中国饲料２００８年第８期
＊通讯作者
乳酸菌是机体肠道正常菌群中的优势菌，能够产生有机酸（如乳酸、乙酸、丙酸等）、双乙酰、过氧化氢等化合物，能够抑制腐败菌和病原菌。大肠杆菌在正常条件下是机体肠道的正常菌群，但在异位时或当机体抵抗力下降时又可能成为条件致
病菌，引起各种感染（凌代文，
１９９１；Ｓｏｒｒｅｌｓ和Ｓｐｅｃｋ，１９７０）。研究表明，乳酸菌通过自身的生长繁殖及其所产生的代谢物等，达到改善动物胃肠道内部微环境、降低ｐＨ值和抑制有害菌生长，对肠道细菌如大肠杆菌、沙门氏菌引起的疾病有治疗和保健作用（Ｂｌｏｍｂｅｒｇ等，１９９３）。本文旨在通过乳酸菌的体外抑菌试验，探讨乳酸菌菌液及其代谢产物对致病性大肠杆菌的抑制特性。１材料与方法
１．１试验菌株及培养条件乳酸杆菌为乳酪杆菌，鸡致病性大肠杆菌为鸡志贺氏大肠杆菌。培养乳酸菌专性培养液（ＭＲＳ）组成为：胰蛋白胨１０ｇ，牛肉蛋白胨１０ｇ，酵母浸出物５ｇ，葡萄糖２０ｇ，吐温（８０）１ｍＬ，磷酸氢二钾２ｇ，乙酸钠５ｇ，柠檬酸钠２ｇ，硫酸镁２００ｍｇ，硫酸锰５０ｍｇ，定容至
１Ｌ，ｐＨ为６．２～６．６。培养条件为３７℃，厌氧静止
培养１８～２４ｈ。ＬＢ培养基的组成为：胰蛋白胨１０ｇ，酵母浸出物５ｇ，氯化钠１０ｇ，定容至１Ｌ，ｐＨ为７．０。培养条件为３７℃，摇床培养（１５０ｒ／
ｍｉｎ）
１８～２４ｈ。１．２根据抑菌环直径大小判定抑菌能力的强弱１．２．１乳酸杆菌菌液的制备取０．１ｍＬ乳酸菌接种在２００ｍＬＭＲＳ液体培养基中，３７℃厌氧培养２４ｈ，然后进行抑菌试验。
１．２．２乳酸杆菌代谢产物的制备将上述各时间段培养的乳酸菌菌液取出３ｍＬ，然后以１３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，取上清液用滤菌膜过滤，即为乳酸杆菌代谢产物。
１．２．３营养琼脂培养基的准备称量２ｇ酵母、１ｇ氯化钠、１ｇ胰蛋白胨、４ｇ琼脂，置于２５０ｍＬ的三角瓶中，再加入２００ｍＬ蒸馏水配制成溶液，高压灭菌。之后将灭菌过的营养琼脂液倒入１２个平皿中，待用。
１．２．４对大肠杆菌的抑菌试验取２００μＬ大肠杆菌培养物，用无菌的Ｌ型玻璃棒将其均匀抹在营养琼脂培养基上，待干后打孔。在平皿底部分区（分四个区），用金属管在每个区打３个孔，孔径为
乳酸菌及其培养物对鸡致病性大肠杆菌的抑菌试验
郑州牧业高等专科学校郭金玲
河南农业大学牧医工程学院郑秋红刘香尹清强＊
商丘市饲料监测站
董良奇
［摘要］本试验研究了乳酸菌、乳酸菌上清液、抗生素及ＭＲＳ对照液对鸡致病性大肠杆菌的体外抑菌作用。结果表明，乳酸杆菌菌液及培养后的无菌上清液都有较强的抑菌活性，其抑菌圈的直径显著大于对照组（Ｐ＜０．０５）；且随着乳酸菌培养时间的不同，乳酸菌培养液的ｐＨ值逐渐降低，对致病性大肠杆菌的抑制作用也逐渐增强。
［关键词］乳酸菌；鸡致病性大肠杆菌；体外抑菌试验［中图分类号］Ｓ８１６．７
［文献标识码］Ａ
［文章编号］１００４－３３１４（２００８）０８－００３４－０３
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｎｄｉｔｓｓｕｐｅｒｎａｎｔ，
ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃａｎｄＭＲＳｍｅｄｉｕｍｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｓｔｕｄｙｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃＥ．ｃｏｌｉｏｆｃｈｉｃｋｅｎ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｎｄｉｔｓｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｈａｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃＥ．ｃｏｌｉ．ＴｈｅｄｉａｍｅｔｅｒｓｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｚｏｎｅｓｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｎｄｉｔｓｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｗｅｒｅｌａｒｇｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ；
ｔｈｅｐＨｖａｌｕｅｓａｎｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＥ．ｃｏｌｉｄｅｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｅｘｔｅｎｓｉｏｎｏｆｉｎｃｕｂａｔｉｎｇｔｉｍｅ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ；
ｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃＥ．ｃｏｌｉｏｆｃｈｉｃｋｅｎ；ｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＥ．ｃｏｌｉｉｎｖｉｔｒｏ３４
中国饲料
２００８年第８期（下转第４０页）
培养时间０ｈ６ｈ２４ｈ４８ｈ７２ｈ大肠杆菌＋乳酸菌
５．０２５．１６５．６９５．８３５．８４乳酸菌
４．９６４．９１４．９０４．８１４．８１大肠杆菌＋乳酸菌上清液
５．１１５．０３４．８５４．８３４．８３大肠杆菌
７．３６
８．２４
８．９０
９．０５
８．８９
注：同列数据肩标不含相同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），含相同字母或无字母标注表示
差异不显著（Ｐ＞０．０５）；下同。
乳酸菌原液８．１±１．０８．２±０．６９．９±０．７８．０±０．９８．６±０．９ａ乳酸菌上清液７．３±０．４７．９±０．９８．７±０．５８．５±０．８８．１±０．６ａ抗生素８．５±０．５８．９±０．７９．４±０．２１０．７±１．０９．４±１．０ｂＭＲＳ对照液７．２±０．１７．７±０．６７．４±０．２７．４±０．４７．４±０．２ａ
１２ｈ
２４ｈ
４８ｈ
７２ｈ
培养时间
平均数
表１乳酸菌及其上清液、抗生素、ＭＲＳ对照液对大
肠杆菌所产生的抑菌圈的大小（ｎ＝３）ｍｍ
图１不同培养时间段的光密度值
培养时间０ｈ２４ｈ４８ｈ大肠杆菌＋乳酸菌（３．７１±０．４５）×１０７ａ（５．６５±０．７６）×１０４ａｂ（１．１７±０．２３）×１０３ａ乳酸菌（１．２５±０．２１）×１０４ｂ（８．３３±０．８４）×１０３ａ（３．１７±０．４１）×１０３ａ大肠杆菌＋乳酸菌上清液
（３．６３±０．４４）×１０７ａ（１．４７±０．３５）×１０５ｂ（８．３３±０．９０）×１０３ａ大肠杆菌
（８．７１±０．９２）×１０７ａ
（１．４１±０．２５）×１０８ｃ
（１．８８±０．３１）×１０９ｂ
表２不同时间段培养液的活菌数变化
个／ｍＬ
大肠杆菌＋乳酸菌
乳酸菌
大肠杆菌＋上清液大肠杆菌
８７６
５４３２１０ＯＤ值
０
６
２４
４８
７２
时间（ｈ）
表３不同时间段培养液的ｐＨ值变化
７．０ｍｍ，再用镊子将孔内琼脂块挑出，然后封底。在４个区的孔内分别加入乳酸菌原液、乳酸菌上清液、抗生素、ＭＲＳ对照液。３７℃培养１６ｈ，观察抑菌圈大小并用游标卡尺测量其直径，根据抑菌圈直径大小作为判定其抑菌能力的强弱。
１．３利用液体培养的方法测定抑菌能力的大小制取４个５０ｍＬＬＢ液体培养基，标号１、２、３、４。１号管加入１ｍＬ乳酸菌和２００μＬ致病性大肠杆菌，２号管加入１ｍＬ乳酸菌和２００μＬ无菌蒸馏水，３号管加入１ｍＬ乳酸菌上清液和２００μＬ致病性大肠杆菌，４号管加入２００μＬ致病性大肠杆菌和１ｍＬ无菌蒸馏水。
随即取样测量光密度值、菌数及ｐＨ值，再置３７℃厌氧培养６、２４、４８、７２ｈ，测定各不同时间段的活菌数、光密度值（ＯＤ值）、ｐＨ值。
１．４统计分析数据经Ｅｘｃｅｌ软件初步整理后，利用ＳＰＳＳ１０．０单因子方差分析中ＬＳＤ法进行统计分析。
２结果与讨论
２．１乳酸菌原液、乳酸菌原液上清液、抗生素、ＭＲＳ对照液对致病性大肠杆菌的抑制作用见表１。表１表明，
乳酸菌原液、乳酸菌原液上清液和抗生素对致病性大肠杆菌都有一定的抑制作用，其中以抗生素的抑制效果最好。２．２不同时间段的活菌数、光密度值、ｐＨ值变化
见表２、图１和表３。由表２可知，培养液中的活菌数随着培养时间的增加变化显著，大肠杆菌＋乳酸菌、乳酸菌、大肠杆菌＋乳酸菌上清液处理组的活菌数，随培养时间的延长不断减少；而只含有大肠杆菌的处理组的活菌数不断增加，这说明乳酸杆菌及其上清液对致病性大肠杆菌有明显的抑制作用。
从图１可知，不同时间段培养液的ＯＤ值变
化趋势虽然是相同的，但２４ｈ后只含有大肠杆菌
的ＯＤ值大于其他各组。这说明大肠杆菌在没有加抑制剂的情况下，其生长速度比添加有抑制剂的快。也就是说，乳酸菌原液及上清液、抗生素对致病性大肠杆菌有明显的抑菌作用。
从表３可知，
大肠杆菌＋乳酸菌、乳酸菌、大肠杆菌＋乳酸菌上清液处理组的ｐＨ值，随培养时间的延长变化幅度不大，但与只含有大肠杆菌的处理组相比仍显得很低，这一结果与大肠杆菌的活菌数低相一致。这说明乳酸菌对致病性大肠杆菌的抑菌作用可能与乳酸菌产酸有关。
３
讨论
本试验结果表明，乳酸菌原液及乳酸菌原液
上清液具有与抗生素同样的抑菌作用。从抑菌圈的大小来看，乳酸菌原液和乳酸菌原液上清液的抑菌作用低于抗生素。另外，乳酸菌原液和乳酸菌原液的上清液抑菌作用无显著差异，说明乳酸菌的抑制作用有可能与其在培养过程中产生的代谢产物（乙酸、乳酸、丙酸等）密切相关。培养液中低
３５
中国饲料２００８年第８期
ｐＨ值和低大肠杆菌活菌数相一致，也充分证明了这一论点的正确性。本试验结果与丁轲等（２００３）报道相似，而与王传彬等（１９９７）的研究报道不一致。本研究证实，乳酸菌完全可以替代抗生素作为饲料添加剂和抑菌剂，对无公害畜产品的生产具有重要的意义。
参考文献
［１］丁轲，倪学勤，潘康成，等．三株乳酸杆菌体外抑菌试验的研究［Ｊ］．饲料工业，
２００３，２４（３）：１９～２１．［２］凌代文．乳酸细菌分类鉴定及实验方法［Ｍ］．北京：中国轻工业出版社，１９９１．１１７～１８１．
［３］王传彬，王永坤，朱国强，等．动物源乳酸菌筛选及生物特性参数测定［Ｊ］．江苏农学院学报，１９９７，１８（１）：１～５．
［４］ＢｌｏｍｂｅｒｇＬ，ＨｅｎｒｉｋｓｓｏｎＡ，ＣｏｍｖａｙＰＬ．ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆａｄｈｅｓｉｏｎｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＫ８８ｔｏｐｉｇｌｅｔｉｌｅａｌｍｕｃｕｓｂｙＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｐ．［Ｊ］．ＡｐｐｌＥｎｖｉｒｏｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９３，１：３４～３９．
［５］ＳｏｒｒｅｌｓＫＭ，ＳｐｅｃｋＭＬ．ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｇａｌｌｉｎａｒｕｍｂｙｃｕｌｔｕｒｅｆｉｌｔｒａｔｅｓｏｆＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｒｃｉｒｔｒｏｖｏｒｕｍ［Ｊ］．ＤａｉｒｙＳｃｉ，１９７０，５３：２３７～３４３．
［通讯地址：郑州市文化路９５号，邮编：４５０００２］
表１流动相梯度
时间（ｍｉｎ）
乙腈磷酸／三乙胺溶液（含１％乙腈）
０７９３３６９９１６０
１３
８７
表２混合标准液中各组分出峰顺序
出峰顺序１２３４５６７８９名称
氧氟沙星
诺氟沙星
培氟沙星
环丙沙星
洛美沙星
达氟沙星
恩诺沙星
沙拉沙星
二氟沙星
保留时间（
ｍｉｎ）２９．３２８３０．５０３３２．８６４３４．５３６３８．６４１４５．２１２４７．２８１５７．１０６５８．７５４图１喹诺酮类药物分离色谱图１００．００
８０．００６０．００４０．００２０．００
０．００
０．００５．００１０．００１５．００２０．００２５．００３０．００３５．００４０．００４５．００５０．００５５．００６０．００
氧－２９．３２８
诺－３０．５０３
培－３２．８６４
环－３４．５３６洛－３８．６４１
达－４５．２１２
恩－４７．２８１
沙－５７．１０６
二－５８．７５４
％
时间（ｍｉｎ）
峰面积
见表１。
流速：１．２ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：激发波长２８０ｎｍ，发射波长４８０ｎｍ；柱温：３０℃；进样量：２０μＬ。
２结果与讨论２．１
喹诺酮类药物分离色谱图结果
先用混合
标准溶液上机，不断调整流动相，使色谱峰达到较好的分离（见图１），再用９种单标液进行各组分的确认，出峰顺序见表２。
２．２检测药物种类的选择由于第３代喹诺酮
类在兽医临床和水产饲料中使用频率很高，因此本实验把目前常用的９种喹诺酮类作为检测目标物。
２．３色谱柱和流动相的选择参照常用的动物组织中喹诺酮类药物残留检测方法，使用Ｓｙｍ－ｎｅｔｒｙＣ１８（２５０ｍｍ×４６ｍｍ，５μｍ）色谱柱，以０．０１ｍｏｌ／Ｌ四丁基溴化铵溶液（９４％）和乙腈（６％）作为流动相，柱温３０℃，进样量２０μＬ，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，激发波长２８０ｎｍ，发射波长４８０ｎｍ时９种喹诺酮类只看到２个较大的波峰。反复调整流动相中乙腈的比例，色谱峰仍不能很好分离。通过查阅文献和不断摸索，本试验选择了ＡｔｌａｎｔｉｓｄＣ１８（１５０ｍｍ×４６ｍｍ，５μｍ）作为色谱柱，同时对流动相进行优化选择，采用磷酸／三乙胺溶液－乙
腈梯度洗脱，９种喹诺酮类达到较好的分离效果。
２．４检测波长的选择喹诺酮类药物分子为两性结构，由于结构相似，在各种发光物质中，各个药物的激发和发射波长很相近。资料表明，喹诺酮类药物在酸性条件下有最大吸收，当ｐＨ３．０～４．０时洛氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、环丙沙星和诺氟沙星的最大激发波长分别为２７１、２８３、３１７、２８４ｎｍ和２８０ｎｍ，最大发射波长分别为４４５、５００、４４３、４４６ｎｍ和４４９ｎｍ。通常高效液相色谱法都采用激发波长２８０ｎｍ，发射波长４５０ｎｍ，但由于氧氟沙星结构差异比较大，其在发射波长４５０ｎｍ时的吸收值只有发射波长４８０ｎｍ处的２７％左右，故本实验采用激发波长２８０ｎｍ，发射波长４８０ｎｍ。３
讨论
虽然把９种喹诺酮类进行了分离，并得到较
好的色谱图，但是由于实验所用的样品均为标准
品，而实际需要检测的饲料样成分复杂，存在很多干扰因素。因此，还需要对饲料的前处理进行不断优化、提纯和浓缩，摸索出完整检测方法。
［通讯地址：浙江杭州市凤起东路２９号，邮编：
３１００２０］!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（上接第３５页）４０
大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍 相互关系 大肠菌群（总大肠菌群） >粪大肠菌群&耐热大肠菌群> 大肠杆菌 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。 二、总大肠菌群
所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较 北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。 耐热大肠菌群的卫生学意义 作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。 作为粪便污染指标菌，耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似，主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物，有健康者，也有肠道病患者或带菌者粪便，所以粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等）和食物中毒者。因此，食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。
幼畜禽大肠杆菌疾病的防治研究 宝泉 摘要 本文利用兽医学和家畜卫生学的理论知识，研究了大肠杆菌对幼畜禽的危害及防治，对大肠杆菌的病原菌、发病机制、幼畜禽病症及防治措施做了一番较为深入的探讨和研究。 关键词：大肠杆菌幼畜禽发病机制防治措施
1、引言 大肠杆菌是各种家畜易患的传染病，特别是初生幼畜禽易感。患畜以严重腹泻和败血症为主症，严重者造成死亡，给畜牧业生产带来重大损失。现就大肠杆菌病的病原菌，发病机制，幼畜禽症状及防治措施简述如下： 2、病原菌剖析 大肠杆菌（亦称埃希氏大肠杆菌）是动物肠道内的正常寄生菌，是动物肠道后段的常驻菌。初生幼畜当其首次接触外界环境时，即有大肠杆菌从口腔进入消化道，并在消化道的后段大量繁殖，以后即终生存在，并从粪便散播至周围环境。肉食兽与杂食兽肠道内的大肠杆菌比草食兽更多，每克粪便含菌达数十亿个。因此，如果在饮水中或食物中发现有一定量的本菌，说明已有粪便污染。所以，对食物或饮水的卫生检验，往往以所含大肠菌的多少作为卫生指标。一般来说，大肠杆菌对动物是有益的，但也有一些类型能够引起疾病。 大肠杆菌是肠杆菌科中的一个属，即埃希氏大肠杆菌。本菌为革兰氏染色阴性，无芽胞，一般不形成荚膜
的短杆菌，两端钝圆，具有周鞭毛，能运动，兼性厌氧，对碳水化合物发酵能力强。本菌对外界不利因素的抵抗力较弱，50℃加热30分钟，60℃加热15分钟即死亡，常用的消毒药均易将其杀死。 大肠杆菌的类型很多，有菌体抗原“O”，表面抗原“K”和鞭毛抗原“H”三种。“O”，抗原已分出157种，“K”抗原有99种，“H”抗原有52种。根据抗原成份，将病原性大肠杆菌分为许多血清型，引起一种动物发病的大肠杆菌常为一定的血清型，一个畜群如不由外地引进同种家畜，其病原菌株常为一定的1~2种血清型。 3、发病机制分析 病原性大肠杆菌与动物肠道内正常寄居的非致病性大肠杆菌在形态，染色反应，培养特性和生化反应等方面没有差别，但抗原构造不同。病原性菌株一般能产生1种内毒素和1~2种肠毒素。内毒素能耐高热，100℃经30分钟才能破坏，而肠毒素则不同，肠毒素有2种，一种不耐热（LT），有抗原性，分子量大（75×106），60℃经10分钟被破坏；另一种耐热（ST），无抗原性，分子
浅谈大肠杆菌的致病性与防治 解觉五支莫食企09级1班 20095090 摘要：大肠杆菌是人和动物肠道中最主要，数量最多的一种细菌，寄居于人和动物的消化道内，是人和动物消化道内占优势地位的需氧共生菌丛。本文主要综述了大肠杆菌的结构与分类，对人体的作用，致病性及其防治。介绍了大肠杆菌的致病机理，致病性与非致病性的区别，以及对致病性大肠杆菌的预防措施。致病性杆菌引起的病越来越多，严重威胁着人类的健康。 关键字：大肠杆菌致病性防治 大肠杆菌是大肠埃希氏菌的俗称,属肠杆菌科埃希氏菌属,1885年埃舍利希 氏首次发现。在相当长的时间内,人们一直把它当作正常肠道菌群的组成部分,认为是非致病菌。直到20世纪中叶,才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性,尤其对婴儿和幼禽,常引起严重腹泻和败血症[1]。大肠杆菌有致病性和非治病性之分。非致病性大肠杆菌是肠道正常菌丛，致病性大肠杆菌则能引起食物中毒。致病性大肠杆菌分为侵入型和毒素型两类。前者引起的腹泻与痢疾杆菌引起的痢疾相似，一般称为急性痢疾型；后者所引起的腹泻为胃肠炎型，一般称为急性胃肠炎型。毒素型大肠杆菌产生的肠毒素，可分为耐热毒素和不耐热毒素。前者加热至100℃经30分尚不破坏，后者加热60℃仅1分即被破坏【2】。土壤、水源收费便污染后，可带有致病性大肠杆菌，婴儿易被感染。带菌食品由于加热不彻底，或因生熟交叉污染和熟后污染，可引起食物中毒。近年来，由致病性大肠杆菌引起的病更是越来越普遍，对人类的健康产生了严重的威胁。 一、大肠杆菌的结构与分类 大肠杆菌一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌，属于原核微生物。大肠杆菌没有真正完整的细胞核，只有一个拟核而且拟核外没有核膜包围。具有主要由肽聚糖构成的细胞壁，细胞膜，细胞质，核糖体，荚膜，菌毛和鞭毛。
鸭致病性大肠杆菌的分离及人工感染鸭的组织病理学研究 摘要:经过菌落形态?染色形态?生化试验,从来自湖北某鸭场的30份病料中,分离到20株鸭大肠杆菌?以3.0×108CFU/mL剂量感染健康昆明鼠和健康樱桃谷鸭,鼠和鸭分别在感染后8 h和12 h出现症状,12 h和18 h后开始出现死亡,而对照组则未出现任何症状,表明该菌株为致病性菌株?药物敏感试验结果显示该鸭场分离菌株对某些药物已经产生很强的耐药性?人工感染鸭的组织病理学结果表明其肝脏?心脏有广泛的纤维素渗出物且发生严重的变性?坏死? 关键词:鸭致病性大肠杆菌;分离;药敏试验 Isolation of Pathogenicity E.coli from Ducks and Histopathological Representation of the Experimentally Infected Ducks Abstract: 20 duck pathogenic Escherichia coli from 30 clinical samples of a duck farm in Hubei province were isolated and confirmed by microscopic morphology and biochemical assay. Subsequently, they were used to infect healthy Kunmin mice and Cherry valley ducks experimentally with 3.0×108 CFU/mL. Typical clinical manifestations were observed after eight hours and twelve hours in the infected mice and ducks, respectively. And after twelve hours and eighteen hours respectively, the mice and ducks got to die. But there was no any symptom in the control group. Drug sensitivity test indicated that some strains isolated were highly resistant to certain antibiotics. The histopathology tests of experimentally infected ducks showed that livers and hearts had lots of fibrinousexudate, and became denaturation and necrosis. Key words: duck pathogenic Escherichia coli; isolation; drug sensitivity tests 鸭大肠杆菌是引起鸭大肠杆菌病的病原,鸭大肠杆菌病是一种急性败血性传染病,又名鸭大肠杆菌败血病[1]?该病在临床剖检上主要表现为纤维素性心包炎?肝周炎?气囊炎?各种年龄的鸭均可感染,雏鸭最易感,2~6周龄多发,发病率和死亡率较高,在商品肉鸭中死亡率可高达50%左右,而且常常与鸭传染性浆膜炎混合感染,给养鸭业造成了严重的经济损失?随着养鸭业的日益发展和集约化程度的提高,鸭大肠杆菌病越来越多,支原体?病毒细菌?环境因素常加重或诱发大肠杆菌病?调查显示[2,3],鸭大肠杆菌病在我国不同类型的养鸭场中均普遍存在,流行广泛,且血清型众多,不同地区差异较大?本次试验对湖北省某鸭场的大肠杆菌进行了分离鉴定与组织病理学研究,并对分离株进行药物敏感性试验,以便指导临床合理用药,也为今后进一步筛选优势血清型菌株制备灭活疫苗预防本地的大肠杆菌病提供科学依据? 1材料和方法
呼吸道用药方法 鸣管有粘液用泰乐。强力 支气管用红霉素和阿奇， 肺有粘液沉入水用强力，恩诺氧氟。替米考星，泰妙每公斤水8mg喷雾 胸气囊用林可吉他霉素。利高霉素每公斤水10mg 分不清时，有甩头甩水，呼噜清晰时是上呼吸道用泰乐 呼噜沉闷鸣管以下，犬坐或伸颈是支气管感染如全部感染可用氟苯+阿奇+强力 怀疑有病毒或20天以上的鸡加双黄连+利巴韦林 大肠杆菌： 1，头孢噻肟+丁胺卡那+磷霉素； 2，氟苯尼考+强力霉素+粘杆菌素； 3，左旋氧氟+丁胺卡那。 肠炎： 1，克林霉素+林可霉素+甲硝唑； 2，痢菌净+甲硝唑； 3，替硝唑+地克珠利+阿莫西林。 传染性鼻炎治疗方案： 磺胺间甲氧嘧啶+泰乐菌素+利巴韦林+安乃近氟苯尼考+磺胺间甲氧嘧啶 肠毒综合症治疗方案：磺胺氯吡嗪钠+痢菌净+安乃近+K3粉 要是象肾传的话 用干扰素+肾药+病毒药 流感干扰素或抗体+抗生素+安乃近 关于家禽如何合理用药 一、用药误区目前，在禽类疾病的治疗过程中，药物的应用经常存在以下几个方面的误区和不足： 1、不注意给药的时间：无论什么药物，固定给药模式或用药习惯，不是在料前喂，就是在料后喂。 2、不注意给药次数：不管什么药物，通通一天给药1次。 3、不注意给药间隔：凡是一日2次给药，白天间隔时短(6-7小时)，而晚上间隔过长(17-18小时)。 4、不重视给药方法：无论什么药物，不管什么疾病，一律饮水或拌料给药，自由饮水或采食。 5、偏面加大用药量或减少兑水量：无论什么药物，按照厂家产品说明书，通通加倍用药。 6、疗程不足或频繁换药：不管什么药物，不论什么疾病，见效或不见效，通通3天停药。
7、不适时更换新药：许多用户用某一种药物治愈了某一种疾病，就认准这种药物，反复使用，即使包装规格甚至颜色改变也不接受，且不改变用量，一用到底。 8、药物选择不对症：如本来为呼吸道疾病，口服给药用肠道不宜吸收药物(硫酸新霉素等)。 9、盲目搭配用药：不论什么疾病，如大肠杆菌与慢呼混感，不清楚药理药效，多种药物搭配使用，如含有治疗大肠杆菌的头孢噻肟钠与含有治疗支原体感染的红霉素搭配。 10、忽视不同情况下的用药差别：如疾病状态、种别、药物酸碱性影响、水质等。 关于给药时间(又称时间药理) (一) 内服药物大多数是在胃肠道吸收的，因此，胃肠道的生理环境，尤其是PH值的高低，饱腹状态，胃排空速率等往往影响药物生物利用度(F)。如林可霉素需空腹给药，采食后给药药效下降2/3；而红霉素则需喂料中或喂料后给药，否则，易受胃酸破坏，药效下降80%。而有的药物需定点给药，如用氨茶碱治疗支原体、传支、传喉所致呼吸困难时，最佳用药方法是将2天的用量于晚间8点一次应用，这样既可提高其平喘效果，且强心作用增加4-8倍，还可以减少与其它药物如红霉素、氨基糖甙类等不良反应发生。 需要注意给药时间的常用药物及内服方法如下： 1、需空腹给药的药物有(料前1小时)：半合成青霉素中阿莫西林、氨苄西林、头孢菌素(头孢曲松钠除外)、强力霉素、林可霉素、利福平，喹诺酮类中诺氟沙星、环丙沙星、甲磺酸培氟沙星等。 2、料后2小时给药的药物有：罗红霉素、阿奇霉素、左旋氧氟沙星 3、需定点给药的药物有： A.地塞米松磷酸钠(治疗禽大肠杆菌败血病、腹膜炎、重症菌毒混合感染)：将2天用量于上午8点一次性投药，可提高效果，减轻撤停反应。 B.氨茶碱：将2天用量于晚间8点一次性投药。 C.扑尔敏、盐酸苯海拉明：将1天用量于晚间9点一次性投药 D.蛋鸡补钙(葡萄糖酸钙、乳酸钙)：早晨6点补钙疗效最佳。 4、需喂料时给药的药物有：脂溶性维生素(VD、VA、VE、VK1、VK2)、红霉素等。 5、关于中药： A.治疗肺部感染、支气管炎、心包炎、肝周炎、宜早晨料前一次投喂。 B.治疗肠道疾病、输卵管炎、卵黄性腹膜炎时，宜晚间料后一次投喂 关于给药次数 浓度依赖型杀菌药物(氨基糖甙类、喹诺酮类)，其杀菌主要取决于药物浓度而不是用药次数，以2MBC(最低杀菌浓度，可以理解为通常使用效量的2倍)一日只需给药一次，有利于迅速达到有效血药浓度，缩短达峰时间，既可以提高疗效，又可以减少不良反应，否则即使一天给药10次，也不能达到治疗目的。抑菌药(如红霉素、林可霉素、磺胺喹恶林钠等)的作用，在达到MIC(最低抑菌浓度)时，主要取决于必要的用药次数，次数不足，即使10倍MIC，也
鸭传染性浆膜炎与鸭大肠杆菌病鉴别诊断 1、病原：浆膜炎―鸭疫里默氏菌（血液内生长、繁殖，主要经呼吸道传播。）大肠杆菌病―致病性大肠杆菌（肠道内的常在菌，主要经呼吸道传播。） 2、症状：浆膜炎―头颈歪斜、步态不稳和共济失调、瘫鸭（35日龄后较少发病）。大肠杆菌病―无上述特征（不同型号具有不同症状）。 3、病理变化：浆膜炎―最明显的剖检病变为脑膜炎，脾脏肿大、呈班驳样（大理石病变）。体表局部慢性感染病鸭在屠宰去毛后可见局部肿胀，表面粗糙、颜色发暗，切开后见皮下组织出血，有多量渗出液。 大肠杆菌病―无上述特征病变。 鸭传染性浆膜炎 1、流行特点 1-8周龄的鸭对自然感染均易感，但以2-3周龄的雏鸭最易感，1周龄以下或8周龄以上的鸭极少发病。本病主要经呼吸道或经皮肤感染；不良的环境是促使本病发生和流行的诱因，病死率高低不一，有5%-75%不等。 2、临诊特点 鸭突然发病，1、表现精神沉郁，缩颈，嗜睡，不食或少食；2、眼、鼻流出浆液性分泌物，眼圈周围羽毛污染成“黑眼圈”，有的鼻窦肿胀；3、粪便稀薄呈黄绿色、绿色或白色；4、腿软，不愿走动或行动打晃，运动失调，仰卧呈游泳状，有的脚蹼有伤痕、跗关节肿胀；5、濒死前出现神经症状，头颈震颤，角弓反张，不久抽搐死亡，病程一般为1-3天。6、慢性病例多斜颈，转圈或倒退运动，呼吸困难，病愈鸭对本病有抵抗力，但生长缓慢。 3、病理变化 病变遍及全身浆膜面，最明显的眼观病变是纤维素性渗出物；构成纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎和脑炎等。在渗出物中除纤维素外，尚有少量炎性细胞，主要是单核细胞和异嗜细胞。肝脏肿大、质脆，表面有出血不明显，边缘有坏死灶。脾脏肿大，个别呈红灰色斑驳状。肺充血、出血，有明显坏死灶。 鸭大肠杆菌病 鸭大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌引起的非肠道传染性疾病的总称。雏鸭以急性败血症型为主。大肠杆菌血清型较多，主要有大肠杆菌败血症、腹膜炎、脐炎、输卵管炎、生殖道感染、气囊炎、蜂窝织炎等。 1、流行特点 本病传播较缓慢，呈散发性的较多，多发生于雏鸭，2-6周龄雏鸭发病率可大25%-40%，死亡率为5%-30%，四季都可发生，尤以冬末春初较多见，蛋鸭和种鸭也可发病，常与其他疫病并发，继发混合感染。 2、临诊特点 最急性型不显临诊症状突然死亡。急性型可见精神萎顿呆立，挤堆，羽毛松乱，食欲废绝，饮欲增加，腹泻，排出黄白色或绿白色稀粪，并粘污肛门周围羽毛。多无神经症状，但多有两腿后伸和呼吸困难症状，病程2-4天。 3、剖检特点 主要病变是出血，心冠脂肪、心内腹出血，肝肿大，质脆、出血，胆囊缩小，脾脏肿大，腺胃粘膜出血，肠壁增厚、出血。部分病例可见心肝、气囊被覆有凝乳状、厚而湿润的纤维素性渗出物。
鸭大肠杆菌病 鸭大肠杆菌病是由一种致病性血清型大肠杆菌引起的鸭的一种急性或慢性环境性的传染病。由于感染鸭的日龄、抵抗力、大肠杆菌致病力和感染途径的不同而有许多症状和病变不同的病型。常见的有急性败血症、气囊炎、肠炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、大肠杆菌脑炎和全眼球炎等病型。世界各地都有本病的发生和流行，尤其近十多年来，大肠杆菌病已成为危害养鸭业重要传染病之一。致病性大肠杆菌是本病的病原菌。据报道，致雏鸭本病的大肠杆菌主要有O78、O8、O7、O73、O19、和O45等，在雏鸭主要有O1、O2和O6等血清型。大肠杆菌对外界环境的抵抗力一般，常用消毒剂常用浓度可在数分钟内将它杀死。 流行特点 1、大肠杆菌是外表健康的鸭群肠道中的常在菌，其浓度约为106个/克，其中约有10%-15%是致病性血清型。随粪排出，污染鸭舍内外环境、垫料、饲料、饮水、水槽、种蛋和孵化器等。当鸭群由于气候、疾病或应激因素影响而抵抗力下降时，致病大肠杆菌增强毒力、增殖数量引发疾病，所以大肠杆菌也是一种条件病原菌，此时发病称为内源性发病，或者为其他疫病（如鸭疫里氏杆菌病等）的继发或并发病。 2、各种日龄的鸭都有易感性，但雏鸭易感性更大，尤以2-6周龄为多见，其次是蛋鸭和种鸭。主要以生殖道感染、浆膜炎较为多见。产蛋率下降，有零星死亡。致病性大肠杆菌病一般为泛传性，可以感染多种禽类，但某些病型只为少几个血清型的大肠杆菌所引发。 本病可以通过呼吸道、消化道和眼结膜（污染的空气、灰尘、飞沫）、伤口、污染和带毒的种蛋以及交配(种蛋和种鹅)传染，其中呼吸道传染是条重要的传染途径。在中小型养鸭场（户）鸭群中的本病还可经鸭贩子污染的手、鞋、衣服和鸭篓传播。他们骑着摩托车、带着鸭篓走东场、串西户，进鸭舍看鸭议价。抓鸭的手和装鸭的篓子从来不消毒，也不换鞋和衣服，把病原菌带进（传播）健康鸭场（户）。 3、本病一年四季都可以发生和流行，但以秋、冬季和初春寒冷，天气变化剧烈，鸭舍地面潮湿和育雏舍温度过低都可促进本病的发生和增高发病率。南方地区7-9月份气温过高，热应激大，本病容易发生，比较多发。 主要症状和剖检病变 1、鸭大肠杆菌病常见的有大肠杆菌性脐炎、大肠杆菌性肝炎、脑炎、急性败血症、气囊炎、输卵管炎及卵黄性腹膜炎等病型。 （1）、大肠杆菌性脐性先天性或后天性卵黄囊感染，或者在孵化中死胚，或者出壳雏鸭大肚脐、体表潮湿、脐环发炎，水肿、皮下胶液浸润。病雏衰弱、行动迟缓、呆滞、腹泻、稀粪污染肛周绒毛（建议甩死后，无害处理!）剖检卵黄未吸收。卵黄囊形状不规则，内容物半液状，黄绿或灰绿色。 （2）、大肠杆菌性肝炎和脑炎多见于1-7周龄的各品种的家雏鸭和家养野雏鸭。本型病传播快，数天功夫可传染全群。发病率80%以上，病死率50%以上。 病雏鸭委顿、沉郁、减食或废食，有的有咳嗽和呼吸困难，拉黄绿色水样稀粪，消瘦，出现神经症状后迅速死亡。 剖检见肝稍肿大，呈黄斑驳状，上有充血和出血斑块。胆囊肿大，充满胆汁。脾有的稍肿大、充血；有的有坏死灶。胰腺充血、出血和坏死灶；有的呈液化状。肾条纹状出血。心的近尖部有坏死灶，色灰白。脑壳严重出血、脑膜充血、脑组织充、出血以及灰白色坏死灶。肠道粘膜大多无异常。肺、气囊、气管、喉头粘膜亦多正常。 （3）、大肠杆菌性败血症和呼吸道型大肠杆菌病多见于育雏或育成期间，其临床症状与鸭疫里氏杆菌病（浆膜炎）基本相似，但是缺乏神经症状和眼圈。主要是委顿、沉郁、减食或拒食、腹泻、稀粪灰黄色或黄绿色，呼吸困难。
江西农业大学学报2010，32（1）：0141－0143http：//https://www.doczj.com/doc/ed1744853.html, Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E－mail：ndxb7775@https://www.doczj.com/doc/ed1744853.html, 肠道病原性大肠杆菌 和宿主细胞间的相互作用 李正平，杨倩* （1.南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室，江苏南京210095） 摘要：肠道病原性大肠杆菌（EPEC）属于胞外菌，主要通过粘附在肠上皮细胞上引起宿主的发病。EPEC形成基座、产生粘附和脱落（A/E）损伤的细菌因子、导致宿主信号转导改变的途径及其发病机制的遗传基础都已经得到广泛的研究。对近年来关于EPEC和宿主细胞间的相互作用的研究进展进行总结，并着重论述EPEC对于肠上皮细胞紧密连接的影响。 关键词：肠道病原性大肠杆菌；肠上皮细胞；紧密连接；肠上皮细胞屏障 中图分类号：S852文献标识码：A文章编号：1000－2286（2010）01－0141－03 The Interaction between Enteropathogenic Escherichia coli and Host Cells LI Zheng-ping，YANG Qian* （Key Laboratory of Animal Physiology and Biochemistry，Minstry of Agriculture，Nanjing Agricultural Uni-versity，Nanjing210095，China） Abstract：Enteropathogenic Escherichia coli（EPEC）is an extracellular bacteria，primarily through ad-here to host intestinal epithelial cells caused pathogenesis.EPEC can produce pedestals，and the bacterial fac-tors involved in attaching and effacing（A/E）lesion formation，modulates several signal transduction pathways within the host cells and the genetic basis of EPEC pathogenesis have been widely studied.This review de-scribes the recent studies of enteropathogenic（EPEC）interact with host cells，and intensively discusses the influence of EPEC to tight junctions between cells. Key words：EPEC；intestinal epithelial cells；tight junctions；intestinal epithelial cells barrier 肠道病原性大肠杆菌（EPEC）是引起发展中国家儿童水样腹泻的一个重要原因，目前已对人类的健康构成了一个重大的危害。EPEC虽然是胞外菌，但是可以和肠上皮细胞紧密粘附，产生特征性的粘附和脱落（A/E）损伤［1］，然后影响到上皮细胞的吸收。在体外EPEC也可以粘附宿主上皮细胞导致细胞异常［2］，包括细胞凋亡和与紧密连接损失有关的黏膜屏障的破坏。然而，一项最近的报告提出EPEC 很少在老鼠肠内定植，与致病性相比，EPEC和宿主之间更像是共生的关系［3］。 人和动物主要通过呼吸道、消化道和生殖道与外界接触。这些黏膜表面都覆盖着一层高度极化的上皮细胞，其游离面位于腔面，直接与外界环境相接触；基底面与富含肠相关淋巴样组织的固有层相接；侧面与毗邻的细胞接壤。这层上皮细胞构成了机体与外界的第一道屏障。相邻上皮细胞连接起来的紧密连接可以封闭细胞间隙，阻止管腔物质的自由进出，是上皮细胞选择性通透作用的物质基础。紧密连接也可以用来评价黏膜屏障的功能。跨肠上皮渗透的主要途径是细胞旁通路，而紧密连接是细胞旁通 收稿日期：2009－11－27修回日期：2009－01－05 基金项目：国家自然科学基金（30871858）、教育部博士点基金（B200606）和江苏省支撑计划（BE200830155）资助作者简介：李正平（1986－），女，硕士生，主要从事动物免疫和分子免疫学研究，E－mail：lizp1986@https://www.doczj.com/doc/ed1744853.html,；*通讯作者：杨倩，教授，博导，E－mail：zxbyq@https://www.doczj.com/doc/ed1744853.html,。
文献综述题目：禽大肠杆菌病的病原特征及防治措施
禽大肠杆菌病的病原特征及防治措施 摘要:禽大肠杆菌病是家禽最常见的细菌病之一，给养禽业造成了严重的经济损失。禽大肠杆菌病(Avian Colibacillosis)是指部分或全部由禽病源性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escheichia coli,APEC)所引起的局部或全身性感染的疾病。包括大肠杆菌性败血症、大肠杆菌肉芽肿(Hjarre 氏病)、气囊病(慢性呼吸道病，CRD)、禽蜂窝织炎、肿头综台症、腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、全眼球炎、脐炎及卵黄囊感染。大肠杆菌的血清型复杂，仅国内报道的就有80余种之多，对大肠杆菌所引起的疾病并无理想的疫苗来预防，多采用有效的抗生素进行治疗。抗菌药在控制大肠杆菌方面发挥了重要作用，但随着抗菌药物的广泛应用，导致大肠杆菌耐药株的不断增多，耐药机制的不断变迁，特别是大肠杆菌多重交叉耐药株的大量出现，使人医临床和兽医临床对大肠杆菌病的治疗变得十分困难，有时甚至找不到可治之药。大肠杆菌的耐药问题已成为影响人类健康和养殉业发展的重要因素。 关键词：禽大肠杆菌；血清型；抗菌药；耐药株 1 大肠杆菌介绍 1.1大肠杆菌起源 大肠杆菌（Escherichia col i）由德国细菌学家(Theodor Escherich)于1885年发现，可在当初认为E.coli是人和多种动物的肠道内的常驻菌，且分布非常广泛。直到20泄纪中叶，人们逐渐认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物具有很强的致病性，尤其引起幼儿和幼畜、禽的严重腹泻和败血症。大肠杆菌病(Colibacillosis)是指由致病性大肠杆菌(Enteropathogenic E.coli,EPEC)引起多种动物发生不同疾病或病型的统称，包括局部性或全身性大肠杆菌感染、大肠杆菌腹泻、败血症和毒血症等[1-2]。由于肠杆菌病其抗原性复杂，血清型多样，引起动物发生大肠杆菌病的表现形式有所不同，但多发生于幼龄动物，给养殖业造成了严重的损失[3]。 1.2大肠杆菌形态结构 大肠埃希氏菌(Escherichia coli)生物学分类属于细菌域(Bacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、γ一变形菌纲(Gammaproteobacteria)、肠杆菌(EntembactcmIes)、肠杆菌科(Enterobactenaceae)、埃希氏菌属(Escherichla)、大肠杆菌种(E .coli)。大肠杆菌为革兰阴性短杆菌，长约2-3微米，宽约0.6微米，有时似球形，无芽胞，有鞭毛，周身
肠出血性大肠杆菌 肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhage E．Coli，EHEC）是大肠杆菌的一个亚型，EHEC分为157、26、111血清型，主要致病菌株为O157∶H7，可引起感染性腹泻，因能引起人类的出血性肠炎而得名。在1982年一次出血性结肠炎流行中被分离出。 一、生物学特性 大肠杆菌是人和动物肠道中的正常菌群，一般对人无害。它有三种抗原结构，即菌体抗原（又叫O抗原）、包膜抗原（又叫K抗原）和鞭毛抗原（又叫H抗原）。 O抗原是对大肠杆菌进行分型的基础，目前已发现有170多种。其中一些特殊的血清型具有致病性，可引起人类感染性腹泻。引起人类感染性腹泻的大肠杆菌又可被分为5类，即肠致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠聚集性大肠杆菌和肠出血性大肠杆菌。肠出血性大肠杆菌因能引起人类的出血性肠炎而得名。EHEC包括几种血清型，分为157、26、111。分离出的主要致病菌株为O157∶H7。还包括O26H11、O111及无动力的O157菌株O157NM等。目前不断发现其他型菌株与出血性肠炎的关系。 EHEC-O157H7为格兰氏染色阴性的、有动力、两端钝圆的短杆菌。没有芽孢、有周鞭毛，大多数菌株有荚膜。它对热敏感，最适生长温度为37℃，30-42℃时在肉汤中也生长良好，55℃经60分钟可有部分存活，在75℃水中1分钟可被杀死。迟缓发酵山梨醇-麦康凯(SMAC)培养基可作为对O157∶H7之筛选培养基。在SMAC培养基上，O157∶H7菌落无色，而发酵菌株呈粉红色，但有半数EPEC菌株有类似O157∶H7之特性，应注意EPEC与EHEC 之鉴别。大肠埃希杆菌O157∶H7抵抗力较强，耐酸耐低温。在自然界的水中可存活几周甚至几个月，在冰箱内则可长期生存。在酸性果汁（PH为2）中甚至可存活几十天。对氯敏感，在余氯为1mg/l的水中可被杀死。O157∶H7具有含60MD质粒的纤毛，此纤毛能与Henle407细胞粘附。EHEC能产生大量类志贺样毒素(Shiga-Like toxin，简称SLT)。SLT有抗原性，可被志
鸭源致病性大肠杆菌的分离鉴定及致病性观察 摘要:自湖北省荆州市某鸭场送检病料中分离到一株疑似鸭大肠杆菌,经选择性培养基培养?生化试验?PCR鉴定?动物回归试验?药物敏感性试验,确认为鸭大肠杆菌,该菌对多种抗生素具有耐药性,用已分离鉴定的大肠杆菌经腹腔注射途径感染15日龄雏鸭,致病性试验结果显示,经腹腔注射途径感染雏鸭死亡率达100%,引起纤维素性心包炎?肝被膜炎和气囊炎,说明此株大肠杆菌具有强致病性? 关键词:鸭;大肠杆菌;分离鉴定;致病性 The Identification and Pathogenicity of Escherishia coli Isolated from Ducklings Abstract:A suspected E. coli from ducklings was isolated in Jingzhou of Hubei province. After selective culturing, biochemical test, PCR identification, regression test and medicine-resistance test, it was identified to be Escherishia coli from ducklings with high resistance to several antibiotics. Subsequently, some 15 day-old ducklings were infected with the E. coli isolates by lumbar injection for pathogenicity test. The results showed that the mortality of infected ducklings was 100%. In the dead ducks fibrinous pericarditis, glissonities and air sacculitis were also observed. It proved that this E. coli isolate was in high pathogenicity. Key words:Duckling; Escherichia coli; Isolation and Identification; Pathogenicity 鸭大肠杆菌病是影响养鸭场生产效益的主要疾病之一?据文献资料显示[1,2],鸭 大肠杆菌病在我国不同类型的养鸭场中普遍存在,流行广泛,而使用抗生素防治该病,又易产生抗药性,并且从这些报道看,我国分离到的鸭源性大肠杆菌的血清型众多,不同地区差异较大?伴随着规模化养鸭的发展和区域集约化养殖的扩大,加上环境与水源的污染加重,该病的危害日益严重,往往一个场发病,能导致集养区成片流行,而且鸭大肠杆菌病与传染性浆膜炎混合感染较多,症状与病变较相似而不易区分,还具有垂直传播的特点,这都会给养殖户造成重大的经济损失,因此对鸭大肠杆菌病的防治是非常重要的[3,4]? 本研究从湖北荆州五三农场病变特征为纤维素性心包炎和肝周炎的患病的雏鸭脑内分离到1株细菌,进行生化特性试验?药敏试验?细菌16S rRNA序列测定和动物回归试验,鉴定为致病性大肠杆菌,并用已分离鉴定的大肠杆菌经腹腔注射途径感染15日龄雏鸭,观察雏鸭感染后的临床症状?病理变化,进一步了解此分离菌株的病理变化?致病特点,阐明雏鸭感染大肠杆菌后发病特点,为进一步探讨其发病机理和临床防治提供资料? 1材料和方法
一、鸭大肠杆菌病 鸭大肠杆菌病是由一定血清型的致病性大肠杆菌及其毒素引起的一种肠道传染病。一年四季均可发生，每年在多雨、闷热、潮湿季节多发。尤以冬末春初较多见，蛋鸭和种鸭也可发病，常与其他疫病并发，继发混合感染。 鸭子大肠杆菌病发病原因 1.在日常生产中，饲养方式、饮水等会直接影响到家禽的营养状况，喂养饲料和家禽饮水的的不卫生，会导致家禽发病，为大肠杆菌入侵提供条件。 提供条件，同时恶劣的环境容易使大肠杆菌交叉感染。2.有害的环境因素也是引起大肠杆菌感染的主要原因之一。如不及时清理养殖舍，造成空气中氨的含量超过一定浓度，长期接触即会破坏呼吸道黏膜上的纤毛。相对湿度低于25%，既会导致呼吸道黏膜变干，为大肠杆菌进入体内
鸭大肠杆菌病症状 雏鸭发病后，质较弱，闭眼缩颈，腹围较大，常有下痢，因败血症死亡。较大的雏鸭发病后，精神委靡，食欲减退，隅立一旁，缩颈嗜眠，两眼和鼻孔处常附黏性分泌物，有的病鸭排出灰绿色稀便，呼吸困难，常因败血症或体质衰竭、脱水死亡。成年病鸭表现喜卧，不愿走动，站立时，可见腹围膨大下垂，呈企鹅状，触诊腹部有液体波动感，穿刺有腹水流出，对养鸭业危害严重。
鸭大肠杆菌病用什么药? 用于治疗该病的药物有很多，而效果比较好的主要有庆大霉素，阿普霉素，新霉素，黏杆菌素，磷霉素，氧氟沙星，氟哌酸、头孢类药物。 鸭大肠杆菌病的用药方案推荐 方案1： 肌注庆大霉素，2~3mg/公斤，卡那霉素10~15mg/公斤，3次/天，连用3天~5天。 方案2： 氟哌酸按0.01%拌料混饲，连用3天~5天 方案3： 除了以上介绍几种药，恩诺沙星、环丙沙星也有较好的治疗效果。使用方法如下： ①拌料饲喂。可选用以上两种药物中的其中一种，按照70mg/公斤的量，将药放入饲料中，拌料喂患鸭。
养殖与饲料2015年第6期 地区放牧。严格做好检疫和消毒工作， 定期用10%石灰乳或5%漂白粉液对鸭舍、饲养场地、污染物及粪便等进行喷洒消毒。 2）加强饲养管理。在日粮中添加多种维生素和矿物质，以增强机体的免疫力。适度调整鸭群的饲养密度，保持鸭舍通风换气良好， 避免骤冷骤热，以减少各种疫病的诱发因素。 3）制定科学的免疫程序，预防疫病发生。根据当地疫病流行情况，科学制定免疫程序，定期进行免疫接种，预防疫病发生。 4）鸭群发病时，对病鸭及时隔离，同时对病死鸭集中深埋或焚烧作无害化处理。 摘要 从一鸡场患病鸡体内分离出1株鸡致病性大肠杆菌，将分离的菌株扩增、 灭活，制备成油乳剂灭活苗。对灭活苗进行物理性状、安全性、保护力等检验，确认合格后，对鸡场进行免疫，效果良好。该油乳剂灭活苗对本场鸡有较好的保护作用。 关键词 鸡；大肠杆菌；致病性； 灭活苗鸡致病性大肠杆菌油乳剂灭活苗的制备 卫春晓1刘俊玲2 1.河南省济源市动物卫生监督所， 河南济源459000；2.河南省洛阳高新区畜牧兽医防疫检疫中心， 河南洛阳471000收稿日期：2015-04-28 卫春晓，男，1987年生，助理兽医师。 禽大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的急性或慢性传染病。各种禽类均易感， 各个品种、日龄的鸡均可发病。随着养殖场户防疫意识的不断提高，诸如新城疫等病毒性疫病基本得到有效控制。与此同时，细菌性疫病却往往被忽略，特别是大肠杆菌病的发生和流行有越发严重的趋势，给养禽业带来巨大损失，而大肠杆菌的血清型极多，我国已报道的鸡致病性血清型已有50个，且各血清型之间没有或很少有交叉保护， 给疫苗免疫带来一定困难，相比之下，利用本场病死禽制备灭活苗针对性强，能得到较满意效果。 1 材料与方法 1.1 致病菌株 某鸡场病死禽，典型包心、 包肝变化。无菌采取病鸡肝脏，37℃麦康凯琼脂培养基上进行分离培养16h 后，挑取单个紫红色菌落，再次接种于麦康凯琼脂培养基上， 经3次纯化。 1.2菌种鉴定 1）形态特征。对分离到的菌株进行革兰氏染色 镜检。 2）生化试验。对分离到的菌株进行生化试验，包括五糖（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖）发酵试验、M-R/V-P 试验、吲哚试验和三糖铁试验。 3）致病性试验。将分离的菌株用普通肉汤培养基培养24h ，培养物接种于5只成年小白鼠（腹腔注射，0.5mL/只）。同时，另取5只成年小白鼠注射无菌生理盐水作对照，观察菌株对小白鼠的致病性。1.3 大肠杆菌油乳剂灭活疫苗的制备 1）菌株的培养。将分离的菌株接种于普通肉汤，37℃培养24h ，计数板菌落计数，菌液含菌量为1012个/mL ，用灭菌生理盐水菌液做10倍稀释，使含菌量为百个每毫升。 2）水相制备。取上述菌液192mL ，逐级加入甲醛，使甲醛终浓度达到0.4％，37℃灭活48h ，经无菌检查合格后，加入吐温-808mL ，混匀即为水相。 疫病防控71··
大肠菌群的特性 检测大肠菌群的食品卫生意义在于: 1,它可作为粪便污染食品的指标菌.大肠菌群因普遍存在于肠道内,若在食品中能检出大肠菌群,则表明该食品曾直接或间接受到人与温血动物粪便的污染. 2,它可以作为肠道致病菌污染食品的指标菌.食品安全性的主要威胁是肠道致病菌,如沙门氏菌属等.但对食品检验肠道致病菌有一定的困难,特别是当食品中致病菌含量极度少时,往往不能检出.由于大肠菌群在粪便中存在数量较大(108～109个/克),容易检测,与肠道致病菌来源又相同,而且一般条件下在外界环境中生存时间也与主要肠道致病菌相近,故常用来作为肠道致病菌污染食品的指标菌.当食品检出大肠菌群时,肠道致病菌有存在的可能.大肠菌群数值愈高,肠道致病菌存在的可能性就愈大.当然,也有可能没有致病菌存在,因为这两者之间并非一定平行存在. 大肠菌对氯很敏感,在含有0.5～1ppm氯量的水中,很快死亡. 大肠菌群等革兰氏阴性无芽孢杆菌对紫外线最敏感,用15瓦紫外线杀菌灯,距离50cm,照射1分钟,或距离10cm,照射6秒钟,几乎可全部杀死. 大肠菌群在60℃,热死时间为5～30分钟,在70℃,热死时间为<5分钟, 今天翻了周德庆老先生的书，写了大肠杆菌在不同温度下的代时： 10度? ?860min 15度??120min 20度? ?90min 25度? ?40min 35度? ?22min 大肠杆菌生长温度范围7～49.5℃，最适生长温度37℃，最低水分活度0.95，pH4.0～9.0，最高盐度6.5%，致病性大肠杆菌在室温下能生存数周，在土壤和水中可达数月，O157大肠杆菌75℃时，1min即被杀死，但它耐低温。因此说，理论上没有水分的环境，大肠杆菌是不能生存的。在生活中，大肠杆菌无处不在，有时又和水似乎无关。如人们的手上可以被大肠杆菌污染，而幼眼又看不到手上有水，这是因为大肠杆菌一个只有1微米左右，幼眼是看不到的，同样，水也是看不到的。人们看不到的，不等于不存在。 大肠菌群主要包括肠杆菌科中的埃希氏菌属、柠檬酸细菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。这些属的细菌均来自于人和温血动物的肠道，需氧与兼性厌氧。不形成
1．禽流感的病原属 A．副黏病毒B．副嗜血杆菌C．疱疹病毒 D．冠状病毒E．正黏病毒 2．到目前为止，发现的高致病力禽流感毒株均为（）亚型 A．H5和H6B．H5和H7C．H5和H8D．H5和H9E．H7和N7 3．禽流感的传播途径主要是 A．呼吸道B．呼吸道和消化道C．消化道D．各种途径E，垂直传播 4．对禽痘病毒易感性最高的是 A．火鸡B．鸡C．鸽D．驼鸟E．麻雀 2、流行病学：各种禽类均可感染禽痘病毒，家禽中以鸡的易感性最高，不分年龄、性别和品种都可感染。其次是火鸡、鸭、鹅等，但发病较轻；鸵鸟、鸽、麻雀、... 5．黏膜性鸡痘多发生于 A．青年鸡B．幼雏C．中雏D．幼雏和中雏E．产蛋鸡 粘膜型（白喉型 2．此型鸡痘的病变主要在口腔、咽喉和气管等粘膜表面。初期为鼻炎症状，2天～3天后先在粘膜上生成一种黄白色的小结节，稍突起于粘膜表面，以后小结节逐渐增大并互相融合在一起，形成一层黄白色干酪样的假膜，覆盖在粘膜上面，这层假膜是由坏死的粘膜组织和炎性渗出物凝固而形成，很象人的“白喉”，故称白喉型鸡痘为鸡白喉。如果用镊子撕去假膜，则露出红色的溃烂面。随着病的发展，假膜逐渐扩大和增厚，阻塞在口腔和咽喉部分，使病鸡尤以幼雏鸡呼吸和吞咽都受障碍，严重时嘴也无法闭合，病鸡往往张口呼吸，发出“嘎嘎”的声音。病鸡由于采食困难，体重迅速减轻，精神萎靡，最后窒息死亡。此型多发生于小鸡和中鸡，死亡率高，严重时可达50％。 6．可在咽喉部及上部气管处的黏膜表面形成白色假膜的传染病是 A．禽流感B．新城疫C．鸡痘D．传染性支气管炎E．传染性喉气管炎 7．鸡痘的接种途径是 A．饮水B．点眼或滴鼻c．肌肉注射D．气雾E．翼膜刺种 1、免疫接种痘苗，适用于7日龄以上各种年龄的鸡。用时以重量盐水或冷开水稀释10-50倍，用钢笔尖（或大针尖）蘸取疫苗刺种在鸡翅膀内侧无血管处皮下。接种7天左右，刺中部位呈现红肿、起泡，以后逐渐干燥结痂而脱落，可免疫5个月。 8．禽大肠杆菌病在传播途径上主要是 A．消化道B．垂直传播C．皮肤．粘膜D．呼吸道E．伤口 9．禽大肠杆菌病在临床上]最常见的是 A．气囊炎和肝周炎B．关节炎C．急性败血症和卵黄性腹膜炎 D．心包炎和滑膜炎E．脐炎 10．鸡致病性大肠杆菌引起的卵黄性腹膜炎，多见于 A．产蛋初期B．产蛋中期C．产蛋后期D．产蛋中后期E．休产期 卵黄性腹膜炎多见于产蛋中后期，病鸡腹部膨胀，剖检可见腹腔积有大量卵泡，肠道或脏器间相互黏连。 11．在剖解上表现纤维素性心包炎．肝周炎的疾病是 A．大肠杆菌病B．传染性支气管病炎C．沙门氏菌病 D．马立克氏病E．传染性喉气管病炎 12．禽出血性败血症的病原是 A．沙门氏菌B．大肠杆菌C．李氏杆菌D．链球菌E．多杀性巴氏杆菌 13．最急性的禽霍乱多见于流行 A．初期B。中期C．后期D．中后期E．产蛋后期 最急性型 3．常见于流行初期，以产蛋高的鸡最常见。 14．在剖解上肝脏有针尖大小白色坏死灶的疾病是 A．传支B．鸡沙门氏菌病C．禽霍乱D．鸡新城疫E．大肠杆菌病 15．在临床上将鸡白痢沙门氏菌引起的沙门氏菌病称为