实验室常用试剂、缓冲液的配制
1 M Tris-HCl, ,
组份浓度 1 M Tris-HCl
配制量 1 L
配制方法 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
1.5 M Tris-HCl
组份浓度 1.5 M Tris-HCl
配制量 1 L
配制方法 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化
差异很大，温
度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
10×TE Buffer, ,
组份浓度100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA
配制量 1 L
配制方法 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3 M 醋酸钠
组份浓度
配制量
配制方法
PBS Buffer
组份浓度137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4
配制量 1 L
配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和
0.5 mM MgCl2。
10 M 醋酸铵
组份浓度10 M 醋酸铵
配制量100 ml
配制方法 1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 使用m m滤膜过滤除菌。
4. 密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
Tris-HCl平衡苯酚
配制方法
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作
均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到以上，苯酚平衡操作方法如下：
①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下
放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完
全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1 M Tris-HCl（，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层
后，除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1 M Tris-HCl（，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分
层后，除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
10% (W/V) SDS
2 N NaOH
组份浓度 2 N NaOH
配制量100 ml
配制方法
1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。
4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
N HCl
组份浓度N HCl
配制量100 ml
配制方法 1. 在ml的去离子水中加入ml的浓盐酸（N），均匀混合。
2. 室温保存。
5 M NaCl
组份浓度 5 M NaCl
配制量 1 L
配制方法 1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
20% (W/V) Glucose
组份浓度20% (W/V) Glucose
配制量100 ml
配制方法
1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
Solution I(质粒提取用)
组份浓度25 mM Tris-HCl（）, 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
配制量 1 L
配制方法 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml）。Solution II (质粒提取用)
组份浓度
配制量
配制方法
Solution III (质粒提取用)
组份浓度 3 M KOAc, 5 M CH3COOH
配制量500 ml
配制方法 1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
0.5 M EDTA
组份浓度0.5 M EDTA
配制量 1 L
配制方法 1. 称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值至（约20 g NaOH)。
注意：pH值至时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
1 M DTT
组份浓度 1 M DTT
配制量20 ml
配制方法 1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（），溶解后使用0.22 mm滤膜过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
10 mM ATP
组份浓度10 mM ATP
配制量20 ml
配制方法 1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（），搅拌溶解。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
组份浓度10 mM ATP
配制量20 ml
配制方法 1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（），搅拌溶解。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
30% (W/V) Acrylamide
组份浓度30%（W/V）Acrylamide
配制量 1 L
配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L，用mm滤膜滤去杂质。
4. 于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未
聚合成份。
40% (W/V) Acrylamide
组份浓度40%（W/V）Acrylamide
配制量 1 L
配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L，用0.45 m m滤膜滤去杂质。
4. 于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。10% (W/V) 过硫酸铵
组份浓度
配制量
配制方法
5×Tris-Glycine Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液)
组份浓度0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, %（W/V）SDS
配制量 1 L
配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。
5×SDS-PAGE Loading Buffer
组份浓度
配制量 5 ml
配制方法 1. 量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。
2. 加去离子水溶解后定容至5 ml。
3. 小份（500 m l/份）分装后，于室温保存。
4. 使用前将25 m l的2-ME加到每小份中。
5. 加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。
考马斯亮蓝R-250染液
组份浓度%（W/V）考马斯亮蓝R-250, 25%（V/V）异丙醇, 10%（V/V）冰醋酸
配制量 1 L
配制方法 1. 称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。
2. 量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
3. 加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。
4. 加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。
5. 用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。
考马斯亮蓝染色脱色液
组份浓度 10%（V/V）醋酸, 5%（V/V）乙醇
配制量 1 L
配制方法 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 充分混合后使用。
凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用）
组份浓度 50%（V/V）甲醇, 10%（V/V）醋酸
配制量 1 L
配制方法 1.量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2.均匀混合后室温保存。
凝胶处理液（SDS-PAGE银氨染色用）
组份浓度
配制量
配制方法
凝胶染色液（SDS-PAGE银氨染色用）
组份浓度 %（W/V）AgNO3, 1%（V/V）浓NH3·H2O, %（W/V）NaOH
配制量 100 ml
配制方法 1. 量取下列试剂，加入100～200 ml的试剂瓶中。
2. 均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液会呈混浊状，此时应
补加浓氨水，直至透明。
3. 本染色液应现用现配，不宜保存。
显影液（SDS-PAGE银氨染色用）
组份浓度 %（W/V）柠檬酸, %（V/V）甲醛
配制量 1 L
配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L试剂瓶中。
2. 加入1 L去离子水后，摇动混合溶解。
3. 室温保存。
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
50×TAE Buffer
组份浓度 2 M Tris-醋酸, 100 mM EDTA
配制量 1 L
配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加入 ml的醋酸，充分搅拌。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。
10×TBE Buffer
组份浓度
配制量
配制方法
10×MOPS Buffer
组份浓度200 mM MOPS, 20 mM NaOAc, 10 mM EDTA
配制量 1 L
配制方法
1. 称量41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2. 加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3. 使用2 N NaOH调节pH值至。
4. 再向溶液中加入下列试剂。
5. 用DEPC处理水将溶液定容至1 L。
6. 用 um滤膜过滤除去杂质。
7. 室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭（10mg/ml）
组份浓度10 mg/ml 溴乙锭
配制量100 ml
配制方法
1. 称量1 g 溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2. 加入去离子水100 ml，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。
3. 将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4. 溴乙锭的工作浓度为m g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶
1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是×TBE或1×TAE)。
2. 根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3. 加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4. 在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中,当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥形瓶，使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。
5. 使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液（终浓度 mg/ml)，并充分混匀。注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。
6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3 ~ 5 mm之间。
7. 在室温下使胶凝固（大约30分钟 ~ 1小时)，然后放置于电泳槽中进行电泳。
注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存2～5天。
琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围
6×Loading Buffer (DNA电泳用)
组份浓度
配制量
配制方法
10×Loading Buffer (RNA电泳用)
组份浓度
配制量 10ml
配制方法 1. 称量下列试剂，置于10 ml离心管中。
2. 向离心管中加入约4 ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。
3. 加入5 ml的甘油（Glycerol）后，充分混匀。
4. 用DEPC处理水定容至10 ml后，室温保存。
核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法20×SSC
组份浓度 3.0 M NaCl, 0.3 M 柠檬酸钠
配制量 1 L
配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加14 N HCl，调节pH值至后，加去离子水将溶液定容至1 L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
20×SSPE Buffer
组份浓度 3.0 M NaCl, 0.2 M NaH2PO4, 0.02 M EDTA
配制量 1 L
配制方法
1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加NaOH调节pH值至（约 ml的10 N NaOH)。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
50×Denhardt's溶液
组份浓度
配制量 500ml
配制方法
1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
2. 加去离子水约400 ml，充分搅拌溶解
3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。
4. 用0.45 m m滤膜过滤后，分装成每份25 ml。
5. -20℃保存。
0.5M磷酸盐Buffer
组份浓度0.5 M Na2HPO4
配制量 1 L
配制方法
1. 称量134 g Na2HPO4·7H2O置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水充分搅拌溶解。
3. 加入85%的H3PO4（浓磷酸）调节溶液pH值至。
4. 加去离子水定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
组份浓度 10 mg/ml Salmon DNA
配制量约100 ml
配制方法
1. 称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。
2. 用磁力搅拌器室温搅拌2～4小时，溶解后加入4 ml的5 M NaCl，使其终浓度为0.1 M。
3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。
4. 回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以切断DNA。
5. 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。
6. 离心回收DNA后，溶解于100 ml的去离子水中，测定溶液的OD260值。
7. 计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。
8. 煮沸10分钟后，分装成小份（1 ml/份）。-20℃保存。
9. 使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却。
组份浓度
配制量
配制方法
组份浓度
配制量约100 ml
配制方法 1.称量下列试剂，置于200 ml烧杯中。
组份浓度
配制量100 ml
配制方法 1.称量下列试剂，置于200 ml烧杯中。
2. 充分混匀后，使用 um滤膜滤去杂质后使用。
组份浓度 39 mM Glycine, 48 mM Tris, % (W/V) SDS, 20% (V/V) 甲醇配制量 1 L
配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至800 ml后，加入200 ml的甲醇。
4. 室温保存。
组份浓度 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, %（V/V）Tween 20
配制量 1 L
配制方法
1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加入 ml Tween 20后充分混匀。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，4℃保存。
组份浓度 5%（W/V）脱脂奶粉/TBST Buffer
配制量 100 ml
配制方法
1. 称量5 g脱脂奶粉加入到100 ml的TBST Buffer中，充分搅拌溶解。
1.4℃保存待用（本封闭液应该现配现用）。
实验室常用培养基的配制方法
Ampicillin (100 mg/ml)
组份浓度100 mg/ml Ampicillin
配制量50 ml
配制方法
1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。
2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3. 用0.22 m m过滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。
IPTG (24 mg/ml)
组份浓度24 mg/ml IPTG
配制量50 ml
配制方法
1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。
2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3. 用0.22 m m过滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。
X-Gal (20 mg/ml)
组份浓度
配制量
配制方法
-20℃避光保存。
组份浓度
配制量
配制方法
组份浓度
配制量 1L
配制方法
1. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5 N NaOH（约ml)，调节pH值至。
4. 加去离子水将培养基定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。
6. 加入1 ml Ampicillin（100 mg/ml）后均匀混合。
7. 4℃保存。
组份浓度
配制量 1L
配制方法
1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4）100 ml。
溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。
2. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
3. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1 L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6. 4℃保存。
组份浓度
配制量 1L
配制方法
组份浓度
配制量 1L
配制方法
1. 配制250 mM KCl溶液。
在90 ml的去离子水中溶解1.86 g KCl后，定容至100 ml。
2. 配制2 M MgCl2溶液。
在90 ml去离子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，高温高压灭菌。
3. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
4. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
5. 量取10 ml 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。
6. 滴加5 N NaOH溶液（约 ml)，调节pH值至。
7. 加入去离子水将培养基定容至1 L。
8. 高温高压灭菌后，4℃保存。
9. 使用前加入5 ml灭菌的2 M MgCl2溶液。
组份浓度
配制量 100ml
配制方法
1. 配制1 M葡萄糖溶液。
将18g葡萄糖溶于90 ml去离子水中，充分溶解后定容至100ml，用0.22 mm滤膜过滤除菌。
2. 向100 ml SOB培养基中加入除菌的1 M葡萄糖溶液2 ml，均匀混合。
3. 4℃保存。
组份浓度
配制量
配制方法
组份浓度
配制量
配制方法
组份浓度
配制量 1 L
配制方法 1. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5 N NaOH（约 ml)，调节pH值至。
4. 加去离子水将培养基定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
组份浓度
配制方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。
组份浓度
配制方法 NZM培养基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。
1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。
2. 高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温
度很高，小心烫伤)。
3. 待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素等），摇动容器充分混匀。
组份浓度
配制量 1 L
配制方法 1. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5 N NaOH（约 ml)，调节pH值至。
4. 加去离子水将培养基定容至1 L后，加入15 g Agar。
5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6. 加入1 ml Ampicillin（100 mg/ml)、1 ml IPTG（24 mg/ml)、2 ml X-Gal（20 mg/ml）后均
匀混合。
8. 4℃避光保存。
组份浓度
配制量 1 L
配制方法
1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4）100 ml。
溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。
2. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
3. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1 L后，加入15 g Agar。
5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6. 加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1 ml Ampicillin（100 mg/ml)、1 ml IPTG（24 mg/ml)、
2 ml X-Gal（20 mg/ml）后均匀混合。
8. 4℃避光保存。
实验室试剂的分类使用和 存放 The following text is amended on 12 November 2020.
常用化学试剂的分类、存放和使用 （一）化学试剂的分类 （二）化学试剂的等级标准，化学试剂的取用 （三）部分特殊试剂的存放和使用 化学试剂又叫化学药品，简称试剂。它是工农业生产、文教卫生、科学研究以及国防建设等多方面进行化验分析的重要药剂。化学试剂是指具有一定纯度标准的各种单质和化合物（也可以是混合物)。要进行任何实验都离不了试剂，试剂不仅有各种状态，而且不同的试剂其性能差异很大。有的常温非常安定、有的通常就很活泼，有的受高温也不变质、有的却易燃易爆：有的香气浓烈，有的则剧毒……。只有对化学试剂的有关知识深入了解，才能安全、顺利进行各项实验。既可保证达到预期实验目的，又可消除对环境的污染。因此，首先要知道试剂的分类情况。然后掌握各类试剂的存放和使用。 一、化学试剂的分类 试剂分类的方法较多。如按状态可分为固体试剂、液体试剂。按用途可分为通用试剂、专用试剂。按类别可分为无机试剂、有机试剂。按性能可分为危险试剂、非危险试剂等。 从试剂的贮存和使用角度常按类别和性能2种方法对试剂进行分类。 （一）无机试剂和有机试剂 这种分类方法与化学的物质分类一致，既便于识别、记忆，又便于贮存、取用。 无机试剂按单质、氧化物、碱、酸、盐分出大类后，再考虑性质进行分类。 有机试剂则按烃类、烃的衍生物、糖类蛋白质、高分子化合物、指示剂等进行分类。 （二）危险试剂和非危险试剂 这种分类既注意到实用性，更考虑到试剂的特征性质。因此，既便于安全存放，也便于实验工作者在使用时遵守安全操作规则。 1．危险试剂的分类 根据危险试剂的性质和贮存要求又分为： （1）易燃试剂
031*-2./4,+ 5 8679giaifi [`eg]\_debe^h \ZgZbe^ edb`d]:mwwtYOOyyyNwioiuiNjsqNjr .1/{30,z +|2}-4*~ Q c gunvM_\p Jt_WNTL WNVL XNPK : I JRNS7GDO :H :8b~:;:8:M JRNS QK :H 4^R U ;8t 3L A99 POg /} T8Yclw\1yU <8[?`~t 3-C9ix ;AD gQG O U =8u 1E j 2P :HU >8m >m B,{qY 7>]dU SF Z I61E |0P7>q N ijQG O Y H 实验室常用试剂、缓冲液的配制 1 MTris-HCI(pH7.4,7.6,8.0) 组份浓度1 MTris-HCI 配制量1 L 配制方法1.称量121.1 gTris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 咼温咼压火菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 1.5 MTris-HCl(pH8.8) 组份浓度1.5 MTris-HCl 配制量1 L 配制方法1.称量181.7 gTris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压火菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化 差异很大，温 度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 10 X TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0) 组份浓度100 mMTris-HCl,10 mMEDTA 配制量1 L 配制方法1.量取下列溶液，置于 1 L烧杯中。 2. 向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合 3. 将溶液定容至1 L后，高温高压火菌。 4. 室温保存。 3 M醋酸钠(pH5.2) 组份浓度配制量配制方法PBSBuffer 组份浓度137 mMNaCl,2.73 M琴磁柚 IQO ml 1. N.1OAC - 3H.OH于100-200 m：疑杯中.加人對40讪的去两子水披扌半渚孵 2、加入冰酯敌讷帑pH值至4 3加去离子庆粕増液證容至20ml. mMKCl,10 mMNa2HPO4,2 mMKH2PO4 配制量1 L 配制方法1.称量下列试剂，置于 1 L烧杯中。 2. 向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。 实验室常用溶液及试剂配制 一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂配制 表三混合酸碱指示剂配制 表四容量分析基准物质的干燥 表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液 5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制 二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4 1、硝酸银（C AgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（C I2=0.1mol/L）标准溶液的配制 3、硫代硫酸钠（C Na2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（C HClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（C HCl=0.1mol/L）标准溶液的配制 6、乙二胺四乙酸二钠（C EDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（C K2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（C NaOH=1mol/L）标准溶液的配制 三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6 1、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷 9、硫酸镁（MgSO4） 四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8 1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱 分子生物学实验室常用试剂配方：医药观察之我见 2. 常用试剂配方（Prescriptions of Ordinary Reagents）（高媛）. (217) (1) PBS (217) (2) 胰酶Trypin (217) (3) Tris-NH4Cl (217) (4) Running buffer (218) (5) Washing buffer (218) (6) 湿转液 (218) (7) LB培养基 (218) (8) LB培养板 (218) PBS:PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。 配置方法： NaCl : 320g 优级纯 Na2HPO4. 12H2O 61.44g KCl 8g KH2PO4 8g 三蒸水4L 烧杯溶解后用HCl调PH为7.2-7.4，细胞用需要高温灭菌，放于超净台冷却，贴上封口膜及标签。 胰酶：Trypsin 一种胰蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。细胞消化胰酶常用工作浓度为0.25%，PH为7.2-7.4，储存液放在-20冻存，使用液放在4度。 Tris-NH4Cl :红细胞裂解液，是一种从人，鼠及其他哺乳动物等体内烦人组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，应用低渗的原理，改变红细胞渗透压，使得红细胞胀大破裂。 配置方法： 2L 体系： NH4Cl : 14.94g 溶于1800mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤 实验室试剂管理办法 1目的 1.1使操作员能够妥善保存化学药品、化学试剂，防止其变质、防止意外事故的发生。 1.2使操作员能够妥善处理废料，防止其污染环境、防止意外事故的发生。 2范围 2.1适用于化验室化验员日常药品的管理。 3职责 3.1化验室 4内容 4.1 化学药品、试剂的储存 4.1.1化学药品储存室应符合有关安全规定，有防雷、防火、防爆、调温等安全措施。室内应干燥、 通风良好、温度一般不超过３０℃。 4.1.2化学药品建立严格的帐目并记录于《化学试剂点检表》、《化学药品使用记录表》。 4.1.3室内备有消防器材。 4.1.4所有的化学试剂分类存放，无机试剂按酸、碱、盐、氧化物、单质等分类；盐类按阳离子分 类，钾盐、钠盐、铵盐、钙盐、镁盐等；有机试剂按官能团排列，烃、醇、酸、酯等；指示 剂按用途分类，酸碱指示剂、氧化还原指示剂、配位滴定的金属指示剂；专用有机指示剂按 测定对象分类。 4.1.5易燃易暴品应存放于阴凉偏低、不易碰撞的地方，有良好的通风效果，移动时轻拿轻放；配 备相应的灭火设备。 4.1.6低沸点、易挥发有机溶剂存放于阴凉、通风处，远离热源，不得有明火。并不要与固体试剂 同置一个柜中。 4.1.7见光易分解的应保存在棕色瓶中，或用黑色袋子裹严包装物，避光保存。 4.1.8 易燃易爆品、有毒害药品，应锁入药品柜内，防止人员带出制成自己或他人身体伤害和财 产损失，药品柜钥匙由部门主管保管一把，带班主管保管一把，其余钥匙全部交还公司，如要使用以上药品，需带班主管或部门主管批准后，由带班主管或代理人亲自开锁按其需要数量发料，并记录于<化学药品使用记录表》。易燃易爆品储存于①药品柜，有毒害药品储存于②药品柜。 4.2 化学试剂溶液的管理 4.2.1化学试剂溶液要装在细口瓶中，见光易分解的应装在棕色瓶中。所有化学试剂溶液在存放过 程中都应避免受热和强光照射。 4.2.2所有试剂、溶液的盛装容器上都必须贴上标签，标签书写工整、完整和清晰；试剂最好是原 标签，配制的溶液包装上的标签应写明名称、单位浓度、配制日期；长期使用的试剂、溶液上的标签，贴层透明胶保护，以防腐蚀、磨损。并填写《标液配制记录表》。 4.2.3影响试液质量的因素。试液的质量除主要受试剂质量的影响以外还会受其他多种因素的影 响。 4.2.3.1试液的稳定性。稳定性较好的试剂配制成溶液后，其稳定性可能变差。因而试液都应标 明配制日期，并根据需要定期检查记录于《实验室试剂点检表》，如发现试液变色、沉淀等变质迹象，即应弃去重配。不稳定试液应分多次少量配制，并分特别情况来采取特殊贮存方法，如避光等。 4.2.3.2试液的贮存期。一般浓溶液在贮存期内变化不大，而稀溶液则随贮存时间的延长，其浓 度多会发生变化。溶液的浓度愈低，有效使用期限愈短。化学试剂溶液只能在其有效期内使用，GB 601 规定一般滴定分析用标准溶液在常温下，使用期限不宜超过两个月。 1DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC 根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris 1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。 3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA 1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压) 将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。 30.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris 4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0）柠檬酸钠88.2g DEPC水1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用 5 HEPES 溶液HEPES 23.8g (ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml 6 50X Denhaldt′s 液 聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA）0.2g DEPC 水20ml 7 预杂交buffer Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldt′s液1ml 龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC水 1.4ml 龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。 8Washing buffer (ph7.5) maleic acid 5.8g NACL 4.4g Tween（吐温） 1.5ml 定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween 9Maleic acid buffer (ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g 定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 10Detection buffer 实验室常用生化试剂配方 1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版） 抗生素 英文名称及缩写 抗性基因 贮藏液浓度(mg/ml) 100 25(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 35 25(0.15M NaOH配) 50(DMSO配) 50 50 MM 使用终浓度（μg/ml）链霉菌 2CM YEME 大肠杆菌 LA或LB 氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMP Ampicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprim cat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph －* 10 10 2 5 10 5 100 10 －－ 25 25 20 25 10 － 50 －－－－－－ 2.5 － 5 50-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30 注意事项： (1) –表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请 确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装； （2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并 设置阴性对照； （3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio （4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并 分装；氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确 保配制贮存液所用溶剂（无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水 乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易 挥发，有剧毒； （5）长期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存，经常使用时可以暂置于4℃保存； （6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整； (7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次 性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂 对自身的损伤及对工作环境的污染。 注意事项： (1)表中所列酶均可以用无菌水配制，也可以用相应的缓冲液配制，缓冲液配制方法 参考《分子克隆实验指南（第3版）》： 蛋白酶 K缓冲液：50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM 乙酸钙； RNase A缓冲液：TE （pH 7.6）：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA；溶菌酶缓冲液：10 mM Tris-HCl（pH 8.0）； (2) RNase A配制好后沸水浴处理5 min，取出贮存RNase A后首次使用时也需沸水 浴处理5 min后再使用； （3）制备原生质体时使用的溶菌酶配制时需过滤除菌，其他情况一般无需过滤除菌； （4）所有酶均应在-20℃保存，使用过程中避免反复冻融，配制过程中尽量避免外界 污染。 （1）IPTG用无菌水配制，0.22μm一次性滤膜过滤除菌，分装保存于-20℃； 实验室试剂管理办法 1 目的 1.1 使操作员能够妥善保存化学药品、化学试剂，防止其变质、防止意外事故的发生。 1.2 使操作员能够妥善处理废料，防止其污染环境、防止意外事故的发生。 2 范围 2.1 适用于化验室化验员日常药品的管理。 3 职责 3.1 化验室 4 内容 4.1 化学药品、试剂的储存 4.1.1 化学药品储存室应符合有关安全规定，有防雷、防火、防爆、调温等安全措施。室内应干燥、通 风良好、温度一般不超过3 0C。 4.1.2 化学药品建立严格的帐目并记录于《化学试剂点检表》、《化学药品使用记录表》。 4.1.3 室内备有消防器材。 4.1.4 所有的化学试剂分类存放，无机试剂按酸、碱、盐、氧化物、单质等分类；盐类按阳离子分类，钾 盐、钠盐、铵盐、钙盐、镁盐等；有机试剂按官能团排列，烃、醇、酸、酯等；指示剂按用途分 类，酸碱指示剂、氧化还原指示剂、配位滴定的金属指示剂；专用有机指示剂按测定对象分类。 4.1.5 易燃易暴品应存放于阴凉偏低、不易碰撞的地方，有良好的通风效果，移动时轻拿轻放；配备相应 的灭火设备。 4.1.6 低沸点、易挥发有机溶剂存放于阴凉、通风处，远离热源，不得有明火。并不要与固体试剂同置一 个柜中。 4.1.7 见光易分解的应保存在棕色瓶中，或用黑色袋子裹严包装物，避光保存。 4.1.8 易燃易爆品、有毒害药品，应锁入药品柜内，防止人员带出制成自己或他人身体伤害和财产损 失，药品柜钥匙由部门主管保管一把，带班主管保管一把，其余钥匙全部交还公司，如要使用以上药品，需带班主管或部门主管批准后，由带班主管或代理人亲自开锁按其需要数量发料，并记录于< 化学药品使用记录表》。易燃易爆品储存于①药品柜，有毒害药品储存于②药品柜。 4.2 化学试剂溶液的管理 4.2.1 化学试剂溶液要装在细口瓶中，见光易分解的应装在棕色瓶中。所有化学试剂溶液在存放过程中 都应避免受热和强光照射。 4.2.2 所有试剂、溶液的盛装容器上都必须贴上标签，标签书写工整、完整和清晰；试剂最好是原标签， 配制的溶液包装上的标签应写明名称、单位浓度、配制日期；长期使用的试剂、溶液上的标签，贴层透明胶保护，以防腐蚀、磨损。并填写《标液配制记录表》。 4.2.3 影响试液质量的因素。试液的质量除主要受试剂质量的影响以外还会受其他多种因素的影响。 4.2.3.1 试液的稳定性。稳定性较好的试剂配制成溶液后，其稳定性可能变差。因而试液都应标明配 制日期，并根据需要定期检查记录于《实验室试剂点检表》，如发现试液变色、沉淀等变质迹 象，即应弃去重配。不稳定试液应分多次少量配制，并分特别情况来采取特殊贮存方法，如避光 等。 4.2.3.2 试液的贮存期。一般浓溶液在贮存期内变化不大，而稀溶液则随贮存时间的延长，其浓度多 会发生变化。溶液的浓度愈低，有效使用期限愈短。化学试剂溶液只能在其有效期内使用，GB 601 规定一般滴定分析用标准溶液在常温下，使用期限不宜超过两个月。 4.2.3.3 容器的耐蚀性。玻璃容器的耐碱性都较差，玻璃被腐蚀后可释放出某些杂质污染试液，所以，应采用聚乙烯瓶盛放碱性试液。软质玻璃的耐酸性和耐水性也较差，不应采用此种玻璃制成的容器长期贮存试液。 生物试剂分类 欧阳家百（2021.03.07） 生物试剂（BR：Biological reagent） 涉及到化学试剂分类。 我国的试剂规格基本上按纯度（杂质含量的多少）划分，共有高纯、光谱纯、基准、分光纯、优级纯、分析和化学纯等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要优级纯、分级纯和化学纯3 种。 （1）优级纯（GR：Guaranteed reagent），又称一级品或保证试剂，99.8%，这种试剂纯度最高，杂质含量最低，适合于重要精密的分析工作和科学研究工作，使用绿色瓶签。 （2）分析纯（AR），又称二级试剂，纯度很高，99.7%，略次于优级纯，适合于重要分析及一般研究工作，使用红色瓶签。 （3）化学纯（CP），又称三级试剂，≥ 99.5%，纯度与分析纯相差较大，适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色（深蓝色）标签。 （4）实验试剂（LR：Laboratory reagent），又称四级试剂。 除了上述四个级别外，目前市场上尚有： 基准试剂（PT：Primary Reagent）：专门作为基准物用，可直接配 制标准溶液。 光谱纯试剂（SP：Spectrum pure）：表示光谱纯净。但由于有机物在光谱上显示不出，所以有时主成分达不到99.9%以上，使用时必须注意，特别是作基准物时，必须进行标定。 纯度远高于优级纯的试剂叫做高纯试剂（≥ 99.99%）。 目前，国外试剂厂生产的化学试剂的规格趋向于按用途划分，常见的如下： 生化试剂（BC：Biochemical） 生物试剂（BR：Biological reagent） 生物染色剂（BS：Biological Stain） 络合滴定用（FCM：For Complexometry） 层析用（FCP：For chromatography purpose） 荧光分析（FIA） 微生物用（FMB） 显微镜用（FMP：For microscopic purpose） 合成用（FS：For synthesis） 气相色谱（GC：Gas chromatography） 高压液相色谱（HPLC：High Pressure Liquid chromatography） 指示剂（Ind：Indicator） 红外吸收（IR） 化验室化学试剂管理规定 1.范围和目的 本规程适用于品检科所有化学试剂以及配制试剂。 制定本规程的目的是为了建立化验室化学试剂的购买、接受、储存、发放、使用、销毁使用管理规程，使化验员能正确地使用试剂，保证化验工作质量。 2.化学试剂的购买： 技术员根据库存量及化学试剂检验需要量提出购买计划，经化验室负责人审核，公司厂长批准，交供应科采购员购买。 3.化学试剂的入库 购买后由采购员直接交给仓库管理员并办理入库手续。 技术人员根据购买计划办理出库手续并通知化学试剂管理员到出库接受。 化学试剂管理员先检查包装的完好性，封口是否严密,试剂无泄漏，标签是否粘贴牢固无破损，内容清晰,贮存条件明确，瓶签已部分脱胶的，应及时用胶水粘贴。无标签的试剂不得入库。严格按采购计划单内容，逐一核对。 化学试剂保管员必须每天检查一次温湿度表并记录。超出规定范围的应及时调整。 无标签的试剂应予销毁。 4.化学试剂的领用 化验员根据检验需要量提出领用要求。 化学试剂管理员根据化验员的要求发放化学试剂，并填写化学试剂领用记录。 5.化学试剂贮存 原装化学试剂贮存环境 55 5 55℃,相对湿度以45-75%为宜。 5应有良好的通风设备。 化验室内化学试剂的贮存 5 配制好的化学试剂应存放于试剂架上。性质不稳定的配制试剂应根据不同的性质存放，如放在阴暗处、冰箱等地方。使用化学试剂的过程中应特别注意其外观的变化。 配制化学试剂一般贮存1~2个月为宜,过期不得使用,须重新配制。在使用过程中发现有沉淀的，亦不得使用。 55需要冷藏保存的化学试剂应放在冷藏箱内保存。 易潮解、易失水风化、易挥发易吸收、二氧化碳、易氧化、易吸水变质化学试剂，需密闭保存或蜡封保存,应存放试剂柜下部柜中,平时应关门上锁；。 易爆炸品、易燃品、腐蚀品应单独存放,平时应关门上锁,剧毒品用后归还专用库（柜）。某些高活性试剂应低温干燥贮放。 保持室内清洁,通风和温湿度应符合规定。 每日检查一次消防灭火器材的完好状况,保证随时可以使用。 实验室药品的取用和溶液的配制 1 固体试剂的取用规则 （1）要用干净的药勺取用。用过的药勺必须洗净和擦干后才能再使用，以免沾污试剂。 （2）取用试剂后立即盖紧瓶盖。 （3）称量固体试剂时，必须注意不要取多，取多的药品，不能倒回原瓶。 2 液体试剂的取用规则 （1）从滴瓶中取液体试剂时，要用滴瓶中的滴管，滴管绝不能伸入所用的容器中，以免接触器壁而沾污药品。从试剂瓶中取少量液体试剂时，则需要专用滴管。装有药品的滴管不得横置或滴管口向上斜放，以免液体滴入滴管的胶皮帽中。 （2）使用胶头滴管“四不能”：不能伸入和接触容器内壁，不能平放和倒拿，不能随意放置，未清洗的滴管不能吸取别的试剂。 （3）配制一定物质的量溶液时，溶解或稀释后溶液应冷却再移入容量瓶。 （4）配制一定物质的量浓度溶液，要引流时，玻璃棒的上面不能靠在容量瓶口，而下端则应靠在容量瓶刻度线下的内壁上（即下靠上不靠，下端靠线下）。 （5）容量瓶不能长期存放溶液，更不能作为反应容器，也不能互用。（一般用于配制标准溶液的容量瓶最好专用） 3 溶液的配制 （1）配制溶质质量分数一定的溶液 计算：算出所需溶质和水的质量。把水的质量换算成体积。如溶质是液体时，要算出液体的体积。 称量：用天平称取固体溶质的质量；用量筒量取所需液体、水的体积。 溶解：将固体或液体溶质倒入烧杯里,加入所需的水,用玻璃棒搅拌使溶质完全溶解。（2）配制一定物质的量浓度的溶液 计算：算出固体溶质的质量或液体溶质的体积。 称量：用托盘天平称取固体溶质质量，用量筒量取所需液体溶质的体积。 溶解：将固体或液体溶质倒入烧杯中，加入适量的蒸馏水用玻璃棒搅拌使之溶解，冷却到室温后，将溶液引流注入容量瓶里。 转移：用适量蒸馏水将烧杯及玻璃棒洗涤2－3 次，将洗涤液注入容量瓶，振荡，使溶液混合均匀。 氨苄青霉素 ﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 5g Ampicillin置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。卡那霉素 (可配 25mL ﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 2.5g 卡那霉素置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。RNase A ﹡组分浓度 10mg/ml RNase A ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.取 0.5g RNase A置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 100℃煮沸 15min, 缓慢冷却至室温,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。IPTG ﹡组分浓度 24mg/ml IPTG ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1.2g IPTG置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 X-Gal ﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1g X-Gal置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40mlDMF (二甲基甲酰胺 ,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3.小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 DTT ﹡组分浓度 1M DTT ﹡配制量 10ml 目 录 蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 30% (W/V) Acrylamide 1 40% (W/V)Acrylamide 1 10% (W/V) 过硫酸铵 1 5×Tris-Glycine Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液) 1 5×SDS-PAGE Loading Buffer 1 考马斯亮蓝R-250染色液 2 考马斯亮蓝染色脱色液 2 凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 凝胶处理液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 凝胶染色液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 显影液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) 4 IPTG (24 mg/ml) 4 X-Gal (20 mg/ml) 4 LB培养基 4 LB/Amp培养基 4 TB培养基 5 TB/Amp培养基 5 SOB培养基 5 SOC培养基 5 2×YT培养基 6Φb×broth 6 NZCYM培养基 6 NZYM培养基 6 NZM培养基 7 一般固体培养基的配制 7 LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 7 TB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 7 实验室常用试剂、缓冲液的配制方法 1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)9 1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 9 10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0) 9 3 M 醋酸钠 (pH5.2) 9 PBS Buffer 9 10 M 醋酸铵 10 Tris-HCl平衡苯酚 10 苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1) 10 10% (W/V) SDS 10 2 N NaOH 10 2.5 N HCl 10 5 M NaCl 11 20% (W/V) Glucose 11 Solution I (质粒提取用) 11 Solution II (质粒提取用)11 Solution III (质粒提取用) 11 0.5 M EDTA (pH8.0)11 1 M DTT1 2 10 mM ATP 12 核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50×TAE Buffer (pH8.5)13 10×TBE Buffer (pH8.3)13 10×MOPS Buffer 13溴乙锭（10mg/ml） 13 Agarose 凝胶 13 6×Loading Buffer (DNA电泳用)14 常用试剂配方 1、1M pH8.5或pH8.0 Tris-HCl 1L：800ml H2O中加121.1g Tris，用HCl调pH 8.5定容至1升或用HCl调pH 8.0定容至1升，灭菌。 2、0.5M pH8.0 EDTA 1L：800ml H2O中加186.1g EDTANa2·2H2O，用NaOH调pH 8.0后定容至1升（在加有EDTA二钠盐的悬浊液中加入适量氢氧化钠，同时搅拌，直至溶液澄清，此时溶液pH约为8）。 3、20% SDS 2L：在2L热水中缓慢加入400g SDS，边加边搅拌，溶解后放置热地方保存。 4、5M NaCl 1L：750ml H2O中加292.2g NaCl，溶解后定容至1升，灭菌。 5、缓冲液“S” 100 mM Tris·Cl pH8.5 100 mM NaCl 50 mM EDTA pH8.0 2% SDS 6、10xTE 1L：800ml H2O 中加12.11g Tris，3.72 gEDTANa2 ·2H2O，用HCl调pH 8.0，定容，灭菌。 7、50xTAE 1L：500ml H2O 中加242g Tris，溶解后加100ml 0.5M pH8.0 EDTA和57.1ml冰乙酸，定容。 8、蛋白酶K溶液 用20mM pH8.0Tris·Cl，2mMCaCl2的缓冲液配制浓度为10μg/μl的蛋白酶K溶液或用超纯水配制成相同的浓度。 9、RNAase 用水溶解RNAase，终浓度为10mg/ml，煮沸20min，缓慢冷却，分装，-20℃下保存。 10、3M pH5.2 NaAc 1L：600ml H2O 中加408.24g NaAc·3H2O, 溶解后, 用冰乙酸调pH 5.2，定容灭菌。 11、5M KAc 1L：600ml H2O 中加490.8g KAc·3H2O, 溶解后, 定容灭菌。 12、Loadind-Buffer（琼脂糖电泳） 200ml：100ml H2O 中加80g蔗糖和0.5g溴酚蓝，定容，分装后4℃保存。 13、Bind-Silence配制 500ml 无水乙醇加2ml Bind-Silence原液。 14、Repel配制 500ml 三氯甲烷加10ml 硅烷化试剂。 15、PCR引物配制 引物粉剂5000rpm/min离心1min，1OD值加50μl超纯水，2OD值加100μl超纯水；混匀离心配成原液，-20℃保存，使用时原液稀释10倍（RAPD原液10μl，超纯水90μl；STS或SSR上下引物原液各10μl，超纯水180μl）。 16、EB配制 100mg EB加超纯水10ml溶解。 17、APS配制 APS（过硫酸铵）10g加水定容至100ml。 18、氯仿︰异戊醇（24︰1）、氯仿︰异戊醇︰酚（24︰1︰25）配制 480ml氯仿中加异戊醇20ml配成氯仿异戊醇；氯仿异戊醇与Tris饱和重蒸酚等体积混合配成酚氯仿。 19、2?SDS电泳上样缓冲液：1M Tris-HCl (pH 6.8)2.5ml，β-巯基乙醇1.0ml，SDS 0.6 g，甘油2.0ml，0.1% . 实验室化学药品、试剂管理制度及规范 1 目的 1.1规范实验室化学药品、试剂的管理，确保化学药品、试剂正确安全使用，保证检测工作质量。 1.2所有被允许使用的化学药品（化验室的化学试剂、杀虫剂、车间使用的消毒剂、洗涤剂、润滑油、油漆等）应被有序地标记、存放、使用，避免污染食品、食品接触面和包装物料。 2 适用范围 适用于实验室化学药品、试剂的采购、贮存、标识、领取和使用的全过程。 3 职责及术语 负责实验室化学药品、试剂的控制和管理。 从与食品或食品接触面接触的可能性角度分类，把工厂可能使用的化学品分为A、B、C三类： A类化学品：指与原材料、食品或食品接触面发生接触的化学品。（如CIP使用 的酸、碱、清洗剂等）。 B类化学品：在线使用但不与食品及原材料、食品接触面接触（如车间所用的链条润滑油、墨水等）。 C类化学品：为实验室分析用的标准试剂或指示剂。 4 内容及要求 4.1化学药品、试剂的采购 4.1.1实验室依据本室检测任务或药品台账，制定各种化学药品、试剂的采购计划，写清品名、单位、数量、纯度、包装规格等。 4.1.2化学药品、试剂购进后，由相关使用人员负责验收，确认安全有效后，方可领回存放，并记录于台账。 4.2化学药品、试剂的贮存 4.2.1化学药品试剂贮存环境应通风、干燥，实验室用配备消防器材和灭火设备。 4.2.2化学药品、试剂种类繁多，需严格按其性质和贮存要求（参见中国药典2005版附录XV试药项下）分类陈列整齐，放置有序。一般遵循以下原则：①酸液、碱液分开存放；②固体、液体化学品分开存放；③有毒、有害化学品单独存放； ④不常用的化学药品、试剂单独存放。 4.2.3化学性质不同或灭火方法相抵触的化学试剂应分柜存放，化学危险品按其特性单独存放，并有明确规范的标识，较贵的特纯试剂等药品应与一般药. . 品分开，妥善存放。 4.2.4操作区内的橱柜中及操作台上存放化学试剂的数量不应超过三个月使用 的量。 实验室常用试剂、缓冲液的配制方法 1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0) ■组份浓度 1 M Tris-HCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70 ml 7.6 约60 ml 8.0 约42 ml 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的 pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液 的pH值大约降低0.03个单位。 1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 10×TE Buffer (pH7.4，7.6，8.0) ■组份浓度 1.5 M Tris-HCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的 pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液 的pH值大约降低0.03个单位。 ■组份浓度 100 mM Tris-HCI，10 mM EDTA ■配制量 1 L ■配制方法 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH 7.4,7.6,8.0）100 ml 500 mM EDTA (pH 8.0) 20 m l 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 实验室常用化学药品、试剂，由于性质的不同，有效期也有所不同，比如我们常用的有缓冲液，有机试剂，标准溶液，流动相，标准品，配制溶液，留样等等，都有一定的有效期，如何正确把握使用期限？常用的标准溶液、缓冲液的有效期，你记住了吗本文列出了有效期一览表，供大家参考。 滴定用标准溶液的有效期为多长？其实跟贮存的条件有关，正常室温下贮存时间见下表。 表1.常见滴定用标准溶液的有效期 相比标准溶液的有效期，各种缓冲液、试液、指示液也有其有效期限制，多数实验室都是根据前辈的经验来规定期限，也有的实验室为了防止过期现象导致的样品分析结果误差的产生，尽量都是现配先用，或者最多使用一个月。对于某些较稳定的溶液来说，不必矫枉过正，一方面会造成浪费，一方面也增加了分析人员的工作量，那么，到底如何规定各种缓冲液、试液、指示液的使用期限呢，请参考下表！表2：各种缓冲液、试液、指示液使用期限表 表3.一般溶液有效期一览表 淀粉指示剂5g/L5天液/ 1个月 淀粉指示剂10g/L5天硫酸锌535g/L1个月 盐酸氨水缓冲溶 液PH=9.6-9.7 7天 硫酸锰380g/L 1个月 乙醇溶液78%7天硫酸铜溶液20g/L1个月乙醇溶液75%7天六水氯化铁0.25g/L1个月乙醇溶液72%7天碱性试剂/1个月乙醇溶液70%7天重铬酸锌12.285g/L1个月碘指示剂/7天重铬酸钾12.258g/l1个月氧化镁2%7天磺胺5g/L1个月间苯二酚盐酸溶 液/7天七水硫酸镁22.5g/L1个月氨水溶液1:47天三乙醇胺溶液1:31个月溴甲酚紫水溶液 1.60%7天韦氏液13g/L1个月酚酞指示剂5g/l7天硼酸溶液20g/L1个月酚酞指示剂10g/l7天喹钼柠铜溶液/1个月除蛋白试剂/7天柠檬酸溶液0.1moL/L1个月 饱和苦味酸溶液/7天氯化铵-EDTA溶 液/1个月 硝酸银溶液9.6g/L7天硫酸镉溶液/1个月 硝酸银溶液50g/L7天氢氧化铵-氢化 氨缓冲液/1个月 淀粉溶液1%7天碘贮备液/1个月玫红酸0.5g/L7天碘化钾溶液1moL/L1个月使用液（检测尿 素）/7天碘化钾溶液10%1个月碘-碘化钾/7天碘化钾溶液15%1个月 盐酸N-(1-萘基） -乙烯二胺0.1%10天碘化钾溶液饱和 1个月 萘胺盐酸盐1g/L10天碘酸钾标准溶液10mmoL/L1个月亚甲基兰饱和溶 液/14天碘溶液0.005moL/L1个月显色剂（原料奶 掺假用）/15天氯化镁2%1个月 次甲基兰指示剂1g/L、10g/L 1个 月氯化钙27.5g/L1个月 甲基红指示剂0.1g/l、 2g/L 1个 月碱性酒石酸钾钠/1个月 甲基红指示剂1g/L 1个 月纳氏试剂/1个月 溴百里酚蓝指示 剂1%1个 月 费林试剂甲、乙 液 0.5g 1个月 溴甲酚绿指示剂1g/L 1个 月 三氯甲烷-冰乙 酸溶液 2：3 1个月 溴甲酚绿指示剂2g/L1个氯化钡溶液25g/L1个月 令狐文艳 化学试剂是实验室里品种最多、消耗购置最频繁、危险性也最大的物质，因此，化学试剂的管理无疑是实验室管理人员的首要工作。对试剂的管理可以说是实验室管理的重头戏，因为试剂安全关系到实验室安全。所以本文的实验室试剂分类知识，一起来分享吧! 我国的试剂规格基本上按纯度(杂质含量的多少)划分，共有高纯、光谱纯、基准、分光纯、优级纯、分析和化学纯等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要优级纯、分级纯和化学纯3种。 (1)优级纯(GR：Guaranteed reagent)，又称一级品或保证试剂，99.8%，这种试剂纯度最高，杂质含量最低，适合于重要精密的分析工作和科学研究工作，使用绿色瓶签。(2)分析纯(AR)，又称二级试剂，纯度很高，99.7%，略次于优级纯，适合于重要分析及一般研究工作，使用红色瓶签。 (3)化学纯(CP)，又称三级试剂，≥ 99.5%，纯度与分析纯相差较大，适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色(深蓝色)标签。 (4)实验试剂(LR：Laboratory reagent)，又称四级试剂。除了上述四个级别外，目前市场上尚有：基准试剂(PT：Primary Reagent)：专门作为基准物用，可直接配制标准溶液。光谱纯试剂(SP：Spectrum pure)：表示光谱纯净。但由于有机物在光谱上显示不出，所以有时主成分达不到99.9%以上，使用时必须注意，特别是作基准物时，必须进行标定。纯度远高于优级纯的试剂叫做高纯试剂(≥ 99.99%)。 目前，国外试剂厂生产的化学试剂的规格趋向于按用途划分，常见的如下：生化试剂 (BC：Biochemical) 生物试剂 (BR：Biological reagent) 生物染色剂 (BS：Biological Stain) 络合滴定用 (FCM：For Complexometry) 层析用 (FCP：For chromatography purpose) 荧光分析(FIA) 微生物用(FMB) 显微镜用(FMP：For microscopic purpose) 合成用 (FS：For synthesis) 气相色谱 (GC：Gas chromatography) 高压液相色谱 (HPLC：High Pressure Liquid chromatography) 指示剂 (Ind：Indicator) 红外吸收(IR) 液相色谱(LC) 核磁共振(NMR) 有机分析标准 (OSA：Organic analytical standard) 分析用(PA：Pro analysis) 实习用 (Pract：Practical use)(Pure purum 纯) Puriss (Purissmum 特纯) 合成(SYN) 工业用Tech：Techincal grade) 薄层色实验室常规试剂配制
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