常用的组织固定液
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。
甲醛(40%)100 ml
无水磷酸氢二钠6.5 g
磷酸二氢钠 4.0g
蒸馏水900 ml
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多聚甲醛：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
甲醛(40％)100 ml
95％乙醇900 ml
(2)B5(醋酸钠一升汞一甲醛)固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。
无水醋酸钠 1.25 g
升汞 6.0 g
蒸馏水90 ml
使用前加入甲醛10 ml
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
饱和苦味酸水溶液(约1.22%)75 ml
甲醛25 ml
冰醋酸 5 ml
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小
体的固定。
无水乙醇60 ml
氯仿30 ml
冰醋酸10 ml
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。
升汞 5.0 g
重铬酸钾 2.5 g
硫酸钠 1.0g
蒸馏水(加至)100 ml
常用固定液及其配制 固定液分单纯固定液和混合固定液。 1甲醛（formaldehyde） 是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。 10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。 经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。 2 乙醇 无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。 3 中性甲醛液（混合固定液） 甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。 4 AF液（混合固定液） 95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。 此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。 以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。 yzbai wrote: （1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。经自来水冲洗6~24小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。 （2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。固定的时间不宜太长，以24小时以内为宜，适用于免疫组织化学染色。
环境监测技术理论考试试卷（模拟卷）及答案 一、填空题（20个空格×0.5分=10分） 1.在环境空气采样期间，应记录流量、时间、气样温度和压力等参数。 2.钼酸铵分光光度法测定水中总磷时，如显色时室温低于13o C，可在20o C-30o C水浴中显色 15 min. 3.应用分光光度法进行试样测定时，选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，吸光度值在 0.1-0.7 范围，测定误差相对较小。理论上，吸光度值是0.434时，浓度测量的相对标准偏差最小。 4.在气相色谱中，保留值实际上反映的是组分和固定相分子间的相互作用力。 5.在地表水采样断面同一条垂线上，水深5m-10m时，设2个采样点，即水面下0.5 m处和河底上0.5m 处；若水深≤5m时，采样点在水面下0.5m处。 6.环境空气手工监测时，采样仪器临界限流孔流量每月校准1次，流量误差应小于5%。 7.空气动力学当量直径≤100μm 的颗粒物，称为总悬浮颗粒物，简称 TSP ；空气动力学当量直径≤ 10μm 的颗粒物，称为可吸入颗粒物，简称 PM10。 8.大气污染物无组织排放监测，一般在排放源上风向设1个参照点，在下风向最多设4个监控点。 9.GC-MS的进样口对真空要求最高。 10.土壤混合样的采集方法主要有四种，即对角线法、棋盘式法、梅花点法和蛇形法。 11.测量噪声时，要求的气象条件为无雨雪、无雷电天气，风速5m/s。 12.一般情况下，工业企业厂界噪声监测点位应选在法定厂界外1m，高度1.2m以上。监测时，如是稳态噪声， 则采取1min的等效声级。 13.等离子体发射光谱通常由化学火焰、电火花、电弧、激光和各种等离子体光源激发而获得。 14.采集用于监测细菌学指标水样的玻璃瓶，在洗涤干燥后，要在160o C-170o C干热灭菌2h或高压蒸汽121 o C灭菌20min。不能使用加热灭菌的塑料采样瓶应浸泡在0.5%的过氧乙酸中10分钟进行低温灭菌。15.实验室质量体系的内部审核一般每年不少于1次；管理评审每年至少组织1次。
组织固定液 【产品名称】 组织固定液 【包装规格】 货号：DF0111 装规格分别为：500ml、5000ml。 【预期用途】 用于新鲜组织标本的固定。 【检验原理】 固定的目的在于保护细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长，通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。本组织固定液主要由甲醛、磷酸盐组成，该固定液适合于绝大多数组织的固定，属于中性福尔马林固定液，pH接近于中性。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 组织固定液甲醛、磷酸盐 【储存条件及有效期】 5℃～35℃保存，原包装未开封固定液的有效期为24个月，在有效期内的已开封固定液建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 组织尽量新鲜。 【检验方法】 l、一般标本固定时间控制在1～4小时/mm，大标本应适当延长固定时间； 2、固定好的组织，可在10%福尔马林固定液或70%乙醇中长期保存。 【检验方法的局限性】 仅限于病理组织内容物固定。 【注意事项】 l、避免过度延长固定时间，否则引起生物大分子过度交联，取材厚度不同，固定时间也不同。 2、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
3、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 4、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。 5、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。 6、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。 【基本信息】 备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司 住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房
北京吉美生物技术有限公司 Carnoy固定液 产品简介： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。 Jimei Carnoy固定液(Carnoy，s Fluid)又称卡诺氏固定液，主要由乙醇、乙酸等混合而成。适用于一般动物组织和细胞的固定，常用于动植物压片及石蜡切片等，有极快的渗透力，固定最多不超24h。其特点是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。推荐用于RNA和DNA染色的组织固定，亦用于糖原染色的组织固定，能够使糖原呈细微颗粒状。由于该液穿透力强，亦可固定外膜致密不宜渗透的组织。组织固定后暂时不用，可置于70%乙醇中保存。 操作步骤（仅供参考） 1、一般小块组织固定30~40min。稍大块组织2~4h。如果组织块大，可适当延长固 定时间，但不宜超过24h。 注意事项： 1、Carnoy固定液对人体有一定的损害，请小心操作，不宜用于固定脂类染色的组织。 2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10：1。 4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。
安徽雷根生物技术有限公司 https://www.doczj.com/doc/ec6949423.html, 组织固定液说明书 【产品名称】 组织固定液 【包装规格】 货号：DF0111 包装规格分别为：500ml、5000ml。 【预期用途】 用于新鲜组织标本的固定。 【检验原理】 固定的目的在于保护细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长，通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。 固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。本组织固定液主要由甲醛、磷酸盐组成，该固定液适合于绝大多数组织的固定，属于中性福尔马林固定液，pH接近于中性。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 组织固定液甲醛、磷酸盐【储存条件及有效期】 5℃～35℃保存，原包装未开封固定液的有效期为24个月，在有效期内的已开封固定液建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 组织尽量新鲜。 【检验方法】 l、一般标本固定时间控制在1～4小时/mm，大标本应适当延长固定时间； 2、固定好的组织，可在10%福尔马林固定液或70%乙醇中长期保存。 【检验方法的局限性】 仅限于病理组织内容物固定。 【注意事项】 l、避免过度延长固定时间，否则引起生物大分子过度交联，取材厚度不同，固定时间也不同。 2、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。 3、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 4、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。 5、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效 日期见包装。 6、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。 【基本信息】 备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司 住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房
【专题】组织细胞固定的原理、基本要求和注意事项等 在病理学中，组织只有经过固定，才能完成随后的一系列制作过程，直至切片的最后完成。每个医学研究者都能容易地把组织细胞固定起来，但是，要掌握组织固定的原理、过程及其意义是一件十分困难的事，下面我们将逐一阐述。 一、固定的作用组织经一系列的处理后，就必须进行固定，当然有的组织是先固定，再进行处理，然后再固定。固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。二、固定的目的1、能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。固定液可以固定任何蛋白质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为什么呢？除了细
菌参与外，其本身也是很重要的。因为组织离体后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，日常生活中常碰到的肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。 2、保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖原等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。细胞的固有物质，即细胞核、内质网、线粒体、高尔基器、溶酶体、过氧体，细胞骨架，组织液，抗原、糖元等。这些物质，如果不将其及时固定，是很容易丧失的，尤其是溶酶体，很容易受到破坏，因此应特别小心。 3、使组织硬化，便于切块。刚离体的组织，除了胃组织以外，都是柔软的组织，尤其是胃肠道的组织，如果在没有固定时就取材，效果就很差，不是取材不规整，就是厚薄不均，粘膜和肌层很容易分开，因此，要取得规整标致的材料，就必须将组织彻底固定，再行取材。 4、对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散。病理标本、种类繁多，成份复杂，各种病例都有，具有传染性的病种也不少，如结核、肝炎、麻风、性病等等。对于此类标本，应进行彻底的固定后，再行取材，如结核球，固定时间应在3-5天。 5、保存好大体标本。对于有教学任务的医院病理科，除搞好疾病的诊断外，还有收集有价值的大体标本，有些大体标
Bouin固定液 Bouin Fixative Solution 编号名称规格单位 北京华越洋WG07113Bouin固定液250ml，500ml瓶 Bouin固定液说明： Bouin固定液是常用的混合型固定液，其渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，不会使组织变硬变脆。适用于绝大部分组织，特别适用于睾丸活检组织的固定。固定时间一般需要12-24小时。 保存条件：4℃避光保存，有效期半年。 一般固定液固定时的注意事项： (1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。 (2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。 (3)固定的时间要合适： 与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。 经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。 一般固定液具有的特点： (1)迅速渗入组织，杀死原生质。在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。 (2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。 (3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。 (4)使细胞内的成分凝固或沉淀。 (5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。 (6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使组织变硬，具有一定的硬度。 (8)固定以后能起到保存的作用。 (9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。 华越洋Bouin固定液其他相关固定液： 通用组织细胞固定液 Champy固定液 Helly固定液 AAF固定液 Bouin固定液 戊二醛固定液 Zetterqvist固定液 B-5固定液 Bouin固定液 Dafano固定液 Gendre固定液 Methacarn固定液 A-F固定液
动物组织各种固定液及优缺点 编 号 类别名字配方优缺点或备注 甲醛：从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂类物质.5. 成本较低. 缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可产生福尔马林色素,影响观察.4. 不能固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,临床活检不用.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。 1 10%缓冲福尔马林固 定液甲醛100ml 蒸馏水900ml NaH2PO44g Na2HPO4 6.5g 该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固 定较好,损伤较少,因对其后的各方面研究都较 好,尤其是对免疫组化的染色. 2 10%福尔马林固定液甲醛100 ml 自来水900ml 这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携带的固定液，但由于它的单一性，因此，只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。 3 10%福尔马林盐固定 液甲醛100ml 自来水900ml Nacl 9克 先将Nacl溶于水，再加入甲醛。这也是一种 较为简单的固定液，但由于加入Nacl，它是 一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染 色，增加染色的强度 4 Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液 75ml 甲醛 2 ml 冰醋酸 5 ml 该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用。而甲醛对组织有收缩作用。两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用。使组织固定达到优良的固定水平 5 醛糖钙固定液甲醛100ml 蔗糖300ml 乙酸钙20g 蒸镏水90ml 先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。 酒精：优点：1、可保存尿酸结晶和糖原等物质。2、能在任何比例的情况下与水混合，如组织的脱水，切片染色前后都离不开酒精，通常都用95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等不同的浓度来使用。 3、可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。常规活检等切片上的石蜡必须除去，才能进行染色，能除去石蜡的物质有苯及汽油等，因此称它为桥梁试剂。 4、能除去切片上的水份，使切片无水化。切片经染色后，到无水酒精中已完全无水，这样处理对于切片的保存是有好处的，否则，切片将会褪色。5，可与其它试剂配成多种的混合固定液，加快固定，它的缺点是：1、可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡切片。2、对组织收缩较大，不宜作单纯固定液。3、渗透力不强。当用酒精固定组织时，组织表面很快就被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透，造成了中间组织固定不佳的现象。4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡经酒精固定的组织，核的染色都不好。 5、可脱去切片上已着染的各种颜色，切片经染色后，一是必须洗去多余的染液，二是必须脱去切片上的水。在用酒精洗切片时，必须仔细地掌握显微镜下观察，还要掌握酒精的浓度，低浓底的酒精脱色力强，稍不注意，便可脱去切片上大部分的颜色。切片脱水时，要较快地通过低浓度的酒精，以免使已着染的颜色被脱去。
几种细胞固定方法 选择最佳固定液标准是： （1）最好地保持细胞和组织的形态结构； （2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的； （3）不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液，会使上皮细胞产生非特异性荧光； （4）固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。 单纯固定液 （1）4%中性甲醛固定液： 最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。 （2）乙醇固定液： 使用时以80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，假如用于证实尿酸结晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定组织。 （3）4%多聚甲醛固定液： 主要用于培养细胞的固定。 混合固定液 （1）乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液： 适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。 （2）B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液： 多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。 （3）Bouin固定液： 非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。 （4）Carnoy固定液： 穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，非凡适用于固定外膜致密的组织，也适用于糖原及尼氏小体的固定。 （5） Zenker固定液： 经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清楚，但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。
Carnoy固定液使用说明 货号：G2312 规格：100ml/500ml 保存：RT避光，有效期1年。 产品简介： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。Carnoy固定液(Carnoy's Fluid)又称卡诺氏固定液，主要由乙醇、乙酸等混合而成。适用于一般动植物组织和细胞的固定，常用于动植物压片及石蜡切片等，有极快的渗透力，固定最多不超24h。其特点是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。推荐用于RNA和DNA染色的组织固定，亦可用于糖原染色的组织固定，能够使糖原呈细微颗粒状。由于该液穿透力强，亦可固定外膜致密不宜渗透的组织。组织固定后暂时不用，可置于70%乙醇中保存。 操作步骤(仅供参考)： 一般小块组织固定30～40min。稍大块组织2～4h。如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h。 注意事项： 1、Carnoy固定液对人体有一定的损害，请小心操作。不宜用于固定脂类染色的组织。 2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。 一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较
Gendre固定液 Gendre Fixative Solution 编号名称规格单位 北京华越洋WG03593Gendre固定液100ml，500ml瓶 Gendre固定液用途： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。 Gendre固定液(Gendre Fixative Solution)类似于Bouin's固定液，主要由PA、甲醛、乙醇、乙酸混合而成，PA可沉淀蛋白引起组织收缩，但不会使组织硬化，其与甲醛和乙酸混合后，穿透度加快，固定均匀，组织收缩轻微，对细胞的微细结构显示的很清晰，为一种良好的固定液。该固定液主要用于保存糖原，保存的糖原呈粗大颗粒状，小块组织细胞固定数小时至过夜后直接转入95%的乙醇脱水，其缺点是易把糖原推向细胞的一端，造成人为的“极化现象”。 Gendre固定液固定时的注意事项： 1、Gendre Fixative Solution对人体有一定的损害，请在通风好的环境下小心操作，避免吸入。 2、2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同，对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。常规活检组织比较适合的厚度为2~4mm，一般不超过6mm。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10：1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1~3次固定液。 4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 Gendre固定液固定的条件： 1、一般需固定4h至整夜。如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h。 2、固定后，组织可稍微流水冲洗或不冲洗直接转入70%的乙醇脱水，经乙醇脱水时可除去大部分PA，组织留有一点黄色，对染色也无影响。 Gendre固定液保存条件：RT,避光。有效期半年。
从大体标本上切除适量的组织材料进行研究就是取材。取材不仅在免疫组化而且在常规病理检查中也十分重要。用于免疫组化的组织一般取材大小为1．OcmXl．OcmX0．2cra。取材时应剔除脂肪和钙化，否则会影响切片，出现假阳性或假阴性结果。 组织标本包括动物标本、手术活检标本、尸体解剖标本及细胞标本等，有关各种标本的取材方法分述如下。 一、动物的致死法及取材 (一)致死法 (1)空气栓塞法向动物静脉注入一定量的空气，使动物很快死亡。一般适用大动物，例如兔、犬、猫等动物。 (2)麻醉法可将浸有乙醚或氯仿(三氯甲烷)的棉球连同动物一起放人密闭容器进行麻醉，也可用4％戊巴比妥作静脉注射，或用20％氨基甲酸乙酯做腹腔注射。适用于鼠等小动物。 (3)断头法用剪刀剪去动物的头部，待血液流出后立即取材。适用于小动物。 (4)去头法用重物猛击头后部或将动物头后部猛撞桌沿。 (5)股动脉放血法动物麻醉后，切开股动脉放血致死。 (二)取材注意事项 (1)最好在动物心脏还在跳动时立即取材，并迅速投入环保组织固定液。脏器的上皮组织易变质，争取在死后半小时取材完毕，否则免疫组化染色时会产生背景染色。 (2)切取组织使用的刀、剪要求锋利，避免来回挫动组织。因动物组织质脆，因此夹取组织时切勿用力过重，以免挤压损伤组织。 二、尸体解剖的取材 尸体解剖的取材应根据实际需要进行，一般取材部位和数量如下。 (1)心和大血管右心室一块，左心室一块，主动脉一块，取材部位可在距主动脉瓣5cm处。 (2)肺右下叶一块，切成正方形；左下叶一块，可切成长方形。 (3)肝右叶一块，切成正方形；左叶一块，切成长方形。 (3)脾一块。 (4)胰一块。 (6)肾两肾各一块，包括皮质、髓质和肾盂。右肾一块切成正方形，左肾一块切成长 (7)膀胱一块。 (8)肾上腺左、右各取一块。 (9)消化道食管一块，胃窦部一块，小肠一块，淋巴结一块，直肠一块。 (10)骨脊椎骨一块。 (11)胸腺一块。 (12)子宫宫颈和宫体数块。 (13)睾丸或卵巢各一块。 (14)脑左侧运动区一块，左侧豆状核一块，小脑一块。 (15)脑下垂体一块，前叶或包括前后叶。 如有较严重或复杂病变时应适当增加取材数量，以便彻底检查而作出正确诊断。 三、活检标本的取材 (一)常规活检标本的取材 应注意病变的部位、形状、大小、颜色以及与周围组织的界限，有无完整的包膜。取材时应取病变部位、病变的切缘、病变与正常组织交界处以及远离病灶的正常组织。取材用的刀剪
环保组织固定液(浓缩型) 简介： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。 Leagene 环保组织固定液(浓缩型)主要环保型组织固定液以植物多糖和聚乙烯醇为主要原料配制，不含甲醛等有害物质，属于无毒环保型固定液，加入3体积95%的乙醇后使用。对于常规石蜡切片固定后形态结构清晰、背景对比度高。在免疫组化、分子病理技术等领域，效果优于甲醛类固定液，多数抗体无需抗原修复处理，可减少因固定产生的假阳性现象。固定标本的组织形态学与甲醛固定相同，组织细胞结构清晰，无空泡化和核固缩等缺陷。 Leagene 环保组织固定液的优点是为无色、无刺激性和无毒性挥发成分，不含甲醛。该固定液可全面替代甲醛成为病理组织细胞实验室的常规组织细胞固定液，最大限度地减少了对病理科和外科等相关人员的健康危害和环境污染，主要用于病理组织学常规制片染色、传统组织细胞化学染色、免疫组织细胞化学和原位分子杂交等其它分子病理学新技术。 该固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定，是免疫组织化学和培养细胞固定中最常用的固定液之一，它能较好的保护组织和细胞的形态结构以及核酸。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 按实验具体要求操作，一般应加入3体积95%的乙醇后使用。 2、 一般标本固定时间控制在1～4h/mm 。 3、 大标本应适当延长固定时间。 4、 固定好的组织，可在福尔马林固定液(10%)或70%乙醇中长期保存。 注意事项： 1、 一经开启，储存过久固定效果易下降。 2、 避免过度延长固定时间，否则引起生物大分子过度交联。取材厚度不同，固定时间也不同。 3、 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。 编号 名称 DF0106 DF0106 Storage 环保组织固定液(即用型) 500ml 5L RT 使用说明书 1份
Bouin固定液 Bouin氏液是组织化学中最常用的混合型固定液之一，由苦味酸饱和液（1.22%）、甲醛和冰醋酸按15:5:1的比例混合而成。此固定液对大多数组织固定效果良好。 它具有下列特点： 1.其渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，染色效果好。 2.适用范围广，特别适合于富含结缔组织的标本和胚胎标本。能够软化皮肤角质，并可以用于植物组织的固定。 3.因为本产品含有苦味酸，会溶解火棉胶，所以如果用于火棉胶包埋，必须进行洗脱苦味酸处理。标本尺寸不可太大，一般窄边不大于5 mm。 使用方法：1.标本修块，厚度一般不超过5 mm，置入本产品内固定8 ~ 24 h（根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异）。 2固定后用70%-80%乙醇洗涤。 Bouin氏液是常用的混合固定液配方： 苦味酸饱和液（1.22%）75ml 福尔马林25ml 冰醋酸5ml Bouin固定液使用方法 1.标本修块，厚度一般不超过5 mm，置入本产品内固定8 ~ 24 h（根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异）。 2.固定后用70%-80%乙醇洗涤。 Bouin固定液关联产品 Zenker固定液；Helly固定液； Carnoy固定液；Karnovsky固定液 此液一般在临床用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。没有很好的固定就无法染色，所以，一种好的固定液是细胞观察的重点。 当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。从免疫组织化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测，据多人认为，它对lgA ，lgM，J链，K链和λ链的标记效果较好，且背景清晰。但美中不足的是：经它固定的组织，可与蛋白形成醛交
Carnoy固定液 Carnoy Fixative Solution 编号名称规格单位 北京华越洋WG04553Carnoy固定液100ml，500ml瓶 Carnoy固定液用途： Carnoy氏液是由乙醇，氯仿和乙酸按6:3:1的比例混合而来的混合型固定液。该液渗透快速，固定只需1-2小时。固定后可以直接用95%乙醇脱水，固定核酸和糖原的效果最好，常用于组织化学。 保存条件：RT，避光保存，有效期一年。 Carnoy固定液固定时的注意事项： (1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。 (2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。 (3)固定的时间要合适： 与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。 经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。 Carnoy固定液固定的条件： (1)迅速渗入组织，杀死原生质。在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。 (2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。 (3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。 (4)使细胞内的成分凝固或沉淀。 (5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。 (6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使组织变硬，具有一定的硬度。 (8)固定以后能起到保存的作用。 (9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。 华越洋Carnoy固定液其他相关固定液： 通用组织细胞固定液 Champy固定液 Helly固定液 AAF固定液 Bouin固定液 戊二醛固定液 Zetterqvist固定液 Carnoy固定液 Brasil固定液 Dafano固定液 Gendre固定液 Methacarn固定液 A-F固定液
一些固定液及方法介绍 前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4?2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m 配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1N NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin's液及改良Bouin's液 试剂：饱和苦味酸 40%甲醛250ml 冰醋酸50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良Bouin's液即不加冰醋酸。 该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3～3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的长期保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。 4．Zamboni's(Stefanini's)液 试剂：多聚甲醛20g 饱和苦味酸150ml Karasson-Schwlt's PB至1000ml 配制方法：称取多聚甲醛20g，加入饱和苦味酸150ml，加热至60℃左右，持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后，加Karasson-Schwlt's PB至1000ml充分混合（Karasson –Schwlt's磷酸缓冲液的配制配制方法见后）。 该固定液适于电镜免疫细胞化学，对超微结构的保存较纯甲醛为优，也适于光镜免疫细胞化学研究，为实验室常用固定剂之一。我们在应用中，常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸，以增加其
Kleinenberg's（克来宁堡氏）固定液 Kleinenberg's Fixative Solution 编号名称规格单位 100ml，500ml瓶 北京华越洋WG06643Kleinenberg's固 定液 Kleinenberg's固定液用途： Kleinenberg's固定液普遍用于鸡胚的固定，也用于许多小型海洋生物的固定。 Kleinenberg's固定液固定时的注意事项： (1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。 (2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。 (3)固定的时间要合适： 与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。 经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。 Kleinenberg's固定液固定的条件： (1)迅速渗入组织，杀死原生质。在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。 (2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。 (3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。 (4)使细胞内的成分凝固或沉淀。 (5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。 (6)增加媒染作用和染色能力。 (7)使组织变硬，具有一定的硬度。
(8)固定以后能起到保存的作用。 (9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。 华越洋Kleinenberg's固定液其他相关固定液： Bouin固定液,Bouin氏固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。 戊二醛固定液 Zetterqvist固定液 组织细胞固定液 AAF固定液：广泛用于动植物组织的固定和各种实验检测,植物固定则是首选.固定液渗透均一,速度很快.固定时间一般为 4~24h.此液处理后,染色结果细腻,但酸性染料着色力下降.本液配制后可以短时间放置. 卡诺氏固定液，CarnoyFluid：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。 Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。 B5固定液：多用于固定淋巴组织。 乙醇-甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。 Schaffer氏甲醛—酒精固定液：此液对固定肥大细胞颗粒及粘液效果良好。 Zamboni固定液：用于免疫组化和免疫电镜的首选固定液，保存细微结构和抗原特性最好的固定液之一。
缓冲液及组织固定液的配制 1、磷酸盐缓冲液的配制 关于缓冲溶液PB的配制，好多参考书如生物技术实验的后面均附有缓冲溶液的配制配方，可以根据需要配制pH5.7～8.0的磷酸盐缓冲。磷酸盐缓冲液称简PB，加NaCl（氯化钠）的称PBS，加KCl（氯化钾）、NaCl（氯化钠）的称KPBS。S就是指氯化钠的含量，一般为0.85％，即是100ml里面加0.85克，这个时候的PBS的浓度是0.1M的。一般在免疫组化洗涤中采用0.01M的PBS，pH7.0～7.4。我们在实验中直接将0.1M的稀释十倍，即可。最好能现配现用。母液4℃可以保持1～2周，影响不大。 成份 分子量 （MW） 浓度（g/1000mL） 0.01M PBS①0.1M PBS0.1M PB Na2HPO4·12H2O 358.14 2.684 29.009 29.009 NaH2PO4·2H2O 156.01 0.39 2.964 2.964 NaCl 58.44 8.5 8.5~9 / pH值/ 7.4 7.4 7.4 注：①配方来自网上。 2、组织固定液的配制 2.1、4%多聚甲醛-0.1M磷酸缓冲液[1]（pH=7.3）：多聚甲醛40g，置于三角烧瓶中，加入500~800mL 0.1M的磷酸缓冲液（PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）至粉末完全溶解，通常需要滴加少许1N NaOH才能使溶液澄清，最后补足0.1M PB至1000mL，充分混匀。该固定试剂适用于光镜免疫细胞化学研究，因较温和，适用于组织标本的较长期保存。 2.2、10%中性缓冲福尔马林固定液[2]：甲醛溶液（37~40%）100mL，蒸馏水900mL，NaH2PO4（磷酸二氢钠）4g，Na2HPO4（磷酸氢二钠）6.5g，混合摇匀后调pH至7.2~7.4。 2.3、10%福尔马林固定液配制[2]：甲醛溶液（37~40%）100mL，自来水900mL，混合后在溶液中加入碳酸钙使溶液呈中性或偏碱性。 2.4、10%中性甲醛液[3]：甲醛原液100mL，0.01M PBS 1000mL（磷酸缓冲液pH 7.4）。