL 烧杯中，加入%硼砂沸水200ml ，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8～9，在此pH 下保持微沸20～30min ，趁热用棉花滤过，残渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。 提 碱 取 溶 分 酸 离 沉
一、溶剂提取法：国内外使用最广泛的方法，步骤多、周期长、产率低、产品中有机溶剂易残留。溶剂系统主要有乙醇，水溶液、丙酮-水溶液、NaOH-水溶液、NaOH-乙醇等。精提物常在粗提物制备基础上精制，常用液-液提取法、沉淀法和吸附．洗脱法。以60％丙酮为起始溶剂粗提取，再脱脂、去银杏酚酸等15道工艺制成提取物。NaOH-水溶液提取效果最好，NaOH-乙醇溶液次之，正丁醇萃取水溶液中银杏黄酮苷，获得最佳萃取条件为萃取5 min温度60℃4次，萃取物中黄酮苷含量为57％。V水：V正丙醇=1:25最佳。银杏叶精提物树脂吸附纯化法以石油醚回流提取，再以80％乙醇回流提取，减压浓缩，新型澄清剂沉降，树脂分级吸附，pH值为3—4酸水和酸性25％乙醇洗涤，75％乙醇洗脱，喷雾干燥将银杏叶洗净，于60℃烘干至恒重，粉碎，过50目筛。称取粉末25 g，置于索氏提取器中恒重，粉碎，过50目筛。称取粉末25 g，置于索氏提取器中加入60％乙醇至250．0 ml，80℃下回流提取3．0 h，蒸馏回收乙醇，并用活性炭脱色，得银杏叶黄酮提取物。乙醇浓度为50％一70％时,提取率随浓度增加提高，当浓度70％时提取率达最大。随水浴温度升高总黄酮提取率快速增加。当温度80℃时提取率达最大。提取时间为三小时为佳。 黄酮类化合物（英语：Flavonoid，又称类黄酮[1]）是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物，现在则泛指两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳原子相互连接的一系列化合物。他们来自于水果、蔬菜、茶、葡萄酒、种子或是植物根。虽然他们不被认为是维生素，但是在生物体内的反应里，被认为有营养功能，曾被称为“维生素P”： 黄酮类（英语：Flavones）是一类基于2-苯基色原酮-4-酮（2-苯基-1-苯并吡喃-4-酮）骨架的黄酮类化合物，如右图所示。 银杏叶黄酮的研究程序 溶剂提取法：国内外使用最广泛的方法，步骤多、周期长、产率低、产品中有机
荷叶黄酮与生物碱类成分提取工艺比较 摘要】本文比较研究了荷叶总黄酮和总生物碱的乙醇提取工艺、酸水提取工艺 和酸性乙醇提取工艺。根据三种工艺提取物的得率和提取物中总黄酮、总生物碱 的含量，结合生产需要，确定以乙醇提取工艺为荷叶提取物制备工艺。然后对乙 醇提取工艺的醇浓度进行优化，确定70%乙醇作提取溶剂时，提取物得率为 6.87%，总生物碱和黄酮的含量分别可达4.32%和5.93%。该研究可以对荷叶提取 物制备及产品开发生产提取较为行的技术支持。 【关键词】荷叶；提取工艺；优化 【中图分类号】R92 【文献标识码】A 【文章编号】 2095-1752（2015）32-0363-02 1.试验材料 1.1仪器设备 FW135中草药粉碎机、HZT-A200电子天平、RE-201D旋转蒸发仪、101-1A数显式电热恒温干燥箱。 1.2材料与试剂 1.2.1试验材料荷叶原材料，采于常州市新北区荷园 1.2.2试验试剂芦丁对照品荷叶碱对照品和（上海源叶生物科技有限公司）；C2H5OH、HCl、NaOH、NaNO2、Al(NO3)3、CHCl3、溴甲酚绿。对照品纯度≥98%，其他试剂为分析纯。 2.试验方法 2.1荷叶原材料处理 将所采荷叶洗净，烘干，粉碎，过2号药筛后作为提取原料。 2.2 荷叶总黄酮与总生物碱的提取 分别采用乙醇提取工艺、酸水提取工艺和酸性乙醇提取工艺对荷叶总黄酮和 总生物碱成分进行提取。 2.2.1乙醇提取工艺制备荷叶总黄酮、总生物碱提取物称取荷叶提取原料10g，按20倍量（m:V）加入70%的C2H5OH，80℃温提2h，抽滤得滤液，将滤液减压 蒸发得浓缩液，浓缩液于65℃干燥后粉碎，得乙醇提取物。 2.2.2酸水提取工艺制备荷叶总黄酮、总生物碱提取物称取荷叶提取原料10g，按20倍量（m:V）加入0.15%的HCl，80℃温提2h，抽滤得滤液，将滤液减压蒸 发得浓缩液，浓缩液 资助项目：常州市科技计划资助（CE20132016） 于65℃干燥后粉碎，得酸水提取物[5]。 2.2.3酸性乙醇提取工艺制备荷叶总黄酮、总生物碱提取物称取荷叶提取原 料10g，按20倍量（m:V）加入0.15% HCl的70%的C2H5OH，80℃温提2h，抽 滤得滤液，将滤液减压蒸发得浓缩液，浓缩液于65℃干燥后粉碎，得酸性乙醇提 取物[6]。 2.3 荷叶提取物得率及总黄酮、总生物碱含量检测 2.3.1荷叶提取物得率的检测三种提取工艺所得提取物精确称重，得提取物 重量（m）。 提取物得率（%）= m/10×100% 2.3.2荷叶提取物总黄酮、总生物碱含量检测
第4章黄酮类化合物一、选择题 1.构成黄酮类化合物的基本骨架是（） A. 6C-6C-6C B. 3C-6C-3C C. 6C-3C D. 6C-3C-6C E. 6C-3C-3C 2.引入哪类基团可使黄酮类化合物脂溶性增加（） A. -OCH3 B. -CH2OH C. -OH D. 邻二羟基 E. 单糖 3.黄酮类化合物的酸性是因为其分子结构中含有（） A. 糖 B. 羰基 C. 酚羟基 D. 氧原子 E. 双键 4.下列黄酮中酸性最强的是（） A. 3-OH黄酮 B. 5-OH黄酮 C. 5,7-二OH黄酮 D. 7,4/-二OH黄酮 E. 3/,4/-二OH黄酮 5.下列黄酮中水溶性性最大的是（） A. 异黄酮 B. 黄酮 C. 二氢黄酮 D. 查耳酮 E. 花色素 6.下列黄酮中水溶性最小的是（） A. 黄酮 B. 二氢黄酮 C. 黄酮苷 D. 异黄酮 E. 花色素 7.下列黄酮类化合物酸性强弱的顺序为（） （1）5,7-二OH黄酮（2）7,4/-二OH黄酮（3）6,4/-二OH黄酮 A.（1）＞（2）＞（3） B.（2）＞（3）＞（1）
C.（3）＞（2）＞（1） D.（2）＞（1）＞（3） E.（1）＞（3）＞（2） 8.色原酮环C2、C3间为单键，B环连接在C2位的黄酮类化合物是 A.黄酮醇 B.异黄酮 C.查耳酮 D.二氢黄酮 E.黄烷醇 9.银杏叶中含有的特征成分类型为 A.黄酮醇 B.二氢黄酮 C.异黄酮 D.查耳酮 E.双黄酮 10.黄酮类化合物大多呈色的最主要原因是 A.具酚羟基 B.具交叉共轭体系 C.具羰基 D.具苯环 E.为离子型 11.二氢黄酮醇类化合物的颜色多是 A.黄色 B.淡黄色 C.红色 D.紫色 E.无色 12.二氢黄酮、二氢黄酮醇类苷元在水中溶解度稍大是因为 A.羟基多 B.有羧基 C.离子型 D.C环为平面型 E. C环为非平面型 13.黄酮苷和黄酮苷元一般均能溶解的溶剂为 A.乙醚 B.氯仿 C.乙醇 D.水 E.酸水 14.下列黄酮类酸性最强的是 A.7-OH黄酮 B.4′-OH黄酮 C.3′,4′-二OH黄酮 D.7,4′-二OH黄酮 E.6,8-二OH黄酮
黄酮类化合物提取分离纯化及其活性的研究进展姓名常姣专业微生物学 摘要文章综述了黄酮类化合物的结构特征及提取、分离纯化技术介绍了黄酮类化合物的生物活性，并对其开发利用进行了展望。旨在为黄酮类化合物的研究、开发以及应用提供参考。 关键词黄酮；提取；分离纯化；生物活性 民以黄酮类化合物也称黄碱素, 是广泛存在于自然界的一大类化合物, 在植物体内大多与糖结合成甙的形式存在, 也有部分以游离状态的甙元存在。由于最先发现的黄酮类化合物都具有一个酮式羰基 结构, 又呈黄色或淡黄色, 故称黄酮[ 1]。 目前对天然黄酮类化合物的提取方法较多,如溶剂提取法、微波提取法、超声波提取法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取分离法及半仿生提取法等, 每种方法都有它各自的优点和点。用上述方法提取的黄酮类化合物仍然是一个混合物, 不仅是含有其它杂质的粗品, 而且是几种黄酮类成分的混合物, 需进一步分离纯化, 常用的方法有柱层析法、重结晶法、铅盐沉淀法和高效液相色谱法等。 黄酮类化合物具有降低血管脆性及异常的通透性、降血脂、降血压、抑制血小板聚集及血栓形成、抗肝脏病毒、抗炎、抗菌、解栓、抗氧化、清除自由基、抗衰老、抗癌、防癌、降血糖、镇痛和免疫等生理活性[ 2-5]。这些生理活性已被关注，对该类化合物的研究成为医药界的热门课题。人体自身不能合成黄酮类化合物而只能从食物中摄取，因此多年来科学家都在积极研究探讨从植物体中分离 纯度高、活性强的黄酮类化合物[6]。 1黄酮类化合物的理化性质 黄酮类化合物是以2-苯基色原酮为母核而衍生的一类通过三碳链相互连接而成的大多具有基本碳 架的一系列化合物，且母核上常有羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等助色取代基团。黄酮类化合物多为晶体固体，多数具有颜色，少数（如黄酮苷类）为无定形粉末，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有旋光性外，其余则无旋光性) 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异) 一般游离态苷元难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂) 其中，黄酮、黄酮醇、查儿酮等平面型分子，因堆砌较紧密，分子间引力较大，故更难溶于水；而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因系非平面型分子，故排列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子进入，水中溶解度稍大。 2黄酮类化合物的提取分离及纯化 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中多以苷元的形式存在，而在根部坚硬组织中，则多以游离苷元形式存在。因此，不同来源、部位、种类黄酮提取所采取的方法不同[6]。分离黄酮类化合物的方法很多，根据黄酮类化合物与混入其他化合物的极性不同可采用溶剂萃取法，根据黄酮化合物在酸性水中难溶、碱性水中易溶的特点可采用碱提酸沉法等。 2.1溶剂法 2.1.1 热水提取法