枯草芽孢杆菌代谢物质的研究进展及其在植病生防中的应用
作者：刘雪， 穆常青， 霍炜洁， 朱昌雄， 郭萍， 田云龙
作者单位：中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所,北京,100081
本文读者也读过(10条)
1.杜立新.冯书亮.曹克强.王容燕.王金耀.曹伟平枯草芽孢杆菌在植物病害生物防治上的应用与研究进展[会议论文]-2004
2.冯书亮.王容燕.张用梅.林开春.李芳枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)杀菌剂的研究进展[会议论文]-2003
3.胡洪涛.王开梅.杨自文.陈伟枯草芽孢杆菌防治植物病害作用机理及其在植病生防中的应用[会议论文]-2005
4.黄海婵.裘娟萍枯草芽孢杆菌防治植物病害的研究进展[期刊论文]-浙江农业科学2005(3)
5.张彦杰.罗俊彩.武燕萍.杨合同.Yan-jie Zhang.Jun-cai Luo.Yan-ping Wu.He-tong Yang生防枯草芽孢杆菌研究进展[期刊论文]-生命科学仪器2009,7(4)
6.姜莉莉.陈彦闯.辛明秀枯草芽孢杆菌在防治植物病害上的应用及研究进展[期刊论文]-安徽农学通报
2009,15(7)
7.李晶.杨谦生防枯草芽孢杆菌的研究进展[期刊论文]-安徽农业科学2008,36(1)
8.赵达.傅俊范.裘季燕.刘伟成枯草芽孢杆菌在植病生防中的作用机制与应用[期刊论文]-辽宁农业科学2007(1)
9.黄曦.许兰兰.黄荣韶.黄庶识.Huang Xi.Xu Lanlan.Huang Rongshao.Huang Shushi枯草芽孢杆菌在抑制植物病原菌中的研究进展[期刊论文]-生物技术通报2010(1)
10.罗楚平.陈志谊.刘永锋.刘邮洲.LUO Chu-ping.CHEN Zhi-yi.LIU Yong-feng.LIU You-zhou利用基因工程改良枯草芽孢杆菌[期刊论文]-江苏农业学报2008,24(2)
本文链接：https://www.doczj.com/doc/e79011851.html,/Conference_6239701.aspx
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/e79011851.html, 枯草芽孢杆菌在农业领域的应用研究进展 作者：张洁朱仁胜王春芳千淋兆冯梦喜许鹏 来源：《现代农业科技》2019年第13期 摘要 ; ;本文綜述了近年来枯草芽孢杆菌在农业中的应用研究进展，包括提高作物抗性、促进作物生长、改良土壤、改良作物品质等方面内容，以期为枯草芽孢杆菌未来在农业上的应用提供一定的参考。 关键词 ; ;枯草芽孢杆菌;作物生长;土壤改良 中图分类号 ; ;S154.3 ; ; ; ;文献标识码 ; ;A 文章编号 ; 1007-5739（2019）13-0163- 01 ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; 开放科学（资源服务）标识码（OSID） 枯草芽孢杆菌是一种植物根际促生细菌，于1872年由Cohn正式命名[1]，其广泛存在于 自然界中，便于筛选分离，其所需营养成分简单、生长繁殖速度快、适应性及抗逆性极强，利于大量培养。枯草芽孢杆菌能够分泌多种蛋白类和激素类活性物质，天然无毒害，是一种高效、经济、环保的微生物“工具”。近年来，枯草芽孢杆菌在提高作物抗性、促进作物生长、改良土壤、改良作物品质4个方面的研究不断深入，笔者对此进行了综述。 1 ; ;提高作物抗性 枯草芽孢杆菌通过降低作物病害、增加作物抗逆境能力以及克服作物连作障碍等3个方面综合提高作物的抗逆性。枯草芽孢杆菌具备定殖能力，可以在作物根、茎、叶内部和土壤中成功定殖，定殖量均可达到104 CFU/g以上的水平[2-3]，从而抢占空间与营养，阻碍病原菌对作物的侵染与伤害。同时，枯草芽孢杆菌在定殖后可以产生抗生素[4]、抗菌蛋白等活性物质使 菌丝发生扭曲、肿胀和变形[5]，进而抑制病原菌的生长，实现对病害的防治。郑小亮[6]通过分级沉淀，获得一种新的抗菌粗蛋白，可使菌丝生长的形态畸形、底端膨大并抑制孢子的萌发，实现对禾谷镰刀菌的抑制。 枯草芽孢杆菌还可以诱导作物在逆境中产生抗性，经枯草芽孢杆菌GB03菌液浸泡处理后的紫花苜蓿种子，发芽势与发芽率均显著提高，株高、根长和生物量在不同盐浓度处理下，均有不同程度提升[7]。尹汉文等[8]研究发现，在1 g/L NaCl胁迫下，添加枯草芽孢杆菌增加了苜蓿株高与叶面积，苜蓿产量较未添加菌剂处理增加18%且在一定程度上提高了苜蓿的耐盐性。
枯草芽孢杆菌，学名Bacillus subtilis，是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌。与大肠杆菌不同，枯草芽孢杆菌没有外层膜，分泌的蛋白能直接释放到培养基中，是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株。那么作为一种潜能巨大的原核表达系统，它究竟强在哪些方面呢？且让AtaGenix为您一一道来。 枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的，收录于FDA的GRAS菌中，欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵。很多常用食品工艺中都能见到它的身影。与大肠杆菌相比，枯草芽孢杆菌的细胞壁组成简单，只含肽聚糖和磷壁酸，在分泌的蛋白质产品中不会混杂有类似革兰氏阴性菌细胞壁成分中的热源性脂多糖（内毒素）等物质。该表达系统用于药用蛋白的表达纯化时还可省掉去除内毒素这一步。 同为原核生物界的明星，虽然大肠杆菌和枯草芽孢杆菌都只需短时间就可表达和积累大量目标蛋白。但大肠杆菌在后续发酵工艺中需要对收集的菌体进行破胞处理，而枯草芽孢杆菌得益于其本身所拥有的一套高效分泌信号肽及分子伴侣系统，只要简单处理发酵上清就能得到较纯的蛋白，并且表达的蛋白在多数情况下具有天然构象和生物活性。 蛋白质组学研究表明，枯草芽孢杆菌中至少有四种蛋白质分泌途径，其中Sec 分泌途径是主要分泌途径。另外枯草芽孢杆菌拥有良好的发酵生产技术，目前大部分商业化的蛋白水解酶和淀粉酶都是由其发酵得到的。AtaGenix拥有的5 L、20 L、150 L及其他型号的发酵罐（上图就是真相），可满足各种大规模发酵的需求。 虽然枯草芽孢杆菌表达外源蛋白潜力无限，但也有其短板，如自身胞外蛋白酶对表达产物的降解、遗传操作相对困难、外源蛋白有时得不到有效的表达等等。但AtaGenix却能成功避免以上问题使外源目标蛋白在枯草芽孢杆菌表达系统中有效表达，这主要得益于以下三个方面的优势： ①丰富的表达宿主
枯草芽孢杆菌研究概况 国内外关于枯草芽孢杆菌的研究与应用已有100多年的历史，早期大部分工作集中在形态观察、分类鉴定、生理机制、功能发掘及防治等方面。近年来，对枯草芽孢杆菌的研究渐进到遗传学与分子生物学领域，研究内容体现在特定功能基因的寻找并克隆到需要的物种中或者通过诱变、基因工程等手段对枯草芽孢杆菌生产菌进行遗传改造等。 2.1国外研究概况 1945年Johnson等报道，枯草芽孢杆菌具有防治植物病害的作用。此后，用枯草芽孢杆菌制备生防制剂防治植物病害的研究成为国内外研究的热点。1980年Papavizas G C报道，枯草芽孢杆菌可以防治水稻等作物的多种土传真菌病害。1992年Hwang等报道，用枯草芽孢杆菌可以防治豌豆的Rhizoctoni根腐病。20世纪90年代后，国外已有多种枯草芽孢杆菌制剂投放市场。美国Agraquest公司用枯草芽孢杆菌(B.subtilis)QST 713菌株和QST 2808菌株分别开发出活菌杀菌剂Serenade TM和Souata AS，已在美国登记使用，叶面施用可防治蔬菜、樱桃、葡萄、葫芦和胡桃的白粉病、霜霉病、疫病、灰霉病等细菌和真菌病害。GBO3(商品名为Kodiak)和MBI 600(商品名为Subtilex)分别由美国Gustafson公司和Microbio Ltd公司开发，根部施用或拌种可防治镰刀菌(Fusarium spp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、链格孢属(Alternaria spp.)和丝核菌属(Rhizoctonia spp.)引起的豆类、麦类、棉花和花生根部病害。2001年Gustafson将解淀粉枯草芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合制成混合生防药剂，称为BioYield。解淀粉枯草芽孢杆菌变种(B.subtilis var.amyloliquefaciens FZB24)作为植物促长剂被Taensa公司商品化生产，商品名Taegro TM。施用于温室或室内栽培树苗、灌木和装饰植物根部，可防治由镰刀菌和丝核菌引起的根腐病和枯萎病。俄罗斯全俄植保所开发了枯草芽孢杆菌可湿性粉剂Alifine-B，可用于防治多种作物真菌(Fusarium，Rhizoctonia，Ascohyta，Colletotrichum，Sclerotinia，Botrytis，etc)病害，田间防效高达60％~95％，增产达25％~35％；另一枯草芽孢杆菌产品Gamair由活菌和代谢物组成，主要防治由Clavibacter michiganense subsp.Michiganense，Erwinia caratovota
枯草芽孢杆菌使用技术 制剂：1000亿活芽孢/克可湿性粉剂毒性：低毒级 枯草芽孢杆菌特点： 1、绿色环保――对人畜微毒、对环境无污染、对作物安全（本剂虽属细菌活体杀菌剂，但不会侵染作物引起病 害，亦不会对作物产生药害） 2、高效广谱――对水稻稻瘟病，西瓜、黄瓜、草莓、番茄等多种作物白粉病、灰霉病，马铃薯晚疫病，大豆、油菜菌核病，瓜类、谷物、三七等作物根腐病等多种真菌性病 害具有优良防效。 3、增产提质――枯草芽孢杆菌还能够分泌促进作物生长的活性物质，使植株叶片浓绿肥厚，提高作物免疫力，增产提质效果显著，发酵过程中产生多种氨基酸，对作物有生 长调节的作用。 枯草芽孢杆菌防治机理 １、竞争作用：通过生物间争夺氧气、营养物质及竞争
排它性，形成局部生物优势种群，防止其它菌侵入；同时争夺周围菌的营养，抑制病原菌生长―起到疫苗的作用。 ２、溶菌作用：枯草芽孢杆菌吸附于病原菌的菌丝上，随着菌丝生长而生长，从而消耗病原菌的营养，使病原菌菌丝发生断裂、解体、细胞质消解，使病原菌失去进一步侵染 能力―起到寄生作用。 3、生物拮抗作用：枯草芽孢杆菌生长过程中能产生细菌素（枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌素）、有机酸、天然脂肽类化合物等，对病原菌抑制其生长或溶解其细胞壁、使细胞穿孔、畸形，最终杀死病原菌，。 ４、杀灭作用诱导作物产生抗病性、促进作物生长，增产提质。据统计，使用枯草芽孢杆菌可有效增产 5.6-20.2%。 枯草芽孢杆菌使用方法 1、稻瘟病、纹枯病、稻曲病。施药方法：水稻孕穗破口期和齐穗期各施药一次。每亩用枯草芽孢杆菌10克均匀 喷雾，喷药药间隔7-12天，
2、枯草芽孢杆菌与咪鲜胺、三环唑、井冈霉素等混用，有明显的相互增效作用。在病害集中、急性暴发时，更能显 示出混用的效果。 枯草芽孢杆菌使用注意事项 1、本品用量少，为减少浪费，兑药时应用小容器将所需用量药剂充分溶解后再倒入喷雾器中，加水至喷雾器最佳 水平线进行喷雾； 2、早上10点前或下午4点后施药，避免阳光直射，杀死芽孢。尤其是4点后用药，夜间潮湿的环境更有利于芽孢 萌发。 3、不能与铜制剂、链霉素等杀菌剂及碱性农药混用； 4、病害初期或发病前施药效果最佳，施药时注意使药 液均匀喷至作物各部位。
枯草芽孢杆菌的发酵学院：化工学院 专业：生物工程 班级：生物10-2 ：霞
摘要 枯草芽孢杆菌是我国农业部允许作为饲料添加剂的15种菌种之一 ,其已被越来越多地制成饲用微生态制剂。因其制剂是无毒、无残留、无污染的“绿色”添加剂，故具有广阔的发展前景，并已在畜牧业、饲料业广泛应用，显示巨大的社会效益和生态效益。通过摇床培养筛选出较适宜于枯草芽孢杆菌发酵的培养基配方，发酵培养基配方确定后，在摇床条件下，通过对温度、初始ｐＨ值、初始接种量、装液量、摇床转速等发酵条件的摸索，确定最佳发酵条件。在摇瓶条件下优化发酵培养基和发酵工艺后，采用发酵罐进行发酵培养，对枯草芽孢杆菌在液体发酵过程中的菌体数量、ｐＨ值、总糖含量和总氮含量四个因素随时间的变化进行了观察。 枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些物质对致病菌或源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道pH值，间接抑制其它致病菌生长。枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体的消化酶类一同发挥作用，能合成维生素 B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体干扰素和巨噬细胞的活性，在饲料中应用广泛。它还可以用来改善水质，应用在污水处理和环境保护中。和其它微生物混合使用，还可以用于生物肥料和土地改良等 关键词：枯草芽孢杆菌生长发酵活菌数
饲用枯草芽孢杆菌研究进展 崔东良 （北京昕大洋科技发展有限公司） 1.枯草芽孢杆菌介绍 枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。好氧菌, 可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚[1]，广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故而得名。 2.枯草芽孢杆菌的益生作用 枯草芽孢杆菌的芽孢经食道进入胃后，能顺利通过胃酸环境到达肠道，在肠道中孢子萌发形成营养细胞，并开始大量繁殖。枯草芽孢杆菌为好氧菌，进入肠道后会消耗游离氧，有利于厌氧微生物乳酸菌和双歧杆菌的生长，从而调节肠道内微生态的菌群平衡，提高机体免疫和抗病能力，减少肠道疾病的发生；枯草芽孢杆菌在肠道内繁殖会分泌淀粉酶和蛋白酶，和消化道内的消化酶一起发挥作用，帮助对营养物质的消化和吸收；其产生的维生素、氨基酸、短链脂肪酸等物质能增加小肠蠕动速度，改善肠道消化功能[2]。 3.枯草芽孢杆菌的发酵研究 饲用枯草芽孢杆菌的发酵研究的目的是为了获得大量活菌体和抗逆性强的芽孢，发酵研究的重点主要集中在如何用廉价易得的原料通过优化组合得到得高浓度的菌体，没有复杂的代谢调控和次级代谢的研究。目前关于枯草芽孢杆菌的发酵只要有液体发酵和固体发酵两种工艺。 3.1液体深层发酵 深层液体培养目前发酵工业上常用的一种发酵方法。该方法在发酵罐内完成，设备利用率高、产品质量稳定，便于自动控制，已广泛用于食品、化工、环境行业。液态深层培养是当前饲用枯草芽孢杆菌发酵研究的主要方向。周映华[3]等对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了筛选优化，通过单因素试验及正交试验方法，确定了该枯草芽孢杆菌的优化培养基和最适发酵条件，通过发酵罐放大培养获得的菌体数量约为1.58×109 cfu/mL。刘辉[4]等通过正交优化试验对一株枯草芽孢杆菌的发酵培养基进行了优化, 当培养基中2%豆粕液浓度为15g/L、红糖浓度为20g/L、硫酸铵浓度为10g/L时, 在接种量为5%的情况下, 采用此
一、名词解释 生物制品：是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的药品。 GMP: 是英文Good Manufacturing Practice 的缩写，中文的意思是“良好作业规范”，或是“优良制造标准”，是一种特别注重在生产过程中实施对产品质量与卫生安全的自主性管理制度。 疫苗：一切通过注射或黏膜途径接种，可以诱导机体产生针对特定致病原的特异性抗体或细胞免疫，从而使机体获得保护或消灭该致病原能力的生物制品。 抗原：在机体内能刺激免疫系统发生免疫应答，并能诱导机体产生可与其起特异反应的抗体或效应细胞物质。 灭活疫苗：又称死疫苗，是指利用加热或甲醛等理化方法，将人工大量培养的完整的病原微生物杀死，使其丧失感染性和毒性而保持其免疫原性，并结合相应的佐剂而制成的疫苗。 减毒活疫苗：又称弱毒疫苗，是指将微生物的自然强毒株通过物理的、化学的和生物学的方法，连续传代，使其对原宿主丧失致病力或只引起亚临床感染，但仍保持良好的免疫原性、遗传特性，由此制备的疫苗称为减毒活疫苗。 类毒素：细菌外毒素经甲醛作用及加温处理后可以除去毒性而保留其免疫原性。亚单位疫苗：指提取或合成细菌、病毒外壳的特殊蛋白结构及抗原决定簇制成的疫苗。因不是完整病毒而是病毒的一部分物质，故称亚单位疫苗。 基因工程疫苗：也称遗传工程疫苗，是指使用重组DNA技术克隆并表达保护性抗原基因，利用表达的抗原产物或重组体本身制成的疫苗。 抗原提呈细胞：指在免疫应答过程中，能将抗原物质提呈给T细胞的一类辅佐细胞。 免疫佐剂：能非特异地通过物理或化学的方式与抗原结合而增强其特异免疫性的物质。 细菌类疫苗：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应细菌能力的生物制品。 病毒类疫苗：用病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应病毒能力的生物制品。 正常人免疫球蛋白：又称丙种球蛋白或多价免疫球蛋白，是采用低温乙醇蛋白分离法或经批准的其他蛋白质分离方法从健康人血浆中分离制得的免疫球蛋白浓缩剂。 特异性免疫球蛋白：是由对某些病原微生物具有高滴度抗体的血浆制备的特异的高效价免疫球蛋白。 细胞因子：是一组由机体的免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的小分子或中等分子量的可溶性蛋白质（多肽）与糖蛋白。 血液制品：由健康人血浆或特异免疫人血浆分离、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分或血细胞组分制品，可用于疾病的诊断、治疗或被动免疫预防。基因治疗：通过基因转移技术将外源正常基因直接导入患者病变部位的靶细胞，通过控制目的基因的表达、抑制、校正、替代或补偿缺陷或异常基因，从而恢复受体细胞、组织器官的正常生理功能。 集落刺激因子（CSF)：能刺激多能造血干细胞和不同发育阶段的造血干细胞进行增殖分化, 并在半固体培养基中形成相应的集落的细胞因子。 干扰素（IFN）：机体在病毒感染时合成释放的，能干扰病毒DNA或RNA的复制，
枯草芽孢杆菌表达载体 产品信息和说明 2005年11月
目录 1.简介 (3) 2. pHT 载体 (3) 2.1. pHT01载体图谱 (4) 2.2. pHT43载体图谱 (5) 2.3. pHT01衍生物中标签的定位 (5) 3. 实验方案 (6) 4. 参考文献 (6) 5. 订单信息，运输和存储 (6) 本载体系统由德国拜罗伊特大学遗传研究所的沃尔夫冈·舒曼实验室 开发。 仅用于科研！ 本手册由wy135033405翻译百度文库首发任何意见请PM
枯草芽孢杆菌表达载体 通过质粒在枯草芽孢杆菌中高效表达胞内/胞外重组蛋白 1.简介 革兰氏阳性菌因其在农业，医疗和食品生物技术和重组蛋白生产等方面的贡献而广为人知。在所有革兰氏阳性菌中，枯草芽孢杆菌载体因下列原因尤为引人瞩目。（一）无致病性，且一般认为安全的有机体；（二）无明显的密码子偏好性；（三）可直接将功能性胞外蛋白分泌到培养基中（目前，大约60％的市售酶由芽孢杆菌生产）；（四）具备包含转录，翻译，蛋白质折叠、分泌机制，遗传操作和大规模发酵的大信息量机体。 但是下述两个障碍减少了枯草芽孢杆菌的使用：（一）产生一定数目的识别并降解外源蛋白的胞外蛋白酶；（二）载体质粒稳定性。第一个障碍已因蛋白酶缺失株的构建而基本解决。第二个因引入使用θ-复制模式质粒被完全克服，如由天然质粒pAMβ1和pBS72衍生的一些质粒（Jannière等，1990；Titok等，2003）。 最近，基于大肠杆菌 - 枯草杆菌穿梭质粒pMTLBS72的四种不同表达载体的构建和使用展示出全面的结构稳定性，业已出版（Nguyen等，2005）。 两个新的载体pHT01和pHT43允许在细胞质中高水平表达重组蛋白，其中pHT43载体引导重组蛋白到培养基。这两个载体基于强σA-依赖性启动子的枯草杆菌gro E操纵子通过添加lac操纵子改造成为一种高效可控的（IPTG诱导的）启动子。pHT01衍生载体可与8×His 标签（pHT08），链球菌标签（pHT9）或C - Myc的标签（pHT10）相结合。 2. pHT 载体 所有在枯草芽孢杆菌的gro ESL操纵子之前使强启动子与lac操纵子融合的载体都可通过加入IPTG进行诱导。尽管当未添加诱导物时表达组件的背景表达水平很低，还是成功从约1300种诱导因子中筛选出一种来使用bga B报道基因（Phan等，2005）。当分别将htp G 和pbp E基因融合到gro E启动子时，加入IPTG后，表达的重组蛋白可能分别占细胞总蛋白的10%和13%（Phan等，2005）。热纤梭菌的amyQα-淀粉酶和纤维素酶A、B的高水平表达实验证实。该载体还插入了一个高效SD序列以及一个多克隆位点（BamH I, Xba I, Aat II, Sma I）。编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域与pHT01的SD序列融合，构成了pHT43，以此获得分泌的重组蛋白。
植物病害流行学名词解释 1, 植物病害流行：指植物病原物大量传播，在一定的环境下诱发植物群体发病，并且造成严重损失的过程和现象。 2 稳态流行：指在某地区早已存在，年年或经常发生而波动不大的流行状态。 3 突发流行：是指在某地区以前没有，出现不久就迅速蔓延成灾的流行状态。 4 大区流行：指流行过程中自然传播很广的状态。也称泛洲流行或泛域流行。 5 生态学是研究生物与环境之间相互关系及其作用机理的科学。 6 系统理论定义：指相互依赖的若干事结合成的具有特定功能的有机整体。 7 生态系统：一定空间范围内，所有生物与非生物的环境要素通过物质循环和能量流动，相互作用、相互依存的生态学单元。 8 农业生态系统：是在一定地区内，人类利用农业生物与环境之间的相互作用，按社会经济需求进行物质生产的生态系统。 9 植物病害系统定义：指由病原物和寄主植物两个种群通过寄生作用构成的开放的和动态的生态系统。 10 主导因素：在诸多病害流行因素中，往往有一种或几种起主要作用，被称为病害流行的主导因素。 11 垂直体系和水平体系。即系统中存在着特异性的互作或分化性互作，即为垂直体系，另一类无此互作，呈现出抗病性和致病表现的恒定等级，即为水平体系。 侵染链和侵染环 12 侵染链：侵染物体在寄主一个生长季节中，从一个寄主到另一个寄主的一系列传播。 13 已被侵染的寄主称为散布体，将被侵染的植物称为接受体，而侵染链中的各个环节称为侵染环。 14 侵染环，即指由一次侵染到下一次侵染之间各个阶段所组成的一个周期，为侵染链中的一个环节。 15 单年流行病：指在作物一个生长季节中，只要条件适宜，菌量能不断积累、流行成灾的病害。又称多循环病害、复利病害。 16 积年流行病害：指病原物需要经过连续几年的菌量积累，才能流行成灾的病害。又称单循环病害、单利病害。 17 中间型”病害：有许多病害介于上述两类病害之间，或兼有上述两类病害的特点，故称之为中间型号病害，如油菜菌核病、土传丝核菌引起的水稻纹枯、小麦纹枯、玉米纹枯病等。 18 季节流行曲线：是病害在单一生长季节内病害流行动态的形象表示方式，因病原物致病性、品种抗性和环境因素而变。 19 这种先后出现的不同形态结构，流行学上称为状态。 20 速率：在侵染过程中，病原物从一个状态至下一个状态所需的时间的倒数称为发展速率。 21 传播单位：指病原物能被视觉识别和计数的传播和存活的结构。 22侵染单位：当传播单位与适宜的寄主植物部位接触，并给以适当的环境条件，传播单位就变成侵染单位。 23 侵入概率（侵入率）：指病原物传播体在一定条件下能侵入寄主的概率。 24 侵染概率（侵染几率）：指病原物的一个传播体着落于寄主体表后，在一定条件下得以侵染成功，引致发病的概率。 25 一定数量的亲代病情在一日内传播侵染引致子代病情的概率，称为相对侵染概率或病害日传染率。 26 重叠侵染定义：在一个位点上就可以发生多次侵染。
解淀粉芽孢杆菌 【作用机理】 解淀粉芽孢杆菌的作用机理主要包括分泌抗菌物质，产生拮抗作用，营养与空间的竞争，诱导寄主产生抗性和促进植物生长等。 1、分泌抗菌物质：产生低分子量抗生素以及抗菌蛋白或多肽等活性物质，抑制植物病原菌，并且可作为根围细菌促进植物生长。通过非核糖体途径合成分子量小热稳定性好、含有D-氨基酸、耐受蛋白酶水解以及有机溶剂作用的脂肽类抗生素，在生物防治应用中对植物病原细菌、真菌、病毒、线虫的抑制起到主要作用。 2、拮抗作用：微生物通过同化作用产生抗菌物质抑制有害病原物的生长或发展或直接杀灭病原物。与病原菌直接作用。除了产生抗菌素等次级代谢产物外，还会产生一系列对病原菌抑制起到重要作用的胞外水解酶。 3、营养和空间的竞争：可以迅速地抢占果蔬伤口的营养空间生长存活并大量繁殖，并尽可能快地消耗掉伤口营养，使得病原菌得不到合适的营养与空间条件而不能繁殖从而抑制病害的发生。 4、诱导寄主产生抗性：植物组织在遭受机械损伤或者病原菌浸染时，体内会自发产生一系列生理生化反应来抵抗这些因素对自身的伤害。解淀粉芽孢杆菌可以诱导植物这种自然防御机能。 5、促进植物生长：解淀粉芽孢杆菌可以产生赤霉素、吲哚乙酸、细胞分裂素等多种生理活性物质和氨基酸类物质，促进植物根系及植株生长，增强植物抗病性，从而间接地减少病害发生。 【主要功效】 1、抗病抑菌广谱高效：经试验证明，本品对番茄叶霉病菌、早疫病菌、灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、炭疽病菌、甜瓜枯萎病菌、辣椒晚疫病菌、小麦、水稻纹枯病菌、玉米小斑病菌、大豆根腐病菌等土传病害具有显着防效。 2、抗逆防衰促进生长：解淀粉芽孢杆菌能诱导作物产生超氧化物歧化酶（SOD），加多酚氧化酶（PPO），过氧化物酶（POD）等，提高作物抗逆性；能诱导植物快速分泌内源生长素，促进作物快速生根，提高根系发育能力，促进植物健壮生长。 3、改良土壤增进肥力：解淀粉芽孢杆菌可改善作物根际微生态，活化土壤中难溶的磷、钾等潜在养分，改良土壤，疏松板结，遏制土壤退化，提高土壤肥力。 4、降低农残优质增产：解淀粉芽孢杆菌可降解土壤及果实中的残留农药，减少亚硝酸盐含量，提高果蔬维生素和糖含量，改善农产品品质，提高作物产量，易贮藏运输。提高并延长肥效、减少化学肥料的用量。
毕业设计(论文)课题名称枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究 2014 年5 月15 日
目录 摘要 (2) Abstract (3) 1 前言 (4) 2 材料与方法 (7) 2.1 实验试剂与材料 (7) 2.2 主要仪器与设备 (7) 2.3 试验方法 (8) 3 结果与分析 (8) 3.1枯草芽孢杆菌的标准曲 (9) 3.2单因素试验结果 (10) 3.3 正交试验结果分析 ···································错误！未定义书签。 4 结论和讨论 (15) 5参考文献 (16) 6致谢 (17)
枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究 摘要 本文通过单因素实验和正交试验研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的发酵条件（PH、温度、时间、接种量）对枯草芽孢杆菌生长量的影响。本实验的枯草芽孢杆菌在BPG液体培养基上培养，通过单因实验及正交试验得到最佳的发酵培养条件为：初始pH 7.0；温度35℃；时间20h；接种量为5%。在此培养条件下的活菌液量为 3.785×107CFU/ml，相比在LB培养基下培养时的活菌液量3.2×106CFU/ml提高了10倍左右。 关键字：枯草芽孢杆菌；正交试验；生长量
Optimization study of bacillus subtilis culture conditions Abstract In this paper, we study Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) fermentation conditions (PH, temperature, time, quantity of) the impact on the growth of Bacillus subtilis. The experiment of bacillus subtilis in combined cultivated in liquid medium, is obtained by single for experiment and the orthogonal experiment the best fermentation culture conditions as follows: the initial PH 7.0. Temperature 35 ℃; Time 20 h; Inoculation quantity was 5%. Under the condition of the cultivation of the best amount of bacterium fluid is 3.785 x 107 cfu/ml, compared to when cultured in LB medium under the microbial quantity: 3.231 x 107 cfu/ml by about 10 times. Key words: Bacillus subtilis; Culture conditions; increment
生物学教学2019年(第44卷)第2期枯草芽孢杆菌的应用现状概述 闫杨刘月静陈芳！（山东聊城大学药学院聊城252059) 摘要枯草芽孢杆菌属革兰氏阳性菌#其细胞壁较厚，不含内毒素。枯草芽孢杆菌是一种应用广泛的益生菌，具有对环境友好、 对粮食安全、对人体及动植物无危害的优良特点，被广泛应用于动物饲料、净化水质、医药和植物病害的生物防治中。枯草芽孢杆 菌作为益生菌在微生物益生制剂中的应用也已展现出巨大的发展潜力。本文概述枯草芽孢杆菌应用的现状和发展趋势。 关键词枯草芽孢杆菌益生菌水质净化生物防治 芽孢杆菌是人们最早开始接触并研究的益生菌类 群，而枯草芽孢杆菌是其属中比较受关注的一种细菌。枯草芽孢杆菌是一种分布广泛、能生成抗逆性孢子、可 厌氧繁殖的革兰氏阳性菌[1]。枯草芽孢杆菌具有液化 明胶、还原硝酸盐以及水解淀粉的功能[2]，对动植物及 人体均有益无害。研究表明，枯草芽孢杆菌在动物饲 料、水产养殖业及植物病害防治等方面展现了优良的 特性，具有广阔的应用前景。 1枯草芽孢杆菌在动物饲料生产中的应用 枯草芽孢杆菌是动物饲料中常添加的益生菌种，它以芽孢的形式添加于动物饲料中。芽孢是处于休眠 状态的活细胞，能够耐受饲料加工过程中的不良环境，制备成菌剂后稳定且易存储，并且在进人动物肠道后 能够迅速复苏和繁殖。枯草芽孢杆菌在动物肠道中复 苏增殖后就可发挥其益生特性，包括改善动物肠道菌 群、增强机体免疫力以及提供多种动物所需的酶类等[3]，可以弥补动物体内源酶的不足，促进动物的生长 发育，具有显著的益生作用。例如，徐登峰等[4]的研究 表明，在动物饲料中添加枯草芽孢杆菌可以有效抑制 动物肠道中有害病原菌的生长，营造良好的肠道环境，保护了幼兔的肠黏膜，幼兔的腹泻发生率明显下降;赵 效南等[5]的研究表明，在动物饲料中添加的枯草芽孢 杆菌，能够有效调节动物肠道中菌群的种类结构，增加 肠道微生物菌群的多样性，能在抑制动物肠道中有害 菌生长的同时促进有益菌生长，进而达到促进家禽健 康生长的目的;华洵璐等[)]的研究表明，在动物饲料中 添加芽孢杆菌组合制剂后，仔猪对饲料中营养物质的 消化和吸收水平明显提高;赵玉超等[*]的研究表明，在 饲料中添加枯草芽孢杆菌能够显著影响三疣梭子蟹免 疫相关酶的活力，并能有效提高幼年三疣梭子蟹的存 活率。研究表明，在禽类、牲畜和水产动物的饲料中添 加枯草芽孢杆菌，可明显升高饲料的利用率，有效提高 动物的肠道菌群多样性，增强消化机能，有利于提高肉 品质量。 #枯草芽孢杆菌在水质净化中的应用 枯草芽孢杆菌可以作为微生物调节剂，起到改善 水质、抑制有害微生物的作用，能够创造优良的水生生态环境。水产养殖的水体由于长期高密度养殖动物，有大量的饵料残余、动物残骸和粪便沉积等污染物积 累，容易引起水质恶化进而危害养殖动物的健康，甚至 削减产量引起亏损，对水产养殖业的可持续发展危害 巨大。而枯草芽孢杆菌可以定殖在水体中，并通过营 养竞争或空间位点竞争形成优势菌群，抑制有害病原 菌（如弧菌、大肠杆菌）等有害微生物在水体中的生长 繁殖，从而改变水体和底泥中的微生物数量和结构，有 效预防水产动物因水质恶化而引起的疾病。同时，枯 草芽孢杆菌作为一种可以分泌胞外酶的菌种，其分泌 的多种酶类能够有效分解水体有机物，改善水质。例 如，枯草芽孢杆菌产生的活性物质几丁质酶、蛋白酶和 脂肪酶等，可以分解水体中的有机物，降解动物饲料中 的营养素，不但使动物充分吸收和利用饲料中的营养 物质，而且能大大改善水质;枯草芽孢杆菌还能调节养 殖水体的pH值。 $枯草芽孢杆菌在医药生产中的应用 枯草芽孢杆菌分泌的多种胞外酶已应用到许多不 同领域中，其中脂肪酶和丝氨酸纤溶蛋白酶（即纳豆激 酶）被广泛应用于医药行业。脂肪酶具有多种催化能 力，其在动物或人体的消化道中与原本存在的消化酶 类共同发挥作用，使消化道处于健康的平衡状态。纳 豆激酶是纳豆枯草芽孢杆菌分泌的一种丝氨酸蛋白 酶，该酶具有溶解血栓、改善血液循环、软化血管以及 增加血管弹性等作用。 枯草芽孢杆菌制剂能够有效促进成纤维细胞和血 管内皮细胞的增生，加速烧伤创面肉芽增生，对于预防 和治疗烧伤创面感染以及促进烧伤创面愈合具有良好 的作用[-]。早期新生儿常见高胆红素血症，目前临床 上常用蓝光照射治疗，但是黄疸程度重者常需要反复 照射，所需住院时间较长。黄永昌等[9]的研究发现，枯 草芽孢杆菌活菌胶囊的安全性较高、基本无不良反应，且口感较好，在临床上使用枯草芽孢杆菌活菌胶囊加 蓝光照射共同治疗早期新生儿高胆红素血症得到了很 好的效果，而且具有住院时间短、复发率低等特点。此 外，枯草芽孢杆菌的芽孢可作为黏膜佐剂用于疫苗的 制备，能有效刺激动物机体产生特异性的免疫反应。
目录 第一章芽孢杆菌的简要介绍 (1) 第一节芽孢杆菌种类 (1) 第二节芽孢杆菌表达系统发展简史 (2) 第二章枯草芽孢杆菌的转化系统 (3) 第一种方法：电转化 (3) 第二种方法：Spizizen转化 (3) 第三种方法：原生质体法(Takashi) (4) 第四种方法：原生质体转化之二 (4) 第五种转化方法：质粒混合法（BGSC推荐） (5) 第三章芽孢杆菌表达系统发展简史 (6) 第一节芽孢杆菌表达系统的优点（相对于大肠杆菌） (7) 第二节芽孢杆菌的缺点 (7) 第三节助表达系统 (7) 第四节芽孢杆菌基因表达的主要特点 (7) 第四章枯草芽孢杆菌转录翻译系统 (8) 第一节：转录系统 (9) 第二节：翻译系统 (9) 第五章芽孢杆菌常用的宿主和载体 (10) 第六章芽孢杆菌表达系统应用实例 (11) 1 中国 (11) 2 日本 (12) 3 加拿大 (12) 第七章芽孢杆菌其他产品 (13) 第一节核苷类产品 (13) 第二节核黄素 (13) 第三节微生物制剂/益生菌 (13) 第八章结语 (14) 附录一. 芽孢杆菌的相关经典文章 (14) 附录二. 枯草芽孢杆菌相关数据库 (15) 致谢及参考文献 (15)
第一章芽孢杆菌的简要介绍 芽孢杆菌作为一个属，于1872年被首次提出，至今已有一百多年。目前人们对芽孢杆菌的研究几乎涉及到了革兰氏阳性可生孢细菌的各个领域。尤其是在感受态、芽孢形成及其调控、遗传操作、菌种改良、生物技术等领域进行了大量的工作。芽孢杆菌是一个泛泛的概念，而科学研究中应用最多的当属枯草芽孢杆菌，例如168菌株及其大量的衍生菌株。枯草杆菌的研究之所以领先于其他芽孢杆菌的种，主要是由于他的转化、转导方法较完善，以及大量的衍生菌株。 目前应用最多的芽孢杆菌属菌种有枯草芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和耐碱的芽孢杆菌以及病原菌炭疽芽孢杆菌等12种。 第一节芽孢杆菌种类 目前，芽孢杆菌属很多菌株的全基因组序列已经报道，截至2011年10月，在KEGG 上公布全基因组序列的芽孢杆菌属菌种有： 简称菌种名称测序时间测序链接 bsu Bacillus subtilis1997RefSeq bss Bacillus subtilis subsp. spizizenii W232010RefSeq bst Bacillus subtilis subsp. spizizenii TU-B-102011 RefSeq bsn Bacillus subtilis BSn52011RefSeq bha Bacillus halodurans2000RefSeq ban Bacillus anthracis Ames2003RefSeq bar Bacillus anthracis Ames 05812004RefSeq bat Bacillus anthracis Sterne2004 RefSeq bah Bacillus anthracis CDC 6842009 RefSeq bai Bacillus anthracis A02482009 RefSeq bal Bacillus cereus biovar anthracis CI2010RefSeq bce Bacillus cereus ATCC 145792003RefSeq bca Bacillus cereus ATCC 109872004RefSeq bcz Bacillus cereus ZK2004RefSeq bcr Bacillus cereus AH1872008 RefSeq bcb Bacillus cereus B42642008 RefSeq bcu Bacillus cereus AH8202009 RefSeq bcg Bacillus cereus G9******* RefSeq bcq Bacillus cereus Q12009RefSeq
枯草芽孢杆菌常用培养基配方： 1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂 枯草芽孢杆菌原生质体的制备 1 培养枯草芽孢杆菌 取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36℃振荡培养14 h，各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中，36℃振荡培养 3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/mL 青霉素，使其终浓度为0.3 u/mL，继续振荡培养2 h。 2. 收集细胞 各取菌液10 mL，4000 r/min 离心10 min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。如此洗涤两次，将菌体悬浮10 mL SMM 中，每mL 约含108～109 活菌为宜。 3. 总菌数测定 各取菌液0.5 mL，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24 h 后计数。此为未经酶处理的总菌数。 4. 脱壁 二株亲本菌株各取5 mL 菌悬液，加入5 mL 溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100 ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30 min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000 r/min 离心10 min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。 5. 剩余菌数测定 取0.5 mL 上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4 稀释液各0.1 mL，涂布于完全培养基平板上，36℃培养24～48 h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。 计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。
枯草芽孢杆菌在养殖业中的应用研究进展 来源：《浙江畜牧兽医》.-2010，（3）.-7-9 作者：翟继鹏，张金枝阅读次数： 264 枯草芽孢杆菌又称枯草杆菌，为革兰氏阳性需氧菌。菌形为杆状，单个细胞大小(0.7～0.8)μm×(2～3)μm，生长到一定阶段，菌体原生质失水形成椭圆形倒柱状的内生孢子，即芽孢，大小(0.6～0.9)μm×(1. 0～l.5)μm，中生到近中生，对不良环境有很强的抗逆性。进入动物消化道后，在肠道上部再次萌发。我国乃至东亚地区早已有采用枯草芽孢杆菌加工豆豉、纳豆等食物，证明是一种无害菌。 1 枯草芽孢杆菌在养殖业中的作用 1.1 提高畜禽生产性能 陈旭东(2005)、朱五文(2007)、张灵启(2008)等报道，仔猪日粮中添加枯草芽孢杆菌制剂后可明显提高断奶仔猪的生长性能。王振华(2008)报道，泌乳母牛饲喂枯草芽孢杆菌后可明显提高其产奶量，且饲喂的活菌剂量不同，提高幅度也不同；且在提高产奶量的同时，乳蛋白含量也有相应的提高。 对于禽类，潘康成等(2005)研究表明，在肉鸡的基础日粮中添加0.1%枯草芽孢杆菌制剂后，净增重、日增重均有显著提高；采食量和饲料转化率也有明显提高；鸡肉品质及氨基酸组成则有明显改善。 1.2 防治畜禽疾病 据俞宁等(2009)报道，枯草芽孢杆菌可有效防治消化道疾病，可代替抗生素预防仔猪腹泻症。据徐海燕等(2009)报道，饲粮中添加芽孢杆菌有促进雏鸡胸腺、脾脏和法氏囊发育的功能，能显著提高血清中I gG含量，增强动物的抗应激能力。与单一使用枯草芽孢杆菌相比，多菌种配合疗法更为全面、有效。H.K. Herstad等(2010)使用含枯草芽孢杆菌的多菌种混合剂治疗犬急性腹泻，疗效更为显著。 另外，枯草芽孢杆菌还有防治骨质疏松、促进凝血、抗皮肤感染等作用。然而一些学者认为，目前在防治疾病方面，以枯草芽孢杆菌为代表的益生素尚不能完全替代抗生素，需要二者配合使用，效果更为显著。 1.3 净化养殖环境 由于枯草芽孢杆菌有很强的生物同化作用，故可应用于清除畜禽养殖场的粪便恶臭，其代谢产物对蚊蝇的生长繁殖也有抑制作用。采用圈舍喷洒、加入发酵床垫料等途径，可以有效地改善饲养环境。据曾地刚等(2007)报道，采用海藻酸钙包埋固定枯草芽孢杆菌净化对虾养殖水体，可使池水的亚硝酸盐、硫化氢浓度比对照水池明显降低，总碱度显著上升。 另外，畜禽养殖过程中排放的废渣、废水、粪污等污染物也可用枯草芽孢杆菌处理，使其达到无害化
蛋白分泌表达,枯草芽 孢杆菌来表达 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】
枯草芽孢杆菌，学名Bacillus subtilis，是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌。与大肠杆菌不同，枯草芽孢杆菌没有外层膜，分泌的蛋白能直接释放到培养基中，是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株。那么作为一种潜能巨大的原核表达系统，它究竟强在哪些方面呢？且让AtaGenix为您一一道来。 枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的，收录于FDA的GRAS菌中，欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵。很多常用食品工艺中都能见到它的身影。与大肠杆菌相比，枯草芽孢杆菌的细胞壁组成简单，只含肽聚糖和磷壁酸，在分泌的蛋白质产品中不会混杂有类似革兰氏阴性菌细胞壁成分中的热源性脂多糖（内毒素）等物质。该表达系统用于药用蛋白的表达纯化时还可省掉去除内毒素这一步。 同为原核生物界的明星，虽然大肠杆菌和枯草芽孢杆菌都只需短时间就可表达和积累大量目标蛋白。但大肠杆菌在后续发酵工艺中需要对收集的菌体进行破胞处理，而枯草芽孢杆菌得益于其本身所拥有的一套高效分泌信号肽及分子伴侣系统，只要简单处理发酵上清就能得到较纯的蛋白，并且表达的蛋白在多数情况下具有天然构象和生物活性。 蛋白质组学研究表明，枯草芽孢杆菌中至少有四种蛋白质分泌途径，其中Sec 分泌途径是主要分泌途径。另外枯草芽孢杆菌拥有良好的发酵生产技术，目前大部分商业化的蛋白水解酶和淀粉酶都是由其发酵得到的。AtaGenix拥有的 5 L、20 L、150 L及其他型号的发酵罐（上图就是真相），可满足各种大规模发酵的需求。 虽然枯草芽孢杆菌表达外源蛋白潜力无限，但也有其短板，如自身胞外蛋白酶对表达产物的降解、遗传操作相对困难、外源蛋白有时得不到有效的表达等等。但AtaGenix却能成功避免以上问题使外源目标蛋白在枯草芽孢杆菌表达系统中有效表达，这主要得益于以 下三个方面的优势： ①丰富的表达宿主 由于枯草芽孢杆菌没有明显的密码子偏爱性，表达外源蛋白时无需对DNA序列进行优化。在不同宿主中表达时，蛋白表达情况可能有差异。在AtaGenix拥有的多种枯草芽孢杆菌表达宿主中，1012 wild type宿主菌是最常用到的，可作为胞内和胞外表达的通用菌；168 Marburg遗传背景清楚，是研究枯草芽孢杆菌的标准菌株；AS1作为胞内表达的备用菌株，常用于表达外源蛋白。而胞外蛋白酶缺陷菌株WB800N能有效解决由于枯草芽孢杆菌丰 富的蛋白酶导致的蛋白表达产物降解问题。 ②给力的表达载体 大部分的枯草芽孢杆菌不含内源性质粒，并且一般不能识别大肠杆菌中的启动子。最初的枯草芽孢杆菌载体源于金黄色葡萄球菌，其结构不稳定并易丢失。现在普遍使用的质