哺乳动物体外受精的基本操作程序，主要环节包括以下几个方面:
(一)卵母细胞的采集和成熟培养
1．卵母细胞的采集：卵母细胞的采集方法通常有三种。
(1)超数排卵：雌性动物用促卵泡素和促黄体素处理后，从输卵管中冲取成熟卵子可直接与获能精子受精。在大家畜中，由于操作程序复杂，成本较高，很少使用。这种方法的关键是掌握卵子进入输卵管和卵子在输卵管中维持受精能力的时间，一般要求在卵子具有旺盛受精力之前冲取。
(2)从活体卵巢中采集卵母细胞：这种方法是借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。
在家畜中，牛和马等大家畜常用超声波探测仪辅助取卵，其方法是用手从直肠把握卵巢，经阴道壁穿刺插入吸卵针，借助B型超声波图像引导，吸取大卵泡中的卵母细胞。按照目前的技术水平，一头健康母牛每周可获得5~10枚卵子。在家畜中，活体采集的卵母细胞一般要经成熟培养后才能与精子受精。这种方法对扩繁优良母畜具有重大意义，在有些国家已用于商业化生产。
(3)从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞：这种方法是从刚屠宰母畜体内摘出卵巢，经洗涤、保温（30℃~37℃)后，快速运到实验室，在无菌条件下用注射器或真空泵抽吸卵巢表面一定直径卵泡中的卵母细胞（牛卵泡直径要求3-10mm）也可对卵巢进行切片，收集卵母细胞。用此方法获得的卵母细胞多数处于生发泡期(GV期)，需要在体外培养成熟后才能与精子受精。从废弃卵巢中采集卵母细胞的关键是注意卵巢的保温和防止细菌污染。因此卵巢从畜体摘取后须放入含有生理盐水或磷酸缓冲液（PBS）的保温瓶中；吸卵前卵巢要用生理盐水或PBS多次洗涤；所用溶液都要添加抗生素。
这种方法的最大优点是材料来源丰富，成本低廉，但确定母畜的系谱困难。
2．母细胞的选择：采集的卵母细胞绝大部分与卵丘细胞形成卵丘卵母细胞复合体（cumulus oocyte complesx COC）。无论采用何种方法，采集的COC都要求卵母细胞形态规则，细胞质均匀，外围有多层卵丘细胞紧密包围。在家畜体外受精研究中，常把未成熟卵母细胞分为A、B、C和D四个等级。A级卵母细胞要求有三层以上卵丘细胞紧密包围，细胞质均匀；B级要求卵母细胞质均匀，卵丘细胞层低于三层或部分包围卵母细胞；C级为没有卵丘细胞包围的裸露卵母细胞；D级是死亡或退化的卵母细胞。在体外受精实践中，一般只培养A 级和B级卵母细胞。
3．卵母细胞的成熟培养：由超数排卵采集的卵母细胞已在体内发育成熟，不需培养可直接与精子受精，对未成熟卵母细胞需要在体外培养成熟。培养时，先将采集的卵母细胞在实体显微镜经过挑选和洗涤后，然后放入成熟培养液中培养。家畜卵母细胞的成熟培养液目前普遍采用TCM199添加孕牛血清、促性腺激素、雌激素和抗生素成份。通常采用微滴培养法，微滴体积为50-200微升，每滴中放入的卵母细胞数按每5微升一个计算单位。卵母细胞移入小滴后，放入二氧化碳培养箱中培养，培养条件为39℃、100%湿度和5%二氧化碳的空气。牛的培养时间为20-24小时，卵丘卵母细胞复合体经成熟培养后，卵丘细胞层扩散靠近卵母细胞周围的卵丘细胞呈放射状排列，出现放射冠，用DNA特意性染料染色后，在显微镜下进行核相观察，可见卵母细胞处于第2次成熟分裂中期。
(二)体外受精
1．精子的获能处理：哺乳动物精子的获能方法有培养和化学诱导两种方法。牛、羊的精子常用化学药物诱导获能，诱导获能的药物常用肝素和钙离子载体。
2．受精：即获能精子与成熟卵子的共培养，除钙离子载体诱导获能外，精子和卵子一般在获能液中完成受精过程。受精培养时间与获能方法有关。在B2液中一般为6-8小时而用TALP或S.F液作受精液时可培养18~24h。精子和卵子常在小滴中共培养，受精时精子密
度为1~9×10 6/ml，每10微升精液中放人1~2枚卵子，小滴体积一般为50~200微升。
(三)胚胎培养
精子和卵子受精后，受精卵需移入发育培养液中继续培养以检查受精状况和受精卵的发育潜力，质量较好的胚胎可移入受体母畜的生殖道内继续发育成熟或进行冷冻保存。
提高受精卵发育率的关键因素是选择理想的培养体系。在家畜中，胚胎培养液分为复杂的和化学成分明确的培养液两大类。复杂培养液中的成分很多，除无机和有机盐外，还添加维生素、氨基酸、核苷酸和嘌呤等营养成分和血清，最常用的有TCM199、B2和F10。用它们培养胚胎时，可以采用体细胞共培养体系，即体细胞与胚胎在微滴中共同培养，利用体细胞生长过程中分泌的有益因子，促进胚胎发育，克服发育阻断。
受精卵的培养广泛采用微滴法，胚胎与培养液的比例为一枚胚胎用3~10微升培养液；一般5~10枚胚胎放在一个小滴中培养以利用胚胎在生长过程中分泌的活性因子，相互促进发育。胚胎培养条件与卵母细胞成熟培养条件相同。有的实验室采用88% N2、7% O2和5%二氧化碳混合气体培养，以降低培养液中氧自由基浓度，提高胚胎发育率。胚胎在培养过程中要求每48-72小时更换一次培养液，同时观察胚胎的发育状况。当胚胎发育到一定阶段时可进行胚胎移植或冷冻保存，牛、羊受精卵通常培养到致密桑椹胚或囊胚时进行移植或冷冻保存。
长方案控制性超促排卵HCG日应用Gn对体外受精结局的影 响 摘要：目的探讨在长方案的作用下，在控制性超促排卵HCG日应用Gn对体外 受精结局的影响，旨在为临床上更好的进行体外受精提供依据。方法：利用随机 数字表法将上述研究对象分为试验组和对照组，其中试验组给予GnRH-a长方案 组（试验组），对照组给予改良长方案组（对照组）进行治疗。结果两组患者的 移植胚胎数比较有差异，差异有统计学意义(P<0.05)，而受精率和卵裂率比较无差异，差异无统计学意义(P>0.05)；试验组的临床妊娠率和足月分娩率均高于对照组，两组之间比较有差异，差异有统计学意义（P<0.05）。流产率、胚胎停育率、异 位妊娠和早产率、过期产率及活胎畸形率比较无差异，差异无统计学意义 （P>0.05)。结论 关键词：长方案；控制性超促排卵；HCG；Gn；体外受精； 近年来，受环境、基因等因素的影响，人群中不孕不育的人群数量逐年增多，辅助性生殖技术已经应用于不孕不育的治疗中，控制性超排卵（controlled ovarian hyperstimulation，COH）是体外受精手段中的重要方法之一 [1]，常用的COH 方案主要有长方案、短方案、超短方案、超长方案，其中促性腺激素释放激素激 动剂长方案 ( 简称长方案)是实施体外受精- 胚胎移植(in vitro fertilization- em-bryotransfer，IVF- ET)过程中控制性超排卵的经典方案之一，而人绒毛膜促性腺激 素(human chorionic gonado-tropin, hCG)在生殖领域发挥着重要的辅助作用，本研 究旨在探讨在长方案的作用下，在控制性超促排卵HCG日应用Gn对体外受精结 局的影响，旨在为临床上更好的进行体外受精提供依据。 1.研究对象及方法 1.1 病例来源 笔者回顾性分析了2014年1月至2015年12月间来我院生殖医学中心接受 体外受精- 胚胎移植(in vitro fertilization- em-bryotransfer，IVF- ET)的40例患者作 为研究对象，上述患者年龄在23-42岁之间，平均年龄为31.8±2.9岁。 1.2 纳入标准 （1）取卵次数较少，一般小于等于3次。 （2）基础卵泡刺激素≦15IU/L。 （3）不孕病因主要为单纯的输卵管因素或单纯性男性因素。 （4）主要进行新鲜周期胚胎的移植。 1.3 排除标准 （1）患有临床上常见的妇科疾病，如子宫内膜异位症、子宫腺疾病。 （2）染色体异常。 1.4 治疗方案 （1）促排卵 利用随机数字表法将上述研究对象分为试验组和对照组，其中试验组给予GnRH-a长方案组（试验组），对照组给予改良长方案组（对照组）进行治疗，具体的治疗方案如下： 1.4.1 GnRH-a长方案组（试验组） 试验组于治疗前一周期的排卵后一周注射长效 GnＲH-a 1.8mg，注射后两周 监测患者的血激素水平，同时给予阴道B超检查，当达到垂体降调节标准时开始
专题三胚胎工程 3.1——3.2听写 姓名： 1、胚胎工程的操作对象：。 2、精子的发生时间：；卵子的发生是从 开始，减数第一次分裂是在完成的，减数第二次分裂是在 过程中完成的，当时，说明卵子已经完成了受精（卵子已完成受精的标志）。排卵是指：。哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的储备，是在时完成的，这是精子和卵子在发生上的重要区别。 3、精子形成时要经过变形，其中，变为头部，发育为顶体，演变成尾，聚集在尾的基部形成，作用是。细胞内的其他物质浓缩成，最后脱落。 4、在受精之前，须经准备阶段，包括和，其中，卵子要在 内进一步成熟，须达到期，才具备与精子受精的能力。 5、受精时，精子首先发生反应，穿越，然后穿越，并接触到。阻止多精入卵的的屏障有。受精作用完成的标志是。 6、卵裂期的细胞数量，但胚胎的总体积，早期发育的胚胎按时间先后顺序包括：。其中，其中，阶段前的每个细胞属于全能细胞。期开始出现了细胞分化，将来发育成胎儿的各种组织，滋养层细胞将来发育成，该时期还出现了腔，胚胎进一步扩大，出现现象。期出现了胚层分化。内细胞团表层的细胞形成，下方的细胞形成。 7、培养试管动物所用的技术有：， 培育试管动物的意义是。 8、体外受精的步骤主要包括：。 9、实验动物常采用的获取卵母细胞的方法是，所用激素是， 从中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。从屠宰场已屠宰母畜的卵巢中或从活体中采集的卵母细胞，都需进行体外培成熟养，其目的是。10、采集精子的方法有。从良种公牛采集的精子需才能进行受精作用。体外获能的方法有法和法两种，其中后者是将精子放在一定浓度的溶液中，用化学药物诱导精子获能。 11、获能的精子和培养成熟的卵子，一般可以在溶液中完成受精作用。 12、早期胚胎培养的培养液称为培养液，成分是： 。受精卵在其中培养的目的是。 13、牛、羊等动物的胚胎需培养到阶段进行移植，人的体外受精胚胎可在阶段移植。 14、试管牛和克隆牛中，属于有性生殖的是，二者均用到的技术有：。
体外受精失败的原因及对策 刘平，郑晓英 作者单位:北京大学第三医院生殖医学中心，北京100191 摘要:在接受体外受精胚胎移植治疗的患者中，有时会出现全部获取的卵母细胞均未受精现象，即受精失败。其原因可能为精子与透明带结合失败和(或)精子穿透异常、卵母细胞激活失败等。目前尚缺乏准确的预测受精失败的方法，临床上一旦出现受精失败应采取积极的补救措施，并根据患者病史、临床特征、配子情况对患者以后的治疗措施提出建议。早补救ICSI的有效性和安全性尚需进一步的临床验证。 关键词:受精;完全受精失败;补救卵母细胞浆内单精子注射;卵母细胞激活 Abstract:Total fertilization failures(TFF)are rareevents of in vitro fertilization(IVF).Most cases oc-cur due to lack or dysfunction of sperm binding to/penetrate the zona pellucida or failure of oocyte acti-vation.Fertilization failure is not predictable becauseof lacking accurately and sensitive method.The clin-ical value of rescue ICSI should be fully considerableaccording to patient history，clinical character andgametes quality.Long term evaluation of babies re-sulting from the application of early rescue ICSI isneeded to confirm empirically the safety of this meth-od. Keywords:fertilization;total fertilization failure;res-cue ICSI;oocyte activation 完全受精失败(total fertilization failures，TFF)指在体外受精—包括常规体外受精(in vitro fertilization，IVF)和卵母细胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injecting，ICSI)的显微受精后的一定时段内，精卵没能结合为合子，形态学上没有看到精原核和卵原核形成的现象。多年来的ICSI应用证实:虽然ICSI技术绕开了精子穿越透明带、精卵质膜融合等过程，将精子直接注入卵母细胞内，仍有20%～30%的卵母细胞不能正常受精。 在IVF助孕治疗中，个别患者会出现全部卵母细胞不受精的受精失败，这种现象在常规IVF周期的发生率约为5%～10%[1]，ICSI周期的发生率为1%～3%[2]。 受精失败不仅与精子和卵的质量、受精过程体外环境等因素有关，也可能是某些不明原因性不孕症夫妇长期不能自然受孕的病因所在。当一次取卵获得的多个卵母细胞中有少部分未受精时，被认为是可接受的，但当全部卵母细胞受精失败时，整个治疗过程不得不中断，不仅使医生和胚胎学家感到沮丧，对接受助孕治疗的夫妇更是巨大的精神打击。如何预防和避免受精失败成为改善某些患者IVF结局的重要环节。 1受精失败原因分析
食蟹猴人工授精及體外受精實驗初步程序 KHI Bioservices(Hong Kong)Limited 袁濤 D.V.M 1人工授精及體外受精實驗初步程序 : 1人工授精 (artificial insemination) 1.1母猴準備 利用獨立籠檢視母猴月經, 選擇有正常及規律性月經之猴子進行 利用腹腔鏡(Laparoscopy)或超聲波(Ultrasound)檢查卵巢及卵泡發育情況, 自月經後第5天每隔一天檢查, 接近排卵期時每天進行檢查, 直至確定排卵. [ 另有學者進行荷爾蒙測試 (estrogen, progesterone, LH) 確定排卵 (estrogen ,↓ ↑↑腹腔鏡(Laparoscopy)或超聲波(Ultrasound)較能直接檢視卵泡發育狀progesterone , LH ), 況 ] 1.2公猴取樣 -電激棒取樣 一般分有penile stimulation 及 rectal probe stimulation 電激棒之規格 -精子處理 方法 1取樣後, 凝固精液放於37C 30分鍾 5% CO2 培育箱液化 2液態精液以Tyrode albumin lactate pyruate-HEPES (TALP-HEPES)稀釋1:5 3抽取小許檢視精子活力, 形態及數量 4稀釋至2.0 – 4.0 x 108精子/ml [另有日本研究用2.5 – 5.0 x 107精子/ml 濃度進行 授精] 5培育於30 – 32 , 2-3小時 [另有加入1mM Caffeine使精子活能化(capacitation) ] 1.3授精程序 有文獻提及, 日本獼猴人工授精實驗中, 授精於陰道內之猴不能授精,而只有授精於子官內方可成功. 於食蟹猴陰道及子官均可. 1當母猴証實排卵時, 每天進行0.2ml輸精, 一般由11-14天
辅助生殖技术概况 AIH：夫精人工授精 AID：供精人工授精 IUI: 宫腔内人工授精 IVF-ET: 体外受精与胚胎移植 ICSI: 单精子胞浆内注射 OI: 诱导排卵 COS: 控制性卵巢刺激 COH: 控制性超排卵 OHSS：卵巢过度刺激综合征 一、不育的定义：正常性生活12个月后未妊娠（WHO） 国内常用的名词：不孕——从未怀孕；不育——曾怀孕但无活婴；目前多采用“不育”一词分类：原发不育、继发不育 二、不孕夫妇检查流程，男方先查 男方：查精液——异常——男方治疗——若无法治疗——无精——AID,若少精且输卵管通畅——AIH——失败——IVF；若严重少弱精——ICSI 女方：正常排卵（基础体温、B超），异常——性激素测定；正常——进行输卵管检查输卵管通畅（通液、HSG、LAP），通畅——指导同房——失败——检查其他不孕因素（LAP+HYS）——失败——IVF 若输卵管不通——LAP+HYS——IVF 三、人工授精（AIH、AID） 1、适应症： AIH：不能正常性交；男女生殖道运行障碍、精液轻中度不正常。 （1）不能正常性交：解剖异常（严重尿道下裂、逆行射精、阴道狭窄） 精神因素（阳痿、早泄、阴道痉挛） （2）男女生殖道运行障碍（宫颈因素、双方免疫因素） AID：无生殖功能或切除睾丸；不良的遗传因素、严重的遗传疾病；夫妻间特殊血型不合、治疗无效；严重少弱精、输精管堵塞、不射精。 2、人工授精的部位： 阴道内；宫颈管内；宫腔内、输卵管内、子宫直肠窝内 3、人工授精精液的处理 目的：提高直线运动的精子数、去除不利的成份、促进精子获能、降低粘稠性 方法：上游法、梯度离心法 4、人工授精的条件 女方输卵管通畅、有成熟的卵泡发育（自然、OI、COH）、内膜8mm以上 精液处理后直线运动的精子 宫腔内授精：1千万以上 宫颈管内授精：2千万以上 5、人工授精的时机 B超监测到有18mm及以上的卵泡，HCG后24-36小时内 四、IVF-ET 1、适应症（卫生部卫科教发[2003]176号文件）：
citonin recep to r mRNA exp ressi on by calcitonin during hum an o steoclast-like cell differentia2 ti on.J C lin Invest1995;95:167. 31W alker D G Contro l of bone reso rp ti on by hem atopo ietic tissue.T he inducti on and reversal of congenital o steopetro sis in m ice th rough use of bone and sp lenic transp lants.J Exp M ed1995; 142:651. 41L ee M Y,Eyre DR,O sbo rne W R Iso lati on of a m urine o steoclast co lony-sti m ulating facto r. P roc N atla A cad Sci U SA1991;88:8500. 51N ilsson SK,L ieschke GJ,Garcia-W ijnen CC, W illiam s B,T zelep is D,Hodgson G,Grail D, D unn A R,Bertoncello I Granulocyte- m acrophage co lony-sti m ulating facto r is no t re2 sponsible fo r the co rrecti on of hem atopo ietic de2 ficiencies in the m aturing op op mouse.B lood 1995;86:66. 61O ursler M J O steoclast synthesis,secreti on and activati on of latent transfo r m ing grow th facto r beta.J Bone M iner R es1994;9:443. 71Grigo riadis A E,W ang Z Q,Cecch iniM G,Hofstet2 ter W,Felix R,F leisch HA,W agner EF c-Fo s:a key regulato r of o steoclast-m acrophage lineage deter m inati on and bone remodeling.Science 1994;266:443. 精子运动对体外受精率、妊娠率的影响 李丽莎 孙昭3 成都市妇产科医院成都生殖与不孕研究所 成都610015 3四川大学基础医学与法医学院组织学与胚胎学教研室 成都610041 在体外受精—胚胎移植技术(In V itro Fertilizati on-Em b ryo T ran sfer简称I V F-ET)中,过去单纯考虑或更多的考虑卵子质量,是因为得到卵子比较困难,超排卵花费较高;胚胎学方面也较多地强调卵子在胚胎发育中占有的作用,所以人们常常忽视精子质量特别是其运动能力对发育的影响,越来越多的事实说明,精子对I V F-ET的成功率同样起到至关重要的作用。而在20世纪90年代产生的计算机辅助分析精子(Com p u ter A ssisted Sper m A nalysis CA SA)技术则能比较准确地反映精子的运动特性。 1 精子的产生、成熟、获能与受精 精子由睾丸曲细精管的生精上皮产生。生精上皮由生精细胞和支持细胞(serto li cell)组成,生精细胞包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞。生精细胞越近管腔越趋成熟,最后经变成态为精子。此时的精子尚无受精能力,也无运动能力。在曲细精管内产生的精子被运送到附睾停留一段时间,达到生理成熟,此间由附睾上皮分泌一种糖蛋白叫前向运动蛋白,与精子表面的运动蛋白受体结合,使精子产生前向运动〔1〕,同时,附睾头部分泌酸性糖蛋白与精子结合并定位与顶体及尾部,与精子将来在受精时附着于透明带上有重要作用。受精早期包括精子获能、精卵识别(或粘着)、顶体反应。精卵质膜融合受糖类调节,输卵管特异糖蛋白(CO GP)对精子获能起直接作用,蛋白多糖和氨基葡聚糖均可诱发精子获能〔2〕。精子表面的甘露糖配体的受体是其受精能力的分子标记物〔3〕,精子表面的去能因子可抑制它的 83
哺乳动物体外受精的基本操作程序，主要环节包括以下几个方面: (一)卵母细胞的采集和成熟培养 1．卵母细胞的采集：卵母细胞的采集方法通常有三种。 (1)超数排卵：雌性动物用促卵泡素和促黄体素处理后，从输卵管中冲取成熟卵子可直接与获能精子受精。在大家畜中，由于操作程序复杂，成本较高，很少使用。这种方法的关键是掌握卵子进入输卵管和卵子在输卵管中维持受精能力的时间，一般要求在卵子具有旺盛受精力之前冲取。 (2)从活体卵巢中采集卵母细胞：这种方法是借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。 在家畜中，牛和马等大家畜常用超声波探测仪辅助取卵，其方法是用手从直肠把握卵巢，经阴道壁穿刺插入吸卵针，借助B型超声波图像引导，吸取大卵泡中的卵母细胞。按照目前的技术水平，一头健康母牛每周可获得5~10枚卵子。在家畜中，活体采集的卵母细胞一般要经成熟培养后才能与精子受精。这种方法对扩繁优良母畜具有重大意义，在有些国家已用于商业化生产。 (3)从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞：这种方法是从刚屠宰母畜体内摘出卵巢，经洗涤、保温（30℃~37℃)后，快速运到实验室，在无菌条件下用注射器或真空泵抽吸卵巢表面一定直径卵泡中的卵母细胞（牛卵泡直径要求3-10mm）也可对卵巢进行切片，收集卵母细胞。用此方法获得的卵母细胞多数处于生发泡期(GV期)，需要在体外培养成熟后才能与精子受精。从废弃卵巢中采集卵母细胞的关键是注意卵巢的保温和防止细菌污染。因此卵巢从畜体摘取后须放入含有生理盐水或磷酸缓冲液（PBS）的保温瓶中；吸卵前卵巢要用生理盐水或PBS多次洗涤；所用溶液都要添加抗生素。 这种方法的最大优点是材料来源丰富，成本低廉，但确定母畜的系谱困难。
精心整理 体外受精和早期胚胎培养 学习目标： 1、简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。 2、简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。
A. 2 A C 3 A B C D 4．下列关于屠宰场和“胚胎工厂”合建的说法正确的是() ①可保证屠宰场的肉是鲜肉，防止实验过长，肉变质②有利于生产大量的胚胎和胚胎工程所需要的原材料③不够卫生，不能合建④从屠宰场废弃的卵巢中可直接获取卵细胞 A．①②④B．②④C．①②D．③
5．下列关于培育试管婴儿的叙述，不正确的是() A．培育试管婴儿要进行体外受精过程B．试管婴儿的发育场所主要在试管内 C．试管婴儿的发育场所主要在母体内D．试管婴儿具有双亲的遗传特性 6．卵母细胞的采集之前，用_____________处理雌性个体，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，又叫______。收集精子的方法有______法、______法和 7、 8 拓展题 9() A 10．哺乳动物胚胎的早期培养所用培养液成分一般都比较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加___________、____________、__________、__________等营养成分，以及___________等物质。 答案：维生素激素氨基酸核苷酸血清 知识拓展：
何谓试管婴儿技术 “试管婴儿”是指分别将卵子与精子取出后，在体外(培养皿中)使其受精，并发育成胚胎后，再植回母体子宫内。因此，胚胎在体外培养的时间只有几天，最重要的目的是确定精卵能结合成功，并筛选好的胚胎植回母体，以增加怀孕成功的机会。 1 6 的患 管婴儿”的成功率一般为30～40%。 目前“试管婴儿”技术可帮助几乎所有类型的不孕症患者，但由于其费用较高，尚难以在国内普及，但我们认为如果存在需要进行“试管婴儿”技术助孕的特征，应及早来辅助生殖中心诊治，以提高其成功率。 胚胎冷冻保存
体外受精—胚胎移植及其衍生技术临床操作规程第一节不孕症的诊断 一对夫妇在没有采取避孕措施的情况下，有规律性生活1年而未能自然妊娠，即诊断为不孕症（WHO，1995）。首诊时详细询问并记录患者的不孕时间、既往性生活史、既往妊娠史、既往检查及结果、遗传病史、家族史，了解患者是否可能暴露于毒性物质,夫妇双方有无酗酒、吸烟、非处方镇静剂的使用、吸毒等，详细询问可能影响生育能力的疾病史，包括糖尿病、内分泌疾病、自身免疫性疾病，了解月经周期、经量、经期、是否痛经等，询问患者性生活的频率,了解有无性功能障碍，并根据情况建议不孕症夫妇接受以下检查,以明确不孕症病因。 1、女方因素 （1）月经第2~5天，抽血检查性激素水平：FSH、LH、E2、PRL、T。 （2）月经干净3~7天，输卵管碘油造影检查或腹腔镜检查。 （3）阴道B超自然周期排卵监测，至卵泡破裂。 （4）黄体中期（监测排卵后1周）抽血检查孕激素水平。 （5）必要时宫腔镜检查了解子宫腔内病变。 （6）抗精子抗体。 2、男方因素 （1）精液常规分析，结果异常需复查1~2次 （2）按Kruger严格形态标准进行精子形态分析 （3）连续3次精液离心检查均未发现精子者建议行以下检查： 经直肠精囊、前列腺彩超（TURS） 染色体核型分析 性激素：FSH LH T PRL E2 睾丸/附睾穿刺，了解睾丸/附睾中是否有成熟活动精子 （4）抗精子抗体
第二节体外受精与胚胎移植的适应症与禁忌症 一、体外受精与胚胎移植的适应症： 1、女方各种因素导致的配子运输障碍。 2、排卵障碍。 3、子宫内膜异位症。 4、男方少、弱精子症。 5、不明原因的不育。 6、免疫性不孕。 二、体外受精与胚胎移植禁忌症： （1）如有下列情况之一者，不得实施体外受精-胚胎移植及其衍生技术 ①男女任何一方患有严重的精神疾患、泌尿生殖系统急性感染、性传播疾病； ②患有《母婴保健法》规定的不宜生育的、目前无法进行胚胎植入前遗传学诊断的遗传性疾病； ③任何一方具有吸毒等严重不良嗜好； ④任何一方接触致畸量射线、毒物、药物并处于作用期； （2）女方子宫不具备妊娠功能或严重躯体疾病不能承受妊娠。 第三节体外受精与胚胎移植助孕前常规检查 1、全身体格检查：血压、脉搏、身高、体重（BMI）、皮肤粘膜、心脏、肺脏、乳房、肝脏、脾脏、肾脏、脊柱、四肢等。 2、女性生殖系统检查：有无生殖道畸形、分泌物异常，宫颈有无糜烂，子宫大小、质地、位置、活动度，附件有无包块及其大小。 3、实验室检查： 女方检查项目男方检查项目 血常规血型（ABO Rh）尿常规血型（ABO Rh） 白带常规细胞涂片或阴道镜精液常规 支原体衣原体淋球菌支原体衣原体淋球菌
高中生物体外受精和早期胚胎培养2019年3月20日 （考试总分：130 分考试时长： 120 分钟） 一、单选题（本题共计 20 小题，共计 100 分） 1、（5分）下列有关胚胎工程的叙述，正确的是 A．受精卵发育成早期胚胎所需营养主要来源于培养液 B．内细胞团的细胞具有发育的全能性 C．受体的遗传特性影响移植胚胎的遗传特性 D．为避免代孕母体对植入胚胎产生排斥反应，应注射免疫抑制剂 2、（5分）通过胚胎移植技术，可以实现绵羊的快速繁殖来推动畜牧业的发展。下列相关叙述正确的是A．受精和胚胎的早期培养都需要在体外进行 B．对供体和受体母羊都要进行相同激素处理 C．对冲卵获得的原肠胚检查合格后方可移植 D．胚胎分割移植实现同卵多胎的成功率很高 3、（5分）下列有关胚胎工程的叙述正确的是 A．试管动物的培育离不开核移植技术 B．受精卵发育到原肠胚阶段才能进行胚胎移植 C．通过胚胎分割技术可获得遗传特性相同的后代 D．利用某一胚胎的干细胞进行多组核移植，理论上产生子代的雌雄个体的比例为1:1 4、（5分）下列有关胚胎工程的叙述，正确的是 A．具有胚胎干细胞核的重组卵细胞不能直接移植到代孕母亲子宫中 B．全体外培养哺乳动物胚胎的困难在于细胞不能表达全能性 C．将转基因细胞嵌入滋养层中可获得转基因动物 D．卵裂期的胚胎只能用酶分割 5、（5分）下列关于基因工程的叙述中错误的是 A．基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建 B．将目的基因导入微生物细胞常用Ca2+处理法 C．基因工程技术可以定向改造生物的性状，培育新的生物品种 D．基因工程技术是唯一能打破远缘杂交不亲和障碍培育生物新品种的方法 6、（5分）下列关于基因工程的叙述中，正确的是 ①基因工程是人工进行基因重组的技术 ②基因治疗是基因工程技术的应用 ③基因工程打破了物种与物种之间的界限 ④DNA探针可用于病毒性肝炎的诊断、遗传性疾病的诊断、改造变异的基因、检测饮用水病毒含量A．②③④ B．①②③ C．①②④ D．①③④ 7、（5分）下列关于胚胎工程的叙述，错误的是A．体外受精是指获能的精子和成熟的卵子在相应溶液中受精 B．受精卵发育到原肠胚阶段才能进行胚胎移植 C．早期胚胎培养与动物细胞培养的培养液通常都需加入血清 D．试管婴儿技术主要包括体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植技术 8、（5分）下列有关哺乳动物胚胎发育和胚胎工程的叙述，正确的是 A．卵裂期的胚胎中细胞数目不断增加，胚胎的总体积逐渐变大 B．移植用的胚胎一般取发育到桑椹胚或囊胚时期的，不同生物移植的时期是相同的 C．胚胎干细胞的体积和细胞核都较小 D．胚胎的内细胞团细胞分裂、分化成各种组织和器官，滋养层细胞发育成胎膜和胎盘 9、（5分）下列关于胚胎工程的叙述，错误的是 A．精子获能方法有培养法和化学诱导法 B．防止多精入卵受精的两道屏障有透明带反应和顶体反应 C．精卵发生中包含有丝分裂 D．卵子只有到了减数第二次分裂中期才能受精 10、（5分）牛胚胎移植试验的主要流程如下，下列相关叙述正确的是 ①供体超数排卵→②配种→③胚胎收集→④________→⑤胚胎移植→⑥子代小牛 A．①过程需要注射有关激素，目的是获得更多的卵母细胞并完成减数分裂 B．③过程是以哺乳动物早期胚胎与子宫建立了组织上的联系为前提 C．④过程是“对胚胎进行质量检查”，可移植的胚胎应发育到囊胚或原肠胚 D．⑤过程成功率的高低主要取决于供、受体生理状况是否一致 11、（5分）草甘膦是一种广泛应用的除草剂,能不加选择地杀死各种杂草和农作物,将抗草甘膦基因转入油菜中,使油菜能抗草甘膦。在转基因油菜种植多年后,调查发现在公路边的野生油菜有80%含有抗草甘膦基因。下列叙述正确的是 A．80%的野生油菜体内出现抗草甘膦基因是人工选择的结果 B．含抗草甘膦基因的野生油菜是经自然选择进化出的新物种 C．野生油菜体内的抗草甘膦基因主要源自转基因油菜的花粉 D．大量使用单一除草剂可以减轻环境污染,提高农作物产量 12、（5分）在下图所示的过程中，哪一事件在2～9阶段没有发生 A．细胞体积减小 B．细胞内有机物总量增加 C．细胞有丝分裂 D．细胞分化 13、（5分）如图所示为培育农作物新品种的一种方式。下列说法正确的是
教学目标： 1、简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。 2、简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。 3、认同体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。 教学重点 1、体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。 2、哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。 教学难点 1、卵母细胞的采集和培养。 2、精子的采集和获能。 教学过程 一、从试管牛说起 阅读P69，思考讨论：体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。 我国奶牛的产量较低，有什么方法可以提高产量? “试管牛”工厂化生产的技术流程图
采集良种母牛的卵母细胞采集良种公牛精子 卵母细胞的体外培养精子体外获能 体外受精 良种牛体外受精胚胎 胚胎移植 受体牛 良种犊牛 成熟期牛 采集卵巢中的卵母细胞←屠宰加工厂→市场 试管动物技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育成早期胚胎后，再经移植产生后代的技术。 二、体外受精 1、卵母细胞的采集和培养 仔细阅读P70，思考讨论： (1)卵母细胞的采集和培养的主要方法是什么？ (2)其它方法如何？ (3)有什么方法可以获得更多的卵母细胞？ 1)主要方法是：用促性腺激素处理，使其排除更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与或能的精子在体外受精。 2)第二种方法：从刚屠宰的母畜的卵巢中采集卵母细胞；第三种方法是直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞，叫活体采卵。需借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等工具。采集的卵母细胞，都要在体外经经人工培养后成熟，才能与或能的精子受精。
3)促性腺激素、收集屠宰场母畜的卵巢。 2.精子的收集和获能 仔细阅读P71，思考讨论： (1)收集精子的方法有几种？各有什么具体要求？ (2)精子的获能方法通常包括哪几种？具体操作如何？ 1)收集的方法:假阴道法,手握法和电刺激等。 A：假阴道法，采用仿生学的方法，模仿发情雌性动物阴道环境设计的装置，
IVF-in vitro fertilization-体外受精联合胚胎移植技术，又称试管婴儿 IVF-in vitro fertilization-体外受精联合胚胎移植技术，又称试管婴儿，是指分别将卵子与精子取出后，置于试管内使其受精，再将胚胎移植回母体子宫内发育成胎儿。 学术术语来源--- 新鲜胚胎与冷冻胚胎移植在体外受精周期中疗效比较的Meta分析 文章亮点： 1 对于胚胎移植的方法，临床上一直存在争议，诸多研究以新鲜胚胎移植和冷冻胚胎移植的回顾性分析为主，缺乏两种方法对比的循证医学证据。 2 现有关于新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在IVF周期中疗效的Meta分析，纳入研究文献方法学质量不高，或此类分析较少。此次Meta分析研究，全部纳入国外随机对照实验，方法学质量采用改良Jadad评分标准，全为高质量研究文献。 3 文章特点在于采用Meta分析比较新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在IVF周期的临床疗效差异，发现新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在流产率方面无明显差异，但冷冻胚胎移植在持续妊娠率及临床妊娠率方面较优。 关键词： 器官移植|器官移植循证医学|新鲜胚胎移植|冷冻胚胎移植|体外受精-胚胎移植|临床妊娠率|持续妊娠率|流产率|Meta分析 主题词： 胚胎移植；受精，体外；妊娠率；循证医学 摘要 背景：胚胎移植的方式主要包括新鲜胚胎移植和冷冻胚胎移植，但两种方法各有优缺点，哪种方法更有利于患者的受孕目前仍存在较大争议。 目的：系统评价新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在体外受精-胚胎移植(IVF)周期中的临床疗效。 方法：计算机检索Medline、Cochrane Library、Ovid、EMBASE、中国生物医学、中国期刊全文和万方数据库，以及手工检索国内相关妇产科杂志。检索新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在IVF周期中的疗效对比的随机对照研究文献，评价指标包括临床妊娠率、持续妊娠率、流产率等。由2名评价者按照纳入与排除标准选择试验，提取资料和评价质量，并采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。 结果与结论：共纳入随机对照研究3篇，包括633例患者。Meta分析结果显示：冷冻胚胎组在持续妊娠率方面，优于于新鲜胚胎组[OR=0.60，95%CI(0.44，0.84)，P=0.003]；在临床妊娠率方面，冷冻胚胎组优于新鲜胚胎组[OR=0.60，95%CI(0.44，0.83)，P=0.002]；在流产率方面，2组比较差异无显著性意义[OR=1.23，95%CI(0.60，2.49)，P=0.57]。提示在IVF周期中，冷冻胚胎移植在持续妊娠率及临床妊娠率方面优于新鲜胚胎移植。但受纳入研究样本量及方法学质量限制，尚需开展更多大样本、高质量随机对照试验来增加证据的论证强度。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程