迁移实验( cell migration assay ) 实验介绍
细胞迁移与侵袭实验将Transwell 小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
实验步骤：
1 材料准备：
可拍照显微镜，Tran swell小室，孔径8 ^m,没包被胶的（Coster和Corni ng公司的也较常用）, Tran swell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Tran swell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，（1%胎牛血清）DMEM和1640培养基，DMEM完全培养
基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）
2 步骤和流程
2.1 基质胶铺板：
用BD公司的Matrigel 1 : 8 （根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Tran swell小室底部膜的上室面，置37C 30min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。
2.2 制备细胞悬液
①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12 - 24h，进一步去除血清的影响。但这一步并
不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1-2遍），用含BSA的无血清培养基
重悬。调整细胞密度至5X 105ml。
2.3 接种细胞
①取细胞悬液100卩加入Tran swell小室。
②24孔板下室一般加入600 □含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
③培养细胞：常规培养12 —48h （主要依癌细胞侵袭能力而定）。24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。
2.4结果统计
直接计数法，“贴壁”细胞计数，这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室
侧而不会掉到下室里面去，通过给细胞染色，可在镜下计数细胞。
取出Tran swell小室，弃去孔中培养液，用无钙的PBS洗2遍，甲醇固定30分钟，将小室适
当风干。
0.1%结晶紫染色20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。
400 倍显微镜下随即五个视野观察细胞，记数。
实验材料
(1)Tran swell chamber: 24-well, 8.0-卩m pore membra nes (Cor ning)
( 2)细胞培养相关试剂：无血清培养基，10％血清培养基，PBS，0.02％EDTA
( 3 )固定液：甲醇
( 4)染色液：Giemsa 染液
( 5 )封片剂：中性树胶
( 6 )其他：小镊子，棉棒，载玻片，盖玻片
操作步骤
(1)所有细胞培养试剂和Tran swell chamber放在37C温育；
(2)待测细胞培养至对数生长期，消化细胞，用
PBS和无血清培养基先后洗涤一次，用无血清培养基悬浮细胞，计数，调整浓度为2X 105 /ml;
(3)在下室(即24孔板底部)加入600 —800卩l含10%血清的培养基，上室加入100 —150^1
细胞悬液，继续在孵箱培养24 小时；
(4)用镊子小心取出chamber，吸干上室液体，移到预先加入约800 ^1甲醇的孔中，室温
固定30 分钟；
(5)取出chamber，吸干上室固定液，移到预先加入约800l Giemsa染液的孔中，室温染色
15—30 分钟；
(6)轻轻用清水冲洗浸泡数次，取出chamber，吸去上室液体，用湿棉棒小心擦去上室底部膜
表面上的细胞；
(7)用小镊子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至载玻片上用中性树胶封片；
( 8)显微镜下取9 个随机视野计数，统计结果。
注意事项
(1)根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber。常用的为8.0- ^m孔径(如AGS细胞)，
如果细胞体积较大可以考虑用10- ym孔径；
(2)根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-well chamber 接种细胞数
约为2~5X 1/well，迁移时间12~36小时；
(3)由于Corning公司的24-Transwell内含12个独立的chamber，为了避免操作污染，每次实验
可预先另准备一块24 孔普通培养板( Corning)；
( 4)如果细胞迁移能力较弱，下室液体可用3T3 细胞无血清培养24 小时获得的上清加50y g/ml FN( Fibronectin )，具体可查阅相关文献；
(5)细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平；
(6)固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜表面上未迁移的细
胞，以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；
( 7)Chamber 和膜上都无法标记，操作时应小心避免混淆实验组和对照组；
( 8)充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。
细胞侵袭实验 ( cell invasion assay)
实验材料
(1) Matrigel (BD 5mg/ml) , -20C 保存
( 2)其余材料同迁移实验
操作步骤
(1)Matrigel在4C过夜融化；
(2)用4C预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度
1mg/ml，冰上操作；
(3)在chamber上室底部中央垂直加入100□稀释后的Matrigel , 37C温育4 —5小时使其干成
胶状；
( 4)后续步骤同迁移实验( 1-8)。
注意事项
(1) Matrigel在过高或过低的温度均易凝固，因此操作所需枪头和离心管应提前在 4 C预冷; ( 2 )铺胶时保证液面水平，胶的厚度均匀一致，切勿产生气泡；
( 3)其他注意事项同迁移试验。
其他
Transwell 做肿瘤侵袭实验的具体步骤
(1) 基质胶准备：将冻存于—80 度冰箱的BD matrigel 4 度过夜( 24h) ，变成液态；
(2 )取300ul无血清培养基，加入60ul (或50ug/每室)Matrigel ，混匀，(4C操作，最好在冰浴上)，加入上室各100ul ( 3个室)；放入37C培养箱中，孵育4-5h (>5h);此间经常观察，当出现“白色层”时，说明已经变为固态。
注释：无血清培养基和基质胶按1: 5稀释，每孔加50ul，在37C培养箱中1-2h。
( 3)消化细胞，无血清培养基洗 3 次，计数，配成细胞悬液；
(4)用无血清培养基洗Matrigel 洗 1 次；每孔加入100ul 细胞悬液；
(5)下腔室中加入500ul含有20% FBS条件培养基；
(6)37 C培养箱中，孵育20-24h ；
(7)取出transwell用PBS洗2遍，5%戊二醛固定，4C ；
(8)加入结晶紫(0.1%)染色或Giemsa染色(5 —10min ),室温0.5h, PBS洗2遍，用棉球擦去上表面细胞，显微镜下观察。
迁移实验
transwell 在24 孔板中浸泡1 小时；消化细胞，无血清培养基洗2 次，计数，配成细胞悬液，每孔加入100ul细胞悬液；加药刺激；下腔室中加入条件培养基或其他刺激因子；37 C 培养箱中，孵育20-24h ;取出transwell用PBS洗2遍，5%戊二醛固定，4C ；PBS洗2 遍，加入结晶紫( 0.1%)染色，室温0.5h，PBS 洗 2 遍，用棉球擦去上表面细胞，显微镜下观察计数10 照相，记录。
侵袭实验
取300ul无血清培养基，加入30ul (或50ug/每室) Matrigel，混匀，(4 C 操作，最好在冰浴上)，加入上室各100ul ( 3个室)；放入37 C培养箱中，孵育4-5h ( >5h )；消化细胞，无血清培养基洗 3 次，计数，配成细胞悬液；用无血清培养基洗Matrigel 洗
1次；每孔加入100ul细胞悬液；下腔室中加入600ul无血清条件培养基；37 C培养箱中，孵育20-24h ；取出transwell用PBS洗2遍，5%戊二醛固定，4 C ；PBS洗2遍, 加入结晶紫（0.1% ）染色，室温0.5h ，PBS 洗 2 遍，用棉球擦去上表面细胞，显微镜下观察
transwell 小室是否可以重复利用，该怎样消毒
用棉签轻轻擦去胶和反面细胞，清水冲洗，超声清洗，低挡，30min，清水3X 5min蒸馏水
3x 5min室温凉干，用前紫外线小室正面3h,反面6h，微波，低火10min X2效果很好。
初中物理实验教学心得 体会 标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]
物理实验教学从实入手 实验是物理教学中的主要方法, 也是使学生提高学习兴趣、建立基本概念、培养科技 精神的一个重要手段。在教学的全过程中要贯穿实验这一条主线, 要想达到这一目标, 必 须把握好“演示实验”、“分组实验”和“探究实验”这三个关键环节。 1 演示实验教学要做到“精、真、显” 演示实验是指为配合教学内容而由教师操作示范的实验。它能化抽象为具体, 化枯 燥为生动, 把要研究的物理现象清楚地展示在学生面前, 引导学生观察思考, 帮助他们掌 握物理概念和规律。“精”是要精心准备, 要在选题、仪器、教案、教法等各个方面进行 充分准备。在选题上, 对于教材中提供的演示实验要作为首选, 但要结合实际。在仪器上, 要在课前认真检查实验所需仪器的性能, 必要时可以先做一遍实验,确保仪器的完好。在 备课上, 教师要对教材进行认真分析, 实验过程中可能出现的问题进行认真的思考, 对可 能出现的问题如何解决。在教法上, 教师要对授课内容有整体把握, 对何时进行实验, 在 实验中有什么现象, 根据这些现象引导学生应归纳出什么规律或总结出什么结论, 学生会 提出哪些问题要在课前考虑清楚。“真”教师在演示实验的过程中也必须保证过程的真 实性和结论的可靠性。因此一定要尽可能保证实验的成功。要保证实验成功, 除了在课前 充分准备外, 还要求教师有深的理论功底和较刻苦的钻研精神。一旦实验中出现了问题, 教师一忌忙乱, 二忌简单, 三忌虚假, 教师对出现的问题要迅速地分析原因, 找出错误的 所在, 并向学生做出正确的解释, 尔后重新开始实验直到得出正确的结论。“显”是显明 易见, 演示实验的目的就是要使全体学生有直观的印象, 并通过其建立正确的物理概念。 2 “学生分组实验”培养学生的独立思考和解决问题的能力 学生实验是指学生在教师的指导下自己动手, 通过亲自实践, 验证物理规律、加深 对教材理解的教学手段。学生亲自操作、观察、记录、分析和总结物理现象, 是对知识的
实验介绍 细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 实验步骤： 1材料准备： 可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 基质胶铺板： 用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。 制备细胞悬液 ①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。 ②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105/ml。 接种细胞 ①取细胞悬液100μl加入Transwell小室。 ②24孔板下室一般加入600μl含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。 ③培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。 结果统计 直接计数法，“贴壁”细胞计数，这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的
中学物理实验常用方法 一、观察法 物理是一门以观察、实验为基础的学科。人们的许多物理知识是通过观察和实验认真地记录总结数据和思索得来的。例如：著名的马德堡半球实验，通过观察几匹马拉不开半球，证明了大气压强的存在。 二、控制变量法 控制变量法是指一个物理量与多个物理量有关, 把多因素的问题变成多个单因素的问题, 分别加以研究, 例如：研究导体中的电流跟这段导体两端的电压时, 控制导体的电阻不变, 改变导体两端电压, 看导体中电流的变化, 得出欧姆定律I=U/R。
三、转换法 一些比较抽象的看不见、摸不着的物质的微观现象，要研究它们的运动等规律，使之转化为熟知的看得见的现象来认识它们。这种方法在科学上叫做“转换法”。如：分子的运动（通过观察花粉证明水分子的热运动） 例如：1.测不规则小石块的体积我们转换成测排开水的体积（阿基米德原理） 2.在测量滑动摩擦力时转换成测拉力的大小,（二力平衡原理） 3.大气压强的测量（无法直接测出大气压的值，转换成求被大气压压起的水银柱的压强）（托里拆利实验） 4.在研究物体吸热能力（比热容）时，我们通过温度计示数判断热量的多少。 5.通过铁钉数量来判断磁性的强弱（我们无法直接看到磁场）等， 四、累积法 积累法是指在测量微小量的时候,常常将微小的量, 积累成一个比较大的量。 比如在测量一张纸的厚度的时候，我们先测量100张纸的厚度在将结果除以100。 五、等效替代法 等效替代法是指抓住两个看似不同的物理过程, 寻求其共同效果。如用合力替代物体所受几个力时, 合力与原来几个力的作用效果相同；研究串、并联电路的总电阻时, 用总电阻大小代替分电阻大小；在平面镜成像的实验中,由于我们无法真正的测出物与像的大小, 所以利用了一个完全相同的另一根蜡烛来等效替代像的大小, 从而验证物与像的大小相同。 六、归纳法 是通过样本信息来推断总体信息的技术。要做出正确的归纳，就要从总体中选出的样本，这个样本必须足够大而且具有代表性。 在验证导体的电阻与什么因素有关的时候，经过多次的实验我们得出了导体的电阻与长度，材料，横截面积，温度有关，也是将实验的结论整理到一起后归纳总结得出的。即多次实验使实验具有普遍性
细胞迁移和侵袭实验 实验准备： 细胞，24孔板，transwell小室（8μm，24孔板专用），ECM Gel，10%FBS+培养基，无血清培养基，10 μ、200 μL、1000 μL移液器及配套枪头，1.5 mL EP 管，冰盒 实验设计： 实验分组一般分为阴性组（上下层均没有趋化因素），实验组（按照实验需要，上层或者下层加入趋化因素），对照组（趋化因素与实验组中的相反）。如果有特别需要，可以再加上阳性组（上下层都有趋化因素）。 实验操作（请细读注意事项）： 一、细胞侵袭实验 1.ECM Gel原液提前1 h放在4 ℃冰箱中解冻，实验前转移到冰盒中。 2.将1.5 mL EP、枪头盒、transwell放在24孔板里面后，置于冰上预冷。 3.根据自己的使用量，按照ECM Gel : 无血清培养基=1 : 7.5在冰上稀释成使 用液。 4.把枪头剪去一小段（约3 μm）后在冰上吸取40 μL/孔ECM Gel使用液轻轻 加入transwell上室中，加入时慢慢移动枪头，保证液体平铺在底部。 5.放在37 ℃孵箱15 min，让胶凝固。 6.消化、离心、计数细胞后，按照2.5x104 / mL用无血清培养基稀释细胞， 制成细胞悬液（如果细胞很多，这一步可以提前，在4、5之前做）。 7.按照每孔200 μL，将细胞悬液加入transwell上室，同时在transwell下室加 入10%FBS+培养基500 μL，放入37 ℃孵箱培养。 8.若干小时后取出，吸去transwell上室多余液体，用PBS清洗两次，用棉棒 在上室中轻轻转动，吸干水分并擦去膜内侧的细胞。 9.在上室中加入结晶紫染液，染色5 min，回收染液，用流水缓缓冲去染液， 再次用棉棒在上室中轻轻转动，吸干水分。 10.在正置显微镜上放置一块载玻片，将transwell小孔倒置放在上面，拍照。 11.在100倍视野下，对膜的上下左右及中间计数，做平均数。
细胞培养实验技术大全 第一章细胞培养的基本原理与技术 现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。 第一节体外培养的概念 一、基本概念体外培养（in vitro culture），就是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。 组织培养：是指从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。 细胞培养：是指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。 器官培养：是指从生物体内取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。 二、体内、外细胞的差异和分化 1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。 2、分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内不同。细胞是否表现分化,关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。 第二节细胞培养的一般过程 一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。 二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。 理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则
测量小灯泡的电功率 实验器材：电池盒，1号干电池3节，2.5V小灯泡1个，小灯座1个，滑动变阻器1个（20Ω或50Ω），开关1只，导线7根，电流表1只(0-0.6-3A)，电压表1只(0-3-15V)。 操作程序： 按照如图所示的电路图连接实验电路，开关断开，电流 表、电压表连接最大量程。 实验记录:
测量石块密度 实验器材：托盘天平1架、烧杯（内装适量水）、待测石块、量筒1个（100mL）、细线操作程序： 实验记录：
测量盐水的密度 实验器材：托盘天平1架（含砝码200g) 烧杯（内装适量盐水）(50mL) 量筒1个（100mL） 操作程序： 实验记录：
测量未知电阻的阻值 实验器材：电池盒，1号干电池3节，未知电阻1个，滑动变阻器1个(20Ω或50Ω)，开关1只，导线7根，电流表1只(0-0.6-3A)，电压表1只（0-3-15V）。 操作程序： 顺序操作内容 1 观察电流变、电压表并调零，按照如图所示的电路图连接实验电路，滑动变阻器最大阻值接入电路，电流表、电压表选择最大量程。 2 闭合开关试触马上断开，观察电流表、电压表示数，换用合适量程。闭合开关，移动滑动变阻器滑片，使电压表的示数为1.5V，读出此时电流表的示数，记入表格中。 3 移动滑片，使电压表示数为2V，再次读出电流表示数,并记入对应表格。 4 移动滑片，使电压表示数为2.5V，再次读出电流表示数,并记入对应表格。 5 断开开关，根据实验数据计算出平均电阻。 6 整理器材。 实验记录: 试验次数电压U（V）电流I(A)电阻R(Ω)电阻的平均值R平均（Ω） 1 1.5
初中物理实验教学方法探讨 摘要：物理是一门以观察和实验为基础的科学。实验教学既是物理知识教学的基础，也是物理课堂教学中实施素质教育的一种主要渠道和有效手段。然而，由于长期受应试教育思想的影响，在很大范围内物理实验教学在某种程度上仍然处于”讲起来重要，教起来次要，考起来不要”的状态。实验教学因长期未受到应有的重视而成为物理教学中的薄弱环节。采取”以讲代做”的实验教学方式大有人在。教学大纲上规定的演示实验和学生分组实验未得到真正的重视和落实，导致实验室和仪器设备使用效率十分低下，教育资源严重浪费。实践证明：只有通过训练有素的实验教学，才能使学生在获取物理知识的同时，潜移默化地形成良好的科学素养。如：严谨的科学态度，实事求是的科学作风LL 同样，只有加强实验教学，才能培养出具有较强动手能力的学生。而这种能力正是日后成为合格劳动者所必需的劳动技能素质的基础。 关键词：初中物理实验教学 如何来加大实验教学力度，改进实验教学、提高教学效果以推进物理素质教育，我认为可以从以下几点入手： 一、切实重视演示实验，提高课堂教学质量
物理演示实验具有形象真实、生动有趣的特点，能为学生在形成物理概念、得出物理规律前营造出活生生的物理情景，使学生感受倍深。心理学研究表明：人的动作记忆效率比语言文字记忆效率要高好几倍。“百闻不如一见，百看不如一做”说的就是这个道理。经验告诉我们：一个成绩优秀的物理尖子对物理现象和物理过程具有很强的“悟性”，这种“悟性”源于对日常生活丰富的感性认识。对物理学习有障碍的人，其最大的障碍不在于智力因素，而在于缺少对日常生活的用心观察，头脑中缺乏感性经验，而这些感性经验恰恰是物理思维的基础。因此，作为一名物理教师，首要任务就是：尽一切可能，在课堂上为学生展现出丰富多采的物理现象和活生生的物理情景。教师不仅要用好课程标准上规定的演示实验，甚至教材上的一段话、一幅插图、一道习题也可以将它搬上“讲台”，进行演示。演示的形式不能仅仅是“教师演，学生看”，还可以是“教师导，学生演”？即边学边实验。 例如：利用鸡蛋做实验。鸡蛋很容易找到，若引导学生利用鸡蛋做实验，既可说明物理道理，又可提高学生的学习兴趣。 1.做压强的实验 鸡蛋握在手中，使劲握也难以破碎，但手拿鸡蛋在碗边轻轻一敲即破。说明：鸡蛋紧握在手中时，受力面积大，
Transwell侵袭实验全面总结 第一节概念 这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。 1．Transwell trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable support s）。更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（T ranswell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。 但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有－μm，根据不同需要
可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。下图是一个Trans well装置的纵切面 将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养 液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验： （1）共培养体系： 小于孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择μm以下孔径。常用、μm。我们实验室用的是μm。将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
（一）干扰引物（shRNA）设计： 1、NCBI上下载基因序列 2、在sigema网站输入基因号设计一对21个碱基的干扰引物（上下游） 3、从起始密码（ATG）下游25bp开始； 4、GC含量介于40%~60% 5、干扰引物至少一个在SDS区，一个在3’UTR区 6、选择脱靶率低的 （二）、干扰载体构建 1、引物退火（引物加水看标签X 50,弹匀，瞬离） 退火体系： 上游：5ul 下游：5ul 10X M buffer 5ul H2O 35ul 水浴锅100℃2min，锅里隔夜 （三）、酶切plko.1载体 1、AgeI 酶切，反应体系： plko.1载体4ug AgeI 2ul 10X AgeI buffer 5ul H2O 39ul 37℃水浴2~3h 2、切胶回收AgeI 酶切产物，30ul 水洗脱 3、EcoRI酶切，反应体系： AgeI 酶切产物30ul EcoRI 2ul 10X H buffer 5ul H2O 13ul 37℃水浴2~3h 切胶回收，30ul 水洗脱，测浓度 （四）、连接 连接体系：T4连接： 退火引物2ul 退火引物5ul 酶切载体1ul 酶切载体1ul Solution I 5ul T4连接酶1ul H2O 2ul T4连接酶Buffer 1ul H2O 2ul 室温下连接4h。 （五）、转化 -80℃取感受态细胞于冰上融化，在1.5ml离心管加33ul感受态，将连接产物加入，冰上放置30min，42℃水浴60~90s，冰上放置2min，加入无氨苄培养基，37℃摇床1h，涂布在氨苄平板上，37℃，16h。 （六）、挑菌 用枪头挑取5个菌落（可送测序）扩大培养，加有氨苄的培养基，37℃过夜培养。 （七）、提质粒
中考物理实验操作及方 法归纳 Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】
中考物理实验操作及方法归纳 实验步骤、操作、结论 一、力学 ?基础性 天平测质量 【实验目的】用托盘天平测质量。 【实验器材】天平（托盘天平）。 【实验步骤】 1)把天平放在水平桌面上，取下两端的橡皮垫圈。 2)游码移到标尺最左端零刻度处（游码归零，游码的最左端与零刻度线对 齐）。 3)调节两端的平衡螺母（若左盘较高，平衡螺母向左拧；右盘同理），直至 指针指在刻度盘中央，天平水平平衡。 4)左物右码，直至天平重新水平平衡。（加减砝码或移动游码） 5)读数时，被测物体质量=砝码质量+游码示数（m物=m砝+m游） 【实验记录】此物体质量如图：62 g 弹簧测力计测力 【实验目的】用弹簧测力计测力 【实验器材】细线、弹簧测力计、钩码、木块 【实验步骤】 ●测量前： 1)完成弹簧测力计的调零。（沿测量方向水平调零） 2)记录该弹簧测力计的测量范围是 0~5 N，最小分度值是 N。
测量时：拉力方向沿着弹簧伸长方向。 【实验结论】如图所示，弹簧测力计的示数F= N。 验证阿基米德原理 【实验目的】定量探究浸在液体中的物体受到的浮力大小与物体排开液体的重力之间的关系。 【实验器材】弹簧测力计、金属块、量筒、水 【实验步骤】 1)把金属块挂在弹簧测力计下端，记下测力计的示数F1。 2)在量筒中倒入适量的水，记下液面示数V1。 3)把金属块浸没在水中，记下测力计的示数F2和此时液面的示数V2。 4)根据测力计的两次示数差计算出物体所受的浮力（F浮=F1-F2）。 5)计算出物体排开液体的体积（V2-V1），再通过G水=ρ（V2-V1）g计算出 物体排开液体的重力。 6)比较浸在液体中的物体受到浮力大小与物体排开液体重力之间的关系。 （物体所受浮力等于物体排开液体所受重力） 【实验结论】液体受到的浮力大小等于物体排开液体所受重力的大小测定物质的密度 （1）测定固体的密度： 【实验目的】测固体密度 【实验器材】天平、量筒、水、烧杯、细线、石块等。 【实验原理】ρ=m/v 【实验步骤】
初中物理实验教学心得 体会 -CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
物理实验教学从实入手 实验是物理教学中的主要方法, 也是使学生提高学习兴趣、建立基本概念、培养科技精神的一个重要手段。在教学的全过程中要贯穿实验这一条主线, 要想达到这一目标, 必须把握好“演示实验”、“分组实验”和“探究实验”这三个关键环节。 1 演示实验教学要做到“精、真、显” 演示实验是指为配合教学内容而由教师操作示范的实验。它能化抽象为具体, 化枯燥为生动, 把要研究的物理现象清楚地展示在学生面前, 引导学生观察思考, 帮助他们掌握物理概念和规律。“精”是要精心准备, 要在选题、仪器、教案、教法等各个方面进行充分准备。在选题上, 对于教材中提供的演示实验要作为首选, 但要结合实际。在仪器上, 要在课前认真检查实验所需仪器的性能, 必要时可以先做一遍实验,确保仪器的完好。在备课上, 教师要对教材进行认真分析, 实验过程中可能出现的问题进行认真的思考, 对可能出现的问题如何解决。在教法上, 教师要对授课内容有整体把握, 对何时进行实验, 在实验中有什么现象, 根据这些现象引导学生应归纳出什么规律或总结出什么结论, 学生会提出哪些问题要在课前考虑清楚。“真”教师在演示实验的过程中也必须保证过程的真实性和结论的可靠性。因此一定要尽可能保证实验的成功。要保证实验成功, 除了在课前充分准备外, 还要求教师有深的理论功底和较刻苦的钻研精神。一旦实验中出现了问题, 教师一忌忙乱, 二忌简单, 三忌虚假, 教师对出现的问题要迅速地分析原因, 找出错误的所在, 并向学生做出正确的
迁移实验（cell migration assay） 实验介绍 细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 实验步骤： 1材料准备： 可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM 完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 2.1基质胶铺板： 用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。 2.2制备细胞悬液 ①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。 ②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105/ml。 2.3接种细胞 ①取细胞悬液100μl加入Transwell小室。 ②24孔板下室一般加入600μl含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。 ③培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。 2.4结果统计 直接计数法，“贴壁”细胞计数，这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去，通过给细胞染色，可在镜下计数细胞。 取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用无钙的PBS洗2遍，甲醇固定30分钟，将小室适当风干。 0.1%结晶紫染色20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。 400倍显微镜下随即五个视野观察细胞，记数。 实验材料
分子克隆及细胞培养基本实验方法 1.载体构建实用操作技术 1.1菌种的保存—20%甘油菌 2体积菌液与1体积70%的甘油混合后，储存于-20℃或-70℃备用。（甘油菌中甘油的浓度为20-30%均可） 1.2甘油菌复苏、培养 方法一、挑取甘油菌一环，接种在含100ug/ml Amp的LB固体培养基上（活化菌种），37℃培养过夜（约16小时）；挑取一个菌落转接在含100ug/ml Amp 的LB液体培养基中，37℃振荡过夜（约12~16小时）。 方法二、直接吸取10~20ul甘油菌，接种在含100ug/ml Amp的LB液体培养基中，37℃振荡过夜（约12~16小时）。 1.3小规模制备质粒DNA（QIA miniprep kit ） 适于从1~5ml 菌液中制备20ug高拷贝质粒 ⑴收集菌液，离心1000rpm，１分，弃上清 ⑵以250ul P1重悬细菌（P1中已加RNase） ⑶加入250ul P2，颠倒4~6次轻混，约2~3分（轻混以免剪切基因组DNA，并免 长时间消化） ⑷加入350ul N3，迅速颠倒4~6次轻混；离心10分，13 000rpm ⑸上清入QIAprep柱，离心30~60秒，滤液弃之 ⑹加入0.5ml PB洗，离心30~60秒 ⑺加入0.75ml PE洗，离心30~60秒，弃滤液，再离心1分 ⑻换新管，加入50ul EB，静置1分（EB 37℃预热），离心1分。 1.4酶切反应 ⑴体系构成（反应体系尽可能小！） pGEM3ZF-huCTLA4-Ig（ul）pAdTrack-CMV（ul）
①dd.H2O 17 17 ②10×NEbuff 2 3 3 ③10×BSA 3 3 ④底物DNA 5 5 ⑤内切酶HindⅢ 1 1 XbaⅠ 1 1 Total : 30 ul 30ul ⑵37℃水浴1~2小时，必要时延长酶切时间至12小时 ⑶酶切2小时后，取5-10ul 电泳观察酶解是否完全 ⑷65℃灭活内切酶 ⑸-20℃保存备用 1.5回收目的片段（QIAquick Gel extraction Protocol） ⑴胶，尽可能去除多余的胶，称重； ⑵加入适量buff QG（300ul QG /100mg胶）；>2%的胶，应加大QG用量（600ul QG /100mg）； ⑶水浴50℃，10min，每2-3min混匀一次，使胶完全溶解！必要时延长水浴时间， 胶完全溶解后混合物颜色应为黄色，与buff QG 相似； ⑷当DNA片段在<500bp或>4kb时，应加入异戊醇100ul/100mg胶，以提高产物 量。此步不离心。DNA片段在500bp~4kb时，加入异戊醇并不能提高产量； ⑸结合：将混合物转入QIAquick柱，离心13000rpm，1min；（柱容量800ul/次）； ⑹洗：0.75ml buff PE，离心13000rpm，1min；（DNA用于盐敏感操作时，如平 端连接、直接测序，加入PE后静置2-5min）；弃离心液，再离心13000rpm， 1min，以去除剩余的乙醇； ⑺将QIAquick柱置于一清洁的1.5ml Ep管，加入30~50ul buff EB或H2O （滴 于QIAquick 膜上！），静置1min，离心15000rpm，1min； ⑻-20℃保存备用。 1.6连接反应
初中物理电学实验的基本操作 初中物理电学实验的基本操作 基础性 9.(1)用电流表测电流 【实验目的】用电流表测电流 【实验器材】电源、电键、小灯泡、电流表、若干导线等 【实验步骤】 1.将电源、电键、小灯泡、电流表串联起来，连接过程中电键处于断开状态。 2.电流从电流表的正接线柱流入，负接线柱流出。在未知电流大小时，电流表选择0~3A 量程。
程，然后记下电流的示数。 【实验结论】如图所示，电流表的示数为0.5 A。 (2)用电压表测电压 【实验目的】用电压表测电压 【实验器材】电源、电键、小灯泡、电压表、若干导线等 【实验步骤】 1.将电源、电键、小灯泡连接在电路中，连接过程中电键处于断开状态。 2.将电压表与小灯泡并联连接，在连接过程中，电压表的正接线柱靠近电源的正极，负接线柱靠近电源的负极，在未知电压大小时，电压表选择0~15V 量程。
程，然后记下电压的示数。 【实验结论】如图所示，电压表的示数为2.5 V。 10. 用滑动变阻器改变电路中的电流 【实验目的】练习使用滑动变阻器改变电路中的电流强度。 【实验器材】滑动变阻器、小灯泡、电流表、开关、电池组、导线若干 【实验原理】通过改变连入电路中电阻线的长度来改变电阻，从而改变电路中的电流强度。 测定性 11.用电流表、电压表测电阻(伏安法测电阻) 【实验目的】用电流表、电压表测电阻 【实验器材】电源、电键、电压表、电流表、待测电阻、滑动变
阻器、若干导线等。 【实验原理】R=U/I 【实验步骤】 1.如图所示连接电路，电键处于断开状态，滑动变阻器连入电路中的电阻处于最大值。 2.移动滑片到三个不同位置，记下相应的电流表示数和电压表示数。 3.根据公式计算三次的电阻，最后通过求平均值得到待测电阻的阻值。 滑动变阻器在实验中作用：多次测量，求平均值，减小误差。 12. 测定小灯泡电功率 【实验目的】测定小灯泡的电功率
关于初中物理实验教学方法初探 发表时间：2017-01-13T10:48:37.887Z 来源：《教育学文摘》2017年1月总第216期作者：孙晓菊[导读] 你将如何实验，请画出电路图。”这样，学生在一系列符合自己认识水平的有梯度的问题诱导下，很容易完成了实验。 山东省青岛市平度市店子镇昌里中学266753 初中物理实验教学是初中物理教学的重要组成部分。新课程“从生活走向物理，从物理走向社会”的理念，就一针见血地指出了物理实验和实践的重要性。但是由于初中学生的思维抽象能力还不高，因此对实验的设计、记录、分析一定会存在很多漏洞。教师应提前设计好教学实验方案，提高实验教学的有效性，使学生在动手动脑的前提下顺利完成实验，体验实验的乐趣。下面就教学实践谈一点体会： 一、创设课堂情境，激发学习兴趣 对于初中生来说，特别是独生子女、留守学生，由于受年龄的制约，受家庭、社会环境的影响，学习主动性不高，学习动机不明朗，学生的“注意”学习时间持续较短，主动的、有目的的学习习惯有待于养成。因而，学生的学习动力在很大程度上还来源于兴趣，兴趣决定着实验教学的有效性。因而，教师在设计实验教学时，应着力于课堂教学情境的创设，激发学生的学习兴趣，以有效地完成实验教学。 1.注重课堂情境的现实熟悉性。课堂情境的现实熟悉性是指教师所创设的课堂情境应是学生所熟悉的现实存在的情境。这样的情境，既符合新课程“从生活走向物理”的课程理念，又符合学生的认知规律。但是，教师创设的课堂情境不是对生活现象的原样照搬，而是对生活现象的抽象和加工。如研究《杠杆平衡条件实验》，在学生弄清了什么是杠杆后，我展示了小敏和小虎玩翘翘板的图片（小虎在空，小敏在地），并提出问题：杠杆这时平衡了么？如果小虎想将小敏翘上去，你能帮他想个办法么？这些方法都是通过改变杠杆的什么要素来改变杠杆的平衡的？你能猜想出影响杠杆平衡的因素么？玩跷跷板是我校学生的一大乐趣，这样，将现实抽象成图片，直观地显示出来，于抽象中有直观，学生再联系生活，就踊跃地回答了这一问题，从而顺利进入了实验。 2.注重课堂情境的可操作性和显象性。课堂教学的可操作性和显象性，是指教师设计的课堂情境操作起来简单，而所发生的现象明显可观。如在《探究大气压的存在》的实验时，我曾进行过两次情境设计。第一次，给每个学生发一个纸杯、一个纸板，让学生将纸杯灌满水，用纸板盖住，倒置后观察现象。很多同学的纸板掉了下来，水流了一地。情境创设基本失败，第二次试验，我给两个学生发一个皮碗，让他们使劲按在平滑的桌面上，再用力拉一拉，观察现象。这次同学们很容易地做了出来，并且现象很明显：使很大的劲才能将皮碗拉掉。接着，让学生将皮碗轻放在平滑桌面上，再挤压皮碗，会发现什么现象？（有气流声，皮碗里的空气被排出。）这样就很容易地体验了大气压的存在。上述两个情境，第一个失败的原因是可操作性较差；第二个成功的原因是器材少，便于操作，现象明显。 3.注重课堂情境的激励性。新课程背景下的课堂教学双边活动，教师所扮演的角色应该是：点燃学生兴趣的火把，启迪学生智慧的钥匙。在设计实验教学时，教师一定要遵循课堂教学激励性原则，设计激励性问题，让学生在主动的情绪下互动，以优化实验教学。如在探究《怎样使一个小灯泡亮起来》的实验时，我出示了如下激励题：“你能使实验台上的灯泡亮起来么？比一比，看谁又快又好。” 在学生试验后，让学生展示，有的同学无法使灯亮起来（短路），有的同学连掉了开关（长明）。这时教师就要及时激励；“虽然有的同学没有使灯亮起来，但他给我们探究出了电路的错误状态——短路，他为我们以后的学习铺平了道路，也是很不简单的。”接着提出：“你能将你的实验方法说给大家听听么？试试看。”这些话语，看似平常，但它激励着学生产生想试一试的欲望（这就成功了一半），抚平了学生受挫的心灵。 二、转换教学观念，树立服务意识 新课程的实验教学中，教师应该是教学活动的引导者和服务者。要完成这一角色的使命，教师应做到以下几点： 1.换位思考。教师在设计教学流程时，一定要重视学生的知识基础、能力水平，充分考虑以往学生容易出错的地方，从学生的认识水平出发，树立正确的学生观，设计课堂诱导题。如在进行《探究影响电阻大小的因素》实验时，我设计了如下诱导题：“导体有材料、粗细、长度、温度的区分么？”诱导学生从导体自身因素考虑，来进行猜想。“你猜想影响电阻的因素有几个？要探究其中的一个因素是怎样影响电阻的，你准备怎么办？要探究长度如何影响电阻，你准备选择什么器材？应选择什么样的导线？你将如何实验，请画出电路图。”这样，学生在一系列符合自己认识水平的有梯度的问题诱导下，很容易完成了实验。 2.全员参与，做好服务。教师要扮演服务角色，就必须允许学生犯错误。在学生实验时，根据不同实验小组所犯的错误，及时启发，及时纠正，及时反馈。这样，在学生全员参与的基础上，就能使实验教学得到优化。 3.交流互动，促进学生的试验评估能力。物理实验教学过程，是学生全员参与实验的过程，而不同学生的试验方法、实验所获是各不相同的。因而，在组织实验教学时，教师要注重小组内、班级内的合作交流引导，并让学生对自己的试验过程进行自评，在此基础上，让学生也评一评他人的实验设计。这样，学生在自评和他评中可以找出自己的不足，借鉴他人的经验，既完善了实验过程，又为以后的实验设计奠定了基础。在评价中，切忌教师大包大揽，要知道，教师的评价是教师的感受，和学生的感受是千差万别的。 三、注重知识应用，拓展实验天地 初中物理实验教学的目的是在实验中学习科学知识，培养科学探究实验能力，而最终目的是将科学知识运用于学生的学习和科学实践之中。因而教学中，教师要激励学生自制实验教具，完成实验，并应将教材中的综合实践活动付诸学生的行动，做好检查、评比、展示，切不可忽视综合实践活动的作用而放任自流。
Transwell侵袭实验总结 第一节概念 这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。 1.Transwell 关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。 更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。 但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。 下图是一个Transwell装置的纵切面
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。 我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验： （1）共培养体系： 小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0μm以下孔径。常用0.4、3.0μm。我们实验室用的是0.4μm。
实验记录 24/2/2014 一、细胞培养 一、培养基的配制 a. RPMI 1640 1×（with L-glutamine）类培养基组分：RPMI ，10%FBS（胎牛血清），双抗生素（penicillin，盘尼西林（青霉素），streptomycin，链霉素）； 配制方法：500 ml RPMI(一瓶) + 50 ml FBS + 5 ml 双抗生素 b. DMEM 1×类培养基组分：DEMI，10% FBS，双抗生素； 配制方法：500 ml DMEM(一瓶) + 50 ml FBS + 5 ml 双抗生素 二、培养细胞RNA的提取 1.从培养箱中拿出6孔板（每孔培养2 ml），吸出培养液； 2.PBS清洗；用大枪管吸取PBS加入每个培养孔中（枪头不要触碰培养板，防止交叉污染），用1 ml枪吹匀清洗（把培养板倾斜，吸溶液指最高处打出）。重复以上操作一次。 3. 每孔中加1 ml Trizol ，吸出放-80℃冰箱冷冻。 三、培养细胞DNA的提取 1.从培养箱中拿出6孔板（每孔培养2 ml），吸出培养液； 2.PBS清洗；用大枪管吸取PBS加入每个培养孔中（枪头不要触碰培养板，防止交叉污染），用1 ml枪吹匀清洗（把培养板倾斜，吸溶液至最高处打出）。重复以上操作一次。 3. 向培养板中加酶消化（时间较长，放进培养箱，看到有白色悬浮后取出），取出加DMEM类培养基； 4. 吸出至1.5 ml 离心管，3600 rpm，4 min离心； 5. 吸出上清（不要触及沉淀），加PBS 1ml清洗，3600 rpm，4 min离心； 四、常用细胞系（人） 名称细胞类型来源核型培养液 A431 上皮型表皮细胞肿瘤非整倍体（76，XX）DMEM+10%FBS HeLa 上皮样宫颈癌非整倍体（81-83，XX）MEM+NEAA 10%FBS Hep G2 上皮样肝细胞癌非整倍体（55，XY）MEM+NEAA 10%FBS MEM：极限必需培养液（Eagle）；NEAA：非必需氨基酸；DMEM：Dulbecco’s MEM改良培养液；RPMI：Roswell Park Memorial 研究所；BrdU：5-溴脱氧尿苷；APRI：腺苷磷酸核糖转移酶 实验室除snu系列与国产7721用1640培养基，其它用DMEM培养基。 五、原代培养----肝细胞 1.切除乳鼠肝脏组织放进小烧杯中，用PBS或培养液漂洗2-3次，去除血污； 2.加少量培养液，用剪子把组织剪碎，1 平方mm左右，再用吸管吹打； 3.加含10%小牛血清的1640培养液，制成均匀的细胞悬液，移入培养瓶，将组织块放在培养瓶底部，采用薄层营养液培养法，盖上瓶盖。 4.换液，只将旧的培养液吸弃，换上新的培养基。 六、传代培养 1.显微镜观察是否需要传代 细胞生长良好：上清液清亮，无悬浮物，折光性好，均质而透明，胞膜完整，胞内颗粒少，无空泡和脂滴。细胞生长不良：悬浮物多，发差增大，胞膜不完整，胞质中颗粒多，出现空泡和脂滴。
初中物理实验操作步 骤
初中物理实验操作练习题 步骤 A1.探究平面镜成虚像时物距和像距的关系1.画记录表格 2.检查器材是否够用。 3.把方格纸平铺在桌面上，用支架把玻璃板立放在方格纸上，使玻璃板的下缘与方格纸上某一条水平线对齐。 4.把一“小人”摆放在玻璃板前，使其下缘与方格纸上某一条水平线对齐，记录下物距；拿另一“小人”在玻璃板后来回移动，直到它与前面“小人”的像重合，观察并记录像距。 5.再重复步骤4一次。 6.写出实验结论。（实验结论：平面镜成像时像距和物距相等。） A2. 探究凸透镜成缩小实像的规律1.画记录表格 2.检查器材是否够用。 3.在光具座上自左向右依次放置蜡烛、透 镜和光屏，并点燃蜡烛，使烛焰、透镜和 光屏的中心大致在同一高度。 4.把点燃的蜡烛放在离透镜的距离大于2 倍焦距的地方，记录物距；沿光具座移动 光屏，直到光屏上出现清晰的倒立缩小的 实像，像的性质记录在表格中。 5.把蜡烛移向透镜，使它们的距离等于2 倍焦距，记录物距；沿光具座移动光屏， 直到光屏上出现清晰的倒立、等大的实 像，把像的性质记录在表格中。 6.写出实验结论。（实验结论：当蜡烛到 凸透镜的距离大于2倍焦距时，成倒立、 缩小的实像。） A3.用天平和量筒测量小石块的密度 1.画记录表格 2.检查器材是否够用，观察天平标尺分度 值，量筒量程和分度值。 3.双手托住底座把天平移到面前，用镊子 把游码拨到标尺左端的零刻度处（拨不动 时也可以用手），检查天平是否平衡（标 志是天平静止时指针对准分度盘的中 线）。 4.把小石块（用细线已系好，称时带线） 放入天平的左盘中，用镊子从砝码盒中夹 取砝码，按照从大到小的顺序向右盘中添 加砝码，并移动游码，使天平平衡，观察 并记录小石块的质量。先把砝码放回砝码 盒中，把游码拨到零刻度处，把小石块取 下放到桌面上，把游码拨离零刻度，双手 托住底座把天平移放到原来的位置。 5.在量筒中加入适量的水，把量筒放到桌 面上适当的位置，把刻度面向自己，观察 量筒中水的体积（视线应与水面的最低处 相平），若水面没有对准刻度线，可用滴 管向量筒中补充，直到水面对准某一刻度 线，观察并记录量筒中水的体积。 6.把小石慢慢浸入量筒中的水中，观察并 记录量筒中水面到达的刻度。 7.根据测得数据计算出小石块的密度，并 记录在表格中。 8.整理器材。把小石块从量筒中取出并用 抹布擦干放回原处，把量筒中的水倒到废 液杯中并放回原处。 A4. 用天平和量筒测量盐水的密度 1. 画记录表格 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2