实验三 线粒体的超活染色与观察

实验三 线粒体的超活染色与观察
实验目的
一、观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、学习线粒体的超活染色技术。
实验原理
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所,其形态和数量随不同物种,不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）
实验用品
一、器材
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
二、试剂
1．Ringer 溶液 氯化钠 0.85g（变温动物用0.65g）；氯化钾 0.25g；氯化钙 0.03g；蒸馏水 100 ml
2. 1%、1/5000詹纳斯绿B溶液
称取50 mg詹纳斯绿B溶于5 ml Ringer 液，稍加热（30oC~40 oC）使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液1 ml 加入49ml Ringer 液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。
三、材料 1．动物肝细胞；2．人口腔上皮细胞；3．洋葱鳞茎内表皮细胞。
实验方法
一、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
1．取清洁载玻片放在37 oC恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
2．实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10~15 min（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染料，置显微镜下观察。
3．低倍镜下，选择平展的的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。可见扁平上皮的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒的结构，即是线粒体。
二、动物肝细胞线粒体的超活染色观察
1．处死动物，置于解剖盘中，剪开腹腔，取边缘较薄的肝组织一小块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。
2．在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成（一般需染20~30min）。
3．吸去染液，滴加Ringer溶液，用眼科剪将组织块着色部分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后，用吸管吸取分离出的细胞悬液，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片进行观察。
4．在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜或油镜下观察，可见具有1~2个核

的肝细胞细胞质中，有许多被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布情况。
（三）洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察
1．用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净的载玻片上，然后，撕取一小片洋葱鳞茎内表皮，置于染液中，染色10~15min。
2．用吸管吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮组织展平，盖上盖玻片进行观察。
3．在高倍镜下，可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至一侧贴细胞壁处。仔细观察细胞质中线粒体的形态与分布。
作业
绘口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布。