《食品微生物学》实验大纲
总学时： 24 学分：1.5
面向专业：食品科学与工程（大类）课程代码：B32100014
先开课程：化学、生物化学等课程性质：必修课
执笔人：宫春波审定人：宫春波孙庆杰
第一部分：实验教学部分
一、说明
1、本门课程实验的性质任务、目的与要求
本实验课是《食品微生物学》的重要组成部分，是《食品微生物学》课程的必修环节。在系统地学习了理论知识的同时，通过课程实验，使学生能掌握一定的基本实验技能；通过分析实验过程出现的各种现象和问题，培养学生分析问题和解决问题的能力；通过实验数据的分析处理以及实验报告的撰写，培养和训练学生的实际应用能力和组织报告的能力。本实验的开设要求实验室具备微生物实验要求的基本设备和相关测试仪器，同时要求学生具备化学、生物化学等基本理论知识。
2、本门课程实验项目设置情况
二、各实验项目教学要求
实验一微生物的个体形态观察及群体形态特征的观察
(一).显微镜的构造、性能和使用方法
1.实验目的
（1）掌握显微镜的构造、性能和使用方法，重点掌握普通光学显微镜油镜的使用。
（2）了解和利用普通光学显微镜油镜对细菌、放线菌进行个体形态观察。
（3）观察并比较不同来源的的微生物生长的数量和类型。
2.原理
显微镜的光学系统中，有两组重要的透镜，这两组透镜虽然结构很复杂，但它们的作用都相当于一个凸透镜。凸镜的成像原理，也就是显微镜放大成像的光学原理。只不过是通过两次放大而已。显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型不同。通过环境中微生物的检测，比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。
3.试剂和仪器设备
（1）仪器或其他用具：显微镜（带油镜头，每人1台）、擦镜纸、棉签、废物缸等。
（2）溶液或试剂：香柏油、二甲苯。
（3）菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）及枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）
染色玻片标本；链霉菌（Stretomyces sp.）及青霉（Penicillium）的水封片；细菌染色片：单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌、无芽孢杆菌、荚膜、鞭毛、弧菌、螺菌）；放线菌染色片：细黄链霉菌（5406放线菌）、弗氏链霉菌。
3.实验步骤
标本片→低倍镜观察→高倍镜观察→油镜观察
①低倍镜的使用方法：
（1）取镜和放置
（2）对光
（3）放置玻片标本
（4）调节焦距
②高倍镜的使用方法：
（1）选好目标
（2）转动转换器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察（防止高倍镜头碰撞玻片），如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。
（3）调节焦距
③油镜的使用方法：
（1）在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。
（2）将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。
（3）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。
（4）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。
（5）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。
5.实验数据及其处理
绘出你观察到的经简单染色的细菌菌体形态图。
6.问题讨论
（1）显微镜的工作原理是什么？
（2）使用显微镜有哪些注意事项？
（3）使用油镜观察细菌染色标本片时为何要加香柏油？
（二）细菌的染色与形态结构的观察
1.实验目的
（1）学习微生物涂片、染色的基本技术。
（2）初步认识细菌的形态特征。
（3）巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。
（4）学习并初步掌握革兰氏染色法。
（5）了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
（6）观察芽孢的形态特征。
2.原理
细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂质含量低，用乙醇（或丙酮）脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫一碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇（或丙酮）溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫一碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
3.试剂和仪器设备
（1）主要仪器设备或其他用具：显微镜（带油镜头，每人1台），酒精灯，载玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，生理盐水等。
（2）试剂：吕氏碱性美蓝染液（或草酸铵结晶紫染液），齐氏石炭酸复红染液；革兰氏染色液。5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液。绘图墨水（上海墨水厂的“沪光绘图墨水”效果较好；必要时用滤纸过滤后使用），1%甲基紫水溶液，1%结晶紫水溶液，6%葡萄糖水溶液，20%硫酸铜水溶液，甲醇。
（3）菌种：枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物，藤黄微球菌（Ｍicrococcus luteus）约24h营养琼脂斜面培养物。大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物，蜡样芽孢杆菌（B.cercus）12-20h营养琼脂斜面培养物。革兰氏染色液。蜡样芽
孢杆菌约2d营养琼脂余斜面培养物，球形芽孢杆菌（B.Sphaericus ） 1-2d营养琼脂斜面培养物。
4.实验步骤
无菌操作挑取菌种→涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检
5. 实验数据及其处理
记录大肠杆菌和枯草芽孢杆菌染色后的观察结果。
6.问题讨论
（1）在制作涂片中，为什么要进行固定这一步？
（2）革兰氏染色中哪一步关键，为什么？
（3）作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚?其染色成败的关键是什么?
（4）当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？
实验二培养基的制备、灭菌以及无菌检测
1.实验目的
（1）明确培养基的配制原理；通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
（2）了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
（3）了解干热灭菌的原理和应用范围；学习干热灭菌的操作技术。
2.原理
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖的营养基质。培养基要具备以下条件：①要有适宜的营养物质和水分；②具有适宜的PH值；③配制后应经灭菌呈无菌状态。培养基按物理状态可分液体培养基、固体培养基、半固体培养基。常用琼脂作凝固剂。
3.试剂和仪器设备
（1）仪器或其他用具：手提式高压蒸汽灭菌锅，电烘箱，培养皿（6套一包），培养皿，试管，吸管，试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，pH试纸（pH 5.5-9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
（2）溶液或试剂：
①牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，1mol/L NaOH,1mol/L HCl。
②可溶性淀粉，KNO3,NaCl,K2HPO4·3H2O,MgSO4·7H2O,FeSO4·7H2O。
4.实验步骤
称量→溶化→过滤→定容→分装→包装→灭菌
微生物样品→接种→观察
5.实验数据及其处理
根据你所制作的培养基，简述其制作过程。
6.问题讨论
（1）说明制备培养基应注意哪些问题？
（2）培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？
（3）为什么高压蒸汽灭菌比干热灭菌所需的时间短，温度低
实验三微生物营养谱的测定
1.目的要求
学习用生长谱法测定微生物营养需要的基本原理和方法。
2.基本原理
为了使微生物生长、繁殖，必须供给所需要的碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因子等，如果缺少其中一种，微生物便不能生长。根据这一特性，可将微生物接种在一种只缺少某种营养物的完全合适的琼脂培养基中，倒成平板，再将所缺的营养物（例如各种碳源）点植于平板上，经适温培养，该营养物便逐渐扩散于植点周围。该微生物若需要此种营养物，便在这种营养物扩散处生长繁殖，微生物繁殖之处便出现圆形落圈，即生长图形，故称此法为生长谱法。这种方法可以定性、定量的测定微生物对各种营养物质的需要。在微生物育种和营养缺陷型的鉴定中也常用此法。
3. 操作步骤
1、24小时的大肠杆菌斜面用无菌水洗下，制成菌悬液。
2、将合成培养基约20毫升，溶化后冷到50℃左右加入1毫升大肠杆菌悬液，摇匀，立即倾注于直径为12㎝的无菌培养皿中，待充分凝固后，在平板背面用记号笔划分为六个区，并标明要点植的各种糖类，如图1所。
3、将6根无菌牙签，挑取6种糖对号点植，糖粒大小如小米粒。
4、倒置于37℃温室培养18～24小时，观察各种糖周围有无菌落圈。
5.思考题
营养缺陷性菌株营养谱确定的方法？
实验四环境因素对发酵微生物的影响及药敏实验
实验七环境因素对微生物的影响
1.实验目的
了解环境条件的改变对微生物生长影响。
2.原理
微生物的生长受环境条件的影响，这些环境条件包括物理的、化学的及生物的因素。如温度、氢离子浓度、水分活度、渗透压、氧气（氧化还原电位）、辐射、超声波、无机和有机化学试剂及
其他生物生长过程中产生的毒素、抗生素等因素。根据微生物与氧气的关系，可将微生物分为好氧微生物、兼性厌氧微生物、厌氧微生物和微好氧微生物几大类。通常对细菌分类要求进行需氧性的测定。每种微生物都有其生长温度范围，根据其最适生长温度范围，可将微生物分为低温型、中温型和高温型三大类。大多数微生物属于中温型，它们的适宜生长温度在20～40℃之间。微生物对环境氢离子浓度即pH亦有一定的要求，一般细菌、放线菌适于在中性微偏碱的环境生长，而酵母和霉菌适于在微酸性环境中生长。如果pH过酸或过碱都将抑制微生物的生长。
（1）常用化学消毒剂对微生物的作用。
（2）紫外线灭菌的原理和方法。
①紫外线照射。
②化学消毒剂与紫外线照射结合使用。
（3）微生物之间的拮抗作用。
①琼脂移块法。
②琼脂平面划线法。
3.试剂和仪器设备
（1）仪器或其他用具：
①恒温培养箱，无菌滤纸片，吸管，三角涂棒。
②紫外线灯，无菌平皿，接种环境。
（2）溶液或试剂：
①2.5%碘酒，0.1%升汞，5%石炭酸，75%乙醇，1%来苏尔，0.25%新洁尔灭，0.005%龙胆紫，0.05%龙胆紫，无菌生理盐水。
②3%-5%石炭酸或者1-3%来苏尔溶液。
（3）菌种：
①大肠杆菌，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）
②试验菌（植物病原菌）、拮抗菌（放线菌）；苏云金杆菌
（4）培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
4.实验步骤
到平板→接种菌种→物理、化学药剂处理→培养观察
5.实验数据及其处理
记录物理、化学因素对微生物生长的影响，分析影响的大小。
6.问题讨论
（1）在化学因素实验中，影响抑（杀）菌圈大小的因素有哪些？
（2）紫外线对微生物的杀灭原理是什么？紫外线灭菌应注意什么问题？
实验五微生物的选育及其鉴定、分类、命名
1.实验目的
本实验为综合性实验。学生应在掌握微生物分离纯化、菌种鉴定知识的基础上，结合微生物菌种分离、鉴定的技能，完成本项实验。本实验目的是使学生掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化接种培养的基本操作技术，了解微生物的保藏原理；掌握微生物的无菌操作技术；产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的分离鉴定及产酶特性研究。学习、掌握和区别细菌、霉菌、酵母菌、放线菌、细菌菌落形态的方法。
2.原理
微生物在自然界中不仅分布广，而且种类多，并多是混杂地生活在一起。要想研究或利用某一微生物，必须把混杂的微生物类群分离开来，以得到只含一种微生物的纯培养。微生物学中将在实验室条件下由一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为微生物的纯培养。纯培养技术包括两个基本步骤：①从自然环境中分离培养对象。②在以培养对象为唯一生物种类的隔离环境中培养、增殖，获得这一生物种类的细胞群体。针对不同微生物的特点，有许多分离方法。应用最广的是平板法分离纯培养。微生物的接种技术有：①斜面接种法。②液体接种法。③穿剌接种法。根据枯草芽孢杆菌的生长特性利用纯培养技术进行鉴定，研究枯草芽孢杆菌的产酶特性。
3.试剂和仪器设备
（1）仪器或其他用具：
①净化工作台、恒温培养箱、分光光度计、培养基、分离样品、灭菌培养皿、灭菌１ml吸管、接种环、接种针、酒精灯、火柴、玻棒、试管架、记号笔、牛皮纸、棉绳、废物缸。
②放大镜（每1人1个），直尺。
（2）溶液或试剂：盛有90ml无菌水三角瓶（内放少量玻璃珠），盛有9ml无菌水试管。
（3）菌种：霉菌（根霉、毛霉、青霉、曲霉、木霉、赤霉菌）、酵母菌、放线菌、细菌的菌落。
4.实验步骤
学生应通过查阅相关资料，采集土样，样品处理――样品稀释――菌种分离――菌落观察――鉴定――特性研究
5.实验数据及其处理
（1）记录平板菌落计数结果，并分析土壤微生物分布状况。
（2）将你所观察到的微生物菌落特征记载入下表
（3）分别描述细菌、放线菌、霉菌、酵母菌的主要特征。
6.问题讨论
（1）枯草芽孢杆菌分离方法是什么？
（2）如何初步鉴定其产酶活性的高低？
（3）试比较细菌与酵母菌、放线菌与霉菌的菌落形态差异。
实验六基于培养介质的微生物消长的测定
1.实验目的
1.了解大肠杆菌的生长曲线特征和繁殖规律，并学会绘制生长曲线。
2.复习光电比浊法测量细菌数量的方法。
2.实验原理
将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。
3.试剂与器材
1.材料与试剂大肠杆菌、LB液体培养基70ml、分装2支大试管(5ml／支)、剩余60ml装入250ml的三角瓶。
2.器材 722型分光光度计、恒温振荡摇床、无菌试管、无菌吸管等。
4.实验内容
编号→接种→培养→比浊测定
5.关键步骤及注意事项
1.测定OD值时，要求从低浓度到高浓度测定
2.严格控制培养时间
6.思考题
1.根据实验数据画出生长曲线，并说明大肠杆菌生长特征。
2.如果用活菌计数法制作生长曲线，你认为会有什么不同?两者各有什么缺点7．
3.次生礼谢产物的大量积累在哪个时期?根据细菌生
实验七微生物遗传物质提取、测序实验
1.目的要求
1.了解分光光度计测定DNA含量的原理和方法。
2.熟悉质粒的基本特性及质粒DNA提取的基本原理。
3.掌握碱变性法提取质粒DNA的基本操作过程。
2.实验原理
质粒(Plasmid)是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链DNA分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200Kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的DNA。
质粒DNA 具特定的形态结构，在特殊的环境条件下，如加热、极端pH值、有机溶剂、尿素、酰胺试剂等会导致质粒DNA变性，去除变性条件又可以使DNA复性。SDS是一种阴离子表面活性剂，它既能裂解细菌细胞，又能使细菌蛋白质变性。所以，SDS处理细菌细胞后会导致细菌细胞壁破裂，从而使质粒DNA及细菌基因组DNA从细胞中同时释放出来。释放出来的DNA遇到强碱性（NaOH）环境就会变性。然后，用酸性乙酸钾中和溶液碱性使溶液处于中性，质粒DNA将迅速复性，而染色体DNA由于分子巨大在短时间内难以复性。离心后，质粒DNA将留在上清中，染色体DNA则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出来。
测定DNA浓度的方法有两种：一是利用分光光度计法测定DNA的紫外光吸收值；一是利用溴化乙锭荧光强度法测定样品中溴化乙锭发射的荧光强度来计算核酸的含量。（1）紫外光吸收法：因为组成核酸的碱基在260nm处具有强吸收峰，所以通过测定260nm处的吸收峰即可对DNA进行定量。一般在中性pH环境条件下进行测定，此方法常用于测定比较纯净的DNA样品。（2）溴化乙锭荧光强度法：溴化乙锭能与DNA结合并嵌入双链中，当受紫外光照射时会激发产生荧光，且荧光的强度与DNA含量成正比。
3.实验准备
一、器材
1.电泳仪（包括直流电源整流器和电泳槽两部分）
2.台式离心机与高压灭菌锅
3.超净工作台、摇床和各式加样枪
二、试剂
1.溶液Ⅰ
50mmol/L葡萄糖
10mmol/L EDTA，20mmol/L
20mMTris-HCl pH8.0
100mg/ml RNase A（抽质粒时现加）
溶液Ⅰ可成批配制，每瓶约100ml，在10lbf/in2（6.859×104Pa）高压下蒸汽灭菌15分钟，40C冰箱贮存（注：不能将RNase A加入溶液Ⅰ中一起灭菌，RNase A用时现加）。
2.溶液Ⅱ
0.2mol/L NaOH（临用前用10mol/L NaOH贮存液现用现稀解）
1%SDS（临用前用10mol/L SDS贮存液现用现稀解）
3.溶液Ⅲ
60mL 5mol/L 醋酸钾，5ml 冰醋酸，28.5mL H2O
4.TE缓冲液
10mmol/L Tris-HCl, 1mmol/L EDTA（pH8.0）
5.100%乙醇，70％乙醇
6.上样缓冲液(6×)：0.25% 溴酚兰，40％(W/V)蔗糖水溶液或30％的甘油
7.5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
445 mmol/L Tris碱， 445 mmol/L 硼酸盐， 10 mmol/L EDTA
称取54g Tris碱、27.5g 硼酸溶于500ml蒸馏水中，加入20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）混匀，补加蒸馏水至1000ml，40C冰箱贮存。
8.5×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
2mol/L Tris碱，1mol/L 乙酸，100 mmol/L EDTA
称取242g Tris碱溶于500ml蒸馏水中，加入57.1 ml冰乙酸（17.4 mol/L）及200ml 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）混匀，补加蒸馏水至1000ml，40C冰箱贮存。
三、材料
1.含有质粒大肠杆菌
2.琼脂糖
【实验操作】
一、质粒DNA的提取
1.培养细菌：将带有质粒的大肠杆菌接种到液体培养基中，37℃振荡培养12～16小时，到细菌对数生长期即可收获;
2.取3ml细菌培养液（分2次，每次1.5ml）于Eppendorf
管中，10，000 × g离心1分钟，弃上清液（尽可能完全）；
3.加入100ul冰预冷的溶液Ⅰ，剧烈振荡使细胞完全重悬；
4.加入200ul新配制的溶液Ⅱ，快速颠倒4次，轻轻混合，将离心管放置于冰上；
5.加入150ul冰预冷的溶液Ⅲ，温和振荡10秒钟使溶液Ⅲ均匀地分散在细菌裂解物中，置冰浴放置3～5分钟；
6.12，000 × g 离心5分钟，将上清液移入另一离心管中；
7.加等量酚：氯仿，振荡混匀，用台式高速离心机，10000r/min离心7min，上清移入另一干净离心管；
8.加2倍体积的 100％乙醇混匀，于室温净置5分钟沉淀双链DNA；
9.用台式高速离心机
于40C、12000r/min离心5min；
10.小心倒弃上清，将离心管倒置于滤纸上将剩余液体滴尽；
11.用1ml70％乙醇于40C洗涤双链DNA沉淀，按步骤11去上清，在空气中使沉淀干燥10分钟；
12.取50ul含胰Rnase A（20ug/ml）无Dnase的TE重新溶解质粒DNA，于-200C冰箱贮存备用。
二、质粒DNA含量测定
1.取2ul提取的质粒DNA，加入98ul蒸馏水对待测DNA样品进行1:50倍(或更高倍数的稀释);
1、蒸馏水作为空白,在波长260nm、280nm处调节紫外分光光度计读数至零。
4.加入DNA稀释液，测定260nm 及280nm的吸收值。260nm 读数用于计算样品中核酸的浓度，OD260值为1相当于约50mg /ml双链DNA，33mg /ml单链。可根据在260nm以及在280nm的读数的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度。一般DNA的纯品，其比值为1.8，低于此值说明有蛋白质或其它杂质的污染
5.记录OD值，通过计算确定DNA浓度或纯度，公式如下:
2、
dsDNA=50×(OD260) ×稀释倍数（注：浓度单位为mg /ml）
三、质粒DNA的琼脂糖电泳
1.琼脂糖凝胶的制备:称取05g琼脂糖，置于三角瓶中，加入50ml TBE或TAE工作液，瓶口倒扣一个小烧杯等，将该三角瓶置于微波炉加热至琼脂糖溶解。
2.胶板的制备:取有机玻璃内槽，洗净、晾干；取纸胶条(宽约1cm)，将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，放好梳子。将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液，小心地倒入有机玻璃内槽，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。室温下静置30min左右，待凝固完全后，轻轻拔出梳子，在胶板上即形成相互隔开的上样孔。制好胶后将铺胶的有机玻璃内槽放在含有0.5～1×TAE（Tris-乙酸）或TBE（Tris-硼酸）工作液的电泳槽中使用。
3.加样:用微量加样器将上述样品分别加入胶板的样品孔内。每加完一个样品，换一个加样头。加样时应防止碰坏样品孔周围的凝胶面以及穿透凝胶底部，本实验样品孔容量约15～20 ul。在第一个上样孔或最后一个上样孔内加入6ul 的 1 kb DNA ladder（50ng/ul ）。
4.电泳（带上手套操作）:加完样后的凝胶板即可通电进行电泳；建议在80～100V的电压下电泳；当溴酚兰移动到距离胶板下沿约1cm处停止电泳；将凝胶放入溴化乙啶（EB）工作液（0.5ug/ml 左右）中染色约20min。为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不应高于5V/cm（两电极间的距离）。电泳温度视需要而定，对大分子的分离，以低温较好，也可在室温下进行。在琼脂糖凝胶浓度低于0.5%时，由于胶太稀，最好在4℃进行电泳以增加凝胶硬度。
5.观察与拍照:在紫外灯(310nm波长)下观察染色后的凝胶。DNA存在处显示出红色的荧光条带。紫外光激发30s左右，肉眼可观察到清晰的条带。在紫外灯下观察时，应戴上防护眼镜或有机玻璃防护面罩，避免眼睛遭受强紫外光损伤。拍照电泳图谱时，可采用快速凝胶成象系统。
【注意事项】
1.收获细菌应在其对数生长期，此时细菌生长活跃，死菌较少，质粒产量高。
2.质粒提取过程中，溶液Ⅱ应现用现配，不亦贮存。
3.在质粒提取的整个过程中都应特别注意DNase污染，防止质粒DNA被DNase水解。
4.质粒提取过程复杂，在抽质粒前一定要充分作好准备，将器具、离心管、枪头等消毒。
5.质粒DNA进行琼脂糖凝胶电泳时，要特别注意EB的使用，因为EB是一种诱变剂，有致癌作用，操作时戴塑料或乳胶手套。
【思考题】
1、质粒抽提用具、试剂为何要高压灭菌？
2、溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的作用是什么？
3、质粒抽提取过程为何要防止DNA酶污染？
4、细菌收获的最佳时期是什么时期？
5、质粒DNA电泳时为何要加EB？为何又要特别小心？
6、质粒DNA的电泳图谱为何有时只有1条带谱，有时又有2～3条带谱？为什么？
三、考核方式和成绩评定要求
1．实验报告的格式
实验完毕，根据实验中的现象及数据记录等，及时而认真地写出实验报告。
2．实验成绩评定方法：
实验课成绩单独百分制记录成绩，可参考以下标准：
(1)90—100分
能正确理解实验的目的要求，能独立、顺利而正确的完成各项实验操作，会分折和处理实验中遇到的问题，能掌握所学的各项实验技能，能较好地完成实验报告及其它各项实验作业，有一定创造精神和能力。有良好的实验室工作作风和习惯。
(2)80—89分
能理解实验的目的和要求，能认真正确地完成各项实验操作，能分析和处理实验中遇到的一些问题。能掌握所学实验技能的绝大部分，对难点较大的操作完成有困难。能一般完成实验报告和其它实验作业。有较好的实验习惯和工作作风。
（3）70~79分
能粗浅理解实验目的要求，能认真努力进行各项实验操作，但技巧较差。能分析和处理实验中一些较容易的问题，掌握实验技能的大部分。有30%掌握得不好。能一般完成各项实验作业和报告。处理问题缺乏条理。工作作风较好。能认真遵守各项规章制度。
(4)60~69分
只能机械地了解实验内容，能一般按实验步骤完成实验操作，能完成60％所学的实验技能，有些虽作但不准确。遇到问题常常缺乏解决的办法，在别人启发下能作些简单处理，但效果不理想。能一般完成实验报告，能认真遵守实验室各项规章制度，工作中有小的习惯性毛病(如工作无计划，处理问题缺乏条理)。
(5)59分以下
试验预习不认真，只掌握5%的所学实验技能。有些实验虽能做，但一般效果不好，操作不正确。工作忙乱无条理。一般能遵守实验室规章制度，但常有小的错误。实验报告较多的时候有结果，遇到问题时说不明原因，在教师指导下也较难完成各项实验作业。工作态度不认真，不求上进。
中国近代史纲要期末考试试题一、单项选择题(本大题共20小题120分) 1.1936年10\ 二、四方面军胜利会师于(D ) A.陕北保安地区 B.陕北洛川地区 C.陕北瓦窑堡地区 D.甘肃会宁、静宁地区 2. ( C) A.毛泽东朱德、周恩来 B.毛泽东、朱德、王稼祥 C.毛泽东、周恩来、王稼祥 D.毛泽东、张闻天、周恩来 3.中华民族进入全民族抗战是在(D ) A.九一八事变后 B.一二八事变后 C.华北事变后 D.卢沟桥事变后 4.1935年12 是(B ) A.遵义会议 B.瓦窑堡会议 C.洛川会议 D.晋绥干部会议 5. 胜利的战役是(A ) A.台儿庄战役 B.桂南战役 C.枣宜战役 D.中条山战役 6. 的阶段是( B)
A.战略防御阶段 B.战略相持阶段 C.战略反攻阶段 D.战略决战阶段 7.1945年4 表是(C ) A.周恩来 B.刘少奇 C.董必武 D.王若飞 8. 表会谈纪要》的时间是( C) A.1945年8月 B.1945年9月 C.1945年10月 D.1945年11月 9.1947年10月10(C ) A.和平、民主、团结 B.向北发展、向南防御 B.C. D.将革命进行到底 10.1949年6 著作是(D ) A.《新民主主义论》 B.《目前形势和我们的任务》 C.《论联合政府》 D.《论人民民主专政》 11.1898 (C ) A.李鸿章 B.左宗棠 C.张之洞 D.刘坤一 12.
(A ) A.《时务报》 B.《国闻报》 C.《湘报》 D.《万国公报》 13.中国第一个资产阶级革命政党是( B) A.兴中会 B.中国同盟会 C.中华革命党 D.中国国民党 14. 是(D ) A.湖南 B.湖北 C.广东 D.四川 15.中国历史上第一部具有资产阶级共和国宪法性质的法典是(D ) A.《中华民国宪法》 B.《钦定宪法大纲》 C.《中华民国约法》 D.《中华民国临时约法》 16.1913年领导革命党人发动了( A) A.二次革命 B.护国战争 C.护法战争 D.北伐战争 17.1930年成立的中国国民党临时行动委员会(又称第三党) 主要领导人是(D ) A.梁漱溟 B.黄炎培 D.张君劢 D.邓演达
微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。 （1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。 （2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。 （3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或
环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。是指用物理或化学的方法杀灭全部微生 物，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。 （4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。平板分离法主要有：1.平板划线分离法。2.稀释涂布平板法。 （5）革兰氏染色法：革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性细菌（G+）和革兰氏阴性细菌（G-）两种类型。这是两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。大肠杆菌是革兰氏阴性杆状细菌，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性细菌，经过革兰氏染色后两者呈现不同的颜色，在显微镜下便于进行观察…… 我们学习微生物实验技术，就是要把微生物的实验技能应用于实践生产，培养繁育细菌收集细菌代谢产物，应用于药业、工业，产生经济利益。制备培养基是微生物实验技术操作的重要环节，按照培养基的功能分类培养基的类型有：1.选择培养基。2.鉴别培养基。在工业生产中常常应用于培养微生物的主要是-发酵罐。我将微生物在生产生活中的应用总结如下： 微生物技术的应用在当今社会中已取得了很大的作用，在工业、农业、医药业、畜牧业等各个行业中都取得了长足的进展，但相对于
实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察、 大小的测定和计数 一、实验目的 １、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片,学会绘制生物图 3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法 ４、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法 二、实验器材 １、显微镜 ２、微生物标本装片 ３、目、物镜测微尺 ４、血球计数板 ５、酵母菌液或霉菌孢子液 6、载波片、盖波片、烧杯、滴管、擦镜纸、香柏油、二甲苯等 三、显微镜的构造、原理及使用方法 1、构造 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜,由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器;光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。 ２、操作 在目镜保持不变的情况下,使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下,特别是初学者，进行显微观察时应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序,因为低倍数物镜视野相对大,易发现目标及确定检查的位置。 四、微生物大小的测量原理和方法 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和物镜测微尺。 1、目镜测微尺(图1-1）是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍｍ长度刻成5０等分，或把1０mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中 --
-- 间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用物镜测微尺校正，以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2、物镜测微尺(图１-２）是中央部分刻有精确等分线的载 玻片,一般将lmm 等分为100格,每格长ｌ０μm （即0.0ｌmm), 是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将物镜测微尺放在载 物台上,由于物镜测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经 过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即物镜测微尺随着显 微镜总放大倍数的放大而放大，因此从物镜测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用物镜测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去物镜测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 3、目镜测微尺的校正 把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把物镜测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与物镜测微尺的刻度平行，移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“０”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度（图1－３)，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。因为物镜测微尺的刻度每格长l0μｍ，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。 例如目镜测微尺５小格正好与物镜测微尺5小格重叠，已知物镜测微尺每小格为ｌ0μm ，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/５=1０μm 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同,因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用,当更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 4、细胞大小的测定 移去物镜测微尺,换上待测菌体的装片，先在低倍镜下找到目的物,然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值,即等于该菌的长和宽。 结果计算： 长μm=平均格数×校正值 宽μｍ＝平均格数×校正值 大小表示: 宽μm ×长μｍ 五、微生物细胞数量的测定原理和方法 1、血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图1-4），计数区 图1-1 目镜测微尺 图1-2 物镜测微尺 图1-3 目、物镜测微尺的校正 图1-4 血球计数板
课程编号： 《微生物学实验》教学大纲 学时数：108讲课：108 学制：四年制本科 适合专业：生物科学相关专业 一、本课程的性质和任务 （一）课程的性质： 微生物学实验主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。提高学生分析问题和解决问题的能力。根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的问题点样分析，并加以解决。 （二）课程的任务： 微生物学实验是生物学重要的基础课之一，要求学生熟悉微生物学方法与技术，掌握无菌操作技能和建立无菌概念是微生物学实验中最重要的内容，重点掌握最基本的无菌操作技能，如接种、纯培养、计数等。 二、本课程与其他课程的联系： 1. 通过教师示范、讲解与学生实际操作相结合方法，使学生牢固树立无菌概念，掌握显微镜的使用、生物染色技术、形态学观察的方法、微生物计数、培养基的配置和灭菌方法、微生物分离、纯化等基本操作技能，基本了解常用的仪器设备的基本原理、构造、使用方法及使用中的注意事项，树立严谨求实的科学态度，提高观察、分析问题和解决问题的能力，培养勤俭节约、爱护公物和相互协作的优良作风。 2. 本实验课内容包括验证性实验、综合性实验两个部分。验证性实验主要
通过光学显微镜镜检观察方法进行教学，综合实验在教师指导下学生根据所掌握的理论基础和实验技能，由学生自己动手完成。实验过程要求学生仔细观察实验现象，完整记录原始实验数据、结果，分析实验现象并认真填写实验报告。 三、教学内容 （一）实验一实验室安全教育与微生物学实验室常用的器皿 目的要求 掌握实验室安全规则，了解微生物学实验所用的器皿，因其大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此了解其质量、洗涤和包装方法的要求。 实验内容 一、器皿的种类、要求与应用： 1、试管 大试管(约18mm×180mm) :可装倒平板用的培养基；可作制备斜面用；装液体培养基用于微生物的振荡培养 中试管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 装液体培养基培养细菌或做斜面用；用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。 小试管[(10～12)mm×100mm]:一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料的试验。 2、容量瓶 主要用于准确配制一定浓度的溶液，它是一种细长颈、梨形的平底玻璃瓶，配有磨口塞，瓶颈上刻有标线。 3、量筒 用来量取液体体积的一种玻璃仪器，外壁上有刻度。常用量筒的规格有5ml、10ml、25ml、50ml、100ml、250ml等。 4、三角瓶 用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等。 5、烧杯 呈圆柱形，顶部的一侧开有一个槽口，便于倾倒液体，有些烧杯外壁标有刻度，可以粗略地估计烧杯中液体的体积，这种烧杯叫印标烧杯，也叫刻度烧杯，其分度并不十分精确，允许误差一般在±5%。 6、烧瓶 通常具有圆肚细颈的外观，因瓶口很窄，不适用玻璃棒搅拌，若需要搅拌时，
中国近现代史纲要题库 说明：为使学生复习方便，期末考试规范，本题库基本以章为单位设定一个代码，其中将上编综述与第一章合并，代码为A，计22题；第二章代码为B，计12题；第三章代码为C，计13题；中编综述与第四章合并，代码为D，计15题；第五章代码为E，计14题；第六章代码为F，计15题；第七章代码为G，计15题；下编综述与第八章合并，代码为H，计18题。第九章、第十章因与《毛泽东思想和中国特色社会主义理论体系概论》课程内容重叠，故略。总计124 题。 A.1、中国半殖民地半封建社会形成的原因是什么 1、外国资本主义势力入侵 2、中国封建势力的压迫 A.2、鸦片战争后中国社会发生了哪两个根本性变化 1、独立的中国逐步变成半殖民地的中国 2、封建的中国逐步变成半封建的中国 A.3、在近代，中国没有完全变成殖民地的原因是什么 1．中国长期以来一直是一个统一的大国2、中国人民的反抗3、帝国主义列强间争夺中国的矛盾无法协调 A.4、近代中国工人阶级的来源有哪些 1、城市贫民 2、手工业者 3、破产农民 A.5、中国工人阶级的优点有哪些 1、革命性最强 2、组织纪律性强 3、集中、团结 4、与广大农民有天然联系 A.6、中国资产阶级包括哪几部分 1、官僚资产阶级 2、民族资产阶级 A.7、简述中国民族资产阶级政治上的两面性 1、与外国资本主义和本国封建主义有矛盾、斗争的一面 2、与外国资本主义和本国封建主
义有依赖、妥协的一面 A.8、在近代中国社会的诸矛盾中，占支配地位的主要矛盾是什么 1、帝国主义和中华民族的矛盾 2、封建主义和人民大众的矛盾 A.9、近代以来中华民族面临的历史任务是什么 1、争取民族独立、人民解放 2、实现国家繁荣富强、人民共同富裕 A.10、为什么说鸦片战争是中国近代史的起点 1、鸦片战争前，中国是一个领土完整、主权独立的封建国家；鸦片战争后，中国逐步沦入半殖民地的地位 2、鸦片战争前，中国是一个经济上自给自足的封建国家；鸦片战争后，中国从一个完全的封建社会转变为半封建社会 3、鸦片战争前，中国社会的主要矛盾是封建主义与人民大众的矛盾；鸦片战争后资本—帝国主义和中华民族的矛盾成为中国社会的另一个主要矛盾 A.11、怎样认识近代中国的主要矛盾 1、帝国主义与中华民族的矛盾，封建主义和人民大众的矛盾，是近代中国社会的基本矛盾 2、而帝国主义与中华民族的矛盾，乃是各种矛盾中最主要的矛盾 A.12、怎样认识近代中国的社会性质 1、鸦片战争后，由于帝国主义列强的侵略，中国的社会性质逐步演变为半殖民地半封建社会 2、半殖民地，是指由于外国资本主义的侵入，使中国沦为表面上独立、实际上受帝国主义列强共同支配的半殖民地国家 3、半封建是指由于外国资本主义的侵入，中国由一个完全的封建社会变成有一定资本主义成分的半封建社会。 A.13、如何理解近代中国的两大历史任务及其相互关系 1、近代中国人民始终面临两大历史任务：一是求得民族独立和人民解放；二是实现国家的繁荣和人民的共同富裕 2、在两大历史任务中，首先必须完成的历史任务是求得民族独立和人民解放，结束半殖民地半封建社会，才能使国家繁荣富强和人民共同富裕成为可能 3、近代中国社会的两大历史任务是互相联系的。前一个任务为后一个任务扫清障碍，创造必要的前提；后一个任务是前一个任务的最终目的与必然要求 A.14、近代中国，列强对华军事侵略采取的主要方式是什么 1、发动侵略战争，屠杀中国人民 2、侵占中国领土、划分势力范围 3、勒索赔款，抢夺财富 A.15、近代中国，列强对华政治控制的主要方式是什么 1、控制中国的内政外交 2、镇压中国人民的反抗 3、扶植、收买代理人 A.16、近代中国，列强对华经济掠夺的主要手段是什么 1、控制中国通商口岸 2、剥夺中国的关税自主权 3、实行商品倾销和资本输出 4、操纵中国的经济命脉 A.17、近代中国，列强对华文化渗透主要表现是什么
微生物学实验教学大纲 课程名称：微生物学实验课程编码：0431030706 英文名称：Microbiological experiment 学时：36学分：2 适用专业：制药工程及相关专业课程类别：必修 课程性质：专业基础课先修课程：微生物学 参考教材：杜连祥，路福平主编。《微生物学实验技术》，中国轻工业出版社，2005，8. 一、制定本大纲的依据 本教学大纲是根据教学目的、要求以及实际教学学时制定的，课程总学时为36学时。在不妨碍教学内容的系统性与逻辑性的前提下（包括前后实验内容的衔接关系），主讲教师可以按照自己的具体教学情况或经验，适当地将某些内容的次序加以变更或调整。 二、本实验课程的具体安排 实验项目的设置及学时分配（表）
三、本实验课在该课程体系中的地位与作用 微生物学实验课是与微生物学理论课同学期开设的一门重要的技术基础课。通过本课程的教学，使学生较熟练的掌握微生物学实验的基本操作技术和初步掌握研究微生物的基本方法。通过对具体微生物材料的观察、分析，进一步加深和巩固对微生物学理论课所学知识的理解并提高学生分析和解决实际问题的能力。 四、学生应达到的实验能力与标准 通过本课程的教学，使学生掌握进行常规常见微生物检测的实验原理和基本方法，具有独立进行微生物学检测实验方案的设计、初步具备利用微生物学手段分析和解决发酵生产过
程中有关实际问题和从事有关科学研究工作的能力。 要求学生了解实验室的布置以及实验室的规则；使学生熟练掌握显微镜的使用技术并熟悉显微镜的使用技术并熟悉显微镜的构造及保养方法；学会干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱的使用；具有选择和制备培养基的能力；掌握基本染色原理和方法以及制片技术；熟悉细菌、酵母菌、霉菌的基本形态结构、生理生化特征和血清学特性，具有菌种初步鉴定的基本技能；通过实验，使学生学会无菌操作方法，掌握微生物的分离、筛选和育种的基本知识和技能，了解菌种保藏的一般方法。 五、讲授实验的基本理论与实验技术知识 实验一细菌培养基的配制与灭菌 1.实验内容与要求： （1）了解加热灭菌的基本原理，掌握实验室常用的几种加热灭菌技术 （2）了解配制培养基的基本材料，学习配制肉汤培养基的方法并掌握其要点。 2.实验材料： （1）培养基组成牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH值7.2，固体时加琼脂2%。（2）试剂 6mol/lHCl、10%NaOH。 （3）其它工具：台秤、量筒、试管、三角瓶、烧杯、分装架等。 实验二细菌的接种与培养 1.实验内容与要求： （1）掌握无菌操作的概念和基本操作技术； （2）了解细菌常用的培养基以及培养条件； （3）了解平板划线分离菌种的原理和操作要点。 2.实验材料： （1）菌种：大肠杆菌(Escherichia coli)，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，八叠球菌(Sarcina sp.)。 （2）培养基：肉汤固体斜面（2个/菌），肉汤液体试管（2管/菌），平板划线接种肉汤固体培养基（10-15ml/皿，2块/菌），平板点接肉汤固体培养基（10-15ml/皿，3支菌用1块），穿刺用肉汤半固体培养基（2管/菌）。 （3）其它工具：接种针，接种环，酒精灯或煤气灯，消毒酒精棉球，镊子，试管架，标签纸，培养箱（37℃）
南开大学马克思主义教育学院本科2009－2010学年第一学期 《中国近现代史纲要》课程 期末统考试卷（A卷）[闭卷]（100分钟） （平时成绩和期末考试成绩比例：30：70） 学院：专业：学号：姓名： 一、单项选择题：（将1-20题的选项字母填入下表相应空格处，共20分，每小题1分） 1．在19世纪中叶，被称为“海上霸主”、“日不落帝国”的殖民国家是（）。 A．美国 B．德国 C．日本 D．英国 2．中国无产阶级最早诞生于（）。 A．民族资本主义企业 B．洋务派开设的工厂 C．外国资本企业 D．辛亥革命后的新兴企业 3．1895年，日本强迫清政府签订（），割去中国台湾全岛及所有附属岛屿和澎湖列岛。 A．辛丑条约 B．马关条约 C．北京条约 D．望厦条约 4．康有为创立的宣传维新思想的新式学堂是（）。 A．时务学堂 B．万木草堂 C．京师大学堂 D．同文馆 5．被誉为“革命军中马前卒”的（）写了《革命军》号召人民推翻清王朝，建立“中华共和国”。 A．黄兴 B．宋教仁 C．邹容 D．陈天华 6．关于近代中国半殖民地半封建社会性质的叙述，不正确的是( )。 A．表面上独立，实际上受帝国主义列强共同支配和操纵 B．原有的延续几千年的封建经济结构起了很大变化，自然经济逐渐解体
C．民族资本主义在整个社会经济结构中不但占有一席之地，而且逐步占主导地位 D．封建剥削制度依然保留着，而且同买办资本和高利贷资本相结合，在中国社会经济生活中仍占显著优势 7．毛泽东认为，（）是一个“开天辟地的大事变”。 Ａ．十月革命Ｂ．五四运动Ｃ．中国共产党的成立Ｄ．第一次国共合作 8．土地革命战争时期中国共产党最伟大的历史贡献是（）。 A．发动、领导了著名的秋收起义 B．开辟了农村包围城市、武装夺取政权的道路 C．领导中国人民推翻了三座大山 D．推动了抗日民族统一战线的建立 9．下列不属于中华苏维埃共和国建立的前提条件是（）。 A．毛泽东“工农武装割据”的思想 B．农村革命根据地的建立和发展 C．革命武装力量的壮大 D．第四次反“围剿”斗争的胜利 10．中国共产党正式把毛泽东思想确定为自己指导思想的会议是（）。 A．八七会议 B．遵义会议 C．中共六届七中全会 D．中共七大 11．1938年10月后，抗日战争进入相持阶段在中国方面的主要原因是（）。 A．中国地域辽阔，战线长，敌后战场的开辟 B．中国在经济上军事上仍相对弱小，无力开展反击 C．中国国民党不积极抗战 D．中国抗战得不到国际社会的支持，十分困难。 12．（）是民主革命的基本内容。 A．土地革命 B．党的建设 C．根据地建设 D．武装斗争 13．以下人物中，都参加过和平解决西安事变和重庆谈判的是 ( )。
微生物学实验 实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 三、试剂与器材 1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天 平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 四、实验内容 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒 压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC 以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零 取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快， 滤膜要注意清洗保存。 六、思考题 1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是 无菌的? 2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么? 3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么? 4.培养基的配制原则是什么? 实验二土壤中微生物分离纯化培养 一、实验目的 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。 二、实验原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。 三、试剂与器材 1.器材盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角 烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。 2.试剂牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，查氏培养基 四、实验内容
《微生物检测技术》教学大纲 一、基本信息 二、教学目标及任务 教学目标：通过36个学时的教学，努力使学生了解微生物检验检测中的基本技术体系，了解微生物检测技术在研究工作中的用途和新技术的发展动态，使学生在微生物检验检测方面能够提高认识，并对技术体系有一定的了解，以适应就业后在动植物检验检疫、食品品质检测等方面的微生物检验检测业务的需要，也能适应学生今后在进一步的研究和开发过程中所需要用到的研究性检测业务。 三、学时分配 四、教学内容及教学要求 绪论我国粮食生产、我国农业的发展趋势及其和微生物的关系。 重点介绍我国粮食生产的趋势和供需关系，使学生理解微生物检验检测的重要性 无难点 了解微生物检验技术的重要性
第一章微生物在自然界的分布、作用和特征 第一节微生物在自然界的分布 第二节微生物在自然界的作用 第三节微生物在自然界的特征 本章重点介绍微生物的多样性、微生物分布的普遍性和检测特定的微生物的难点 无难点 了解技术对微生物检验的重要性 第二章微生物检验技术和社会 第一节微生物检验技术和植物检疫 第二节微生物检验技术和食品安全 第三节微生物检验技术和研究 本章重点介绍微生物检验检测技术在植物检疫、食品安全、资源开发以及研究活动中的作用和意义 无难点 理解微生物检验技术对国民经济和国民生活安全的重要性，了解微生物检验技术作用范围 第三章微生物检测技术概述 第一节可培养微生物的检测 第二节VBNC的检测技术 第三节其它的微生物检测技术 针对本课程以各项技术为中心展开，缺乏系统性的特点，本章首先给各种微生物检测技术进行概述，尽量给学生提供一个整体观和一些关键技术的信息。 难点在于理解VBNC的检测 理解各种常用的微生物检验技术和方法 第四章样品的采集和处理 第一节气体的采样和处理 第二节液体的采样和处理 第三节固体的采样和处理 从实际出发，本课程设置了采样技术，对用于微生物检验检测的样品的采集进行细致的介绍。 难点在于理解各种采样设备和工具（缺乏实物） 使学生注意到采样行为对微生物的检测结果带来的误差，并培养学生在自己今后的工作中尽量减少采样造成的误差的意识。 第五章微生物检测技术 第一节可培养微生物的检测 以国标为蓝本，介绍可培养微生物的检测方法 学生实验中有一定的基础，应无难点 使学生了解微生物检测的国家标准在实际工作中的应用，使学生学会如何利用国标。 第二节VBNC的检测技术 以最新的研究或最经典的研究例子为蓝本，介绍VBNC检测的各种方法 难点在于理解检测的理论原理和实际操作之间的差距 使学生了解VBNC的检测的方法及其特征，在必要的时候能选择使用。 第六章微生物分离和培养技术 第一节微生物的分离 介绍可培养以及难培养的微生物的分离方法，着重介绍菌根菌的分离 难点在于对于微生物的分离效果的理解 希望学生能掌握基本的微生物分离方法 第二节可培养微生物的培养 1 病原物的培养 2 非病原物的培养 介绍可培养微生物的培养方法，着重介绍病原菌培养时的注意事项 难点在于对于如何传达培养病原微生物时的临场感
中国近代史纲要大题 一、对中国国家出路的早期探索的运动和发起阶级 太平天国农民战争：农民阶级，洋务运动：地主阶级洋务派，维新变法：资产阶级维新派，辛亥革命：资产阶级革命派。 // 太平天国爆发原因 （1）根本原因：清政府的腐败和搜刮，导致国内阶级矛盾激化。 （2）重要原因：外国资本主义的侵略，加剧了中国国内的社会矛盾。 （3）直接原因：连年发生的自然灾难。 （4）主观原因：西方基督教思想的影响，创立拜上帝教组织的推动。 二、太平天国制度建设的两大方案及评价 《天朝田亩制度》是最能体现太平天国社会理想和这次农民起义特色的纲领性文件。 （一）是一个以解决土地问题为中心的比较完整的社会改革方案。（二）从根本上否定了封建社会的基础即封建地主的土地所有制，体现了广大农民要求平均分配土地的强烈愿望。（三）没有超出农民小生产者的狭隘眼界。它所描绘的理想天国，仍然是闭塞的自给自足的自然经济，同时又是一个没有商品交换的和绝对平均的社会，具有不切实际的空想的性质。（四）没能付诸实施。 《资政新篇》是太平天国后期颁布的社会发展方案。 （一）是一个具有资本主义色彩的改革方案。（二）限于当时历史条件，没能付诸实施。 三、太平天国农民起义的历史意义 （一）沉重打击了封建统治阶级，强烈撼动了清政府的统治根基。（二）是中国旧式农民战争的最高峰。（三）冲击了孔子和儒家经典的正统权威。（四）有力地打击了外国侵略势力。（五）和其他亚洲国家的民族解放运动汇合在一起，冲击了西方殖民主义者在亚洲的统治。 四、太平天国起义失败的原因和教训 失败原因：主观原因：农民阶级自身的历史局限性，农民阶级不是先进生产力和生产关系的代表。首先，无法从根本上提出完整的、正确的政治纲领和社会改革方案；无法制止和克服领导集团自身腐败现象的滋长；也无法长期保持领导集团的团结。其次，拜上帝教教义不是科学的思想理论，不仅不能正确指导斗争，而且给农民战争带来了危害。再次，未能正确地对待儒学。最后，对于西方资本主义侵略者缺乏理性的认识。 客观原因：敌人（本国封建势力与外国侵略者）的力量强大。 教训：天平天国起义及其失败表明，在半殖民地半封建的中国，农民具有伟大的革命潜力；但它自身不能担负起领导反帝反封建斗争取得胜利的重任。单纯的农民战争不能完成争取民族独立和人民解放的历史任务。 // 兴办洋务事业之目的 1.压内——镇压农民起义 2.防外——加强海防、边防 3.固体——发展本集团的政、经、军实力 五、洋务事业的主要方面 （一）兴办近代企业；（二）建立新式海陆军；（三）创办新式学堂，派遣留学生。 六、洋务运动的历史作用 （一）客观上对中国的早期工业和民族资本主义的发展起了某些促进作用；（二）开始了中国的近代教育，给当时的中国带来了新的知识，使人们开阔了眼界；（三）社会风气和价值观念开始变化，工商业者的地位上升。
食品微生物学实验技术思考题答案 1. 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？ 答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比. 2. 列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作答：使用高倍镜和油镜时镜头距离标本较近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。 3. 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？ 答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。 4. 影响显微镜分辨率的因素有哪些？ 答：物镜的NA 值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长 5. 根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察 答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。 答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40 倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000 倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。 6. 哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节 7. 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题? 答：着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌 8. 革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色? 答：不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁，对
《食品微生物学实验》课程教学大纲 课程名称：食品微生物学实验 课程编号： 课程组长： 总学分值：1分 总学时数：16学时 适用专业：酿酒工程 一、实验教学课程性质和目的：食品微生物检验技术实验课是与微生物学理论课同学期开设的一门重要的技术基础课。通过本课程的教学，使学生较熟练的掌握微生物学实验的基本操作技术和初步掌握研究微生物的基本方法。通过对具体微生物材料的观察、分析，进一步加深和巩固对食品微生物检验技术理论课所学知识的理解并提高学生分析和解决实际问题的能力。 二、实验教学目的和要求： 1.能够正确制备显微试片，并能独立操作显微镜进行微生物的显微分析； 2.能够通过固体培养的菌落特征，区分真核细胞型微生物和原核细胞型微生物的特点； 3.能在独立进行各种实验材料的准备、实验器皿、培养基的灭菌； 4.能够正确选择符合要求的目的菌株，并进行纯培养和简单的种类鉴定。 5.熟悉从自然界中分离筛选微生物、鉴定微生物的基本方法。 三、实验配套的主要仪器设备及台（套）数
四、实验项目内容和要求
1．考核的内容 ①实验的基本操作； ②实验报告，注重考察学生实验的主动性、分析问题和解决问题的能力； ③实验纪律与实验卫生； ④实验出勤。 2．对实验报告评阅，主要是看学生是否能按实验的要求独立完成实验，报告撰写是否能反映出学生的能力和素质。 3．考核评分，总分100分。 七、实验开出率 实验操作50%，实验报告50% 八、主要教材及参考书 教材：刘素纯，食品微生物学实验，化学工业出版社，2013.4 参考资料： [1] 沈萍，范秀荣，李广武主编．微生物学实验[M].北京:高等教育出版社，1996，6 [2] 周德庆主编．微生物学实验手册[M]．上海：上海科学技术出版社，1986 [3] 林稚兰，黄秀梨主编. 现代微生物学与实验技术[M]．北京：科学出版社，2000 [4] 周阜棣，俞子牛，何绍江主编．农业微生物学实验技术[M]．北京：中国农业出版社，1996 [5] 徐孝华主编．普通微生物学[M]．北京：北京农业大学出版社，1992 [6] 武汉大学，复旦大学生物系微生物教研室编．微生物学（第2版）[M]．北京：高等教育出版社，1987 [7] 徐岩,等译.James M.Jay 编著. 现代食品微生物学[M]. 北京: 中国轻工业出版社, 2001.7 [8] 赵斌，何绍江主编，《微生物学实验》，科学出版社，2002。 执笔人：朱玲审核人： 2017年2月22日
第一章反对外国侵略的斗争 一、单项选择题 1．使近代中国沦为半殖民地半封建社会的第一个不平等条约是（ B）A《辛丑条约》 B《南京条约》 C《马关条约》 D《北京条约》2．第二次鸦片战争中，掠夺中国领土最多的侵略者是（ C ） A美国 B英国 C俄国 D法国 3．近代中外反动势力开始勾结起来是在（ B ） A第一次鸦片战争以后 B第二次鸦片战争以后 C甲午战争以后 D八国联军侵华战争以后 4．把我国领土台湾割让日本的不平等条约是（ A） A《马关条约》 B《天津条约》 C《北京条约》 D《辛丑条约》 5．侵略者第二次洗劫和焚烧圆明园的战争是（ D） A鸦片战争 B第二次鸦片战争 C甲午战争 D八国联军侵华战争 6．1838年6月，鸿胪寺卿（ D）上疏《请严塞漏厄以培国本》，主张用死刑重治吸食鸦片者。 A林则徐 B许乃济 C邓廷桢 D黄爵滋 7．中国赔款最多的条约是（ D ） A《北京条约》 B《望厦条约》 C《马关条约》 D《辛丑条约》8．规定割让香港岛的是（ A ） A《南京条约》 B《虎门条约》 C《天津条约》 D《北京条约》
9．“允许外国侵略者招募华工出国”是（ A ）中给予他们的特权。A中英、中法《北京条约》 B中英《南京条约》 C《中法条约》 D《辛丑条约》 10．19世纪末20世纪初，帝国主义在中国掀起瓜分中国的狂潮，其中广西成了（ C ）的势力范围。 A英国 B俄国 C法国 D德国 11．近代史上外国在中国（ A ）建立了第一块租界地。 A上海 B广州 C福州 D宁波 12．规定在中国通商口岸可以投资设厂的条约是（ C ） A《南京条约》 B《天津条约》 C《马关条约》 D《北京条约》 13．1858年，沙俄侵略者强迫黑龙江将军奕山签订（ A ），将黑龙江以北，外兴安岭以南60万平方公里的中国领土强行霸占，并把乌苏里江以东的中国领土划为中俄共管。 A《瑷珲条约》 B《北京条约》 C《中俄勘分西北界约记》 D《天津条约》 14．1860年沙俄借口“调停有功”，迫使清政府签订（ A ），将乌苏里江以东40万平方公里的中国领土划为俄国。 A《北京条约》 B《瑷珲条约》 C《中俄勘分西北界约记》 D《天津条约》 15．中国近代第一个系统介绍西学的启蒙思想家、翻译家是（ C ）A康有为 B梁启超 C严复 D谭嗣同
实验一实验室和人体表面微生物的检查 一实验目的 1 证明实验室环境与体表存在微生物 2 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型 3 体会无菌操作的重要性 二实验原理 平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，1-2d内每一菌体能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑等。因此可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。 三、器材 1、培养基牛肉膏蛋白胨琼脂平板 2、仪器或其他用具无菌水、灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯，记号笔，废物缸。 四、操作步骤 1、写标签 任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号（包括班级、姓名、日期、样品来源等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。 注：培养皿的记号一般写在皿底上，如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时容易混淆。 2、实验室细菌检查 （1）空气 将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在实验台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中，将另一块肉膏蛋白胨琼脂平板放在洁净工作台内或无人走动的实验室中，移去皿盖，1h后盖上两个皿盖。 （2）实验台 ①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。 ②取棉签 左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞，将其取出，将管口很快地通过酒精灯的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。放回棉塞，并将空试管放在试管架上。 ③弄湿棉签 左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞，并将灭菌水试管放在试管架上。 ④取样将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2cm2的范围。 ⑤接种在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种（滚动一下），立即闭合皿盖。将原放棉签的空试管拔出棉塞，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。
实验一显微镜的使用及细菌的革兰氏染色 一、实验目的和内容 （一）实验目的 1. 复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油镜的使用方法。 2. 初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色的步骤 （二）实验内容 1．学习油浸系物镜的使用方法。 2．制作细菌染色装片。 3．进行革兰氏染色法操作。 4．用油镜观察大肠杆菌和苏云金杆菌染色装片。 二、实验原理 （一）油镜的基本原理 普通光学显微镜包括低倍物镜、高倍物镜和油镜3种物镜。油镜是一种高倍放大的物镜，一般都刻有放大倍数，如95×、100×等。油镜头上常刻有OI（Oil，Immersion）或HI（Homogeneous immersion）字样，有的还刻有一圈红线或黑线标记，而且油镜的镜身较高倍镜和低倍镜为长。在低倍物镜、高倍物镜和油镜3种物镜中，油镜的放大倍数和数值孔径（numberal aperture）最大，而工作距离最短（图3-1）。 图1-1 显微镜物镜参数图 显微镜的分辨率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离（D）的能力。D值愈小表明分辨率愈高。D值与光线的波长（λ）成正比，与物镜的数值孔径（NA）成反比.
从上式可看出，缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。数值孔径指光线投射到物镜上的最大角度（称镜口角，α）的一半正弦与介质折射率（n）的乘积。影响数值孔径大小的因数，一是镜口角，二是介质的折射率。 当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n＝1.0）与玻璃（n＝1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n＝1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明废，更重要的是通过增加数值孔径提高分辨率，因而可以使物像明亮清晰。 （二）革兰氏染色 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的，是细菌学中最重要的鉴别染色法，其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。
《临床微生物学及检验》课程实验教学大纲 课程名称：临床微生物学及检验 英文名称：Clinical Microbiology and Inspection 课程编号：22010000实验课性质：专业基础 课程负责人：姚苹、宋艳艳开放实验项目数：13 大纲主撰人：宋艳艳大纲审核人：王志玉 一、学时、学分 课程总学时：80 实验学时：40 课程总学分：4 实验学分：1.5 二、适用专业及年级 预防医学四年级 三、实验教学目的与基本要求 通过实验巩固相关理论知识，实践与理论相结合，达到融会贯通的目的，培养学生主动解决问题和创新意识。 要求每个同学掌握各种临床标本的处理和接种技巧、常见致病菌的分离与鉴定、常规药敏实验方法等；要求每个同学操作规范、基本操作熟练，并能自己设计完成一个完整检验。 四、主要仪器设备 生化培养箱、CO2培养箱、电冰箱、电冰柜、超净工作台、生物安全柜、显微镜、高压灭菌器、微波炉、多媒体幻灯机 五、实验课程内容和学时分配
六、考核方式 （1）试验报告：要求内容完整，书写认真，对试验结果进行合理讨论。 （2）考核方式：采用课堂提问、实验操作、实验报告、笔试。实验课成绩占课程总成绩的20％。 七、实验教科书、参考书 （一）教科书 1．张卓然主编.《临床微生物学和微生物检验》. 人民卫生出版社. 2003年 2．洪秀华主编.《临床微生物学微生物检验实验指导》.人民卫生出版社. 2003年（二）参考书： 1．李影林主编.《临床微生物学及检验》. 人民卫生出版社. 1995年 2．黄贞祥主编.《病毒学基本原理与技术》.人民卫生出版社.1990年 3．巫向前主编.《临床检验结果的评价》.人民卫生出版社.1999年 4．王庸晋主编.《现代临床检验学》.人民军医出版社. 2001年