动物实验方案设计
动物实验指在实验室内，为了获得有关生物学、医学等方面的新知识或解决具体问题而使用动物进行的科学研究。以下小编为你整理了动物实验方案设计，希望对你有所参考帮助。
实验设计就是拟定实验方案，在进行科学研究时，对研究方案作合理的安排，以减少随机误差的影响。采用适当的研究实验次数，减少实验的成本并能对数据进行有效的分析，提高实验研究的可靠性，从而实现研究的目的。
研究设计包括专业设计与统计设计两个部分。统计设计主要是依据研究目的，从研究的现况条件出发，规定研究因素、选择效应指标、确定研究对象的引入方式方法和规模，拟实施的方法、方案，及数据收集、整理分析的模式，直至结果的解释，进行系统的安排，使其消耗最少的人力物力和时间，而获得可靠的信息与结论。
实验设计的基本要素为：实验单位、处理因素和实验效应。
(1)大多数情况下，实验单位等同于实验对象、受试对象，在动物实验中的动物即为实验单位。
(2)处理要素：是研究者根据研究目的施加于实验单位，在实验中需要观察并阐明其效应的因素，是实验单位分组的标志。而非处理因素则是指实验中非人为施加的、与处理因
素同时存在，同样可以使受试对象产生实验效应的因素，如实验动物的雌雄、体重等因素。突出研究因素的主导作用，排除混杂因素的干扰作用，可以通过相应的实验设计方法，尽量使非处理因素在各处理组中的分布达到一致或均衡，以便分离出处理因素的效应。另外，处理因素的施加方法、强度、频率和持续时间等，在整个实验中应始终保持不变，以保证实验结果评价的可靠性和稳定性；处理因素作用于受试对象的反应，是研究结果的最终体现，其基本要求客观性、特异性、灵敏性和精确性。
(3)实验效应：处理因素作用于实验动物后，出现实验效应，一般是用各种指标来反映的。指标按其性质可分为计数(含等级)指标和计量指标，计数指标如“是”“否”“有”“无”，“阳性”“阴性”，“痊愈”“显效”“好转”“无效”，“存活”“死亡”等。计量指标指可测量(含间接测量)的指标，如很多检查和检验指标。
在对指标进行观察时应注意：
①实验效应的观察应避免偏性。研究者的心理往往偏于阳性结果，为了消除或减少测量偏差，设计时常采用盲法。
②应注意处理和效应的关系：处理与效应之间存在一定的关系，如剂量反应曲线。做实验应选择一个合适的实验剂量。
实验设计的三大原则即为重复(replication)、随机化
(randomization)和对照(control)，这是药理实验设计的基本要求。其目的是排除非处理因素的作用，控制随机误差，避免系统误差，提高实验效率。
(1)重复原则(重复稳定性)：能够充分重现的实验，才能称为可靠的实验。另外，实验研究应有一定数量的重复观测结果，即实验单位要达到一定数量。避免将个别情况误认为普遍情况，将偶然误认为必然，将实验结果错误推广，同一实验条件下、同一观测指标的多次测量会有变异，多次测量才能描述变异，估计随机误差。实验单位足够多时，才能获得随机误差比较小的统计量。重复的目的是估计和控制实验中的随机误差，提高实验结果的可靠性。样本中包含的实验单位数称为样本含量(样本量)。重复原则的应用就是样本含量的估计。
首先要考虑实验要有足够的例数，能准确重复再现，同时尽可能排除对实验的干扰，它包括：①动物方面，如品种、品系、体重、年龄、性别、饲料及饲养环境等；②仪器方面：准确性、稳定性、电压稳定性及操作熟练程度等；③药物方面：性能、批号、纯度、剂量和注射速度等。此外还有室温、气压、季节等物理因素，甚至实验是在上午还是下午，动物群养或单养等，均应预先考虑清楚，做好设计。
(2)随机化原则：其目的是一切干扰因素分配到各组时只受纯机遇的抽样误差的影响，避免受实验者主观因素的干
扰，减小或避免偏性误差，是实验设计中的重要原则之一。随机化手段可采取随机数字表或小计算机上的随机数字键。
在实验分组时，每个受试对象均有相同的概率或机会被分配到实验组和对照组。随机化是一种实验设计的分组程序，而非“随便”、“随意”和“非选择性”。随机化的意义是保证各种非处理因素在各个实验组和对照组达到均衡，从而显现处理因素的作用，避免各种主、客观因素可能导致的偏性，减少系统误差，提高研究结果的效度。随机化分组是从假设检验结果推论因果关系的基础，确定处理因素与实验结果之间因果关系的前提是随机分组后、施加干预前，所有观察对象都属于同一个总体。
(3)对照原则：确定实验组时，同时设立对照组，即不施加处理因素的实验组，只暴露于非处理因素。对照组除没有处理因素外，其他对实验结果可能有影响的因素(已知、可控的非处理因素)都应该与实验组尽量相同。
常用的对照形式，分为空白对照(blank control)、实验对照(experimental control)、标准对照(standard control)、相互对照(mutual control)、潜在对照(potential control)。空白对照即对对照组不施加干预，对照组的处理因素为“空白”；实验对照即对照组不施加干预，但施加某种与处理因素有关的实验因素，用于处理因素的施加需伴随其他因素，而这些因素又可能影响实验结果时；标准对照组
的干预采用现有“标准”方法或常规方法，主要用于临床试验，当伦理上不允许对对照组患者采用空白对照或假干预，如新药研究采用目前疗效确定的药物作为对照药；相互对照则不专门设立对照组，各实验组间互为对照，如比较几种同类药物的疗效差别：潜在对照也不用专门设立对照组，以过去的研究结果为对照(历史对照)。另外，当实验组和对照组例数相等时，统计学证明其统计效率最高，轻视对照或对照较少是错误的和不妥当的。
抽样和分组必须严格遵守随机原则，主要因素要均衡一致，但抽取哪一只动物。分配到哪一组则按随机数字表或键而定。如果随意拿取动物，先取到的为第一组，依次递推，则反应活泼敏捷不易抓到的动物势必集中到最后几组，各组的条件就有了偏性误差。为此，下面介绍几种主要的分组实验设计方法。
完全随机设计(completely random design)亦称单因素设计，即将受试对象随机分到各处理组中进行试验观察，或分别从不同总体中随机抽样进行对比观察。它适用于两个或两个以上样本的比较，各组间样本量可相等，也可不相等，但是样本相等时统计分析效率较高。
例1．将12只动物随机分配到A、B两组。
(1)先将12只动物编号为1、2……12号，然后在随机数字表内任意确定一个起始点和方向连续取12个随机数字，
并依次抄录于动物编号下。
(2)本例从随机数字表第6行第19、20列起向下读取12个随机数字，取两位随机数字(表4-1)。
(3)将随机数字从小到大顺序排列后得序号R，并规定R=1～6者为A组，R：7～12者为B组。
表4-1 12只动物完全随机分两组结果
例2．将15只动物随机分成三组。
(1)将动物编号如1、2……15号，然后在随机数字表内从某行某列起向某方向读取15个随机数字，取两位随机数字，依次抄录于动物编号下。
(2)将随机数字从小到大顺序排列后得序号R。
(3)规定R=1～5者为A组，R=6～10者为B组，R=11～15者为C组。
(4)本例从随机数字表第5行第17、18列起向下读取15个随机数字(表4-2)。
表4-2 15只动物完全随机分三组结果
注：随机数字06之后随机数字为02，但前面已经出现过，故舍去。
随机分组应注意：
(1)随机数的位数不应小于N的位数：
(2)随机数如果有重号数字应舍弃：
(3)若科研上需要各组例数不等可利用序号(R)调整各组例数。如在例2中要求A组6例，B组5例，C组4例，可规定R=1～6者为A组，R=7～11者为B组，R＝12～15者为C组。
统计假设检验方法：
(1)计量资料：t检验、方差分析或秩和检验等；
(2)计数资料：卡方检验等。
完全随机设计的优缺点：设计及统计分析简单。但是，实验效率不高，只能分析单因素。
将受试对象按某些特征或条件配成对子，然后分别把每对中的两个受试对象随机分配到实验组和对照组，再给予每对中的个体以不同处理，连续实验若干对，观察对子间的差别有无意义。
配对设计的特征或条件：
动物实验常以种属、品系、性别相同，年龄、体重相近的两只动物配成对子；临床疗效观察常将病种、病型、族别、性别相同，年龄相差不超过2～3岁，生活习惯、工作环境等相似的患者配成对子；进行配对设计时应注意不要“配对过头”。例如，研究高血压与钠盐摄入量的关系，如果将高血压患者与非高血压患者按饮食习惯配对后比较钠盐摄入量，由于饮食习惯与钠盐摄入量关系密切，可能会掩盖病例
与对照在钠盐摄入量上的差异；实验者必须在整个研究过程中，始终能辨认属于同一对子的是哪两只动物，因此动物编号是非常重要的；记录实验数据应保持每对的一一对应关系，不能错乱或缺失。计算每对实验数据的差值时，顺序应当一致。
例：取20只小鼠，按性别、体重、窝别配成10对，试将其分配到实验组与对照组中去。
先按配对条件配对，并将对子编号，如、、、……、，然后再在随机数字表上任意指定行列及查找方向，将随机数字依次抄写在“对子号”下。
事先规定，遇单数定为AB顺序，遇双数定为BA顺序。
本例：从随机数字表中第46行31、32列向右查找随机数字(表4～3)
表4-3 20只动物完全随机分三组结果
常用统计假设检验方法
计量资料：配对t检验、配对符号检验、wilcoxon符号秩检验。
计数资料：卡方检验、一致性检验等。
配对实验设计的优点：配对设计可做到严格控制非处理因素对实验结果的影响，同时使受试对象间的均衡性增大，因而可提高实验效率。它与成组的完全随机设计相比较，可
克服受试对象间由于遗传因素的差异所引起的偏差，同时还可以减少样本含量。
是在自身配对设计基础上发展的双因素设计，可在同一对象身上观察两种处理的效应，并能减少误差，提高检验效率。
例如：研究A药治疗高血压的疗效，以传统的抗高血压B药物作对照。经随机化将实验动物分为两组，一组先给A 药后再给B药，另一组先给B药后再给A药。第一、二阶段均为一个月，一、二阶段之间的间歇期为一周。结果见表4-4：
表4-4 两种药物治疗高血压的交叉实验
析因设计是一种多因素多水平交叉分组进行全面实验的设计方法，将两个或多个实验因素的各水平进行实验。
例如：2个因素同时进行实验，每个因素取2个水平，实验的总组合数有22=4个(表4-5)；如果每个因素取3个水平，则总组合数有32=9个，即这9种组合都要进行实验，故一般采用简单的析因实验设计。
析因设计可以提供三方面的重要信息：各因素不同水平的效应大小；各因素间的
表4-5 2×2析因设计
交互作用；通过比较各种组合，找出最佳组合。如果在
一次实验中，当一个因素的水平间的效应随其他因素的水平不同而变化时，因素间存在交互作用，它是各因素效应间不独立的表现。
正交设计适用于多因素分析，可算出各因素不同水平对实验的影响，找出最佳组合。现以L4(23)及L9(34)正交设计结合例子简单介绍(L表示正交设计，4或9表示分4组或9组，23表示3个因素2个水平，34表示4个因素3个水平)。
例1 营养液中有三个因素(Ca2+，K+，Mg2+)，各有2个水平(高浓度、低浓度)，要分析它们对实验的影响，找出最佳组合，可设计如下表4-6：
表4-6 L4(23)正交设计
表中Ca2+的1水平之和为+=，K+的1水平之和为+=…。可以看出，Ca2+的差值绝对值最大，说明Ca2+对实验影响最大，且低浓度好。K+的影响次之，高浓度好。Mg2+的影响最小，高浓度好。结论是以低Ca2+，高K+，高Mg2+为最佳组合。但是，这一组合在实验中并未出现，但正交设计提示这是最佳组合，可安排复试加以验证。
例2 四种药物各有三个水平，用L9(34)正交设计，见表4-7：
由表中可以看出甲药影响最大，应列为主药，大剂量较好。乙、丙、丁三药影响较小，可列为辅药，最佳组合为甲
药大剂量，乙药大剂量，丙药小剂量，不用丁药。按理四种药物各三个水平，应做34=81组实验，现在只做9组就找出了实验中并未出现的最佳组合。
在正式实验前应充分重视预试验的重要性，小规模的预试验是使用少量的动物得到预示性的数据或通过预试验将操作和技术固定并完善，即通过预试验可了解各因素对实验的影响，找出最适实验对象、用药剂量和实验条件及检测指标，如温度、刺激强度、营养液组方等，为正式实验做必要的准备，提高实验的重复稳定性和灵敏度。为此，预试验中应注意以下问题：
表4-7 L9(34)正交设计
(1)实验稳定性：变异系数越小，说明实验波动越小，实验的重复稳定性越好。变异系数CV=。
(2)实验灵敏度：预试验时测定两个有效量(D1、D2)，测定其反应强度(E1、E2)。
计算因变系数，因变系数越小，实验灵敏度越好。因变系数CI=(E2-E1)／(lgD2-lgD1)。
筛选是在预试验或既往经验的基础上，用少量动物对多种药物或造模手段进行实验。一般以P (1)保护性实验(以急性毒性实验为例)：筛选解毒药时，常将各解毒药与毒剂的半数致死量(LD50)合用，连用4只非纯品系动物，如无
死亡，表明该药筛选合格(P (2)概率判别实验：本法应用范围更广，对几只动物用药检测其阳性反应数，就可根据概率论推算出该药阳性率的大致情况，参见表4-8。
表4-8 概率判别实验
(1)动物：多用非纯品系动物(能反应个体差异)，如小鼠，健康雌雄各半，20±2g为宜，日龄达到性成熟。
(2)实验条件：在有控制的室温、光照、饲养和卫生条件下进行。
(3)药物及给药途径：以静脉注射、腹腔注射和灌胃为主，最好和临床上给药途径相同。小鼠的用药量标准为：灌胃给药应小于1ml；静脉注射应小于；腹腔注射应小于1ml。另外，药液pH值及渗透压应在生理范围内。
(4)观察项目和时间：记录毒性反应的症状、原因以及致死时间、致死药量、致死动物数量等，当发现组织病变时，应取材做病理切片，必要时做组织学检查，整个实验观察7d。
(5)实验报告：必须说明实验条件，制定LD50值为全面表达实验结果，应求出
95％可信区间和LD10来表示误差限度和量效关系，通过LD50和LD10算出LD5、LD95以
及回归系数。
(6)LD50测定法：方法很多，有加权机率单位法(Bliss
法)、目测机率单位法、目测图解法、寇氏法(Korlbor)等，对短期内致死药物还可采用序贯法。
(7)对于中毒表现和致死原因的分析应给予充分重视。
(1)预试验：根据经验或文献找出实验动物0和100％死亡的剂量，即上下限剂量(Dn、Dm)。对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后倍比稀释成多个剂量，方法是每组取4只小鼠，按估计剂量梯度依次给药。如某组死亡数为4／4，其前一组为2／4或3／4则以该组剂量定为Dm，如前一组是0／4或1／4，则以该组剂量的倍定为Dm，同法找出Dn，这样找出的Dm，Dn比较可靠，为正式实验提供依据。
(2)分组：以4～9组为宜，各组给药剂量按等比关系排列。
(3)根据实验结果计算LD50：
LD50的95％平均可信限LD50±×(LD84一LD16)／
其中N' 为5％～95％致死率间动物数。
至少采用两种不同种属的实验动物，即啮齿类动物(大鼠、小鼠等)和哺乳类动物(犬、猴等)。一般常采用大鼠和犬两种，雌雄各半，且动物数量不宜太少，要满足统计学处理的要求。动物的进化程度越高，对药物的敏感性越强，慢性毒性实验的周期较长，所以要尽量选用年龄较小的实验动物，而且选用未成年的实验动物在迅速生长时期，可以发现
药物对生长及各组织器官成熟的影响。
慢性毒性实验开始选择的小鼠年龄最好是2～3周，体重8～10g，而大鼠不超过3周，体重50～60g。但是避孕药物的毒性实验则要求必须使用性成熟动物，如小鼠应60日龄以上，大鼠应在120日龄以上。
常用三个剂量组，大动物可用两个剂量组，并严格按要求设动物对照组。高剂量组(LD50的1／10～1／4剂量)应有轻微可见的毒性反应(或者某些化验指标有明确而轻微的变化)。中剂量组按LD50的1／30～1／10定量，最低剂量组应是阈剂量组或是无作用剂量组，具体剂量依据实验目的而定。
最好选择临床试用的给药途径。
最好是临床试用的用药时间(连续给药)的3～4倍，临床用药30d以上者，动物给药至少半年。
包括体征、常规血、尿检查、脏器解剖及肉眼观察、生化指标检查等(如新药则按其国家规定标准核查应有项目)。做病理切片进行组织学检查(二十几个脏器)，必要时行骨髓检查、酸碱平衡、水和电解质代谢等。
由于在慢性毒性实验中，受试药物的给药剂量较低，往往一些观察指标变化程度较小，因此需注意：在给药前要观察并记录预计的观察指标，以利于给药后的比较；在给药期间进行定期指标观察时，对照组需同步观察；实验结束后，
主张将最高剂量组与对照组各留部分动物继续饲养1～2个月，以便对已出现变化的指标进行追踪观察，有助于探讨受试药物对实验动物有无后续作用，以及损伤可否恢复。
按观察记录的结果定论，但不应忽视综合因素及其他因素对结果的影响。
其选择动物最重要的依据是对诱发肿瘤的易感性，所以应考虑物种、品系、年龄和性别。物种的选择对受试物有特定的靶器官时尤为重要。同时还应考虑选择肿瘤自发率低、抗病力强且易管理的实验动物，一般多选用大、小鼠，雌雄各半，100只以上做一组，动物多为近交系的第一代杂交动物。
此点较难，但非常重要，一般使用三个剂量，其中最高剂量应为最大耐受量，理想的最大耐受量不应致死，也不引起可能缩短寿命的毒性表现和病理改变，并且与对照组相比的体重下降不大于10％，中剂量为高剂量的1／4～1／3，低剂量最好相当于或低于人类实际可能接触的剂量，同时应设计好阴性对照组和阳性对照组。
体征，一般症状，定期称体重，最主要是密切观察有无肿瘤发生，如生长有肿瘤，则需要做病理组织切片或电镜观察其病理学变化。
一般以组织学结果判定。
(1)动物选择：最好选用与人类皮肤、黏膜反应比较相
近的动物，如家兔、豚鼠和小型猪等。动物种属依据要观察的指标和模型的合理性进行选择，通常一个实验类型选择一种实验动物进行评价。刺激性实验结果从动物外推到人的可靠性有限，如果用两种动物进行试验得到类似的结果，则会增加从动物外推到人的可靠性。
(2)剂量选择：可选择几种不同浓度的制剂进行实验，其中包括拟用于临床研究的浓度，为临床研究的安全性提供选择依据。可以通过改变给药频次进行剂量的调整。对于局部用膏状制剂，在给药面积不变的情况下，不应通过增加厚度来满足增加给药剂量的目的。
(3)给药途径：一般应与临床给药途径一致，否则应加以说明。
(4)给药部位：一般应选择与临床应用相似的部位。并注意对可能接触到受试物的周围组织的影响。设计剂量和给药频次时，应考虑受试动物给药部位的解剖和生理特点，保证受试物在给药部位的有效暴露时间。
(5)观察指标：首先要进行肉眼观察，详细描述动物局部反应，包括红斑、水肿、充血程度及范围，并以计分的方式表示，同时观察动物的一般状态、行为、体征等；其次进行组织病理学检查，应详细描述给药部位的病理变化，并进行半定量分析、判断，提供相应的组织病理学照片；最后进行可逆性观察，若出现刺激性反应，应进行停药后的恢复期
观察，以明确毒性反应的恢复情况。
通常选用体重300～400g的豚鼠，并需要仔细观察过敏反应的一系列指标。
最好选用同一品种小鼠(纯品系)，体重17～20g，雌性无孕，健康无伤。
目前常选用家兔为本实验动物。在热原实验开始之前进行家兔的体温监测，只有在监测的4h内，家兔的体温差异不超过℃的即可被用来进行热原实验，而且在给约之前的30min内体温差不超过℃的家兔方可给药。其给药途径为耳缘静脉注射。在给药后4h内需要密切监测实验用家兔的体温变化。
!""#$%%&’(&)(细胞与分子免疫学杂志*+,-../0.!11230.45%%$6$&*74 859 ############################################################################################# 第四军医大学实验动物中心":;实验部 向国内外上等级课题开放公告 第四军医大学实验动物中心是一个集繁育、科研及成果转化为一体的综合机构。中心":;饲育部可提供包括裸鼠、",!<鼠、=>?=@A 、,8&、昆明小鼠、BCDEFG 和"<大鼠在内的&个品系不同等级的实验动物，特设恒河猴、小香猪、与比格犬培育基地，现已开始提供合格动物。对外开放寄养观察实验部，配有包括无菌动物实验室、水平层流实验室、:)级负压实验室在内的5H 个实验单元，可供$%%多个实验课题同步进行，并可出据本中心的实验报告和":;动物等级证与设施合格证。现已承接包括日本和香港 在内的合作课题几十项。最近正在进行广州、上海与北京等高等院校博士和博士后课题$%多项，本中心将以“三满意”、“五保证”为服务宗旨，竭诚欢迎全国各科研院所的科技人员使用本中心提供的动物及相关开放实验室。 联系电话：$)&%H$(%$%%李六金主任；*%5H 4))&9&(&姜春陵*生产部4；（%5H ）))&9&H5李杰*实验部46 I’1FC.J .FKF3C9L M112N -O2N A36MFPJ *%5H 458)5%98 地 址：*邮编&$%%)54西安市长乐西路第四军医大学实验动物中心 （图$,见8&)页）。 5N 5Doxycycline 对PC -3细胞侵袭转移的影响采用用 EGF3DQ-..小室法，检测不同浓度的<0PRARA.C3-作用后，:,S )细胞降解1FEGCT-.并穿过(!1孔径的无聚碳酸脂:U:多孔 滤膜的作用。结果表明对照组每5%%倍视野穿过的细胞数平 均为（(5N %9V 9N 75），而8、$%和5%1T @?的<0PRARA.C3-作用后，每5%%倍视野穿过的细胞数分别平均为（57N $V )N 87）、（&N $&V 5N 5$）和（)N 58V %N &9），分别与对照组相比差异显著（W X %N %$），表明随着<0PRARA.C3-浓度的增加，其抑制:,S )细胞侵袭转移的能力越强。 )讨论 前列腺癌是雄激素依赖性型和非依赖型两种癌细胞组成的异质体。常用的治疗方法有性腺切除或用内分泌治疗等。这些方法只能诱导雄激素依赖型细胞凋亡，但不可避免的使其转变为雄激素非依赖型前列腺癌，而对于该种前列腺癌的治疗目前尚无有效的方法，因此，研究其侵袭转移的抑制更显得重要。肿瘤侵袭与转移是多步骤的过程，//:在其中起着重要的作 用。如//:S $的表达水平与结肠、直肠癌及食管癌的不良预后有关Y 9Z 8[。//:S $可作为判定胃癌预后的指标，并可将其用于作为对腹膜复发可能性大的患者进行辅助治疗的依据。/FG\等Y 7[研究了=:]和前列腺癌中//:S 5的表达后， 指出//:S 5在良性前列腺增生组织中的表达很少或几乎不表达，而在前列腺癌中则表达很强，且随着^.-FD03积分的增加而增强，表明金属蛋白酶在肿瘤的转移中起着很重要的作用。骨组织和肺组织是前列腺癌最常见的两个转移部位，"FGA_-‘S "Q-FE1F3Y &[通过体外实验证实，前列腺癌细胞可直接降解骨相关的基质，而在这一过程中//:起了很重要的作用。"EC..等Y ([ 采用原位杂交和a#>印迹法， 检测良性前列腺增生和前列腺癌组织后，发现//:S 5及其组织型抑制剂 （b!/:S 5） 定位于低分化和高分化的肿瘤腺体周边恶性上皮细胞内和囊外侵袭的恶性上皮内，且恶性度越高表达越强Z //:S 5@ b!/:的比值越大。以上都表明，//:在肿瘤的侵袭转移中起了很重要的作用，而肿瘤治疗失败的最主要的原因，就是在于不能控制肿瘤细胞的侵袭和转移。//:在肿瘤的侵袭转移中 发挥着重要作用，对其抑制剂的研究将具有广阔的应用前景。 目前，大部分合成的//:抑制剂（如==S H9），都是一种假肽类衍生物，但这类药物口服效果及局部耐受性均差，从而阻碍了它的发展。<0PRARA.C3-可代表一类化学修饰的四环素类金属 蛋白酶抑制剂，在体内外研究中表明均有抑制金属蛋白酶表达的作用，但国内尚未见关于其抑制前列腺癌侵袭转移的报道。我们的研究表明，<0PRARA.C3-在81T @?就能明显抑制:,S )细胞表达//:S 5，抑制:,S )细胞的侵袭转移，改善其恶性表型，而且其抑制作用具有剂量依赖性。这一发现，为应用<0PR’ARA.C3-治疗高表达//:S 5的前列腺癌提供了实验依据。参考文献： Y $[;CM-a"，".-OT-^B +G ，a0E_=+Z -E F.N IMM-AED 0M O0PRARA.C3-03 _21F3WG0DE3E-AF3A-G A-..D C3cCEG0Y +[N ,F3A-G .-EE Z $HH(Z $5&J )&S 9$N Y 5[,F\CG dZ ]F_3e>N
实验动物房的设计 根据实验动物微生物控制标准，可将实验动物分为四级： 一级普通动物（CV），系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和极少数的实验动物烈性传染病的病原体。为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性（即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几乎相同的结果）。 二级清洁动物（CL），要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。 三级无特殊病原体动物（SPF），要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。其除菌与灭菌的方法，可使用高效空气过滤器除菌法、紫外线灭菌法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。 四级无菌动物（GF）或栖生动物（GN），无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。栖生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。 在病理学检查上，四类实验动物也有不同的病理检查标准。 一级外观健康，主要器官不应有病灶。 二级除一级指标外，显微镜检查无二级微生物病原的病变。 三级无特殊病原体动物。无二、三级微生物病原的病变。 四级不含二、三级微生物病原的病变，脾、淋巴结是无菌动物组织学结构。 综合上述，对不同级别的实验动物在动物房设计上和管理上则有不同的要求。 无菌、已知菌以及无特殊病原体动物都需要在无菌或尽可能无菌的环境里饲养，这种环境，目前国际上通用称为屏障环境，即用一道屏障把动物与周围污染的环境隔开，就如胎鼠在母鼠子宫内一样。这种环境从控制微生物的角度分为隔离系统、屏障系统、半屏障系统、开放系统和层流架系统等五大类。 A 隔离系统是在带有操作手套的容器中饲养动物的系统，用于饲养无菌动物和栖生动物。内部保持按微生物要求的100级的洁净度，但其设置的房间及操作人员不必按无菌室考虑。 B 屏障系统把10000～100000级左右的无菌洁净室作为饲养室，主要用于无特殊病原体动物的长期饲养和繁殖。入室施行严格管理，如淋浴、换贴身衣服等。 C 半屏障系统放宽对屏障系统中人及物出入房间时的管理，平面组成大致与屏障系统相同。 D 层流架系统笼具放在洁净的水平层流空气中。常用于小规模饲养，但在一般房间进行饲
实验动物的等级划分及实验动物房的设计规范公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]
【特殊实验室】实验动物的等级划分及实验动物房的设计规范 一、实验动物的分类 实验室根据实验动物微生物控制标准，可将实验动物分为四级，分别是普通动物、清洁动物、无特殊病原体动物、无菌或栖生动物。 一级普通动物（CV），系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和极少数的实验动物烈性传染病的病原体。为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性（即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几乎相同的结果）。 二级清洁动物（CL），要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。 三级无特殊病原体动物（SPF），要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。其除菌与灭菌的方法，可使用高效空气过滤器除菌法、紫外线灭菌法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。 四级无菌动物（GF）或栖生动物（GN），无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。栖生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。 二、四类实验动物的病理检查标准 在病理学检查上，四类实验动物也有不同的病理检查标准。 一级外观健康，主要器官不应有病灶。 二级除一级指标外，显微镜检查无二级微生物病原的病变。 三级无特殊病原体动物。无二、三级微生物病原的病变。 四级不含二、三级微生物病原的病变，脾、淋巴结是无菌动物组织学结构。三、动物房设计管理上的要求 对不同级别的实验动物在动物房设计上和管理上则有不同的要求。 无菌、已知菌以及无特殊病原体动物都需要在无菌或尽可能无菌的环境里饲养，这种环境，目前国际上通用称为屏障环境，即用一道屏障把动物与周围污染的环境隔开，就如胎鼠在母鼠子宫内一样。这种环境从控制微生物的角度分为隔离系统、屏障系统、半屏障系统、开放系统和层流架系统等五大类。 A隔离系统 是在带有操作手套的容器中饲养动物的系统，用于饲养无菌动物和栖生动物。内部保持按微生物要求的100级的洁净度，但其设置的房间及操作人员不必按无菌室考虑。 B屏障系统
——您身边的实验室工程专家【特殊实验室】实验动物的等级划分及实验动物房的设计规范 一、实验动物的分类 实验室根据实验动物微生物控制标准，可将实验动物分为四级，分别是普通动物、清洁动物、无特殊病原体动物、无菌或栖生动物。 一级普通动物（CV），系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和极少数的实验动物烈性传染病的病原体。为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性（即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几乎相同的结果）。二级清洁动物（CL），要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。 三级无特殊病原体动物（SPF），要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。其除菌与灭菌的方法，可使用高效空气过滤器除菌法、紫外线灭菌法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。 四级无菌动物（GF）或栖生动物（GN），无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。栖生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。 二、四类实验动物的病理检查标准 在病理学检查上，四类实验动物也有不同的病理检查标准。 一级外观健康，主要器官不应有病灶。 二级除一级指标外，显微镜检查无二级微生物病原的病变。 三级无特殊病原体动物。无二、三级微生物病原的病变。 四级不含二、三级微生物病原的病变，脾、淋巴结是无菌动物组织学结构。 三、动物房设计管理上的要求 对不同级别的实验动物在动物房设计上和管理上则有不同的要求。 无菌、已知菌以及无特殊病原体动物都需要在无菌或尽可能无菌的环境里饲养，这种环境，目前国际上通用称为屏障环境，即用一道屏障把动物与周围污染的环境隔开，就如胎鼠在母鼠子宫内一样。这种环境从控制微生物的角度分为隔离系统、屏障系统、半屏障系统、开放系统和层流架系统等五大类。 A隔离系统 是在带有操作手套的容器中饲养动物的系统，用于饲养无菌动物和栖生动物。内部保持按微生物要求的100级的洁净度，但其设置的房间及操作人员不必按无菌室考虑。 B屏障系统 把10000～100000级左右的无菌洁净室作为饲养室，主要用于无特殊病原体动物的长期饲养和繁殖。入室施行严格管理，如淋浴、换贴身衣服等。
如何设计动物实验 一般来说，动物实验的研究工作应该明确描述，研究的目的和/或者需要验证的假说。1、选择特定动物模型的原因。2、动物种、品系、来源和类型。3、每个独立实验步骤的详细描述，包括研究设计和使用动物数量。4、数据分析所用的统计学方法。动物实验设计有重要的意义的意义1、正确的动物实验设计对提高科学研究质量、发表高水平的学术论文非常重要2、目前许多动物实验质量不高。3、一个好的实验设计，对统计学分析来说帮助很大，可以使问题变得更加容易解决4、一个不正确的实验设计，导致结果信息无用。实验设计的主要目的一是保证所测变量的任何差异是由处理造成的，而不是其他非对照变量引起；另一个目的是通过控制确定的变量在尽可能小的范围内，减少所测反应的变异性，这样对处理效应的评介更准确。我将它分为以下几个步骤 一、实验设计的最初步骤 1、查阅文献 A: 明确研究焦点B：明确方法 C：明确模型D：评估实验 2、科研方法 A：观察和描述科研中的现象B：系统的陈述问题和解释问题的假说C：利用假说预测新的观察结果D：验证假说 3、问题的陈述、研究的目标和提出假说 ?问题提出：实验将说明的问题是什么，意义 ?研究目标：总目标，特殊问题 ?假说：对每一个至少给出两个预计结果 ４、动物模型的确定 ?使用系统发育水平最低的动物，符合３Ｒ原则 ?使用的动物具有研究要求种属或品系专一特点，特定研究目的必须特点?实验期间动物模型维持条件 ?动物模型来源渠道 ?最终确定动物模型前征询实验动物兽医意见 ５、实验合作者的确定 ?在研究的过程中，明确应用的试验技术操作，并确认具有相应操作专长的人员来完成。 ?让合作者了解实验：设计、计算、样品收集．．．． ?实验动物中心可以提供动物实验有关技术操作培训及昂贵设备服务 二、动物实验设计 １、研究方案 根据问题、目标、假说，提出实验操作安排的计划并文字化 考虑的方面： A：动物模型持续时间B: 模型中预期疾病的进程（决定测定的最适时间点） Ｃ：人员参加的时间，实验花费Ｄ：给药方法 Ｅ：风险评估Ｆ：统计学方法选定 ２、实验单元 可以是一个动物，也可以是一组动物群体
【特殊实验室】实验动物的等级划分及实验动物房的设计规范 一、实验动物的分类 实验室根据实验动物微生物控制标准，可将实验动物分为四级，分别是普通动物、清洁动物、无特殊病原体动物、无菌或栖生动物。 一级普通动物（CV），系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和极少数的实验动物烈性传染病的病原体。为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性（即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几乎相同的结果）。 二级清洁动物（CL），要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。 三级无特殊病原体动物（SPF），要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。其除菌与灭菌的方法，可使用高效空气过滤器除菌法、紫外线灭菌法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。 四级无菌动物（GF）或栖生动物（GN），无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。栖生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。 二、四类实验动物的病理检查标准 在病理学检查上，四类实验动物也有不同的病理检查标准。 一级外观健康，主要器官不应有病灶。 二级除一级指标外，显微镜检查无二级微生物病原的病变。 三级无特殊病原体动物。无二、三级微生物病原的病变。
四级不含二、三级微生物病原的病变，脾、淋巴结是无菌动物组织学结构。 三、动物房设计管理上的要求 对不同级别的实验动物在动物房设计上和管理上则有不同的要求。 无菌、已知菌以及无特殊病原体动物都需要在无菌或尽可能无菌的环境里饲养，这种环境，目前国际上通用称为屏障环境，即用一道屏障把动物与周围污染的环境隔开，就如胎鼠在母鼠子宫内一样。这种环境从控制微生物的角度分为隔离系统、屏障系统、半屏障系统、开放系统和层流架系统等五大类。 A隔离系统 是在带有操作手套的容器中饲养动物的系统，用于饲养无菌动物和栖生动物。内部保持按微生物要求的100级的洁净度，但其设置的房间及操作人员不必按无菌室考虑。 B屏障系统 把10000～100000级左右的无菌洁净室作为饲养室，主要用于无特殊病原体动物的长期饲养和繁殖。入室施行严格管理，如淋浴、换贴身衣服等。 C半屏障系统 放宽对屏障系统中人及物出入房间时的管理，平面组成大致与屏障系统相同。 D层流架系统 笼具放在洁净的水平层流空气中。常用于小规模饲养，但在一般房间进行饲养、操作和处理时有被污染的危险性。可用于半屏障的补充。
医学实验动物房设计（详细）SICOLAB 实验动物房总体建筑设计原则 根据国家科委《实验动物管理条例》、国家卫生部《医学实验动物管理实施细则》的具体要求，结合广西的具体情况，目前广西尚未有能够提供合格的ＳＰＦ级实验动物的单位，而我所是药品检验单位，国家科委要求2000年底前药品检定应使用清洁级实验动物。因此，我所新建的实验动物中心设计的原则是以建立动物饲养繁殖和实验饲养相结合的综合基地，该工程的环境与设施要求达到ＳＰＦ级标准。该中心的设计具有小规模、起点高、设计完善、布局设置合理，可使用面积大，利用率高，具有节能、节资等特点 平面布局设计加层新建的十层楼长48ｍ，宽103ｍ，楼层高为38ｍ;其中十楼西侧长24ｍ暂作普通级设施使用，十楼东侧长24ｍ为ＳＰＦ级设施即ＳＰＦ级实验动物中心，十一楼为饲料加工房和空调、风机机房。SPF级实验动物中心内设置有货物电梯、淋浴室1间，2套更衣1、更衣2和风淋室，洁净物品储藏室1间，洗刷消毒室1间，清洁走廊和亚清洁走廊，隔离观察室(检疫室)1间，饲育室6间及实验室2间，平面布局采用三走廊方式，中间走廊为清洁走廊，二边走廊为亚清洁走廊，清洁真走廊与亚清洁走廊之间为饲育室和实验室。饲育室区和实验室区各走廊均有密封门严格隔开，饲育室区和实验室区分别设置有独立的更衣1、更衣2和风淋室，以便各区域的人员运行各行其道，防止交叉感染。 3 空调通风系统 31 空调系统 311 空调设计及ＳＰＦ级环境设施设计的主要参数：温度：夏季24℃±2℃，冬季22℃±2℃;湿度：ＲＨ(50±10)%;光照度：不小于300～350ＬＸ，明暗比12∶12ｈ，日光灯照明，且设紫外灭菌灯;通风：采用全新风，顶棚送风，四角回风;净化度：1万级(每立升空气中粒径大于05μｍ的尘埃粒子数小于或等于350个);噪音：低于50ｄＢ;氨浓度：低于20ｐｐｍ;正压控制：清洁走廊、饲育室(或实验室)、亚清洁走廊、外环境的压力梯度20Ｐａ。 312 空调系统的设计和选用空调系统是实验动物屏障设施中重要设备，主要起调温调湿作用。由于ＳＰＦ级实验动物中心采用全新风，屏障系统内部与外环境之间换气量大，空调系统在运转时消耗能源相当大，因此，在设计ＳＰＦ级实验动物设施时必须考虑设备的一次性投资和运转的维持费用两方面问题。我所经过大量调查，采用清华同方股份有限公司生产的ＦＳＬＲ60型风冷模块式冷热水机组空调2台，每台机组制冷量为66ｋＷ，输入功率为231ｋＷ。2台机组可依据使用情况自动控制十楼普通级环境(约24ｍ2)和ＳＰＦ级实验动物中心环境(约250ｍ2)的温度和湿度。该机组具有以下优点： ①无需专用机房和水塔，使用方便 ②节省能源，降低维持费用。 ③管理方便。空调机组的工作状态及送风状态都在远程控制上显示及控制，利于使用和管理。 ④维修方便。该机组为模块式组合，可以在工作状态不断电情况下进行维修，更换元件简易，方便;且主要元件均为美国进口元件，不易损坏。 32 通风系统送风系统采用清华同方股份有限公司生产的变频风机，通过该机设置的集成模块可以调节风速和风量，节省运转费用。全新空气经空调净化箱初效、中效过滤、恒温后，由变频风机加压，通过送风管道从各室顶部中央600ｍｍ×600ｍｍ或400ｍｍ×400ｍｍ高效过滤器送入各室内、清洁走廊和亚清洁走廊等。排风系统由2台排风机(其中一台为备用机)组成，在各室四角壁及清洁走廊、亚清洁走廊与各室隔墙处均设置回风口，废气从回风口经排风管道在机房排风箱内集中外排。4 建筑室内净化装饰工程及电气设备工程 41 建筑室内净化装饰工程室内四壁墙体和吊顶顶壁均采用50ｍｍ厚保温泡沫夹心彩钢板，其外形美观，隔音、保温、阻燃、密闭性能较好。室内竖角和横角选中100铝合金圆弧。进气、排气管道位于技术杂层，室内装饰高23ｍ，技术夹层高15ｍ;内门均采用彩钢夹心板密封推开门，门上设置观察窗，各室内隔墙之
动物实验室设计布局要求与规范 动物实验室包括普通的动物实验室规划设计和洁净动物实验室规划设计，一般由前区、饲养区、动物实验室、辅助区组成。 1.动物实验室布局的设计:计符合实验室标准和使用要求的产品布局规划;确定实验室内产品的类别规格数量。 2.水电预留位置的设计:在确定了平面布局后，提供全面水电位置图，方便客户工程精准施工。 3.通排风系统的设计:在实验室新建或改造项目中，在规划阶段就参与其中，派专业的工程师到现场与相关的人员联系，根据实验室内通风载体的数量(如通风柜、集气罩、排气罩)设计出完整的通风方案;方案内容包括：建筑内预留排风管井的位置及尺寸，管道的分布及规格。确保通风的载体使用时的风速、排风量、噪声等指标符合国家标准，并与建筑内的空调、消防、照明等线路互不干绕。 4.气路管道系统的设计:根据实验对气体供应的需要，结合现场布局，提供供气系统设计方案，在保证气体纯度的同时，精密调控气体的压力和流量。 5.环保的设计:提供完善的废气净化处理解决方案，使实验中产生的废气得到有效的解决，符合环保的排放指标。 6.产品个性设计:根据实验流程及人员的特殊要求，调整产品结构和功能，设计出个性的产品以满足不同用户的需要。 7.安全设施的设计:按照国际标准，在实验室合理配置安全柜、毒品柜及紧急事故淋洗器，急救洗眼器等安全设施。 动物实验室的级别： 一级普通动物(CV)，系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和积少数的实验动物烈性传染病的病原体。为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性(即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几乎相同的结果)。 二级清洁动物(CL)，要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。 三级无特殊病原体动物(SPF)，要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。其除菌与灭菌的方法，可使用高效空气过滤器除菌法、紫外线灭菌法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。 四级无菌动物(GF)或悉生动物(GN)。无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。悉生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。 在病理学检查上，四类实验动物也有不同的病理检查标准。 一级外观健康，主要器官不应有病灶。 二级除一级指标外，显微镜检查无二级微生物病原的病变。 三级无特殊病原体动物。无二、三级微生物病原的病变。
一. 背景： 本次动物实验相关疾病介绍、国内外相关治疗及研究的现状及结果（含临床、基础）、相关引文摘要等。 二、实验所用器械简介： 三、实验目的 1、使用猪或其他适宜动物为实验模型, 按照临床要求对产品进行模拟 使用，对* *器械的* *性能、* *效应进行测试。 2、通过动物实验取得数据和经验, 以便为产品的临床使用撰写详尽的使 用指南。 3、确定* * 器械置入猪后的最长可回收天数, 以便为临床使用的最长 可回收时间提供参考。 4、研究* *器械置入* *天后的可回收性, 以回答以往实验中未能解决 的* * 器械在置入* * 天后是否可取出的问题。 四、实验模型和材料 1、实验模型 （1）.动物模型：猪，体重：25?35KG （2）.体外模型：拟采用透明塑料软管作成的20mm 25mm两 种直径的下腔静脉模型。 2、材料： （1）* *器械采用XX公司研发生产的器械。 （2）其他手术配套器械采用临床通用器械。 3.过程要求：
本实验开始前必须取得动物道德委员会的许可（注：国外 有此要求，国内仅少数几家大医院有动物伦理委员会） 五.实验设计 动物数量及分组方法：实验动物共22头，在置入器械后分为A和B两组.A组动物采用介入方法取出滤器，B组动物采用外科方法经腹切开方法取出滤器.下腔静 脉滤器置入后饲养观察时间为7、10、12、14、16、20、30、60和90天，具体分组方法见下表。 分组（头） 时间（天）- A B 7 1 1 10 1 1 12 3 1 14 3 1 16 1 1 20 3 1 30 0 2 60 0 1 90 0 1 六、实验方法： 1、随机选取实验动物以1:1的比例进行* *实验，并记录* * 总结出的操作要求。7?20天实验用以观察器械置入后的可回收期，30、60、90天实验用以观察器械置入后的长期通畅情况。 2、所有动物器械取出前应造影复查，并与器械置入时的资料进行对比，判断器
口服避孕药预防化疗对大鼠卵巢损伤的研究 研究背景 卵巢早衰(premature ovarian failure POF)系指妇女在40岁以前绝经，常表现为雌激素水平降低引起的月经紊乱、不孕、围绝经期综合征等一系列症状。POF病因复杂，目前仍不清楚，化疗远期毒副作用是其中之一。随着化学毒性药物在肿瘤及自身免疫疾病的广泛应用，其导致的性腺功能损害成为研究新热点，其中以环磷酰胺(cyclophosphamide，crx)为代表的烷化剂引起的卵巢功能损害研究较多，但其作用机制仍不清楚。一些研究显示，CTX可直接损伤卵巢颗粒细胞，并主要作用于有丝分裂活跃的卵泡，而静止的生殖细胞呈低度敏感。另有学者提出，化疗期间应用口服避孕药抑制卵泡发育，能够减少化疗对卵巢的损害，依据是化疗药物损伤卵巢的机制和口服避孕药的作用机理，即通过雌孕激素负反馈抑制下丘脑．垂体一卵巢轴，从而抑制卵泡发育，储存原始卵泡，保护卵巢储备功能，减少卵巢损伤。相关研究也证实口服避孕药能够降低及预防化疗对卵巢的损伤，促进化疗后卵巢功能甚至是生殖功能的恢复。但也有学者持不同观点，结论尚有争议。本研究旨在探讨化疗期间应用口服避孕药能否保护卵巢功能，以确定口服避孕药的有效性。 目的 本文采用阴道涂片法监测大鼠动情周期，放射免疫法和组织切片法，检测大鼠血清雌二醇(E2)水平、卵泡刺激素(FSH)水平、卵巢重量及卵泡数量，并通过统计学分析，比较实验前后各组实验指标变化，探讨口服避孕药在化疗期间有否起到保护卵巢的作用及其相关机制。 材料与方法 1．SPF级近交系雌性Wistar大白鼠，3月龄，体重1 809～2009。喂食SPF级鼠饲料及净化水，室温20℃~25℃，相对湿度450／0-．55％，每日光照12h，饲养1周熟悉环境后，每日清晨9：00行阴道细胞涂片，显微镜下观察动情周期，选用有正常动情周期的大鼠进入实验。口服避孕药(OC>．—-．达英一35(35pg炔雌醇／2mg醋酸环丙孕酮)。环磷酰胺(CTX)，规格0．29x10支。 2．动物实验：75只Wistar雌性大鼠随机分为5组： ①空白对照组：不予任何药物处理； ②CTx组：负荷剂量50 mg／kg腹腔注射，之后8 mg／(kg·d)腹腔注射，连续14d； ③oc组：8．7599炔雌醇／0．5mg醋酸环丙孕酮(溶于lml生理盐水)，灌胃，连续25d； ④联合治疗I组：同时给予CTX和OC，连续15d，给药方法同②、③组； ⑤联合治疗II组：先连续10d给予OC灌胃，用药剂量同③组；第11d起加用CTX，给药方法、时间及剂量同④组。3．采用阴道涂片法监测大鼠动情周期，放射免疫法测定E2、FSH浓度。所有卵巢标本均经石蜡包埋，连续切片，苏木素．伊红(HE)染色。 从实验开始到结束，各组大鼠每天行阴道涂片，并于给药结束前，每隔5天(相当于大鼠1个正常动情周期)，于动情间期测定各组E2、FSH浓度；停药后第15、30天(相当于3及6个正常动情周期)，测定各组E2、FSH浓度。另外，停药当天、第15、30天，分别处死各组1／3大鼠，比较卵巢重量、卵泡数量变化。 4．统计学处理采用SPSSl0．0软件包检验分析，数据以均数士标准差表示，采用的具体统计学方法有单向方差分析、重复测量、析因分析，两两比较采用SNK及LSD法，所有结果均P<0．05具有统计学意义。 数据记录与结果分析 1．各组大鼠E2、FSH浓度及动情周期变化 (1)大鼠E2、FSH行重复测量分析，分别比较各组、各时间点E2、FSH，分析差异是否有统计学意义，实验分组和时间是否有交互作用。 (2)空白对照组：于动情间期测定E2和FSH。观察阴道涂片是否呈正常大鼠的动情周期改变。 (3)CTX组：观察从给药第5天至实验结束，E2和FSH的变化情况，与同期其余4组E2、FSH分别比较，并分析计算差异是否有统计学意义。记录阴道涂片该组大鼠在给药的第几天出现持续不排卵现象，停药多少天后恢复正常动情周期。 (4)OC组：观察并比较从给药第5天至停药第15天，以及停药第30天，该组E2、FSH浓度与同期空白对照组的高低，计算差异是否有统计学意义。记录阴道涂片该组大鼠在给药的第几天出现持续不排卵现象，停药多少天后恢复正
Laboratory Animal Research Center of Tsinghua University Requisition Form for Cas9/sgRNA embryo injection Services Date Received (LARC Use Only)______________ 以下请同学们填写： Principle Investigator______________ Contact Person____ _ _______ Contact Phone ______________ Contact E-mail Type of knockout/knockin mice (please check “√”) __ KO ___ CKO ___Knockin Gene to be KO/KI_______________ GeneBank ID gRNA construct _______________ mRNA Concentration_______ _ Cas9 construct________________ mRNA Concentration_____ __ ___ _ Purification method_____ ____ ____ Resuspension buffer used (MUST be RNAase free)_ ____ Please attach a labeled photograph of the gel demonstrating the quality of the mRNA： 假如gel photo表明了有可能有降解，请重新转录、纯化： 说明： 1.中心没有存放和处理RNA 设备，每次注射当天提前通知送注射样品，请当天上午送样之前一定要 经过跑胶验证RNA质量，是否降解，同时发邮件给我们验证胶图。下面胶图对照请参照（左KI 右KO）
动物实验室的设计布局是规范工作流程和人员、动物、物品等相互关系和移动，并确保实验室安全，此外，对形成屏障结构具有重要意义。本文将从三个防护区（外围防护区、建筑防护区、饲养防护区）和四条控制路线（人员控制路线、动物控制路线、物料控制路线、废物控制路线）等方面详细介绍。 动物实验室 1.外围防护区 外围防护区主要指建筑外围的区域。鉴于实验动物饲养的特殊性，外围可能需要设监控设备、人员进出的控制、卫生防护带等。如果设施内从事涉及高致病性病原微生物的动物实验活动，须考虑设施的安保要求，以及一旦发生意外事故后对周围控制区域、疏散和救援的需求。外围的防护主要通过设置栅栏、围墙等方式实现。鉴于景观的需求，使用栅栏更显人性化。栅栏不应低于2米，栏杆的间距不大于10厘米，栏杆要坚固、易于清洁。 此外，需要设置照明系统、报警系统和视频监控系统，更高级别的防护包括地下的电磁场报警、红外线报警和运动物体报警、低压电击等措施。防护区内一般不布置绿化，以免影响监控，同时也可减少昆虫、老鼠等。为保证正常的外来服务，如邮件、送货、访客等，通过风险评估决定是否需要建设安检、特殊通道、中转站等措施。对控制区域应设置警示牌，避免无意闯入。对防护要求高的设施，应保证外来车辆不能靠近设施，距离保持至少30米。在外围防护区，宜设专用的外部人员和车辆入口。
2.建筑防护区 建筑防护区主要指动物实验室所在的建筑。建筑内有动物设施和其它设施之分，其它设施可以与动物设施有关，也可以无关;动物设施可以就是建筑的主体，也可以是其部分。需要考虑的主要问题是动物设施环境与建筑物内其它区域环境的相互隔离与相互关系，人员、动物、物料和废物的进出路线。使用时，动物设施及其相关的设施宜集中布置，从事感染动物活动的设施需要单独布置。建筑除主入口外，要考虑设置动物、大型设备和废物的出口和入口。 出于安全考虑，必须评估和明确对门窗的性能要求。在合理控制数量的前提下，对门窗的大小、形状、耐冲击能力、耐火性、保温性、光学特性等均要有要求。可能的风险来自于异常的气候、自然灾害、人为破坏、设备异常等，如，通风系统的异常可造成室内压力急剧变化，造成门窗损坏。 3.饲养防护区 饲养防护区设施基本的形态是由入口、走廊(或通道)、功能间和出口组成。走廊是连接各功能区的纽带，各种通道发挥快捷、隔离、消毒等作用。实验动物设施的特点是不相容的因素多，需要利用走廊和通道对不相容的因素作合理的安排。走廊的形式包括双走廊、单走廊、U型走廊、环廊等。设施内部的安排应根据工作流程和利于控制风险的原则确定，此外，还要考虑工程可行性和日常维护的方便性，可以组成相对独立的单元。 1.人员控制路线 进出动物实验室的人员主要包括动物管理人员、动物实验人员和清洁人员。此外，还有送货人员、维护人员、来访人员、检查人员、安保人员等。为保证各类人员的进出有序，需要合理设计路线和设置不同级别的物理限制。人员的移动具有主动性，可以到达任何区域，要通过SOP和物理控制措施管理人员的移动。
联系个人所学专业，选取某种或某类疾病，设计相关实验的动物模型，详细描述其方法及步骤，并阐述所选动物种类和级别的理由以及该动物日常生活和实验的环境要求（包括进出该环境的顺序），实验过程中的注意事项 MicroRNA-378(miR-378)在心肌肥厚中的研究 一、实验原理： microRNA(miRNA)是一类小分子非编码单链RNA，长约22个碱基，能通过与靶mRNA3’非翻译区(3’UTR)互补配对，使其翻译受到抑制，从而在转录后水平对生物体内基因时序性表达起到精细调节作用。miRNA的表达变化与心肌肥厚的发生、发展密切相关。本实验通过异丙肾上腺素和去甲肾上腺素诱导实验动物心肌肥厚，然后用PCR技术测定心肌细胞中miRNA 的变化。 二、实验目的： 通过统计学方法观察miRNA在正常心肌细胞和心肌肥厚的心肌细胞中的差异，从而将miRNA作为诊断心肌肥厚的潜在的生物学标志。 三、实验材料及步骤：Wistar雄性大鼠30只（200～250g/只，SPF级别），异丙肾上腺素（ISO），去甲肾上腺素（NE），生理盐水。 3.1 分组及造模 3.1.1采用随机数表的方法讲30只wistar大鼠随机分成三组，每组10只，分别为对照组、ISO处理组、NE组。 3.1.2 ISO处理组：10只大鼠连续7天背部皮下注射ISO（4 mg/kg/天），制成心肌肥厚模型。 NE处理组：10只大鼠连续7天背部皮下注射NE（4 mg/kg/天），制成心肌肥厚模型。
对照组：10只大鼠同法背部皮下注射生理盐水（4 mg/kg/天），制成心肌肥厚模型。 3.2检测造模是否成功 3.2.1高频超声检测 分别于造模后第2周，称取大鼠质量，10％水合氯醛麻醉大鼠后，仰卧固定，将其胸前部剃毛，应用TOSHIBA-6000超声诊断仪，频率为7.5 MHz的探头置于其胸左侧，取径(LVEDD，LVESD)。左室射血分数(EF，%)、左室短轴缩短率(FS，%)、计算左室左室长轴切面，图像深度调至3.0 cm，由二维超声引导，将M型超声取样线置于二尖瓣腱索水平，垂直于室间隔及左室后壁，经M型超声曲线进行测量，每一超声测定值取3个连续心动周期测量均值。超声测量指标：舒张末期及收缩末期室间隔厚度(IVSTd，IVSVTs)、舒张末期及收缩末期左室后壁厚度(LVPWTd，LVPWTs)、舒张末期及收缩末期左室内质量(LVM，mg)。 3.2.2大鼠心肌质量指数的测定 称取大鼠体质量（body weight, BW），摘眼球取血备用，脱颈椎处死，快速打开胸腔取心脏，去除心房组织，分离左、右心室，生理盐水漂洗去血，用滤纸吸干表面水分，电子天平准确称取左心室质量（left ventricle weight, LVW）和全心质量（heart weight, HW）。计算左心室质量与体质量的比值（LVW/BW）、全心质量与体质量的比值（HW/BW），分别记为左心室质量指数（left ventricular weight index , LVWI）和全心质量指数（heart weight index, HWI）。 3.2.3心肌细胞横断面面积测定 每组随机取3只大鼠，取左心室中段，10%福尔马林液固定的心肌组织经乙
东南大学实验动物中心屏障系统管理制度 第一章屏障内动物饲育管理操作规范 l、严格按人员、物品进出屏障设施的规定和要求操作，单向流动。 2、准备当天所需物品。(包括鼠笼、饮水、消毒液、饲料等) 3、按周计划表进行动物换笼、断乳、配种、卫生、消毒等工作；必须使用消毒液浸泡的镊子夹取动物。 4、每天记录饲育室内温、湿度等环境因素，出现异常，及时汇报。 5、及时更换饮水和添加饲料，不得出现断缺。 6、每天坚持检查母鼠生产、哺乳情况，及时调整哺乳仔数，观察动物生长状况及有无漏水等现象，做好卡片记录，工作日记和周报表。 7、日常工作完毕，应将室内物品摆放整齐，清扫地板，彻底擦拭消毒地面一遍。每周五还应对屏障内所有其它区域及物品进行擦拭消毒，之后用消毒液对屏障内所有区域进行喷雾消毒。 8、按规定开关照明灯、紫外灯。 第二章工作人员进出屏障设施的规定和要求 l、感冒、皮炎及各种病菌、病毒携带者禁止进入洁净区； 2、进入屏障区前，先换拖鞋，入更衣室，一切个人用品如钥匙、饰物、手表、眼镜、通讯工具等不得带入； 3、洗手时间不少于1分钟，完毕后入无菌更衣室，打开灭菌包用灭菌毛巾擦干后分别戴上口罩、帽子，穿上连体的灭菌服、鞋套、拖鞋，戴上消毒手套； 4、入风淋室风淋； 5、进入清洁走廊-内准备室(提取所需用品)-饲育室进行工作； 6、随手关门，严禁两扇门同时打开，以保证压差的维持； 7、工作完毕后，将废弃物品等随人从非清洁走廊退出。
第三章物品进出屏障设施的基本要求 1、凡是可以清洗的物品(如饲养盒、饮水瓶等)，在消毒灭菌处理前必须进行彻底的清洗； 2、凡进入屏障设施内的一切物品，必须严格按照设计的流向路线进入。根据物品的性质可分别通过高压蒸汽灭菌器和传递窗两种不同的途径消毒灭菌后进入； 3、消毒灭菌后的物品分别从高压蒸汽灭菌器、传递窗的洁净操作侧取出，放在内准备室备用； 4、消毒灭菌过的物品贮存时间不宜过长，一般在七天内用完最好； 5、使用后废弃的物品和更换的笼具、饮水瓶等从污物走廊搬出。 第四章实验动物进出屏障设施的基本要求 1、采购和引进相应等级的动物时，应向国家规定的供种单位采购和引进； 2、必须明确购入动物的品种(系)、性别、体重、数量、级别，购入的时间及动物质量合格证、动物遗传背景资料等； 3、动物到达后，检查运输盒的密封情况，对照订货条件进行验收； 4、将运输盒外表面用消毒液彻底擦拭消毒，放入传递窗，喷洒2％过氧乙酸溶液，用紫外线灭菌灯照射后，在内准备室打开包装，将动物移入饲养盒内，在动物隔离室观察一周，未见异常后转入饲养室。 5、传出动物时，用已灭菌过的带过滤装置的专用运输盒装入动物后，封口胶布封严； 6、将传出动物的品种(系)性别、日龄、微生物等级等有关资料写在动物标签上，随人带出。 第五章东南大学实验动物中心SPF级实验室内部规章制度 一、SPF级动物实验室组织结构 1、SPF级动物实验室由实验动物中心主任直接领导。 2、SPF级实验室设置负责人1人，工作人员若干人。