细胞工程
任课老师：金裕华
Email：evaking2009@https://www.doczj.com/doc/f11941029.html,
教材及参考书
一、教材
杨淑慎.细胞工程.科学出版社，2009.
二、参考书目
（1）周维燕. 植物细胞工程原理与技术. 中国农业大学出版社，2001.
（2）谢从华，柳俊．植物细胞工程．高等教育出版社，2004.
（3）https://www.doczj.com/doc/f11941029.html,
第1章绪论
1.1 细胞工程的定义和基本内容
?细胞工程是应用细胞生物学和分子生物的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水
平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或特种细胞产品的一门综合性科学技术。
?核心技术：细胞、组织培养与繁殖,细胞融合等
?目的：获得新性状、新个体、新物质
学科交叉：
研究范围：
根据研究水平：
根据研究对象：
1.2 细胞工程的基本技术和内容
?器官、组织和细胞培养
?原生质体培养
?染色体工程
?动物胚胎工程
?胚胎干细胞
?植物胚胎培养
?转基因生物与生物反应器
1. 器官、组织和细胞培养
是指对生物体的器官、组织或细胞进行离体培养，研究所需培养系统和条件，研究器官、组织和细胞的形态发生规律，或使之形成组织或有机体的技术。
2.原生质体培养
原生质体培养是将植物细胞去壁使之游离成原生质体，有利于细胞操作，比如，原生质体融合，在适宜条件下使其细胞壁再生，进行细胞分裂分化，形成完整个体的技术。
3. 染色体工程
染色体工程是指借助物理化学等方法，使生物染色体数目、结构和功能发生改变的技术。
1.3 细胞工程发展史
1.3.1 植物细胞工程的发展
1、探索阶段------细胞及细胞全能性的认识（20世纪初-30年代）
Schleiden and Schwann 提出了细胞学说（主要内容）
Haberlandt认为植物任何细胞都具有发育成为完整个体的潜在能力，从而提出植物细胞全能性。
?植物细胞工程三个研究方向的发展：
?（1）植物组织培养的发展
?（2）植物细胞融合研究
?（3）单倍体植株培养研究
（1）植物组织培养的发展
?1934年荷兰植物学家温特（F. W. Went）发现生长素（吲哚乙酸），并证实了其在植物细胞培养中的作用。
?1937年法国科学家高特里特（R. J. Gantheret）和诺比考特（Nobercourt）几乎同时离体培养了胡萝卜组织，并使细胞增殖。
?1948年斯库格（Skoog）等较好解决了从离体组织或器官中诱导植物再生的问题，确
定腺嘌呤/生长素的比例为调控芽和根形成的一个重要条件。
?1953年，缪尔（Muir）由无菌冠瘿组织的悬浮培养物及易碎的愈伤组织中分离得到单个细胞，并通过看守培养使细胞分裂生长，开创了单细胞无性繁殖的工作。
?1958年施图尔德（Steward）等从胡萝卜根韧皮部愈伤组织获得单细胞，并且经诱导形成胚状体再生了植株，成为世界首次通过实验证实了植物细胞具有全能性的科学家。
（2）植物细胞融合研究
?1960年英国诺丁汉大学科金教授创造性应用酶解方法首次成功从番茄幼苗根部制备到大量的原生质体。
?1972年美国的卡尔森等人用NaNO3作为融合诱导剂将来自不同种的两个烟草原生质体进行融合，获得了世界上第一个细胞杂种植株。
（3）单倍体植株培养研究
?1974年格雷沙夫（Greshoff）从葡萄花药培养中得到单倍体愈伤组织。
?1975年罗萨蒂（Rosati）从草莓花药培养中获得小孢子发育的单倍体植株。
（3）单倍体植株培养研究
?1921年，伯格纳在曼陀罗中发现了单倍体植株。
?60年代，许多人工诱导单倍体植株的方法问世，大大地缩短了杂交育种的时间。
?从1970年开始中国应用单倍体育种方法，已成功地培育出小麦、小黑麦、小冰麦、玉米、辣椒、油菜等花粉植株。
曼陀罗花药培养获得单倍体植株
1.3.2 动物细胞工程发展简史
动物细胞培养方法的建立
细胞融合（自然现象——人工融合）
动物胚胎移植
体处受精
动物克隆
转基因动物
胚胎干细胞
动物细胞工程的发展
三项关键技术的发展:
?（1）动物细胞融合、
?（2）动物细胞组织培养、
?（3）动物克隆
（1）细胞融合现象的发现和发展
?1838年马勒（Muller）在脊椎动物肿瘤细胞中观察到了多核现象。在此间前后，施旺
（Schwann）在天花、水痘等病理组织中观察到了多核现象；
?1849年罗宾（Lobing）在骨髓中也发现了多核现象的存在；
?1855-1858年科学家在肺组织等多种正常组织和坏死部位都发现了多核现象。
?1859年巴里（A. Barli）在研究黏虫生活时发现，某些黏虫存在着由单个细胞融合形成多核原生质团的情况。
?另外，1965年哈里斯和沃特金斯证明了某些灭活的病毒在一定条件下可用来诱导动物细胞融合。
?这些发现为细胞融合研究提供了初步的研究线索、依据和方法。
?当前细胞融合技术已日渐成熟。例，单克隆抗体。
?1975年，英国剑桥大学分子生物学研究室的科莱尔（Kohler）和米尔斯坦（Milstein）合作将体外培养的小鼠骨髓瘤细胞与绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）进行融合，发现融合形成了的杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征：像骨髓瘤细胞体外无限快速增殖，又持续分泌特异性抗体，通过克隆化可使杂交细胞成为单纯的细胞系，由此可获得特性完全相同的高纯度抗体--单克隆抗体(McAb)。两位科学家因此贡献，荣获1984年诺贝尔医学和生理学奖。
（2）动物组织细胞培养技术的建立
?1885年，卢克斯（Roux）发现鸡的神经元在生理盐水中可以存活，并使用了组织培养一词。
?1907年美国胚胎学家哈里森（R. Harrison）采用盖玻璃片悬滴培养蛙胚神经管区组织于蛙的淋巴组织液凝块中，存活数周，且观察到细胞生长现象（从细胞中长出了神经纤维细胞）。
表明了利用体外培养存活的动物组织进行实验研究的可能性。
?1911年卡雷尔（Carrel）发现鸡胚浸出液对某些细胞生长具有很强的促进效应，并将无菌操作引入组织培养技术中。他在不含抗菌素的培养条件下使鸡胚心脏细胞维持生存了34年，先后继代3400次。
证明了动物细胞有可能在体外无限地生长。
?并与1923年设计了卡氏动物细胞培养瓶。
?1914年汤姆森（Thomson）创立了体外组织器官培养方法。
?1951年葛瑞（Gay）建立了第一个人体细胞系——人体宫颈癌细胞系Hela细胞系。至今，各国还常用此种细胞株系进行实验研究，如研制抗癌药物等。
（3）动物克隆技术的建立
?1891年希普（Heape）等人首次报道了家兔胚胎移植成功的结果，他们将安哥拉家兔的胚胎移植到比利时兔，得到了4只安哥拉家兔。其后陆续有家畜胚胎移植成功地报道。
?1952年，美国费城癌症研究院的2名生物学家布里格斯（RW Briggs）和金(TJ King) 等成功将豹蛙的胚胎细胞核移植到同种蛙的成熟去核卵子中，并获得了发育正常的胚胎。
?1962年，英国学者格鲁登（Grudon）报道了首例动物克隆成功，他把非洲爪蟾小肠上皮细胞的核注入同种或异种非洲爪蟾未受精卵（经紫外线照射杀死卵细胞核）中，约有1%
的重组卵发育成为成熟蛙。
?从而实验证明了分化的动物细胞仍然具有全能性；并初步建立了体细胞核移植的实验体系。
?1978年，童第周等将黑斑蛙成体红细胞的细胞核移入未受精的去核卵内，卵子也发育成正常的蝌蚪。
?1997年2月，英国科学家伊恩·威尔穆特（I. Wilmut）等在世界权威杂志《Nature》上首例报道了世界第一只克隆羊的诞生。
实验证明了哺乳动物高度分化的细胞同样含有全套的遗传物质。
?威尔穆特领导培育的世界上第一只体细胞克隆动物-克隆羊“多利”于1996年7月5日出生，于2003年2月因肺部感染而死亡。
?细胞工程对于在细胞学、遗传学、发育学等领域的基础理论研究也极具价值。
?对改善农业生产技术；保护自然资源，维护生态平衡；推进生物医药研究、开拓能源资源等多方面均具有积极意义。
1.4 细胞工程的重要应用
1、优质植物快速培育与繁殖
基于植物细胞全能性，在人工条件下，利用植物胚胎或器官离体培养，再生新植株（试管苗）
2、动物胚胎工程快速繁殖优良、濒危品种。
人工受精、胚胎移植
第2课
第一节细胞工程实验室组成
1、超净工作台
（二）培养仪器设备
1、光照培养箱
?液氮温度：－196℃
?不断挥发，及时补充
1、水纯化装置
三、细胞培养的基本条件：
?无菌条件：净化工作室、高效过滤器、超净工作台、紫外灯、高压灭菌器、抗生素、生物安全柜；
?细胞生长条件：纯水蒸馏器、CO2培养箱、纯水仪、培养板、培养瓶、培养基，血清；?细胞检测条件：倒置显微镜、高速离心机、酶标仪，微孔板震荡器、移液器；
?细胞保存条件：液氮罐；
?实验室安全：生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全。
第二节无菌操作技术
（一）玻璃器皿的清洗
一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤
（1）浸泡
使附着物软化或被溶解掉。新瓶使用前应先用自来水简单刷洗，烤干，然后用稀盐酸液（5%）浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。
要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面上。
浸泡一般要求过夜，甚至更长。浸泡完成后要用清水冲洗5遍左右。
二、常用灭菌方法及原理
消毒：是指用物理或化学的方法，杀灭物料中、物体表面及环境中的部分微生物。
灭菌：是指用物理或化学的方法，彻底杀灭物料、容器、用具和空气中的所有微生物。
防腐：是指用物理或化学的方法，暂时抑制微生物的生长。
除菌：是一种用机械的方法除去液体或气体中微生物的方法。
热力灭菌主要是利用高温使菌体变性或凝固，酶失去活性，而使细菌死亡。
DNA单螺旋的断裂可能是主要的致死因素。细菌蛋白质、核酸等化学结构是由氢键连接的，而氢键是较弱的化学键，当菌体受热时，氢键遭到破坏，蛋白质、核酸、酶等结构也随之被破坏，失去其生物学活性，与细菌致死有关。
高温亦可导致胞膜功能损伤而使小分子物质以及降解的核糖体漏出。
包括湿热灭菌和干热灭菌法。
热力灭菌中的相关定义：
杀死微生物的极限温度称为致死温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间；在致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。
微生物的热阻：是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。相对热阻是指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。
1）湿热灭菌
（1）高压蒸气灭菌
压力指标：1.1Kg/cm2 或0.11*106pa ；30分钟；温度达l21～126℃
湿热灭菌的优点：
?蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒；
?蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底；
?蒸汽有很大的潜热；
?操作方便，易管理。
（2）常压灭菌
?常压灭菌设备
?灭菌方法：100 ℃
?灭菌时间：6~8小时
（3）常压间歇灭菌
?条件和方法：
100 ℃热蒸气30 ~120分钟，20 ~ 25 ℃条件培养24小时，诱发菌丝，30分钟，连续3次。
?细菌的繁殖体在干燥状态下，80℃～100℃1小时可被杀死；芽胞需要加热至160℃～170℃2小时才杀灭。
?干热灭菌法是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。
火焰灭菌法是指用火焰直接烧灼的灭菌方法。该方法灭菌迅速、可靠、简便，适合于耐火焰材料（如金属、玻璃及瓷器等）物品与用具的灭菌，不适合药品的灭菌，温度可达200摄氏度。
干热空气灭菌法是指用高温干热空气灭菌的方法。该法适用于耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿热气体穿透的油脂（如油性软膏机制、注射用油等）和耐高温的粉末化学药品的灭菌，不适合橡胶、塑料及大部分药品的灭菌。
在干热状态下，由于热穿透力较差，微生物的耐热性较强，必须长时间受高温的作用才能达到灭菌的目的。因此。干热空气灭菌法采用的温度一般比湿热灭菌法高。为了保证灭菌效果，一般规定：135-140摄氏度灭菌3-5h；160-170摄氏度灭菌2-4h；180-200摄氏度灭菌0.5-1h。
?电离辐射是一切能引起物质电离的辐射总称，其种类很多，高速带电粒子有α粒子、β粒子，不带电粒子有中子以及X射线、γ射线。
?应用上述离子或射线发生的高能量电子束进行灭菌。适用于忌热物品的常温灭菌方法。又称?°冷灭菌?±。在细胞工程中可以用于一些器皿的灭菌。
?紫外线是一种低能量的电磁辐射，其能量只有5eV，穿透力很差。
?紫外线可分为长波段(320.0~400.0 nm)、中波段(275.0~320.0nm)与短波段(180.0~275.0 nm)三组,短波段中240.0~280.0 nm波长的紫外线杀菌力较强，
?一般多以253.7nm作为杀菌紫外线波长的代表，由于紫外线灯使用较方便，并有一定杀菌作用，所以在卫生防疫、医疗和工业消毒中使用均较普遍。
?杀菌时间一般为20～30分钟。
?过滤除菌法（filtration）是用物理阻留的方法将液体或空气的细菌除去，以达到无菌目的。
所用的器具是含有微小孔径的滤菌器（filter）。主要用于血清、毒素、抗生素等不耐热生物制品及空气的除菌。
?需要过滤除菌的液体量大时，常用较大型号的金属滤器配以过滤泵使用；液量小时，常用注射器推动直径为2.5cm的微孔滤膜滤器过滤。微孔滤膜一般采用0.45μm和0.22μm孔径的两种，后者有效去除细菌。
?使用前将滤膜装入滤器中一同高压灭菌后备用。过滤时将待过滤的液体装入注射器中，套上滤器，推压注射器，溶液压出滤膜，获得无菌溶液。
?使用化学消毒剂进行消毒，称为化学消毒法。
?化学消毒剂的分类方法：根据化学消毒剂对病原体蛋白质的作用可分为以下几类：
（1）重金属盐：重金属盐类可以使蛋白质变性，致死微生物。最常用的是：升汞（氯化汞），硝酸银；剂量：升汞剂量一般为0.1～0.2%;硝酸银剂量一般为0.1～0.5％；
（2）氧化剂：通过氧化左右是蛋白和酶变性失去活性而杀死微生物。常用的有：高锰酸钾，过氧化氢，臭氧，次氯酸钠，漂白粉，过氧乙酸。
（3）表面活性消毒剂：通过改变渗透性及原生质的结构状态使蛋白质凝固变性。常用的有：新洁尔灭，70～75％酒精，石炭酸等。跟蛋白质氨基结合，使蛋白质变性。
（4）甲醛：37－40%的甲醛溶液（福尔马林）。
?化学试剂消毒的使用方法有：
1.熏蒸消毒
加热焚烧、氧化反应，使化学药剂变为气体扩散到空气中，以杀死空气中和物体表面的微生物。常用的熏蒸剂是甲醛与高锰酸钾，熏蒸时按（2ml甲醛+1g高锰酸钾）/立方米，处理后1-3天后可达到空气消毒空气的目的。
2.药剂喷雾消毒
物体表面常用一些药剂涂擦、喷雾灭菌。如，桌面、墙面、双手、植物材料表面等，可用75%的酒精反复涂擦消毒。
三、无菌操作室消毒
常用甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒，消毒期间不宜进入消毒空间。消毒后通风换气，气味散尽后再出入。使用前用20%的新洁儿灭对接种室内的墙壁、地板及设备擦洗，用75%乙醇喷雾（使灰尘迅速沉降），紫外灭菌30min。
每周一次检测无菌室的无菌状况，方法为在灭菌后的接种室内桌上和桌下各放一套培养基平皿，暴露15min，盖上盖子，37℃培养24h，每个平皿的菌落≦4个，认为效果良好。
（一）无菌操作注意事项
体外培养细胞和组织缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。即便使用设备完善的实验室。若实验者粗心大意，技术操作不规范,也会导致污染。因而．为在一切操作中为最大可能的保证无菌．每一项工作都必须做到有条不紊和完全可靠。
1、培养前准备
在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实
验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后．囚物品不全往返拿取而增加污染机会。
2、操作视野消毒
无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面?a次(拖布要专用)．紫外线照射消毒30-50min，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫外线淌毒30min。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线，消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置．否则会遮挡射线降低消毒效果。?a些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。
3、洗手和着装
原则上和外科手术相同。平时仅做观察不做培养操作时，可穿装细胞培养室内紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着长袖的清洁工作服，并于开始操作前要用75％酒精消毒手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。
4、火焰消毒
金属器械不能在为焰中烧的时间过长，以防退火，烧过的金属镊要待冷却后才能挟取组织，以免造成组织损伤。吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有害物带入营养液中。开启、关闭长有细胞的培养瓶时，火焰灭菌时间要短。防止因温度过高烧死细胞。另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞。
5、操作
进行操作时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。手臂不在打开的容器上方过。
操作前用酒精擦拭超净台面及双手。手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管丢掉。
第3课
影响植物离体形态发生的因素
知识点:
基本概念：植物细胞全能性、细胞分化、脱分化、再分化
植物离体培养中再生植株有哪些途径？
愈伤组织是如何形成与生长的？
植物体细胞胚胎发生有哪些途径？
影响植物离体形态发生的因素有哪些？
第一节植物细胞全能性和细胞分化
?植物组织培养的核心理论：
植物细胞全能性理论（Haberlandt, 1902）。
定义：1902年由Haberlandt提出，即植物体细胞在适当的条件下，具有不断分裂和繁殖、发育成完整植株的能力。
20世纪80年代，每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息，在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同类型细胞，形成不同类型的器官甚至胚状体，直至形成完整再生植株。
植物细胞全能性的证明是通过1958年Steward等胡萝卜根段细胞体胚发生试验及1964年Guha等进行的曼陀罗花药培养。
细胞全能性的相对性:
细胞全能性并不意味着任何细胞均可以直接产生植物;
动植细胞全能性的表现程度存在明显的差异.
细胞按照分裂能力分为三类:
第一类是始终保持分裂能力,如茎尖、根尖及形成层细胞；
第二类是永久失去分裂能力的终端分化细胞，如筛管、导管、气孔保卫细胞等特化细胞； 第三类是在通常情况下不分裂，但在受到外界刺激后可重新启动分裂的细胞。如表皮细
胞及各种薄壁细胞。
一个植物细胞向分生状态回复过程所能进行的程度，取决于它在自然部位上所处位置和生理状态。
根据细胞类型不同从强到弱:
营养生长中心>形成层>薄壁细胞>厚壁细胞（木质化细胞）>特化细胞（筛管、导管细胞） 根据细胞所处的组织不同从强到弱：
顶端分生组织>居间分生组织>侧生分生组织>薄壁组织（基本组织）>厚角组织>辅导组织>厚壁组织
1、定义：
?分化（differentiation）：是指植物体各个部分出现异质性的现象，体现在细胞分化、组织分化、器官分化三个水平上。
?细胞分化：指导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在的发育方式改变的过程。是基因选择性活化或阻遏的结果。
?细胞分化是组织分化和器官分化的基础，是离体培养再分化和植株再生得以实现的基础。
2、植物细胞分化的某些规律和机理
（1）细胞分化分为形态结构分化和生理生化分化两类，生理生化分化在形态结构分化之前。
（2）植物中细胞发育的途径一旦被―决定‖（determination），通常不易改变。而离体培养可以通过脱分化而丧失这种―决定‖。
（3）分化与极性（Polarity）关系密切。
（4）细胞分裂对细胞分化具有重要作用。特定环境条件下进行的细胞分裂可以导致特定的细胞分化，由不等分裂形成的分化细胞说明了细胞质在细胞分化中的作用。
（5）植物生长调节剂有明显调节作用。如生长素与分裂素比值，高，促进生根；低，促进长芽。
（6）染色体和DNA的变化对细胞分化影响比较大。如核内多倍体的形成。
三、细胞脱分化
?1、脱分化（Dedifferentiation）：也称去分化，指离体条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或不分化细胞的过程。
?如叶柄基部的薄壁细胞成为离层细胞；伤害导致局部细胞形成愈伤组织。
脱分化诱导期间会导致细胞膜透性改变，细胞核增大，内质网范围扩大，多核糖体形成，过氧化物酶增加，蛋白质和酚类物质合成活跃等。但目前对于脱分化的机理尚未完全阐明。
（1）损伤。切割损伤的刺激，促使细胞增殖。
（2）在诱导愈伤组织时常加入生长素类，但同时配合细胞分裂素的效果可能更好。
（3）弱光或黑暗条件有利于脱分化中的细胞分裂。
（4）细胞位置。外植体本身的各类细胞可能对培养条件的刺激有不同的敏感性。
（5）外植体的生理状态。不同生理年龄和不同季节都会有不同的培养反应。
（6）植物种类的差异。一般双子叶植物比单子叶植物及裸子植物容易。
三、愈伤组织（callus）培养
１、愈伤组织的形成
在细胞脱分化过程中，大多数情况下形成愈伤组织。愈伤组织的细胞往往是异质性的，无明显极性，其形成过程可分为诱导期、分裂期和分化期。
◆诱导期（起动期）：是细胞准备分裂的时期。细胞大小几不变，内部发生生理生化变化，迅速合成蛋白质和核酸。
◆分裂期：外层细胞分裂，中间细胞常不分裂，形成小芯。细胞分裂快，结构疏松，缺少结构，浅而透明。在原培养基上，细胞必分化，及时转移，其可无限制地进行细胞分裂，维持不分化状态。
◆分化期：细胞在形态和生理功能上的分化，出现形态和功能各异的细胞。
2、愈伤组织的生长
（1）生长：诱导期后，外植体外层细胞分裂，在组织受伤表面形成一层愈伤组织，细胞数目迅速增多，表层细胞平均重量下降，体积变小；降低温度，可以使细胞生长速度减慢，平均大小可增加。
（2）质地类型：松脆和致密两种。高浓度生长素，可使Callus变得松脆；高浓度细胞分裂素，则可使致密。
（3）生理生化变化：次生物质合成能力变化，对激素的需求变化等。
3、愈伤组织的保持–转接
在多数情况下，随着继代培养代数增加和培养时间的延长，Callus长势下降、褐变、分化和形态发生能力下降、降低甚至死亡。所以在此之前，应及时转接至新鲜培养基上。
主要原因：遗传因素，染色体畸变、基因突变；生理因素，细胞或组织内激素平衡的改变，细胞对外源生长物质的敏感性改变。后者可以通过调控培养条件而恢复。
4、愈伤组织形态发生
（1）过程：外层细胞分裂，逐渐减慢并停止；内部较深处的细胞开始分裂，而且分裂方向也发生改变，形成微管化组织和瘤状结构。
（2）形态发生方式：器官发生和体细胞胚胎发生。
四、细胞再分化（redifferentiation）
1、概念：指离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株。
组织培养中的再分化包括下面4个水平：
?细胞水平的再分化
?组织水平的再分化
?器官水平的再分化（器官发生）
?植株水平的分化（植株再生）
?细胞水平的再分化：愈伤组织生长、不断分裂，分化出不同的细胞类群。主要有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、石细胞、纤维细胞等。
?组织水平的再分化：在高水平生长素条件下，最常见的是微管束（Vascular tissue）的分化。松散的愈伤组织内含大量拟分生组织或瘤状结构；致密的愈伤组织内组织分化很少，大多由高度液泡化的细胞组成。
?器官水平的再分化：由分化出的不同组织形成各种器官，如芽、茎、叶、根等。
根据起源不同，分为两种类型：
–直接器官发生（器官型）：直接从外植体的细胞形成器官原基，然后发育成器官。
–间接器官发生（器官发生型）：先形成愈伤组织，再由愈伤组织产生不同的器官原基，后形成不同器官。
?植株水平的再分化（植株再生）：根、茎或芽器官的发生可使植株重建。先诱导分化出芽，后形成根较好。
离体培养中再生植株的主要途径有：
–器官发生
–胚胎发生
第二节离体条件下植物器官发生
一、器官发生再生植株的方式：
A 先形成芽，芽的基部后产生后根；
B 先形成根，根上再出芽；
C 愈伤组织的不同部位形成芽和根，然后形成微管束组织把两者结合起来.
二、器官发生的过程：
分为两种：
?经过愈伤组织的器官发生
?不经过愈伤组织的器官发生
经过愈伤组织的器官发生过程
愈伤组织形成
不经过愈伤组织的器官发生过程
第三节植物体细胞胚胎发生
一、什么是植物体细胞胚胎发生？
定义：植物离体培养的细胞、组织、器官产生类似胚的结构，其形成也经历一个类似合子胚胎发生和发育过程，这种现象称为植物体细胞胚胎发生，形成的类似胚的结构称为体细胞胚或胚状体。
体细胞胚胎发生具有普遍性，目前已在200多种被子植物上观察到体胚发生过程。
合子胚与体胚比较
1、发生过程：
一般分为5个阶段：胚性愈伤组织诱导、体细胞胚胎诱导、体细胞胚胎早期分化发育、体细胞胚胎成熟、体细胞胚胎萌发和成苗。
双子叶植物：体胚经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚到子叶胚等阶段。
单子叶植物：与双子叶植物诱导发生过程类似，只是在形态上无鱼雷形胚等阶段，成熟体胚上有盾片、胚芽鞘和胚根等结构。
（1）胚性愈伤组织，通常较小，近圆形，具有较大的核和核仁，并高度染色，胞质浓厚。典型的胚性愈伤组织外表呈松脆颗粒状。
（2）胚性细胞DNA、RNA以及蛋白质的合成更活跃，淀粉、可溶性糖含量增加，内源多胺含量升高，同工酶和内源激素合成变化明显。
如胡萝卜胚性愈伤组织淀粉含量高出非胚性愈伤组织的15~40倍。
3、体细胞胚胎发生的基因表达机理
植物体胚发生的过程非常复杂，牵涉到4000多个相关基因，以体胚发育后期，表达的基因可达1000多个。
在植物体胚发生过程中，会出现与基因表达有关的一系列生物大分子的有规律变化. 如蛋白质含量变化和特异蛋白质（胚性蛋白）出现与消失。
由于其复杂性，目前对体胚发生的机制了解不多。
三、植物体细胞胚胎发生途径
1、直接途径：指从外植体某些部位的胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎，如子叶、花序、珠心等外植体。
2、间接途径:
外植体先脱分化形成愈伤组织，再由愈伤组织的某些细胞重新―决定‖为胚性细胞，进而分化出体细胞胚胎。多数体细胞胚胎通过该途径形成的。通常包括2个阶段：（1）胚胎发生丛（Embryogenic clump）EC是由液泡小、细胞质浓的小细胞构成。（2）胚状体的发育。将EC转入降低或除去生长素、降低还原氮的培养基上培养即可。
四、体细胞胚胎发生的机理
1、体细胞胚胎的起源：
起源存在争论，但绝大多数体细胞胚胎起源于单细胞。
细胞胚发生的实质是细胞分化，即细胞在离体培养条件下，诱导部分基因开放，实现遗传信息的表达。
2、体细胞胚胎发生机理：
体胚具有两个明显特点：极性和生理隔离
极性：单个胚性细胞第一次分裂多为不均等分裂，顶细胞继续分裂形成多细胞原胚，基细胞进行少数几次分裂形成胚柄。极性获得的诱因是激素和外界刺激。
生理隔离：在早期胚性细胞与周围细胞存在胞间连丝，但是随着胚性细胞的发育，细胞壁加厚，胞间连丝消失或被堵塞（类似小孢子发生）。
第四节影响植物离体形态发生的因素
一、植物种类和基因型
1、植物种类不同难易程度不同；被子植物比裸子植物容易。
2、同一物种不同基因型间存在较大差别。
二、培养材料的生理状态
1、发育年龄：一般幼态比老态组织形态发生能力高；
2、培养器官或组织类型：细胞分裂旺盛的器官较好；
3、培养时间和细胞倍性：一般取处于旺盛生长期的愈伤来诱导器官形成。
三、培养基
1、营养成分
一般认为，培养基中的铵态氮和K+有利于胚状体形成，提高无机磷的含量可促进器官发生。
茎尖培养和芽诱导培养基主要是MS及其修改的培养和B5培养基。
茎尖培养的起始培养基和芽增殖的培养基往往是不同。碳水化合物种类及浓度对胚状体发育有重要作用。缺糖或低糖无法形成胚状体。
2. 植物激素及生长调节剂
（起主导作用，通过影响内源激素的平衡起作用）
（1）生长素：促进外植体生长、生根，并与细胞分裂素共同诱导不定芽分化及侧芽萌发与生长。2，4 – D诱导体细胞胚胎发生。
（2）细胞分裂素：促进分化和芽形成，抑制根发育及衰老。
（3）赤霉素：GA3促进茎的伸长，打破休眠，对芽的诱导和形成有促进作用。
（4）乙烯：对芽的诱导和形成有促进或抑制作用
（5）脱落酸：对体胚的发生及成熟很重要，可增加胚性愈伤组织的形成和体胚发生。
3、培养基的性质
（1）愈伤组织诱导：在固体培养基上（胡萝卜、石刁柏）。
（2）细胞和胚状体的诱导：在液体培养基上。
（3）诱导胚状体或早期胚状体培养：渗透压，要求高.
四、培养条件
1、光照
培养条件下，光照的作用是影响细胞的状态，而不是光合作用。连续光照有利于培养细胞维管组织的形成。昼夜光照有利于极性的建立及形态发生。
光强一般要求1000-5000lx。植物间有所差别。
光照周期为10~16h/日。不同波长光质作用不同，蓝光有利于芽的分化，红光有利于根系发生。
2、温度：
大多数培养温度为25±2℃. 花药培养低温或高温预备处理。
3、气体：
氧气、二氧化碳以及乙烯等气体的浓度和通气状况。
思考题:
基本概念：植物细胞全能性、细胞分化、脱分化、再分化
植物离体培养中再生植株有哪些途径？
愈伤组织是如何形成与生长的？
植物体细胞胚胎发生有哪些途径？
影响植物离体形态发生的因素有哪些？
第4课
第四章植物离体无性繁殖
和脱毒技术
第一节植物立体无性繁殖技术
第二节植物脱病毒技术
要点概述
理解：脱毒苗的意义；
了解：1、病毒在植物体内的分布及危害。
2、植物脱毒苗的鉴定、保存、应用与繁殖。掌握：1、无病毒苗概念；
2、植物脱毒的原理和方法。。
无病毒苗
?是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。
?病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。
?潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害，不易被发现，尤其危险。
?国内外解决作物病虫害的有效途径是培育无病毒苗，实施农作物无病毒化栽培。
一.病毒在植物体内的分布、传播及危害
? 1.分布
?在植物体内的分布具有不均匀性，随植株不同部位和年龄而异。
–老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高
–根尖、茎尖生长点约0.1~1mm区域内，几乎不含病毒。
(原因：分生组织细胞分裂和生长速度快，而病毒在植物体细胞内繁殖速度相对较慢；另外，病毒是通过筛管组织或胞间联丝传播至其他组织细胞的，而茎尖分生组织无分化，没有维管组织。)
2.传播及危害:
?病毒在植株个体间的传播分为介体和非介体传播两类
?在无性繁殖的种类中，由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累，危害日趋严重。?病原菌的侵染不一定会造成植物的死亡, 却会大大降低植物的生长发育及产量和质量,从而影响其栽培的经济效益。
?因此, 脱除病毒及其他病原菌对植物栽培生产是非常必要的。
三、植物病毒的检测及无病毒苗的保存和繁殖
3、抗血清鉴定法
利用抗原与抗体特异反应的特性，用已知病毒的抗血清来鉴定未知病毒的种类，常用的有沉淀反应法、琼脂扩散法、酶联免疫吸附法。其中酶联免役吸附反应（ELISA）是常用的一种方法。
5、分子生物学鉴定法
第5课
第五章植物细胞培养和次生代谢产物生产
第五章植物细胞培养和次生代谢产物生产
主要内容：
第一节植物单细胞培养技术
第二节植物细胞的大规模培养
第三节植物细胞生物反应器
第四节植物细胞培养生产次生代谢产物
学习的目标与要求：
掌握单细胞分离和培养的方法，了解植物大规模培养方法，了解植物细胞生物反应器的设计与要求。了解利用植物细胞培养生产次生代谢产物的流程。
植物细胞培养和次生代谢产物生产
植物是人类赖以生存的食物和药品的重要来源之一。80%的天然产物来自于高等植物。
资源的过度采掘，造成了许多植物资源的日益枯竭。
通过植物细胞培养是弥补这方面的重要研究方向
植物细胞培养和次生代谢产物生产
植物细胞培养和次生代谢产物生产
植物细胞培养和次生代谢产物生产
什么是植物细胞培养?与组织培养的区别?
植物细胞培养(plant cell culture):是指在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养并使其增殖，获得大量细胞群体的一种技术。
1979年国际组织培养协会专业术语委员会建议：
组织培养：从机体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外进行培养，使之生存或生长成组织。
细胞培养：动植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。植物细胞培养和次生代谢产物生产
植物细胞培养和次生代谢产物生产
植物细胞培养的应用
获得的细胞群体可以作为制备有价值代谢产物的原料，也可以作为基础研究的材料。
同时植物细胞培养技术也是人工种子、原生质体培养、花药培养等的支撑技术
植物细胞培养和次生代谢产物生产
植物细胞培养和次生代谢产物生产
植物细胞的特点：
植物细胞直径一般约会10-200微米，平均直径比微生物细胞大30-100倍。
植物细胞很少以单一细胞形式悬浮生长，通常以一定细胞数的非均相细胞团方式存在。 植物细胞具有纤维素细胞壁和大的液泡，很容易被剪切力损伤。
与微生物细胞相比，植物细胞生长速度慢，操作周期长，分批培养一般需要2-3周，半连续或连续培养时间一般长达2-3个月
植物细胞培养基成分丰富而复杂，适合微生物生长，因此防止污染更困难
植物细胞培养一般需要光照，通过光合作用合成有机物，因此氧气和CO2的含量与传递对细胞培养影响较大。
植物细胞培养和次生代谢产物生产
植物细胞培养的方法
按培养规模：小规模培养和大规模培养
按培养方式：平板培养法、悬浮培养、看护培养、微室培养等；
按培养基类型：固体培养和液体培养
按要求产物:用于诱变的细胞培养和生产次生产物的细胞培养。
一、植物单细胞培养技术
张学文简历 张学文，男，理学博士，1965年6月出生于湖南省华容县，现任湖南农业大学理学院生物技术系教授。 学历及工作简历： 1982年9月—1986年7月：湖南农学院（今湖南农业大学）园艺系本科学习，毕业获学 士学位； 1986年9月—1989年7月：湖南农学院遗传育种专业硕士研究生，主攻分子遗传学研究 方向，毕业获农学硕士学位； 1989年7月—1991年4月：湖南省农业科学院从事遗传育种研究工作，任研究实习员；1991年4月—1995年7月：湖南农业大学生物技术系，任助教、讲师； 1995年9月—1999年7月：湖南农业大学植物学专业攻读博士学位，主攻生化与分子生 物学方向。1999年毕业获理学博士学位。 1996年获得副教授任职资格并被聘为生物技术系副教授。 1997年7月—1998年8月：美国戴维斯加州大学（UniversityofCaliforniaatDavis）植 物生物系访问学者，主要从事植物发育分子生物学研究；2002年9月—2003年7月：挪威王国卑尔根大学分子生物学系访问学者，主要从事肿瘤 的细胞及分子生物学研究。 2001年8月获教授任职资格。为湖南农业大学细胞生物学硕士点领衔导师。1993年被湖南省教育厅确认为高校青年骨干教师培养对象，1999年被确认为湖南农业大学中青年骨干教师。 主讲课程： 博士生“基因工程专题” 硕士生“基因工程原理”、“分子遗传学”、“分子遗传学实验技术”、“遗传工程原理”、“生物技术概论”。 本科生“基因工程”、“现代生物技术”。
近五年研究工作简介： 1998—2000，参与国家“863”项目“草鱼抗病基因工程研究”，为项目技术负责人。2000—2003，参与国家“863”项目“草鱼抗病基因工程中试研究”。2000—2002，主持国家教育部研究课题“分离克隆水稻胚胎发生调控基因cDNA”。2001—2003，主持湖南省自然科学基因项目“水稻胚胎发生调控基因的研究”。2002—2005，主持湖南省优秀中青年基金项目“α-半乳糖苷酶基因的分离克隆及突变研究”2003—2005，主持湖南省专项科研基金项目“利用基因工程方法发酵生产α-半乳糖苷酶”。近五年主要论文著作目录 1.张学文,罗慧敏拟南芥homeobox基因A21的研究.《面向21世纪的科技进步与社会经济 发展》1999.12北京:科学技术出版社.中国科协首届学术年会交流. 2.张学文,罗泽民拟南芥同源转换盒基因A21反义RNA基因重组体构建及转化.湖南师范大 学学报.2001,27(1):79-83. 3.张学文 ArabidopsishomeoboxgeneA21isactiveindividingcells.10th InternationalCongres sonGenes,GeneFamiliesandIsozyme.1999.10Beijing. 4.张学文生物技术跨越发展的战略研究湖南省科学技术协会2001年年会优秀论文 奖,2001.9.长沙. 5.张学文,洪亚辉,赵燕植物开花时期的分子控制.湖南农业大学学报.2003,29(6):523-528. 6.唐香山,张学文饲料酶制剂研究进展广西农业科学.2004,4. 7.唐香山,张学文,章怀云α-半乳糖苷酶基因克隆及在酵母中的表达.生物工程杂志.2004,4. 8.唐香山，张学文酵母表达载体研究进展生命科学研究.2004,6. 9.陈开健,章怀云，张学文等转人α-干扰素基因草鱼饲喂大鼠的安全性研究.湖南农业大学学 报.2002.28(2):149-151.
2013-2014学年第一学期期末考试 《工程经济学》课程论文题目及具体要求： 题目： 见附录 具体要求： 1．选择必选题目和其他任何7个自选题目之一进行课程设计。2．要求概念清楚，观点明确，计算准确，分析合理。 评分标准： 1．90—100分 概念清楚，观点明确，计算准确，分析深入、透彻，文字表述准确，格式符合要求。 2．80—90分 概念清楚，观点明确，计算准确，分析较为深入、透彻，文字表述较为准确，格式符合要求。 3．70—80分 概念清楚，观点明确，计算准确，分析较为深入、透彻，文字表述基本准确，格式符合要求。 4．60—70分 概念清楚，观点基本明确，分析较为深入、透彻，文字表述基本准确，格式符合要求。 5．不及格 概念不清楚，观点不明确，分析不深入，文字表述基本准确。
附录： 一、必选课程设计题目 本课程设计是对石家庄的某一个房地产开发项目进行经济评价。根据给定的资料数据设计若干种开发方案，综合运用“工程经济学”所学的各种知识和方法，对多种方案进行比较和选择，最终确定最佳方案。 1．至少设计2种开发方案进行比选； 2．各种方案应包括以下内容： （1）投资概算（包括前期费用和建设费用，可考虑建成后的使用费用）； （2）资金筹措计划； （3）项目经济效益评价； （4）不确定性分析（包括盈亏平衡分析，敏感性分析）； （5）结论。 3．不同方案之间的比选方法自行选择并说明理由及其方法优劣。 附录：设计资料及相应数据 1．建筑物地点：石家庄； 2．房地产开发项目可以是：多层商品房住宅楼、高层商品房住宅楼； 3．占地面积100000平方米； 4．投资估算相关数据： （1）前期费用： 土地费用：商业用途800万元/亩；住宅用途300万元/亩 可行性研究70万元 城市基础设施配套费：80元/ m2×建筑面积 消防设施配套费：5元/ m2×建筑面积 生活垃圾服务费：12元/ m2×建筑面积 白蚁防治费：1.3元/ m2×建筑面积 勘察设计费：建筑安装工程费总造价×2% 规划管理费：1.8元/ m2×建筑面积 （2）建设期间费用 建筑安装费用：多层按800元/ m2考虑，高层按1200元/ m2考虑； 设备：不考虑电梯费用。 供水电工程：自行考虑。 （3）管理费：500万元，预备费：自行考虑。
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2014一建工程经济计算公式汇总及计算题解析 第一章：工程经济 1Z101010 资金时间价值的计算及应用 （4-6题） ⑸、一次支付的终值P6 存入银行100万元，年利率5%，时间为3年，在第3年年末连本带利一起取出，问可以取出多少钱？ n i P F )1(+= （式中：F —终值，P —现值，i —利率，n —年限） ⑹、一次支付的现值P7 现在存入一笔钱，银行按照复利5%，按年付利息，在第三年年末，连本带利取出100万，问现在需存入多少钱？ n i F P -+=)1( （式中：F —终值，P —现值，i —利率，n —年限） ⑺、等额支付的终值P9 未来3年每年年末在账户里面存入1万元，银行按照复利5%，按年付利息，在第3年年末连本带利一起取出，问可以取出多少钱？ i i A F n 1 )1(-+= （式中：F —终值，i —利率，n —年限，A —年金） ⑻、等额支付的现值P9 现在存入一笔钱，银行按照复利5%，按年付利息，在未来三年每年年末，取出1万元，在第三年取出后账面余额为0，问现在需存入多少钱？ n n i i i A P ) 1(1 )1(+?-+= （式中：P —现值，i —利率，n —年限，A —年金）
3、名义利率与有效利率的计算P11 ⑴、计息周期：某一笔资金计算利息时间的间隔（计息周期数m ，计息周期利率i ）P12 ⑵、计息周期利率（i ） ⑶、计息周期数：某一笔资金在一年内计算利息的次数（m ） ⑷、名义利率：指的是年利率（单利计算的年利率）（r ）r=i ×m ⑸、实际利率：又称有效利率，复利计算利率 ①计息周期的有效利率：（等效计息周期利率） ②年有效利率： 1)1(-+ =m eff m r i ⑹、已知某一笔资金的按季度计息，季度利率3%，问资金的名义利率？ r=i ×m=3%×4=12% ⑺、已知某一笔资金半年计息一次，名义利率10%，问半年的利率是多少？ i=r/m=10%/2=5% ⑻、甲施工企业，年初向银行贷款流动资金200万，按季计算并支付利息，季度利率1.5%，则甲施工企业一年应支付的该项流动资金贷款利息为多少万元？ 200×1.5%×4=12万元 ⑼、年利率8%，按季度复利计息，则半年的实际利率为多少？季度利率 i=r/m=8%/4=2% 半年的有效利率（i eff ）=(1+r/m)m -1=（1+2%）2-1=4.04% ⑽、有一笔资金，名义利率r=12%，按月计息，计算季度实际利率，月利率i=1% 季度的有效利率（i eff ））=(1+r/m)m -1=（1+1%）3-1=3.03% ⑾、某企业从金融机构借款100万，月利率1%，按月复利计息，每季度付息一次，则该企业一年须向金融机构支付利息多少万元 季度的有效利率（i eff ））=(1+r/m)m -1=（1+1%）3-1=3.03% 季度有效利率×100万×4=3.03%×100×4=12.12万元
2014年一级建造师考试《建设工程经济》真题及答案解析 一、单项选择题(共60题，每题1分。每题的备选项中，只有1个最符合题意) 1.施工图预算审核时，利用房屋建筑工程标准层建筑面积数对楼面找平层、天棚抹灰等工程量进行审查的方法，属于( )。 A.分组计算审查法 B.重点审查法 C.筛选审查法 D.对比审查法 【答案】A 【解析】考察知识点，施工图预算的审查方法。参见教材P219。 2.某项目建设期2年，建设期内第1年贷款700万元，第2年贷款600万元，年内均衡发放，且只计息不还款，年利率为8%。则编制该项目的投资估算时，建设期利息总和为( )万元。 A.104.00 B.110.24 C.114.94 D.155.84 【答案】B 【解析】350×8%=28万元，（700+28+300）×8%=82.24万元，28+82.24=110.24万元。参见教材P165。 3.为了进项盈亏平衡分析，需要将技术方案的运行成本划分为( )。 A.历史成本和现时成本 B.过去成本和现在成本 C.预算成本和实际成本 D.固定成本和可变成本 【答案】D 【解析】根据成本费用与产量(或工程量)的关系可以将技术方案总成本费用分解为可变成本、固定成本和半可变(或半固定)成本。参见教材P33。 4.根据《建设工程工程量清单计价规范》(GB50500-2013)，关于工程量清单编制的说法，正确的是( )。 A.综合单价包括应由招标人承担的全部风险费用 B.招标文件提供了暂估单价的材料，其材料费用应计入其他项目清单费 C.措施项目费包括规费、税金等在内 D.规费和税金必须按有关部门的规定计算，不得作为竞争性费用 【答案】D 【解析】发包人和承包人均应按照省、自治区、直辖市或行业建设主管部门发布的标准计算规费和税金，不得作为竞争性费用。参见教材P174。 5.根据《企业会计准则第15号一建合同》，属于工程成本直接费用的是( )。
2014中南大学细胞生物学考试大纲.doc
中南大学2014年全国硕士研究生入学考试《细胞生物学》考试 大纲 本考试大纲由医学遗传学国家重点实验室教授委员会于2013年7月1日通过。 I.考试性质 细胞生物学是为高等院校和科研院所招收硕士研究生而设置的具有选拔性质的全国统一入学考试科目，其目的是科学、公平、有效地测试学生掌握大学本科阶段细胞生物学的基本知识、基本理论，基本技能，评价的标准是高等学校本科毕业生能达到优良以上水平，以保证被录取者的细胞生物学功底较扎实，并有利于各高等院校和科研院所在专业上择优选拔。 II.考查目标 细胞生物学是综合运用各种现代科学技术，从细胞水平、亚细胞水平和分子水平上全面系统地研究细胞生命活动规律的科学。细胞生物学是生命科学中的一门重要前沿学科，也是基础医学领域的重要基础学科。本门课程主要要求考生： 1、掌握和了解细胞不同的结构与功能以及结构与功能的相互关系，了解细胞生命活动的基本规律。 2、从细胞生物学的角度，了解疾病的发生与发展。 3、掌握基本的细胞生物学实验技能。 Ⅲ.考试形式和试卷结构 1、试卷满分及考试时间 本试卷满分为100 分，考试时间为120分钟 2、答题方式 答题方式为闭卷，笔试。 Ⅳ.考查内容 一、绪论
3、真核细胞的基因结构、基因的转录及其加工。 六、细胞骨架 1、微管、微丝和中间纤维的形态结构和化学组成； 2、微管、微丝和中间纤维的功能； 3、微管、微丝和中间纤维的装配过程； 4、细胞骨架与医学的关系。 七、线粒体 1、线粒体的结构、细胞呼吸和氧化磷酸化； 2、细胞的能量转换； 3、线粒体基因组。 八、细胞的内膜系统 1、核糖体与蛋白质合成、信号假说、内质网的功能、高尔基复合体的形态结构与功能、溶酶 体的功能； 2、内质网、溶酶体的形态结构与类型； 3、过氧化物酶体的形态结构与功能； 4、内膜体系成分与医学的关系。 九、细胞的信号转导 1、受体、配体、G 蛋白、腺苷酸环化酶、第一信使以及第二信使的概念； 2、受体的基本类型、G 蛋白的类型和分子组成、G 蛋白的作用机制； 3、 cAMP 信号系统、cGMP 信号系统以及磷脂酰肌醇信号系统； 4、信号转导与医学的关系。 十、细胞生长、分裂和细胞周期
2014年一级建造师《建设工程经济》真题及答案 一、单项选择题(共60题，每题1分。每题的备选项中，只有1个最符合题意) 1.施工图预算审核时，利用房屋建筑工程标准层建筑面积数对楼面找平层、天棚抹灰等工程量进行审查的方法，属于( )。 A.分组计算审查法 B.重点审查法 C.筛选审查法 D.对比审查法 2.某项目建设期2年，建设期内第1年贷款700万元，第2年贷款600万元，年内均衡发放，且只计息不还款，年利率为8%。则编制该项目的投资估算时，建设期利息总和为( )万元。 A.104.00 B.110.24 C.114.94 D.155.84 3.为了进项盈亏平衡分析，需要将技术方案的运行成本划分为( )。 A.历史成本和现时成本 B.过去成本和现在成本 C.预算成本和实际成本 D.固定成本和可变成本 4.根据《建设工程工程量清单计价规范》(GB50500—2013)，关于工程量清单编制的说法，正确的是( )。 A.综合单价包括应由招标人承担的全部风险费用 B.招标文件提供了暂估单价的材料，其材料费用应计入其他项目清单费 C.措施项目费包括规费、税金等在内 D.规费和税金必须按有关部门的规定计算，不得作为竞争性费用
5.根据《企业会计准则第15号一建合同》，属于工程成本直接费用的是( )。 A.管理费用 B.销售费用 C.财务费用 D.人工费用 6.某租赁设备买价50万元，租期5年，每年年末支付租金，折现率10%，附加率5%，则按附加率法计算每年的租金应为( )万元。 A.20.0 B.17.5 C.15.0 D.12.5 7.甲公司从银行借入100万元，年利率为8%，单利计息，借期4年，到期一次还本付息，则该公司第四年末一次偿还的本利和为( )万元。 A.1360 B.1324 C.1320 D.1160 8.根据《建设工程工程量清单计价规范》(GB 50500-2013)，分部分项工程清单综合单价应包含( )以及一定范围内的风险费用。 A.人工费、材料和工程设备费、施工机具使用费、企业管理费、利润 B.人工费、材料费、施工机具使用费、企业管理费、规费 C.人工费、材料和工程设备费、施工机具使用费、规费、利润、税金 D.材料费、工程设备费、施工机具使用费、规费、税金、企业管理费 9.对于完全有企业自有资金投资的技术方案，自主测定其精准收益率的基础主要是( )。
细胞生物学学习体会 通过网络课程学习,有幸聆听到王金发教授对《细胞生物学》课程的讲授，使我不仅学到了细胞生物学专业新的知识与研究技术、方法,而且在教学方面也受益非浅。下面就我的学习谈一些体会。 一、全面学习了细胞生物学的专业知识 《细胞生物学》是一门包容量大、发展迅速的学科。内容涉及生物膜的结构与功能；内膜系统区室化形成及各种细胞器的结构与功能；细胞信号转导；细胞核、染色体以及基因表达；细胞骨架体系；细胞增殖及其调控；细胞分化、癌变及其调控；细胞的衰老与程序性死亡；细胞的起源与进化；细胞工程技术等多个方面。 (一)对细胞生物学的专业知识有了更深的认识。 1、细胞通讯方面 记得第一次听王老师的课就是讲授细胞的通讯，在多细胞生物中，细胞不是孤立存在的，而是生活在细胞社会中，它们必须协调一致，才能维持机体的正常生理机能，它们的协调是通过细胞通讯来完成的。细胞通讯是通过信号分子与受体的识别，从而在靶细胞内产生一系列反应的过程。信号分子有第一信使和第二信使之分，第二信使位于细胞内，由第一信使与受体识别后最先在胞内产生的，它主要与细胞内受体作用，所以受体也可分为表面受体和胞内受体。信号分子与受体的识别作用具有特异性。细胞信号传递所发生的反应有快速反应和慢速反应。快速反应是信号分子与受体作用后直接引起细胞内的一系列代谢反应；慢速反应则需要引起基因表达，再表现出各种代谢反应。细胞通讯过程是个复杂的过程，一个细胞的周围有上百种不同的信号分子，细胞要对这些信号分子进行分析，做出正确的反应。信号转换的研究在近年很热门，但进展缓慢，主要是因为信号转换的复杂性，不同信号的组合产生的效应是不一样的。 2、蛋白质的合成和分选机理 蛋白质的合成是在核糖体上，有两种合成体系，一种是在细胞质中游离的核糖体上，另一种是在膜旁核糖体上合成，它们合成的蛋白质将分布到不同的部
1 / 71 1Z101000 工程经济基础 1Z101000 工程经济基础知识体系 1Z101010掌握现金流量的概念及其构成 1．知识体系 工程经济基础 时间价值理论 现金流量图 资金等值计算 投资方案 经济效果评价 评价理 论应用 建设工程项目可行性研究的概念和基本内容 建设工程项目周期概念和各阶段对投资的影响 盈亏平衡分析 ( 盈亏平衡点BEP ) 敏感性分析 ( 敏感度系数E ) 评价内容 盈利能力 清偿能力 抗风险能力 成本效益分析法 财务评价 指标体系 静态经济评价指标 （R;P t ;,P d ;利息与偿债备付率） 动态经济评价指标 （P t ’; FNPV; FIRR; FNPVR ） 成本效能分析法 评价方法
2 / 71 2. 知识要点 现金流量 某建设项目投资总额为1000万元，建设期三年，各年投资比例分别为：20%、50%、30%，项目从第四年开始产生效益，每年的净现金流量为300万元，项目计算期十年，在最后一年可收回固定资产余值及流动资金100万元。则该项目的现金流量图为（ ） 知识要点：1Z101013现金流量图的绘制方法 答案：C 解题思路：在画现金流量图时，注意现金流量三要素：现金流量的大小、方向（流出或流入）及作用点（现金发生的时间电）。 100 100 B D 500 100 100 500
3 / 71 解题技巧：在画现金流量图时，投资一般画在年初，收益一般画在年末，箭头向上表示受益（现金流入），箭头向下表示支出(现金流出)，箭头上方（下放）注明现金流量的数值。现金流量图画得正确与否是正确进行资金等值计算的前提。画现金流量图时一定要注意全面，不要有漏项。同时要注意区分年初与年末。 1Z101080熟悉资金的时间价值概念及其相关计算 1．知识体系 2．知识要点 （1）资金的时间价值 资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值。 1.与采用复利计算利息 的方法相同。 2.利息额的多少是衡量资金时间价值的绝对尺度，利率是衡量资金时间价值的相对尺度。 利息计算 不计在先前利息周期中所累积增加复利计算：用本金加上先前计息周期所累积利息总额之和计算。 )：r=i ×m, 1)1(-+ =m eff m r i 1.不同时期、效”的资金称为等值，又叫等效值。2.等值基本公式： （F/P ，i ，n ） （（A/P ，i ，n ） （（F/A ，i ，n ） （影响资金等值因素：金额的多少、资金发生的时间、利率的大小。3.贷款利息计算方法有单利法和复利法之分，公式不同。
2014年细胞生物学复习题 第七章细胞质基质与内膜系统 1.试述泛素化和蛋白酶体所介导的蛋白质降解的机制。 泛素化和蛋白酶体所介导的蛋白质降解机制是识别并降解错误折叠或不稳定蛋白质的机制。其中，蛋白酶体是细胞内降解蛋白质的大分子复合体，富含ATP依赖的蛋白酶活性。泛素是由氨基酸残基组成的小分子球蛋白，普遍存在与真核细胞中。在蛋白质降解过程中，多个泛素分子共价结合到含有不稳定氨基酸残基的蛋白质N端，更常见的是与靶蛋白赖氨酸残基的ε氨基相连接。然后带有泛素化标签的蛋白质被蛋白酶体识别并降解，通过该途径降解的蛋白质大体包括两大类：一是错误折叠或异常的蛋白质；二是需要进行存量调控和不稳定的蛋白质。 蛋白质的泛素化需要多酶复合体发挥作用，通过3种酶的先后催化来完成，包括泛素活化酶（E1）、泛素结合酶（E2，又称泛素载体蛋白）和泛素连接酶（E3）。泛素化过程涉及如下步骤：（1）泛素活化酶E1通过形成酰基-腺苷酸中介物使泛素分子C端被激活，该反应需要ATP；（2）转移活化的泛素分子与泛素结合酶E2的半胱氨酸残基结合；（3）异肽键形成，即与E2结合的泛素羧基和靶蛋白赖氨酸侧链的氨基之间形成异肽键，该反应由泛素连接酶E3催化完成。重复上述步骤，形成具有寡聚泛素链的泛素化靶蛋白。泛素化标签被蛋白酶体帽识别，并利用ATP水解提供的能量驱动泛素分子的切除和靶蛋白解折叠，去折叠的蛋白质转移至蛋白酶体核心腔内被降解。当泛素化的靶蛋白其泛素自身的赖氨酸残基也被泛素化时，便形成具有寡聚泛素链的泛素化蛋白。 2.试述高尔基体的结构及其功能。 高尔基体是有极性的细胞器，面向细胞核扁囊弯曲成凸面称形成面（forming face）或顺面（cis face），面向质膜的凹面（concave）称成熟面（mature face）或反面（trans face）高尔基体的结构由三部分组成： （1）顺面管网状结构(CGN) 和顺面膜囊（cis膜囊）：该区域接受来自内质网新合成的物质并将其分类后大部分转入高尔基体中间膜囊，少部分蛋白质与脂质再返 回内质网。蛋白质丝氨酸残基在此发生O-连接的糖基化。跨膜蛋白质在细胞 质基质一侧结构域的酰基化也发生在此。 （2）中间膜囊（medial Golgi）：该区域参与多数糖基修饰与加工、糖脂的形成、与高尔基体有关的多糖的合成 （3）反面膜囊和反面管网状结构（TGN）：参与蛋白质的分类与包装，最后从高尔基体中输出、晚期蛋白质的修饰-包括：蛋白原的水解加工作用、蛋白质酪氨 酸残基的硫酸化 此外，还存在周围囊泡，顺面一侧的囊泡是内质网与高尔基体之间的物质运输小泡，称为ERGIC或VTCs泡；在高尔基体的反面一侧体积较大的为分泌泡与分泌颗粒高尔基体的功能： （1）参与细胞的分泌活动 在TGN区存在3条蛋白质的分选途径：溶酶体酶的包装和分选、可调节性分泌 （外界激素+受体→胞内信号→Ca2+升高→分泌泡释放）、组成性分泌（参与质 膜更新或向胞外分泌蛋白） （2）参与蛋白质的糖基化及其修饰 N-连接糖基化：寡糖链转移至新生肽链的特定三肽序列的天冬酰胺残疾上，在 糙面内质网以及通过高尔基体各膜囊间隔的转移，寡糖链经一些列加工，最终 形成成熟的糖蛋白。
2014年一级建造师考试《建设工程经济》真题及答案解析 一、单项选择题(共60题，每题1分。每题的备选项中，只有1个最符合题意) 1.施工图预算审核时，利用房屋建筑工程标准层建筑面积数对楼面找平层、天棚抹灰等工程量进行审查的方法，属于( )。 A.分组计算审查法 B.重点审查法 C.筛选审查法 D.对比审查法 2.某项目建设期2年，建设期内第1年贷款700万元，第2年贷款600万元，年内均衡发放，且只计息不还款，年利率为8%。则编制该项目的投资估算时，建设期利息总和为( )万元。 A.104.00 B.110.24 C.114.94 D.155.84 3.为了进项盈亏平衡分析，需要将技术方案的运行成本划分为( )。 A.历史成本和现时成本 B.过去成本和现在成本 C.预算成本和实际成本 D.固定成本和可变成本 4.根据《建设工程工程量清单计价规范》(GB50500-2013)，关于工程量清单编制 百度出品：建造师考试神器，扫码下载！ 海量免费资料，真题，模拟题，任你练！ 一级建造师考试，二级建造师考试，一网打尽！ 官方QQ 群：332321318
的说法，正确的是( )。 A.综合单价包括应由招标人承担的全部风险费用 B.招标文件提供了暂估单价的材料，其材料费用应计入其他项目清单费 C.措施项目费包括规费、税金等在内 D.规费和税金必须按有关部门的规定计算，不得作为竞争性费用 5.根据《企业会计准则第15号一建合同》，属于工程成本直接费用的是( )。 A.管理费用 B.销售费用 C.财务费用 D.人工费用 6.某租赁设备买价50万元，租期5年，每年年末支付租金，折现率10%，附加率5%，则按附加率法计算每年的租金应为( )万元。 A.20.0 B.17.5 C.15.0 D.12.5 7.甲公司从银行借入100万元，年利率为8%，单利计息，借期4年，到期一次还本付息，则该公司第四年末一次偿还的本利和为( )万元。 A.1360 B.1324 C.1320 D.1160 8.根据《建设工程工程量清单计价规范》(GB 50500-2013)，分部分项工程清单综合单价应包含( )以及一定范围内的风险费用。 A.人工费、材料和工程设备费、施工机具使用费、企业管理费、利润 B.人工费、材料费、施工机具使用费、企业管理费、规费 C.人工费、材料和工程设备费、施工机具使用费、规费、利润、税金 D.材料费、工程设备费、施工机具使用费、规费、税金、企业管理费 9.对于完全有企业自有资金投资的技术方案，自主测定其精准收益率的基础主要是( )。 A.资金机会成本 B.资金成本 C.投资风险 D.通货膨胀 10.根据现行《企业会计准则》，下列支出中应列为当期费用的是( )。 A.缴纳罚款 B.购买生产原料支出 C.计提固定资产减值准备 D.股利分配支出 11.关于国际工程投标报价中暂定金额的说法，错误的是( )。 A.暂定金额是业主在招标文件中明确规定了数额的一笔资金 B.承包商在投标报价时应将暂定金额计入工程总报价 C.暂定金额等同于暂估价
《细胞生物学》测试卷(一) 一．单项选择 1．内质网内连着核膜，外连质膜的结构特点适于（）。 A、参与细胞内某些代谢反应 B、提供核糖体附着的支架 C、提供细胞内物质运输的通道 D、扩展细胞内膜面积、有利于酶的附着 2．原始生命的结构组成与下列细胞内容物中的哪一个最相似（）。 A、核仁 B、线粒体 C、核糖体 D、T4噬菌体 3．下列不属于微丝作用的是（）。 A、肌肉收缩 B、参与细胞质运动及细胞移动 C、形成有丝分裂器 D、维持微绒毛的形状 E、形成胞质分裂环 4．细胞的鞭毛和纤毛的结构呈 9＋2型；基体和中心体的为9＋0型。关于它们的结构，下列叙述正确的是 A、＋前的9所示结构相同 B、9表示9条二联微管 C、9表示9条三联微管 D、2和0表示的是中央微管的情况 5．高等到动物进行呼吸的基本单位是（）。 A、细胞 B、线粒体 C、肺泡 D、呼吸系统 6．以下对叶绿体结构的描述中，与吸收和转化光能关系最密切的是（）。 A、叶绿体具有双层单位膜包围着的细胞器 B、在类囊体膜上分布着色素和酶 C、在类囊体的内腔含有液体 D、基质中有酶、DNA和RNA 7．要研究某植物的核型，最理想的研究材料是（）。 A、花药 B、根尖 C、叶表皮细胞 D、皮层 8．细胞表面和细胞器表面都具有的特征是（）。 A、亲水性 B、被糖蛋白所覆盖 C、单层单位膜 D、疏水性 9．细胞中的全部基因都存在于（）。 A、细胞核中 B、染色体中 C、DNA中 D、核酸中 10．下列哪项是细胞核的最重要的机能？（）。 ①控制机体发育②控制机体异化作用③控制细胞全部生命活动 1
④控制机体的遗传和变异⑤细胞中全部基因的贮存场所 A、①② B、②④ C、③⑤ D、①④ 11．下列四种生物的细胞中明显区别于另外三种的是（）。 A、酵母 B、青霉 C、蓝藻 D、衣藻 12．动物细胞膜中的脂双层结构具有流动性与下列哪一种物质关系最密切？ A、磷脂 B、胆固醇 C、糖脂 D、膜蛋白 13．对于细胞周期时间相差很大的不同种类的两种细胞来说，通常它们的差别最明显的时期是（）。 A、G1期 B、S期 C、G2期 D、M期 14．原核生物的质粒是细菌等的（）。 A、染色体DNA B、细胞器DNA C、核外DNA D、附加体 15．（2001全国联赛）用两种不同的荧素分子分别标记两个细胞质膜中的磷脂分子，再将两个细胞融合，经过一段时间后会发现两种荧光均匀地分布在细胞质膜上，这表明了组成质膜的脂分子（）。 A、在双层之间做翻转运动 B、做自旋运动 C、尾部做摇摆运动 D、沿膜平面做侧向运动 16．用秋水仙素处理细胞后，细胞的哪项活动会发生变化？ A 变形运动 B 胞质分裂 C 染色体向极移动 D 吞噬作用 17．核仁增大的情况一般会发生在哪类细胞中？ A 分裂的细胞 B 需要能量较多的细胞 C 卵原细胞或精原细胞 D 蛋白质合成旺盛的细胞 18．若将酵母菌之线粒体DNA进行突变，使其线粒体不再分裂，再将此突变的酵母菌涂抹在含有葡萄糖的培养基上培养，将可观察到何种现象？（） A、因为子代中没有线粒体，所以无菌落形成 B、因为可以由糖酵解作用而获得部分能量，所以有小菌落形成 C、因为线粒体DNA对真核细胞不重要，故有正常大小的菌落形成 D、因为糖酵解作用是在线粒体中进行，故最多表现一半的菌落 19．糖蛋白普遍存在于细胞膜上，如果将细胞培养在含药品X的培养基中，发现细胞无法制造糖蛋白的糖侧链，则此药品可能作用于蛋白质合成及运输过程的哪种细胞器上？（） A 核糖体 B 线粒体 C内质网 D 溶酶体 20．生长因子通常是指机体不同组织细胞产生的一类 A 多肽类 B 糖脂类 C 糖类 D 脂类 2
1.细胞内膜系统(Endomembrane System)：指在结构、功能乃至发生上相互关联、由单层膜包被的细胞器或细胞结构。 主要包括内质网、高尔基体、溶酶体、胞内体和分泌泡等。 2、细胞质基质（Cytoplasmic Matrix）:在真核细胞的细胞质中，除去可分辨的细胞器以外的胶状物质 3、线粒体（mitochondrion）:真核细胞内一种高效地将有机物中储存的能量转换为细胞生命活动直接能源ATP的细胞 器，普遍存在于各类真核细胞中，主要是封闭的双层单位膜结构，且内膜经过折叠演化为表面极大扩增的内膜特化系统。 4、内质网(Endoplasmic Reticulum ER)：是真核细胞中内膜系统的组成之一，由封闭的管状或扁平囊状膜系统及其包 被的腔形成的互相沟通的三维网状结构。有糙面内质网和光面内质网两种基本类型。合成细胞内除核酸以外一系列重要的生物大分子 5、高尔基体（Golgi Body）：亦称高尔基复合体、高尔基器。是真核细胞中内膜系统的组成之一。是由光面膜组成的 囊泡系统，它由扁平膜囊（saccules)、大囊泡（vacuoles)、小囊泡（vesicles）三个基本成分组成 6、溶酶体（Lysosome）：真核细胞中的一种细胞器；为单层膜包被的囊状结构；内含多种水解酶，专为分解各种外源 和内源的大分子物质 7、过氧化物酶体(peroxisome):是一种具有异质性的细胞器，在不同生物及不同发育阶段有所不同。特点是内含一至多 种依赖黄素（flavin）的氧化酶和过氧化氢酶（标志酶） 8、蛋白质分选（Protein sorting）:由于蛋白质发挥结构与功能的部位几乎遍布细胞的各种膜区与组分，因此，必然存 在不同的机制确保蛋白质分选，转运在细胞的特定部位，组装成结构域功能复合体，参与细胞的各种生命活动。这一过程称为蛋白质的定向转运或蛋白质分选 9、信号肽（signal sequence或signal peptide）:引导蛋白质定向转移的线性序列，通常15-60个氨基酸残基，对所引导 的蛋白质没有特异性要求 10、导肽(Leader Peptide)：前体蛋白N端的一段信号序列称为导肽或引肽，完成转运后被酶切除，成为成熟蛋白，这 种现象称后转译 11、脂筏：脂筏是一种相对稳定的、分子排列有序的、较为紧密的、流动性较低的质膜微区结构，富含鞘脂和胆固醇， 在细胞的信息传递和物质运输等很多生命活动中起重要作用。 12、红细胞血影：红细胞经低渗处理破裂释放出内容物，留下一个保持原形的空壳 13、流动镶嵌模型:是1972年提出的一种生物膜的结构模型，主要强调以下两点：1）膜的流动性，膜蛋白和膜脂均可以 侧向运动2）膜蛋白分布的不对称性。有的镶在膜表面，有的嵌入或者横跨脂双分子层。 14、MTOC（课件，细胞外基质细胞骨架的运动，72页）:即微管组织中心，在体内，微管的成核和组织过程与一些 特异结构相关，这些结构被称为微管组织中心 15、核孔复合体：由内、外核膜在一定距离处融合而成的环状孔，主要由胞质环、核质环、辐、栓构成。是一种特殊的 跨膜运输蛋白复合体，并且是双功能双向性的亲水性核质交换通道。（书p230） 16、核定位信号：亲核蛋白含有特殊的具有定位作用的氨基酸序列，这些特殊的短肽保证了整个蛋白质通过核孔复合体 被转运到细胞核内。 17、成体干细胞：指存在于一种已经分化组织中的未分化细胞，这种细胞能够自我更新并且能够特化形成组成该类型组 织的细胞。 18：细胞周期检查点：是细胞周期（cell cycle）中的一套保证DNA复制和染色体（chromosome）分配质量的检查机制。 是一类负反馈调节机制。当细胞周期进程中出现异常事件，如DNA损伤或DNA复制受阻时，这类调节机制就被激活，及时地中断细胞周期的运行。待细胞修复或排除故障后，细胞周期才能恢复运转 19细胞同步化（细胞增殖课件24页）:在自然过程中发生或经人工处理造成的细胞周期呈现同步化生长的情况，包括自然同步化和人为同步化 20、CDK激酶：是与周期蛋白结合并活化，使靶蛋白磷酸化、调控细胞周期进程的激酶。与cdc2一样，含有一端类似的 氨基酸序列，可以与周期蛋白结合，并将周期蛋白作为其调节亚单位，进而表现出蛋白激酶活性。CDK激酶是细胞周期调控中的重要因素，是细胞周期运行的引擎分子。目前发现，哺乳动物细胞内至少存在12种CDK激酶，即CDK1至DK12。一般情况下，CDK激酶至少含有2个亚基，即周期蛋白和CDK蛋白。细胞内部的CDK激酶并不是一旦结合到周期蛋白上就具有激酶的活性，还需要一系列的酶促反应才能具有激酶的活性，使得细胞由分裂间期向分裂期转化，或者分裂间期内部转化。 21、成熟促进因子:即MPF,是一种使多种底物蛋白磷酸化的一种蛋白激酶,在细胞从G2期进入到M期时起着重要作用
2014年一级建造师《工程经济》命题考点解析汇总（3） 1Z102000工程财务会计 命题考点七企业各类财务报表的作用、结构及内容 【教材解读】 一、资产负债表的内容和作用 资产负债表根据资产、负债、所有者权益之间的关系，即“资产一负债+所有者权益”，按照一定的分类标准和顺序，把企业一定日期的资产、负债和所有者权益各项目进行适当排列。资产负债表的主要内容见表2—25。 二、资产负债表的作用 资产负债表作用主要体现在以下三个方面：
(1)资产负债表能够反映企业在某一特定日期所拥有的各种资源总量及其分布情况，可以分析企业的资产构成，以便及时进行调整; (2)资产负债表能够反映企业的偿债能力，可以提供某一日期的负债总额及其结构，表明企业未来需要用多少资产或劳务清偿债务以及清偿时间; (3)资产负债表能够反映企业在某一特定日期企业所有者权益的构成情况，可以判断资本保值、增值的情况以及对负债的保障程度。 三、所有者权益变动表的内容及作用 所有者权益变动表的内容及作用见表2-26。 四、利润表的内容和作用 利润表的内容和作用见表2-27。 五、现金流量表的内容和作用 (1)现金流量表的编制基础。 现金流量表是以现金为基础编制的，这里的现金包括库存现金、可以随时用于支付的存款、其他货币资金以及现金等价物。 现金等价物，是指企业持有的期限短、流动性强、易于转换为已知金额的现金、价值变动风险小的短期投资。现金等价物是短期投资，其支付能力与现金差别不大，可视为现金。
作为现金等价物的短期投资必须同时满足以下四个条件：期限短;流动性强;易于转换为已知金额的现金;价值变动风险小。 (2)现金流量表的内容见表2-28。 (3)现金流量表的结构。 现金流量表由正表和补充资料两部分组成。正表有五项：一是经营活动产生的现金流量;二是投资活动产生的现金流量;三是筹资活动产生的现金流量;四是汇率变动对现金的影响;五是现金及等价物净增加额。补充资料有三项：一是将净利润调节为经营活动产生的现金流量，也就是说：要在补充资料中采用间接法报告经营活动产生的现金流量信息;二是不涉及现金收支的重大投资和筹资活动;三是现金及现金等价物净增加情况。 (4)现金流量表的作用。 1)现金流量表有助于使用者对企业整体财务状况做出客观评价。 2)现金流量表有助于评价企业的支付能力、偿债能力和周转能力。 3)现金流量表有助于使用者预测企业未来的发展情况。 (5)财务报表附注的内容和作用见表2-29。
细胞生物学考试复习 1、放射自显影技术(autoradiography): 标本经放射性标记，感光材料原位暴光，可以确定放射性标记物在细胞内的定位。用于凝胶或琼脂平板时，能鉴定出放射性的条带或菌落。 2、动粒(kinetochore): 是指在主缢痕处两条染色单体的外侧表层部位的特殊结构。是纺锤丝微管的连接处，化学本质是蛋白质。 3、着丝粒(centromere): 是在主缢痕处两条染色单体相连处的中心部位，即主缢痕的内部结构，化学本质是一段DNA序列。着丝粒的 位置是鉴别染色体类型的一个重要标志。 4、核型(karyotype): 是指体细胞中在形态、结构和遗传功能彼此不同而互相协调的全套染色体数，也称染色体组型。根据染色体的 相对大小、着丝粒的位置、臂的长短、有无随体等特征，可把生物体细胞中全套染色体按一定顺序分组排列。染 色体组数，每组染色体的数目多少，均随生物种而异。正常人的46条染色体可分为A～G等7个组，因此，正常 人的核型可表示为46，XX(XY)。 5、多线染色体(polytene chromosome) ： 6、微管组织中心（microtubule organizing center，MTOC）： 7、周期蛋白(cyclin ): 在整个真核生物的细胞周期中，浓度随细胞周期的变化而时升时降的几个相关的蛋白质。细胞周期蛋白与依 赖于细胞周期蛋白的激酶之间形成复合物，从而激活并决定了这些酶的底物特异性。 8、限制点(restriction point): 限制点是哺乳动物细胞周期G 期控制进入S期的调节点，相当于酵母的START点。监测细胞的大小 1 及营养状态等，包括生长因子，满足条件则可通过细胞周期限制点，完成余下的细胞周期过程。 9、促后期复合物(anaphase-promoting complex, APC): APC即遍在蛋白连接酶（ubiquitin ligase，E3）复合物。 E3通常是一种复合体，由多亚基组成。APC激发E2-遍在蛋白复合物与有丝分裂周期蛋白破坏框结合，促使蛋白酶体降解周期蛋白，导致细胞完成M期。 10、M期促进因子(M phase-promotinp factor，MPF): 一种蛋白质，CDK1与周期蛋白B结合成MPF，其含量在有丝分裂前迅速上升， 在有丝分裂后迅速下降，被认为是触发有丝分裂的物质。 11、关卡(checkpoint): 监控细胞周期事件的发生、发展过程是否严格按程序进行的控制点称为关卡。 12、核孔复合物(nuclear pore complexs,NPCs) ：核被膜上有许多孔, 称为核孔( nuclear pore ),是细胞核膜上沟通核质与胞质的 开口, 由内外两层膜的局部融合所形成, 核孔的直径为80～120nm 13、信号肽（signal peptide)：将膜结合核糖体上合成的蛋白质的N-端的序列称为信号序列(signal sequence)，将组成该序列的肽 称为信号肽。在不需要特别区分时，可将它们统称为信号序列或信号肽。 14、伪装mRNA（masked mRNA）:未受精的卵细胞中携带有大量的mRNA,但这些mRNA在发育的早期不能进行蛋白质的合成，一般将这些 储存在卵细胞中为后期发育合成蛋白质用的mRNA称为“伪装的”mRNA（masked mRNA） 15、蛋白质寻靶(protein targeting)：游离核糖体上合成的蛋白质释放到胞质溶胶后被运送到不同的部位，即先合成，后运输。由 于在游离核糖体上合成的蛋白质在合成释放之后需要自己寻找目的地，因此又称为蛋白质寻靶16、染色体早熟凝集(premature chromosome condensation,PCC)：将处于分裂期的细胞与处于细胞周期其他阶段的细胞融合, M期的 细胞质总是能够诱导非有丝分裂的细胞中的染色质凝集, 这种现象称为染色体早熟凝集 17、细胞识别(cell recognition) ：指细胞对同种或异种细胞、同源或异源细胞以及对自己和异己物质分子的认识和鉴别。 18、联会复合体（synaptonemal complex,SC）：联会是在减数分裂的偶线期两条同源染色体侧面紧密相帖并进行配对的现象。联会染 色体间的配对是专一性的, 可以同时发生在分散的几个点上。染色体联会伴随一种复杂结构的形成：联会复 合体。 19、踏车现象(treadmilling) ：在微丝装配时,若G-肌动蛋白分子添加到F-肌动蛋白丝上的速率正好等于G-肌动蛋白分子从F-肌动 蛋白上失去的速率时, 微丝净长度没有改变, 这种过程称为肌动蛋白的踏车现象 20、组成型分泌途径(constitutive secretory pathway)：这种分泌途径中运输小泡持续不断地从高尔基体运送到细胞质膜，并立即 进行膜的融合，将分泌小泡中的蛋白质释放到细胞外, 此过程不需要任何信号的触发, 它存在于所有类型的细胞 中。组成型分泌途径除了给细胞外提供酶、生长因子和细胞外基质成分外，也为细胞质膜提供膜整合蛋白和 膜脂。 21、协同运输(cotransport)：又称偶联运输，它不直接消耗ATP，但要依赖离子泵建立的电化学梯度，所以又将离子泵称为初级主 动运输(primary active transport)，将协同运输称为次级主动运输(secondary active transport)。 22、糖萼(glycocalyx)：细胞质膜通常是由覆盖在细胞表面的保护层保护着，这种保护层即是细胞被。由于这层结构的主要成份是糖， 所以又称为糖萼(glycocalyx)，或多糖包被 23、细胞的胞吐作用(exocytosis):也称细胞的分泌活动动物细胞和植物细胞将在粗面内质网上合成而又非内质网组成部分的蛋白和脂 通过小泡运输的方式经过高尔基体的进一步加工和分选运送到细胞内相应结构、细胞质膜以及细胞外的过程称为细胞的分泌。 24、溶酶体(lysosome)：是动物细胞中一种膜结合细胞器,含有多种水解酶类, 在细胞内起消化和保护作用, 可与吞噬泡或胞饮泡结合, 消化和利用其中的物质