结核分枝杆菌特异性抗原检测的研究现状及展望
【关键词】分枝杆菌;结核；抗原；检测
结核病的实验室诊断技术主要包括细菌学、免疫学和分子生物学等三大领域的诊断方法。与细菌学和分子生物学技术相比，免疫学诊断技术同时兼具简便、快速、价廉、无需贵重仪器、容易在基层实验室推广等优势，因此，长期以来一直是结核病研究人员重点关注并且坚持不懈努力的研究方向。结核病免疫学诊断分为两个类型：①依据机体对病原菌——结核分枝杆菌（MTB）诱发的免疫应答反应进行检测，又分为体液免疫检测和细胞免疫检测两个方面；②针对病原菌MTB 的特异性抗原进行检测。由于机体受到MTB感染后，体内首先出现的是结核分枝杆菌特异性抗原，并且结核抗原的检测可以作为结核杆菌存在的直接证据，可以避免结核病患者由于免疫应答低下导致的体液免疫检测或细胞免疫检测的“假阴性”，因此检测结核分枝杆菌特异性抗原更有可能发展成为结核病早期、快速、敏感、特异，并且适宜在发展中国家推广应用的新型诊断方法，因而也越来越受到人们的重视。现就结核分枝杆菌特异性抗原检测的研究进展做一综述。
1 结核分枝杆菌特异性抗原检测的技术方法
1.1 凝集试验（Agglutination test）
Krambovitis等［1］于1984年首次报道了胶乳凝集试验（LPT）在结核病诊断的中的应用。作者通过纯化兔抗结核分枝杆菌胞膜抗原免疫球蛋白致敏乳胶颗粒，检测脑脊液（CSF），观测凝集发生与否诊断结核性脑膜炎。Cambiaso 等［2］通过将牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）抗体（Fab'）2 连接乳胶颗粒，对组织液标本中的结核抗原进行检测，较大地提高了检测敏感性。Chandramuki 等［3］应用反向间接血凝试验（RIHG）对结核性脑膜炎CSF中结核抗原检测进行了探索。
1.2 酶联免疫吸附试验（ELISA）
Sada等［4］于1983年首次建立了双抗体夹心ELISA（s ELISA）检测CSF中结核抗原，取得了较为理想的的检测结果。其后国内外众多学者应用不同形式的ELISA 方法对结核分枝杆菌特异性抗原检测进行了探索。与凝集试验相比，ELISA检测结果的敏感性和特异性都有一定的提高。
1.3 免疫斑点法(Dot immunobinding assay, Dot－Iba)
Dot－Iba 是20世纪80年代中期发展起来的固相标记免疫测定技术。其技术原理接近ELISA方法，只是将抗原包被于固相的硝酸纤维素膜上，通过相应的抗体特异性吸附，洗涤，最后应用酶标二抗检测。与ELISA法相比，Dot－Iba操作更为简单，所需试剂少，结果肉眼即可判读，检测结果还可常时间保存，不需特殊设备，易于普及和推广。Sumi 等［5］于1999年应用Dot-Iba 技术对结核性脑膜炎患者CSF 中的结核杆菌抗原进行了研究报道。
1.4 免疫金标技术
(Immunogold labelling techique) 该技术是20世纪80年代中后期发展的一种新型免疫
学标记和检测技术，目前在医学检验中的应用主要是免疫金标层析法（Immunochromatography）和免疫金标渗滤法(Dot-immuogold filtration assay，DIGFA)。免疫金标技术是在Dot－Iba检测原理的基础上进一步发展，但应用胶体金标记替代了酶标记，利用金颗粒具有高电子密度的特性，当标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼即可见红色或粉红色斑点，因而可以用于定性或半定量检测。与ELISA和Dot-Iba技术相比，其操作更为简便、快速，可将常规ELISA检测所需的操作时间由2～4h缩短至5～15min，且检测的敏感性和特异性保持不变。Stavri［6］于2003年首先应用DIGFA技术检测了结核病患者血清和痰液中的结核抗原。
2 结核分枝杆菌特异性靶抗原的选择及特性
2.1 菌体细胞
通过将结核分枝杆菌减毒株H37Ra，或BCG株进行超声破碎，应用抽提物直接免疫动物，获得anti-H37Ra 或anti-BCG血清，用以做为待检抗原的捕获抗体。Sada等［4］首先以ELISA双夹心法检测结核病患者CSF中的BCG抗原，在4例细菌学肯定的结核性脑膜炎，12例临床诊断而无细菌学证据者CSF中，BCG抗原阳性者各为4/4例及9/12例，11例对照组均检测阴性。检测的敏感性为81.25％，特异性为95％。Srivastava等［7］应用Dot-Iba 检测50例结核性脑膜炎患者与48例对照患者CSF中的H37Rv抗原，其敏感性为90.0％，特异性为95.8％，比较了ELISA法检测CSF中抗H37Rv抗体（敏感性为74％，特异性为89.6％）和血清中结核杆菌抗H37Rv抗体（敏感性为50％，特异性为91.67％），结果显示结核抗原检测的敏感性与特异性均高于抗体检测。王宁山等［8］建立了Dot-Iba 方法检测CSF中结核菌体抗原，15例结核性脑膜炎患者不同期42例CSF中38例检测阳性反应。1例患者于发病5d即发现抗原。随后，该作者又用PCR、Dot-Iba、ABC—ELISA法测结核性脑膜炎CSF中结核菌DNA、抗原、结核菌A60抗体［9］。结果显示，PCR和抗原在早期可作为结核性脑膜炎诊断的重要手段，且结核性脑膜炎患者经抗痨治疗后，CSF 中抗原量逐渐下降，直至消失，与治疗有效呈平行关系；特异性抗体检测早期阳性率低于抗原检测，但中晚期稍高，在结核性脑膜炎诊断时可作互补。
2.2 PPD
培养结核分枝杆菌减毒株H37Ra，去除菌体细胞收获培养物滤液蛋白，纯化而成PPD，继而免疫兔子，获得抗血清，其也可做为待检抗原的捕获抗体。Mathai等［10］应用Dot-Iba 技术检测了30例结核性脑膜炎患者与40例对照组患者CSF中的结核PPD抗原，显示检测敏感性为83.3%，特异性为95％。
2.3 LAM(Lipoarabinomanna)抗原
Hunter等［11］在获得LAM 后就证明该抗原存在9 个单克隆抗体结合表位，它在病原体与宿主的相互作用中起着关键作用并深刻影响体液、细胞免疫的发生和发展。很多学者采用LAM抗原检测TB 病人抗体［12～14］，先后证实该抗原检测TB 病人血清有较强的敏感性和特异性。既然大多数结核病患者血清中存在LAM抗体，Sada［15］推测也许患者
血清中存在循环的LAM抗原。作者以LAM抗原免疫兔子，层析纯化到抗LAM血清，建立协同凝集检测技术，检测患者血清标本，结果菌阳活动性结核病检出率为88％（44/50），菌阴结核病检出率为67％（6/9），特异性为100％（126/126）。此后较多的学者对体液中LAM抗原进行追踪研究。特别使人意外的是近几年连续有报道在结核病患者尿液中查到LAM抗原，检测的敏感性为50％～90％，特异性高达87％～100％［16～18］。
2.4 14 KDa 抗原
14 KDa抗原是从MTB培养滤液中分离出来的蛋白抗原，Sumi于1999年应用14KDa 抗原免疫兔子，获得相应抗血清，应用Dot-Iba检测结核病患者CSF中循环抗原获得成功［15］，进一步与PCR技术同步检测结核病脑膜炎患者CSF，结果两者的特异性均为100％（45/45），但免疫学检测14KDa 抗原的敏感性是75.7％（28/37），高于PCR技术的检测敏感性（40.7％, 15/37）［19］。
2.5 31KDa 抗原
31 KDa 抗原又称为ES－31，是在H37Ra培养滤液中分离出来的糖蛋白抗原，具结核分枝杆菌的丝氨酸蛋白酶活性。Bera 等［20］通过对31K Da 抗原免疫山羊，获得相应多克隆抗血清，应用sELISA 检测结核病脑膜炎患者CSF和血清中的31 KDa 抗原，并同步应用间接ELISA检测CSF和血清中相应抗体，结果显示31 KDa 抗原检测的敏感性在CSF和血清中分别为90％（18/20）、80％（16/20）而CSF和血清中相应抗体的检出率分别是85％（17/20）、80％（16/20），研究结果表明检测结核病脑膜炎患者CSF和血清中的31 2.6 Hsp65 抗原属于结核分枝杆菌热休克蛋白（hsp）家族，在结核菌感染人体后，Hsp65会诱导宿主产生较强的体液和细胞免疫反应。Mudaliar 等［21］将待检CSF标本包被在微孔板上，应用Hsp65单克隆抗体特异进行捕获，通过酶联显色检测CSF中Hsp65 抗原，结果显示其检测敏感性为82.5%（66/80），特异性为90％（72/80）。最近Rajan等［22］又进一步应用Hsp65单克隆抗体检测结核病患者血清标本中的Hsp65抗原，检测敏感性为82％，特异性为89％，显示了较好的应用前景。
3 问题与展望
尽管应用免疫学技术检测结核病抗原已有20多年的历史，在检测技术和研究思路都有较大的进展，但仍存在一些问题，主要表现为：①是缺乏高效价的特异性抗体，目前国外虽在近几年已有应用特异性结核抗原免疫动物，并纯化出高效抗体的研究报道，但基本上均属小样本量研究，缺少大标本量的临床评估；②目前结核抗原检测的标本主要集中在脑脊液，对其它含有较高蛋白或细胞成分过多的临床标本，结核抗原的检测要困难的多，如痰、支气管灌洗液（BALF）、胸、腹水标本在进行结核抗原检测前必须经过适当处理；③进入结核病患者体内的特异性结核循环抗原量较低，且在疾病的进展期又可能与相应的抗体在体内结合而形成循环免疫复合物(CIC)，因而使血清中抗原检测的敏感性尤其受到限制。
目前重点关注的研究内容包括：①着重于结核杆菌特异性抗原的结构分析和纯化技术，
将分枝杆菌属内菌体抗原的交叉降低到最低限度，这是结核抗原检测中进行靶特异性抗原选择的基础。国内外学者对此已做了大量工作［23～25］，但仍有待深入继续研究。②进一步发展单克隆抗体制备技术，取得高效价的特异性抗体对提高结核抗原检测的敏感性和特异性至关重要。③加强结核分枝杆菌感染与机体免疫应答的机制研究，重视结核病细胞免疫与体液免疫之间的内在联系；研究结核抗原测定的影响因素以及与结核抗体测定的相互关系，并进而确定结核抗原测定时最佳取材的时机及临床意义。④对测定方法的最佳测定条件，可能的影响因素等进行细致研究，特别注重蛋白质包被和标记技术的研究。⑤对多种特异性靶抗原进行优化组合，进一步提高结核分枝杆菌特异性抗原检测的敏感性和特异性。
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湘雅博爱康复医院 开展医疗新技术新项目申请书项目名称：结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测 申请人：张艳 申请人职称：副主任技师 所在科室：检验科 申请日期：2017.06
医务部印制 说明 1、开展新技术新项目是医院可持续发展的重要建设内容，但新技术新项目的开展需严格执行准入制度，并遵循伦理原则，并具有实用、有效、安全、先进等技术特点。 2、项目各栏请认真填写，如无相关内容，请填写“无”，以确认该栏无需填写相关说明；各栏填写内容较多，可另附页。 3、填写本表，如涉及伦理问题，即视为申请者已提请本院医学伦理委员会针对所申请项目进行伦理审查和评议，可不再另行提交申请表。 4、项目审批过程包括填写申请表、专家预审、医疗技术管理或/和医学伦理委员会讨论，表格填写如存在字迹潦草、内容不完整等，视为废表，将不予预审和讨论。 5、凡未履行准入并填写该申请书的新技术新项目，不得参与医院年度新技术新项目成果奖励的申报。 6、本申请书及其审批结果，是申请项目完成后进行成果申请、鉴定的重要基本支持依据。 8、申请项目获得批准后，根据申请人、申请科室承诺，管理部门有责任对批准项目进行全程追踪管理、进度检查、伦理督查，可根据完成情况给予表彰和奖励。
一、新技术新项目开展的目的及主要内容（简述） 结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测基于免疫层析和胶体金显色技术开发而成的一步法检测。用于体外定性检测人血清、血浆或全血样本中的结核分枝杆菌IgG/IgM抗体。 应用目前国际医学基础研究最新进展及公认的最新抗原片段，采用基因工程制备的结核抗原和胶体金免疫层析技术，在确保灵敏度和特异性的基础上，更加符合《结核病管理办法》的核心要旨：“提高肺结核患者的发现水平”进而实现快速普及和广泛应用于结核病的辅助诊断、鉴别诊断和化疗过程中的动态监测及特殊人群体检筛查等。 二、该技术项目相关的国内外进展（简要说明） 肺结核主要由结核分枝杆菌复合群引起的一种慢性传染病，以肺结核常见，其他器官也可受感染致病。结核病主要通过飞沫传播，传染性强，各类人群易感，接种疫苗是有效的预防方式。结核病的常用诊断方法有痰结核菌检查，影像学诊断，PPD试验，抗体诊断方法是近几年引进的结核辅助诊断方法。 该技术的国内外使用单位综述： 《血清中结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测在肺结核诊断中的应用价值》 江西省胸科医院检验科实验与检验医学2015年8月第33卷第4期 《结核抗体IgG/IgM检测在肺结核诊断中的应用价值》 四川省绵竹市人民医院感染科实用临床医药杂志2016年第20卷第15期 该技术项目的国内外参考文献： 胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体对结核病诊断的应用价值--《中国人兽共患病学报》 现阶段结核抗体检测在我国临床应用的专家共识--《中国防痨杂志》 三、该技术项目的技术原理、先进性、有效性、安全性及应用价值 采用基因工程制备的结核抗原和胶体金免疫层析技术，定性检测血清中的结核分枝杆菌（IgG和IgM）。检测时，样本中的结核抗体可与胶体金标记的抗原形成结核抗体-金标抗原复合物，由于层析作用该复合物沿着试剂条向前移动，经过T1检测线时IgM抗体-金标抗原复合物与膜上包被的小鼠抗人IgM结合而显色，经过T2检测线时IgG抗体-金标抗原复合物与膜上包被的结核抗原结核
` 第三章病例分析——结核病一、概述 1.概念 结核病是结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可侵及多个脏器，以肺部受累形成肺结核最为常见。 痰中带菌者称为传染性肺结核，传染性肺结核病人排菌是结核传播的主要来源，主要为病人与健康人之间经飞沫传播。人体感染结核杆菌后不一定发病，当抵抗力降低时，才会引起发病。 其病理变化为渗出型、增生型、干酪样坏死三种类型。三种病变可以相互转化、交错存在，很少单一病变独立存在，而以某一种改变为主。 2.结核病分型 Ⅰ型：原发型肺结核，多见于儿童，典型病变包括肺部原发灶，引流淋巴管和肺门淋巴结的结核性炎症，三者联合称为原发综合征。多数原发综合征临床症状轻微，不治自愈，很少排菌。 Ⅱ型：血行播散型肺结核，儿童多来源于原发性肺结核；成人多由原发感染灶中的结核菌破溃进入血行引起。本型肺结核发生于免疫力极度低下者。 Ⅲ型：继发型肺结核，为成人与继发性肺结核最常见类型。好发于两肺上叶尖后段或下叶尖段，病灶趋于局限，易于有干酪坏死和空洞形成，排菌较多。 Ⅳ型：结核性胸膜炎：常见胸腔积液，为渗出液，草绿色，淋巴细胞为主，ADA明显升高。 V型：其他肺外结核 二、诊断要点 1.全身症状：发热，多数为长期低热，，可伴有倦怠、乏力、夜间盗汗、食欲减退、体重减轻、妇女月经不调、易激惹、心悸、面颊潮红等。 2.呼吸道症状：咳嗽、咳痰、咯血、胸痛、呼吸困难。 3.体征： 病灶以渗出型病变为主的肺实变且围较广或干酪性肺炎时，叩诊浊音，听诊闻及支气管呼吸音和细湿啰音。 继发型肺结核好发于上叶尖后段，故听诊于肩胛间区闻及细湿啰音，有极大提示诊断价值。 空洞性病变位置浅表而引流支气管通畅时有支气管呼吸音或伴湿啰音；巨大空洞可出现带金属调的空瓮音。 慢性纤维空洞性肺结核的体征有患侧胸廓塌陷、气管和纵隔间向患侧移位、叩诊音浊、听诊呼吸音降低或闻及湿啰音，以及肺气肿征象。 支气管结核有局限性哮鸣音，特别是于呼气或咳嗽末。 4.实验室和辅助检查 1）病原学检查 ①痰涂片抗酸染色直接镜检有助于诊断 ②痰培养具有较高的敏感性和特异性 ③结核菌抗原和抗体检测 2）影像学检查 ① X线胸片 文档Word ` 原发性肺结核典型特征有原发灶、淋巴管炎和肺门或纵隔肿大的淋巴结组成哑铃状病灶。
(一)慢性阻塞性肺疾病 分级：轻度FEV1 ≥80％中度50％≤FEV1＜80％重度30％50％极重度30％ 老年人＋咳、痰、喘=慢性支气管炎 桶状胸＋过清音=肺气肿 老年患者＋咳、痰、喘＋桶状胸＋过清音＋肺功能=COPD 慢性呼吸系统病史＋右心衰体征=肺心病 鉴别诊断：1.支气管哮喘2.支气管扩张 进一步检查：1.肺功能检查2.胸部影像学检查3.血气分析4.痰培养 治疗原则：1.控制性氧疗，避免吸入氧浓度过高引起CO2潴留（2）抗生素：β内酰胺类等（3）支气管舒张剂：抗胆碱药和β2肾上腺素受体激动剂雾化吸入（4）短期静脉使用糖皮质激素 （二）肺炎 青壮年＋受凉＋高热＋湿哆音＋铁锈色样痰=大叶性肺炎 婴幼儿＋咳、喘＋呼吸困难体征（鼻翼扇动＋三凹征）=支气管肺炎 发绀＋鼻扇征（+）、三凹征（+ )＋两肺可闻及喘鸣音及湿罗音＋呼吸快、心率快=左心衰 肝大＋双下肢水肿=右心衰 儿童＋发热+阵发性刺激性咳嗽＋头痛及胸骨下疼痛+关节疼（肺外并发症）=支原体肺炎 鉴别诊断：（1）金黄色葡萄球菌肺炎（2）急性肺脓肿（3）肺癌 进一步检查：（1）X线胸片（2）胸部CT（3）痰培养+药敏试验（4）痰找癌细胞（5）痰找结核杆菌（6）必要时行纤维气管镜检查 治疗原则：1.抗感染使用抗生素2.对症治疗退热、祛痰等 （三）支气管哮喘 青少年＋过敏性鼻炎＋发作性喘憋＋满肺哮鸣音=支气管哮喘 鉴别诊断：1.心源性哮喘2.喘息型慢性支气管炎 进一步检查：1.动脉血气2.胸部X线检查3.肺功能检查 治疗原则：1.吸氧2.可静脉应用糖皮质激素3.支气管舒张剂4.急性发作控制后综合防治 （四）肺癌 中老年人＋吸烟史＋刺激性咳嗽（or痰中带血）＋毛刺（边缘不整齐）=肺癌鉴别诊断：1.肺炎2.慢性支气管炎3.肺结核 进一步检查：1.胸部CT 2.纤维支气管镜及活检3.痰脱落细胞检查，或CEA检测4.腹部B超 治疗原则：1.手术切除2.化疗、放疗配合 （五）呼吸衰竭 老年患者＋慢性呼吸系统病史＋紫绀＋血气=呼吸衰竭 1型呼衰PaO2 < 60 mmHg 2型呼衰PaO2 < 60 mmHg + PaCO2 > 50 mmHg pH < 7 . 35酸中毒 pH > 7 . 35碱中毒 慢性呼吸系统病史＋意识障碍=肺性脑病
（完整版）病历分析答题公式---快速写出诊断 (增加辅助检查+鉴诊+治疗) （1）慢性阻塞性肺疾病 老年人＋咳、痰、喘=慢性支气管炎 桶状胸+过清音=肺气肿 老年患者+咳、痰、喘+桶状胸+过清音+肺功能=COPD（分期：急性加重期？稳定期？） 慢性呼吸系统病史＋右心衰体征=肺心病 补：肺功能分级：FEV1/FVC<70,FEV1于30、50、80间分别为轻、中、重、极重。伴慢性呼衰亦为极重。 查：肺功能、胸片、血气分析、痰培养。 治：控制性氧疗，维持氧合水平>60%，或血氧饱和度>90%。、抗生素、支气管舒剂、必要时糖皮质激素、并发症治疗、加强教育、戒烟等康复治疗。 （2）肺炎 青壮年＋受凉＋高热＋湿啰音＋铁锈色样痰=大叶性肺炎 婴幼儿＋咳、喘＋呼吸困难体征（鼻翼扇动＋三凹征）=支气管肺炎发绀＋鼻扇征(+)、三凹征(+)+两肺可闻及喘鸣音及湿罗音+呼吸快、心率快=左心衰 肝大＋双下肢水肿=右心衰 儿童+阵发性刺激性咳嗽+关节疼=支原体肺炎 鉴别：金葡菌炎、干酪样肺炎、肺脓肿、肺癌。
查：胸片、胸部CT、痰培养+药敏、痰找癌细胞、痰找结核杆菌、必要时行纤支镜。 治：抗感染，对症治疗。 （3）支气管哮喘 青少年+过敏性鼻炎+发作性喘憋+满肺哮鸣音=支气管哮喘 鉴别：心源性哮喘、喘息型慢性支气管炎、支气管肺癌、肺嗜酸细胞浸润（胸片肺部游走性淡片影，肺组织活检诊断） 查：血常规、痰涂片、动脉血气、肺功能、胸片、变应原。 治：吸氧、静脉运用糖皮质激素、支气管舒剂、控制急性发作后综合防治（减少接触危险因素、评估及检测哮喘、随访）。 （4）肺癌() 中老年人+吸烟史+刺激性咳嗽（or痰中带血）+毛刺（边缘不整齐）=肺癌 鉴别：肺炎、肺结核、慢性支气管炎、肺炎性假瘤、肺转移瘤慢性肺脓肿、肺门淋巴结肿大（结节病、淋巴瘤）、胸腔积液（胸膜间皮瘤、结核性渗出性胸膜炎）。 查：胸片、胸部CT、纤支镜、胸腔积液检查、痰脱落细胞检查、免疫学检查、肺组织活检，腹部B超 治：手术。配合化、放疗。 （5）呼吸衰竭（) 模拟诊断：慢性阻塞性肺疾病，急性加重；慢性肺源性心脏病；肺性脑病，Ⅱ型呼衰；高血压病2级，极高危。
结核抗体检测试剂盒 康珠生物 一.公司概述： 武汉康珠生物技术有限公司是专业的体外诊断试剂生产企业。也是国内第一批通过国家食品药品监督管理局GMP认证的体外诊断试剂生产厂家。体系覆盖酶联免疫，金标，生化，化学发光等多条生产线。产品涉及传染病，肿瘤筛查等多个领域。现已有国药准（械）字50余个产品文号。拥有诸多自主知识产权专利产品，并获得了多项科研成果奖。公司秉承“厚德载物、诚信待人、团结务实、创新进取”的企业精神，注重以人为本，致力于把“康珠生物”打造成国际先进水平的生物医药高新技术企业。 公司规模： 专注诊断试剂，集研发、生产、经营为一体的高新技术企业； 第一批通过国家食品药品监督管理局GMP认证； 占地30亩的生产基地； 光谷生物产业园5000平方米标准厂房。 公司资质： 药品生产许可证 医疗器械生产许可证 医疗器械经营许可证 拥有完善的体外诊断试剂质量管理体系，体系覆盖胶体金法、乳胶法、酶联免疫法和化学法产品线，并通过国家食品药品监督管理局的现场体系考核。 所获荣誉： 中科院生物高科技创新基金 光谷生物园第5批3551基金 生物创新基金 湖北省科技型中小企业技术创新基金无偿资助项目 十余项专利 二．结核杆菌IgG抗体检测概述：
结核分枝杆菌（M.tuberculosis）,简称结核杆菌,此菌主要引起肺结核病，肺结核是一种通过呼吸道传染、具有强烈传染性的慢性消耗性疾病。肺结核的诊断方法主要以细菌学痰涂片显微镜检查，而免疫血清学对结核杆菌IgG抗体水平检测，可辅助诊断结核病，并为结核病监测提供有力的手段。 三.康珠生物结核抗体检测试剂盒简介： 结核杆菌IgG抗体检测试剂盒采用了间接ELISA法定性检测人血清/脑脊液/胸积水样本中的结核分枝杆菌IgG抗体水平，适用于结核病的辅助诊断及结合临床症状该病情发展IgG 抗体水平的监测。 四.试剂盒组成： 1、含纯化TB-IgG抗原包被的酶标反应板 2、样品稀释液1瓶 3、TB-IgG酶结合物试剂1瓶 4、浓缩洗涤液(25×)1瓶 5、TB-IgG阴性对照液和TB-IgG阳性对照液各1瓶 6、显色剂A和显色剂B各1瓶 7、终止液1瓶 8、自封袋2个、封板膜2片、说明书1份 五.产品相关信息 产品名称：结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒（胶体金法） 包装规格：48T/96T 预期用途：该产品用于定性检测待测血清或血浆中可能存在的结核分枝杆菌IgG抗体。 医疗器械生产企业许可证编号：鄂食药监械生产许20120396 医疗器械注册证书编号：国食药监械（准）字2013第3401627号 产品标准编号：YZB/国5912-2013 储存有效期：2-8℃保存，有效期12个月 生产企业：武汉康珠生物技术有限公司
结核分枝杆菌IgG抗体(TB)检测试剂盒 一、检测原理------斑点金免疫渗滤法 二、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阳性 （一）、抗细胞壁脂多糖LAM抗体呈阳性 1、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，具有较强的免疫原性和免疫调节功能，可刺激机体产生相应的抗体。 2、检测到此抗体阳性，结合临床症状和其他检查要考虑是活动性结核病患者。 3、由于在某些呼吸道炎症等良性疾病中，此抗体也会呈现阳性，所以，请医生要结合其他的临床信息加以鉴别诊断。 （二）、38KDa抗体阳性 1、38KDa抗原是定位在质膜上的磷酸盐转运蛋白。 2、检测到此抗体阳性，结合临床病史，非常有助于活动性结核的诊断。 3、由于此抗原和大肠埃希菌(简称大肠杆菌)同源蛋白有30％以上的交叉，所以，在肠道感染患者中有一定的假阳性，要注意加以鉴别。 4、值得注意的是在部分接种过卡介苗（BCG）的患者中，也会出现阳性，要注意鉴别。 （三）、16kDa抗体阳性 1、16kDa蛋白又被称为HSP16.3蛋白，是小分子热休克蛋白（sHSP）家族成员之一。 2、此抗体在结核病患者中有相当高的阳性率（46～50% )，检测到此抗体阳性，并结合临床要考虑是活动性结核病患者。 3、在大多数接种过卡介苗（BCG）的患者中，并不会出现阳性，能将结核病患者与BCG 接种患者区别开来。 4、作为儿童结核的早期诊断指标，敏感性为64.8%左右，特异性96.2%左右。
（四）、MPT63抗体阳性 1、MPT63抗原是结核杆菌的分泌蛋白之一。 2、它的灵敏度为15～40％，特异性很高，约为98％左右。即在检测到此抗体阳性时，临床 上基本就可诊断是活动性结核病患者。 三、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阴性 （一）不是结核病患者 （二）病情好转 （三）在结核病患者病情加重、合并人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的结核病患者、痰涂片、 痰培养呈阴性的患者中，由于机体免疫能力低下等原因，导致产生的抗体滴度太低，以至于 不能被检测到，会呈现假阴性的结果，需要结合临床加以鉴别。 四、多指标联合检测的优势 （一）多指标联合检测，提高了阳性率 由于单个抗原不可能捕获全部或大多数抗体，所以，多指标联合检测，提高了阳性率，减少 了漏检，是结核血清学诊断的发展趋势。 指标组合灵敏度 LAM 56.5% LAM+38KD 68.3% LAM+38KD+16KD 75.2% LAM+38KD+16KD+MPT63 77.4% （二）多指标独立的检测结果，有助于医生对患者病情的监控 结核菌侵入机体后刺激机体产生一系列体液免疫反应，体液免疫随着病变的加重（或血行播散）而增加。当多个抗体呈现阳性时，提示病情有加重的迹象，所以，临床医生可以根据不 同时期的抗体谱，并结合患者的临床病症，进行病情的监控和疗效的判断。
结核病健康知识讲座总结 2014年3月24日是第19个“世界防治结核病日”，此次结核病日的宣传主题为：“你我共同参与，依法防控结核”。为了提高校师生对结核病防治知识的知晓率，我科在大冶三中二年级（3）班进行了结核病知识的健康讲座，使结核病防治知识进校、进班，极大地提高了师生的防治水平。现将本次活动总结如下： 本次讲座由朱惠泽主任主讲，以提高师生知晓率为目标，了解结核病防治规划目标和免费政策以及结核病的危害及防治知识，宣传结核病防治策略。朱主任讲的通俗易懂，同学们听的津津有味，对同学们不懂的地方，朱主任一一作了详细的解说，讲座结束后发放测试卷，使学生知晓率达到94%以上。 此次讲座，取得了较好的成绩，我科今后将继续开展一系列讲座，认真做好结核病的健康促进活动，使学生对结核病防治知识知晓率更上一个台阶。 学校结核病知识宣传栏
2014年大冶四医院结核病防治知识 讲座模拟试题 姓名：得分：_________ 二、单项选择题
1、在我国传染病疫情网络报告中，（ A ）报告发病和报告死亡数位居甲、乙类传染病前列。 A.肺结核 B.细菌性痢疾 C.手足口病 D.流行性感冒 2、诊断耐药结核病以及指导结核病治疗有效手段是 （ C ）。 A.直接痰涂片检查 B.萋---尼氏染色法 C.药物敏感性实验 D.结核分枝杆菌培养实验 3、（ B ）均为肺结核患者治疗管理对象，其中涂阳肺结核患者是重点管理对象。 A.非活动性肺结核 B.活动性肺结核 C.痰涂阴者 D.未痰检者 4、涂阳患者和含有栗粒、空洞的新涂阳患者应采用 （ A ）的治疗管理方式。 A.全程督导化疗 B.强化督导化疗 C.全程管理 D.自服药 5、世界防治结核病日是（ A ）。 A.3月24日 B.4月25日 C.5月31日 D.10月8日 二．多项选择题 1、痰标本分为哪3类（ ABC ）。 A. 即时痰 B. 晨痰 C. 夜间痰 D.午间痰 2、痰标本性状有（ ABCD ）。
结核分枝杆菌抗体检测(胶体金法) 规程操作 1、检验目的 本试剂盒可定性检测人血清中结构分枝杆菌抗体，用于临床结构病的辅助诊断。 2、检验原理 本试剂盒利用斑点免疫胶体金渗滤技术（DIGFA），将结核分枝杆菌特异性膜蛋白抗原分离纯化，点样并固化在硝酸纤维素膜上，膜上TB抗原捕获人血清样品中结核分枝杆菌抗体，被捕获的结核IgG 抗体可用葡萄球菌A蛋白（SPA）胶体金缀合物标呈色（SPA能与IgG 特异性结合），形成红色斑点，根据是否出现红色斑点即可判断阴、阳结果从而判断是否存在结核分枝杆菌抗体。 3、样本要求 必须使用新鲜血清标本，血浆标本必须用玻璃棒剥离纤维蛋白，保证血清无混浊沉淀。 4、试剂 4.1试剂名称：结核分枝杆菌抗体诊断试剂盒（胶体金法） 4.2生产厂家：上海奥普生物医药有限公司 4.3包装规格：20人份/盒 4.4贮存条件及有效期：2-8℃干燥处保存，有效期12个月。 5、检验方法： 5.1在反应板的反应孔中间，加入2滴封闭液，等待薄膜吸入；5.2 取40μl新鲜的血清标本，加入反应孔中间，等待薄膜吸入； 5.3 在反应孔中间加入6滴洗活液，等待薄膜吸入； 5.4 在反应孔中间加入2滴金标液，等待薄膜吸入；
5.4 在反应孔中间加入6滴洗涤液，等待薄膜吸收，目测结果； 6、结果判断 6.1 阳性——质控点显示红色，反应孔中间有红色斑点出现。 6.2 阴性——质控点显示红色，反应孔中间无红色斑点出现或仅为痕迹。 检验方法的局限性 少数标本（急性感染、高血脂、溶血等）可出现背景偏红，一般不影响结果判断，可通过将标本用封闭液1:3稀释，加样80μl背景将获得改善。严重乳糜血标本可能会阻塞硝酸纤维素膜孔，使背景很红，影响中间红色斑点有无的判别，不宜用本法测定。 7、注意事项 7.1 必须以单人份操作，严禁多标本同时检测，每个标本的操作步骤需要连续进行，不宜停顿过长。 7.2 质控点显示红色表明试剂盒有效；阴、阳性对照也是确保定性结果可靠的一个环节，但临床阳性标本显色深浅可以与阳性对照不同。 7.3 血清、包括健康人血清属潜在生物危害物质，操作者应戴手套，测试后凡接触血清的物品应消毒后再丢弃。
第三章病例分析——肺 癌 一、概论 1.概念 肺癌是最常见的肺部原发性恶性肿瘤，起源于支气管粘膜或腺体，亦称支气管肺癌，常有区域性淋巴结转移和血行播散，早期常有刺激性咳嗽、痰中带血等呼吸道症状，病情进展速度与肿瘤的组织学类型、分化程度等生物学特性有关。本病发病随年龄增长而增加，发病高峰在60～79岁之间。 2.病因 病因和发病机制迄今尚未明确。大量资料说明肺癌的发病与下列因素有关：吸烟；空气污染；职业致癌因子；电离辐射；饮食与营养；遗传因素以及其他，如病毒感染、某些慢性肺部疾病与支气管肺癌的发生也有一定关系。 3.分类 按解剖学部位分类 （1）中央型肺癌：发生在段支气管至主支气管的癌肿称为中央型，约占3/4，以鳞状上皮细胞癌和小细胞未分化癌较多见。 （2）周围型肺癌：发生在段支气管以下的癌称为周围型，约占l／4，以腺癌较为多见。
按组织学分类 按细胞分化程度、形态特征和生物学特点，目前将肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，后者包括鳞癌，腺癌，大细胞癌和鳞腺癌。 二、诊断要点 1.40岁以上男性，长期重度吸烟史。 2.症状体征 ①原发肿瘤引起的症状体征 咳嗽：多为阵发性刺激性呛咳，无痰或少许泡沫痰；肺泡癌可有大量粘液痰。 咯血：以中央型多见，多为痰中带血或间断性血痰。 喘鸣、气急、胸闷、发热、厌食、乏力、体重下降等。 ②肿瘤局部扩展引起的症状体征 胸痛、呼吸困难、吞咽困难、声音嘶哑。 上腔静脉阻塞综合征：胸壁静脉曲张和上肢，颈面部水肿。 Horner综合征：肺上沟瘤（Pancoast's tumor），癌肿侵犯或压迫颈交感神经导致患侧眼睑下垂，瞳孔缩小，眼球内陷，同侧额部无汗。 ③肿瘤远处转移引起的症状和体征 脑，中枢神经系统转移，骨转移。 ④肺癌作用于其他系统引起的肺外表现--副肿瘤综合征。 Ⅰ.异位内分泌综合征：如抗利尿激素分泌异常综合征，异位ACTH综合征，神经肌肉综合征，高钙血症，类癌综合征。 Ⅱ.其他肺外表现：多发性周围神经炎，肌无力样综合征，肥大性肺性骨关节病。 3.实验室和辅助检查 ①胸部X线检查 1）中心型肺癌 直接X线征象：多为一侧肺门类圆形阴影，边缘毛糙，可有分叶或切迹等表现。与肺不张，阻塞性肺炎并存时，可呈现反“S”形征象，有诊断意义。
三种不同检测方法对诊断结核病的比较 池云生张东浩吉林省结核病医院检验科 130500 【摘要】目的将诊断结核病的蛋白芯片法与金标法及抗酸染色法三种检测方法进行比较，以评价三种方法在临床中的应用价值。方法用蛋白芯片法、金标法及抗酸染色法检测125例确诊结核病人、50例肺部其它疾病患者和健康体检者的血清标本，并进行相关统计分析。结果蛋白芯片法、金标法及抗酸染色法检出结核分枝杆菌的灵敏度为64%，72%及22.7%，前两者比较无显著性差异(P>0.05)，但均高于抗酸染色法(P<0.05)。三者的特异性分别为90%，76.7%及96.7%。结论蛋白芯片法检测结核分枝杆菌，与金标法及抗酸染色法比较，具有简便、快速、敏感性较高和特异性强等优点，是临床辅助诊断结核病的有效方法。【关键词】蛋白芯片；结核分枝杆菌；比较；诊断 结核病是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病，被列入我国法定重大传染病。为了实现早发现、早诊断、早治疗的目标，临床上现已开展了多种针对于结核病诊断的实验室检测项目。我院以开展的检测项目有蛋白芯片法、金标法、抗酸染色法、PCR-荧光探针法、结核菌培养等多种方法。根据临床应用情况，现就相对简便易行的蛋白芯片法、金标法、抗酸染色法进行比较，来评价三种方法在临床中的应用价值，以便更好地为结核病防治的临床应用提供及时准确的信息。 结核蛋白质芯片(protein chip，PC)是近年来蛋白质组学研究中兴起的一种新方法，其基本原理是以微孔滤膜为载体，利用微阵列技术将纯化的结核菌脂阿拉伯甘露糖(LAM)、蛋白16 KDa(rT—PA16)和38KDa(rTPA38)等三种抗原固相于同一膜片上，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，再以免疫金作为标记物在膜上显色，然后放入芯片阅读仪，在专门软件的支持下对抗原点阵的灰度值进行分析，以达到检测结核分枝杆菌的目的。为了评价此方法的临床应用价值，本文将此法与免疫胶体金法及常规的抗酸染色法作一比较，现报告如下： 1 材料与方法 1.1 材料①标本来源：125例确诊结核病人血清由我院内科肺结核确诊病人提供，50例肺部其它疾病患者和健康体检者的血清来源于本院胸外科、内科和门诊体检人员。②主要仪器和试剂：蛋白芯片阅读仪、结核分枝杆菌蛋白芯片试剂盒均为南京大渊生物技术公司提供；结核分枝杆菌免疫胶体金诊断试剂盒为
第三章病例分析——结 核病 一、概述 1、概念 结核病就是结核分枝杆菌引起得慢性传染病,可侵及多个脏器,以肺部受累形成肺结 核最为常见。 痰中带菌者称为传染性肺结核,传染性肺结核病人排菌就是结核传播得主要来源,主 要为病人与健康人之间经飞沫传播。人体感染结核杆菌后不一定发病,当抵抗力降低时, 才会引起发病。 其病理变化为渗出型、增生型、干酪样坏死三种类型。三种病变可以相互转化、交错存在,很少单一病变独立存在,而以某一种改变为主。 2、结核病分型 Ⅰ型:原发型肺结核,多见于儿童,典型病变包括肺部原发灶,引流淋巴管与肺门淋巴 结得结核性炎症,三者联合称为原发综合征。多数原发综合征临床症状轻微,不治自愈,很少排菌。 Ⅱ型:血行播散型肺结核,儿童多来源于原发性肺结核;成人多由原发感染灶中得结核菌破溃进入血行引起。本型肺结核发生于免疫力极度低下者。 Ⅲ型:继发型肺结核,为成人与继发性肺结核最常见类型。好发于两肺上叶尖后段或下叶尖段,病灶趋于局限,易于有干酪坏死与空洞形成,排菌较多。 Ⅳ型:结核性胸膜炎:常见胸腔积液,为渗出液,草绿色,淋巴细胞为主,ADA明显升高。 V型:其她肺外结核 二、诊断要点 1、全身症状:发热,多数为长期低热,,可伴有倦怠、乏力、夜间盗汗、食欲减退、体重减轻、妇女月经不调、易激惹、心悸、面颊潮红等。 2、呼吸道症状:咳嗽、咳痰、咯血、胸痛、呼吸困难。 3、体征: 病灶以渗出型病变为主得肺实变且范围较广或干酪性肺炎时,叩诊浊音,听诊闻及支 气管呼吸音与细湿啰音。 继发型肺结核好发于上叶尖后段,故听诊于肩胛间区闻及细湿啰音,有极大提示诊断 价值。 空洞性病变位置浅表而引流支气管通畅时有支气管呼吸音或伴湿啰音;巨大空洞可出现带金属调得空瓮音。 慢性纤维空洞性肺结核得体征有患侧胸廓塌陷、气管与纵隔间向患侧移位、叩诊音浊、听诊呼吸音降低或闻及湿啰音,以及肺气肿征象。 支气管结核有局限性哮鸣音,特别就是于呼气或咳嗽末。 4、实验室与辅助检查 1)病原学检查 ① 痰涂片抗酸染色直接镜检有助于诊断 ② 痰培养具有较高得敏感性与特异性 ③ 结核菌抗原与抗体检测 2)影像学检查 ① X线胸片 原发性肺结核典型特征有原发灶、淋巴管炎与肺门或纵隔肿大得淋巴结组成哑铃状病
结核分枝杆菌荧光定量检测试剂盒研发步骤 非竞争性内标法 1.模板的获得（TB标品和内标DNA） (1) 普通PCR反应 选用一种工作标准品为模板，根据巨细胞病毒荧光定量检测试剂盒说明书进行普通PCR 反应，反应后溶液进行琼脂糖凝胶电泳，并对目的条带进行切胶回收。 (2) 连接 由于Taq酶的PCR反应产物末端带A，故直接以上述切胶回收的PCR片段为目的PCR 片段，按pGMT克隆试剂盒进行10μl连接体系的配制，4℃过夜连接。 (3) 转化 10μl昨日过夜连接的体系转入50μl TP10感受态细胞中，冰浴30min，42℃90s热激，冰浴2-3min，加入600μl LB培养基后37℃震荡培养90min。分别涂100μl于现倒的蓝白筛选平板，37℃过夜培养。 (4) 检测 挑取白色菌落接种于1-5ml LB培养基中，摇到一定浓度后，以菌液为模板用普通PCR 进行验证。 (5) 测序 选择条带正确的菌液进行测序。 2.基因的查找和比对（TB标品和内标DNA） 从https://www.doczj.com/doc/e56265138.html,/网点的genbank中下载所需要的序列，与测序结果进行比对。由于不知道测序基因的具体名称，故需要进行大量的比对以找出其在genebank中的序列。 TB标品DNA序列：CACATCAGCCGCGTCCACGCCGCCAACTACGGTGTTTACGGTGCCCGCAAAGTGTGGCTAACCCTGAACC GTGAGGGCATCGAGGTGGCCAGATGCACCGTCGAACGGCTGATGACCAAACTCGGCCTGTCCGGGACCA CCCGCGGCAAAGCCCGCAGGACCA TB内标DNA序列：CACATCAGCCGCGTCCACATCTGATCCGTAGCGACTACGGACGCGCGCCTACGCCCTTCTCAGTTAA 3.引物和探针的设计（TB标品和内标DNA） (1) 引物设计 引物序列： 上游引物TB-F：5’ CACATCAGCCGCGTCCACG 3’ 19bp
Advances in Microbiology 微生物前沿, 2014, 3, 64-69 Published Online September 2014 in Hans. https://www.doczj.com/doc/e56265138.html,/journal/amb https://www.doczj.com/doc/e56265138.html,/10.12677/amb.2014.33008 Research Progress in Detection Technology of Mycobacterium tuberculosis Jinhong Ju Fujian Province Fuqing 73301 Military Hospital, Fuqing Email: ju868@https://www.doczj.com/doc/e56265138.html, Received: Aug. 6th, 2014; revised: Aug. 24th, 2014; accepted: Sep. 10th, 2014 Copyright ? 2014 by author and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.doczj.com/doc/e56265138.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Tuberculosis (TB) is a notable disease as well as a major global health problem; it is also one of the major infectious diseases in our country. Early diagnosis and treatment is a key step in the process of stopping Tuberculosis. In recent years, with the development of biotechnology, the Tuberculo-sis diagnosis methods have been fully improved, more and more new detection methods are con-stantly emerging, especially the molecular biological techniques for timely diagnosis of Tubercu-losis and pathological research is of great significance. This article summarizes the main domestic detection techniques from the traditional bacteriological, immunological and molecular biological detection aspects, to provide some suggestions and ideas for medical staff and researchers. Keywords Mycobacterium tuberculosis, Traditional Bacteriology Detection, Immunology Detection, Molecular Biology Detection 结核分枝杆菌检测技术研究进展 居金宏 福建省福清市73301部队医院，福清 Email: ju868@https://www.doczj.com/doc/e56265138.html, 收稿日期：2014年8月6日；修回日期：2014年8月24日；录用日期：2014年9月10日
结核性胸膜炎的护理查房 一、定义 结核性胸膜炎是由结核菌及其代谢产物进入高度过敏状态的机体胸膜腔而引起的胸膜炎症。是最为常见的胸膜炎。 结核性胸膜炎的病原是结核分枝杆菌（简称结核菌）。它的发生与两个重要因素有关，即结核菌及其代谢产物对胸膜的刺激和机体敏感性增强。当机体处于高度变态反应时，结核菌及代谢产物侵入胸膜，则引起渗出性胸膜炎，当机体对结核菌过敏反应较低，则只形成局限性干性胸膜炎。少数病人由干性胸膜炎进展为渗出性胸膜炎。 二、临床表现 结核性胸膜炎包括干性胸膜炎、渗出性胸膜炎和结核性脓胸，其临床表现各异。 ㈠干性胸膜炎主要症状为胸痛，为剧烈针刺样痛，深呼吸及咳嗽时更甚，多发生腋侧下胸部。少数病人有轻中度发热、干咳及其他结核毒性症状。体征为患侧呼吸运动受限，呼吸音减低和闻及胸膜摩擦音。 ㈡渗出性胸膜炎临床症状因发病部位、积液量不等，有较大差异。常急性起病，亦可缓发。 ⒈结核中毒症状80%患者有发热，多为中度热，常伴有乏力、纳差、盗汗等症状。 ⒉胸痛与病程的发展阶段及部位有很大关系，常见于疾病初期及病程后期、呈针刺样 或隐痛。 ⒊咳嗽多数为阵发性刺激性干咳。 ⒋大量积液可出现气急、呼吸困难。 积液体征随胸液多寡而异，胸液量较多时，患侧胸廓饱满，呼吸运动减弱、叩诊浊音，听诊呼吸音降低或消失。大量胸腔积液气管移向健侧。 ㈢结核性脓胸一般起病缓慢，症状轻微，多数有结核中毒症状。胸膜下空洞突然破裂，严重感染胸膜，起病急剧，全身中毒症状明显，可出现高热、剧烈胸痛、呼吸困难。若伴有支气管胸膜瘘，可有剧烈刺激性咳嗽，常由于继发细菌感染加重病情。体征大致与渗出性胸膜炎相似。慢性者胸廓塌陷，肋间隙变窄，呼吸音减低，纵隔移向患侧，常伴有杵状指（趾）。 三、病例分析 基本资料 姓名：孙曼性别：女年龄：21岁床号：53 入院日期：2012年9月26日 入院诊断：胸腔积液原因待查：结核性？类肺炎性？ 主诉：胸疼一周，发热伴气促2天 现病史：患者于一周前出现胸痛，为右侧季肋区闷胀样不适及胀痛感，于2天前出现发热，最高体温达39.2℃，并有咳嗽、干咳为主，感轻度胸闷、气促。 查体：T37.7 P88 R20 BP115/70 神志清，精神可，右下肢呼吸音低，右肺叩诊浊音。 辅助检查：血常规WBC7.7g/l N85.6% HB136g/l PLT364g/l CRP45mg/l 胸腔B 超：右侧胸腔积液胸片：支气管炎，右侧胸腔积液血气分析：PH7046 PCO232mmhg PO2 81mmhg BE-0.4 HCO3 22.8 SPO2 97% 四、护理诊断
结核分枝杆菌IgG 抗体(TB) 检测试剂盒 一、检测原理------ 斑点金免疫渗滤法 胶体金 SPA 待测抗体 包被抗原 膜 二、临床意义------ 结核分枝杆菌抗体结果呈阳性 （一）、抗细胞壁脂多糖LAM 抗体呈阳性 1、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM) 是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，具有较强的免疫原性和免 疫调节功能，可刺激机体产生相应的抗体。 2、检测到此抗体阳性，结合临床症状和其他检查要考虑是活动性结核病患者。 3、由于在某些呼吸道炎症等良性疾病中，此抗体也会呈现阳性，所以，请医生要结合其他 的临床信息加以鉴别诊断。 （二）、38KDa 抗体阳性 1、38KDa 抗原是定位在质膜上的磷酸盐转运蛋白。 2、检测到此抗体阳性，结合临床病史，非常有助于活动性结核的诊断。 3、由于此抗原和大肠埃希菌(简称大肠杆菌)同源蛋白有30％以上的交叉，所以，在肠道感染患者中有一定的假阳性，要注意加以鉴别。 4、值得注意的是在部分接种过卡介苗（BCG）的患者中，也会出现阳性，要注意鉴别。 （三）、16kDa 抗体阳性 1、16kDa 蛋白又被称为HSP16.3 蛋白，是小分子热休克蛋白（sHSP）家族成员之一。 2、此抗体在结核病患者中有相当高的阳性率（46～50% )，检测到此抗体阳性，并结合临床 要考虑是活动性结核病患者。 3、在大多数接种过卡介苗（BCG）的患者中，并不会出现阳性，能将结核病患者与BCG 接种患者区别开来。 4、作为儿童结核的早期诊断指标，敏感性为64.8%左右，特异性96.2%左右。
（四）、MPT63 抗体阳性 1、MPT63 抗原是结核杆菌的分泌蛋白之一。 2、它的灵敏度为15～40％，特异性很高，约为98％左右。即在检测到此抗体阳性时，临床 上基本就可诊断是活动性结核病患者。 三、临床意义------ 结核分枝杆菌抗体结果呈阴性 （一）不是结核病患者 （二）病情好转 （三）在结核病患者病情加重、合并人类免疫缺陷病毒(HIV) 感染的结核病患者、痰涂片、 痰培养呈阴性的患者中，由于机体免疫能力低下等原因，导致产生的抗体滴度太低，以至于不能被检测到，会呈现假阴性的结果，需要结合临床加以鉴别。 四、多指标联合检测的优势 （一）多指标联合检测，提高了阳性率 由于单个抗原不可能捕获全部或大多数抗体，所以，多指标联合检测，提高了阳性率，减少 了漏检，是结核血清学诊断的发展趋势。 指标组合灵敏度 LAM 56.5% LAM+38KD 68.3% LAM+38KD+16KD 75.2% LAM+38KD+16KD+MPT63 77.4% （二）多指标独立的检测结果，有助于医生对患者病情的监控 结核菌侵入机体后刺激机体产生一系列体液免疫反应，体液免疫随着病变的加重（或血行播散）而增加。当多个抗体呈现阳性时，提示病情有加重的迹象，所以，临床医生可以根据不 同时期的抗体谱，并结合患者的临床病症，进行病情的监控和疗效的判断。
浅谈结核抗体检测 目前，检测结核分枝杆菌的常见方法是直接涂片抗酸染色、痰结核菌常规培养和生物芯片蛋白技术。与抗酸染色法、痰结核菌常规培养法比较，生物蛋白芯片技术具有检测速度快，敏感性和特异性高的特点。对诊断结核杆菌感染、动态观察结核病患者的疗效有良好作用。 生物蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌抗体。较敏感、特异性强又纯化的抗原为细胞壁的脂阿拉伯甘露糖(LAM)、16kDa蛋白和38kDa蛋白。LAM是构成结核分枝杆菌细胞壁的重要组成成分，其特异性强，能刺激结核感染者产生抗体；16kDa蛋白是有潜力的免疫诊断抗原；38kD a蛋白为脂蛋白。其与细胞膜或菌体表面的脂肪结构相连。 对小儿来说，只要感染过结核菌，结核抗体试验就呈阳性反应，它只是诊断结核感染的一个参考，不能说一定就是结核病。国人大多年长儿及成人感染过结核菌，绝大多数人是不发病的。这和儿科结核菌素试验(PPD)检查一样，也是诊断结核病的一个参考，结核菌素试验是在皮内注射0.1ml的药液，48-72小时看结果，PPD试验也只有强阳性(需配合临床表现和胸片等其他检查)才有意义。如呈阴性反应，就说明没感染结核菌；弱阳性和阳性反映，也只能说明感染了结核菌，不能确诊为结核病。 临床发现，LAM、38 kDa抗体检出率可能与年龄增加、机体抵抗力或免疫力下降有关。其结果随结核病患者的年龄增加而升高，因此采用生物蛋白芯片技术联合检测3种结核抗体，可提高其诊断结核的敏感性和特异性，也可作为结核病的血清学诊断方法之一。 研究证实，门诊及住院结核病患者痰抗酸染色阳性患者的LAM、16 kDa、38 kDa抗体检出率均较高，而经过治疗的患者的3种结核抗体检出率均较低。结核病的免疫特征是细胞免疫功能低下，体液免疫功能增强，当治疗有效、感染控制后，LAM、16kDa、38kDa抗体水平下降。说明生物蛋白芯片技术能动态监测这3种结核抗体，用于结核病的药物治疗选择。 生物蛋白芯片技术应用于结核分枝杆菌抗体的检测，可以快速准确地检测血清中相应的多种抗体，可以诊断小儿结核感染。同时，在不同人群中筛查出不同的抗体类型，可能为临床结核病的诊断及预后估测等提供重要的依据。
分享 寿娟 寿娟的分享 当前分享 返回分享首页? 分享 执业医师技能考试病例分析得分模板来源：执业医师考试的日志执业医师技能考试病例分析得分模板 诊断（4分）1. 慢性阻塞性肺疾病 诊断依据（4分） ①病史： ②症状： ③既往史： ④体征： ⑤辅查: 鉴别诊断（5分） ①支气管哮喘 ②支气管扩张症 ③肺结核 ④间质性肺疾病 ⑤肺癌 进一步检查（4分） ①肺功能 ②胸片 ③胸部CT ④血气分析 ⑤痰涂片、痰培养、痰找肿瘤细胞 治疗原则（3分） ①控制性氧疗 ②抗生素 ③支气管舒张剂 ④可短期使用糖皮质激素 ⑤并发症治疗：呼吸衰竭用机械通气 诊断（4分）2. 肺炎-肺炎球菌肺炎 诊断依据（4分） ①病史： ②症状： ③既往史： ④体征： ⑤辅查: 鉴别诊断（5分） ①细菌性肺炎：葡球菌、流感嗜血杆菌、克雷白杆菌、铜绿菌
②病毒性肺炎、真菌性、支原体、衣原体、军团菌 ③干酪性肺炎 ④急性肺脓肿 ⑤肺癌 进一步检查（4分） ①血常规，电解质 ②X线胸片 ③痰涂片;培养+药敏;找结核杆菌;找癌细胞 ④血气分析 ⑤胸部CT检查必要时纤维支气管镜检查 治疗原则（3分） ①抗感染使用敏感抗生素 ②对症支持治疗如退热，祛痰，维持水、电解质、酸碱平衡等。诊断（4分）3. 支气管哮喘 诊断依据（4分） ①病史： ②症状： ③既往史： ④体征： ⑤辅查: 鉴别诊断（5分） ①急性支气管炎 ②COPD ③心源性哮喘：急性左心衰竭 ④嗜酸性粒细胞肺浸润症 ⑤支气管肺癌 进一步检查（4分） ①肺功能（支气管激发试验或舒张试验） ②血气分析 ③ECG ④血清特异性IgE检查 ⑤皮肤过敏原试验 治疗原则（3分） ①联合使用支气管舒张剂（β2受体激动剂，茶碱，抗胆碱药物） ②吸入糖皮质激素 ③抗感染治疗 ④病情监测和健康教育 诊断（4分）4. 肺癌 诊断依据（4分） ①病史： ②症状： ③既往史： ④体征： ⑤辅查:
结核分枝杆菌GeneXpert核酸扩增检测操作步骤 一、准备工作： 1.开机 ①依次开启：UBS电源、仪器电源、打印机电源、笔记本电脑电源； ②等待笔记本电脑进入系统，出现四个用户图案时，选择用户Cepheid，输 入密码：cphd ，等待约一分钟后系统弹出登录窗口，依次输入用户名和密码； ③等待Gene-Xpert操作软件的启动与自检过程，自检过程中软件出现“数据 库管理”提示窗，点选“否”；再在“存档”提示窗点选“否”，待模块进展显示“可用”。 ④仪器预热15分钟后再进行检测。 2.耗材准备 ①标本处理液、②Cartridge反应盒、③前处理管（带有盖子的试管）、 ④塑料滴管（每个标本准备2支）、⑤待检标本。 3.样品预处理 ①前处理管标号或粘贴条形码，再吸取2ml标本处理液在前处理管中，加入1ml标本； ②旋紧盖子，旋涡仪振荡10秒或剧烈摇动10-20次，室温静置10分钟，再
旋涡仪振荡10秒或剧烈摇动10-20次，室温静置5分钟，观察无可见块状痰标本存在。 4.试剂盒 ①拆开Cartridge反应盒包装，小心取出，不要接触到正面的二维码、上面 胶盖和后面有尖端区域，避免污染，可在侧面编号或粘贴条码。 ②小心上拔开启Cartridge反应盒蓝色上盖的前部，取处理后的样品2ml， 沿样品加入口的内壁缓缓加入反应盒内（避免吸到未液化的粘液部分，吸液量可以略超过两毫升，把尖端残液保留不注入，以免产生气泡）。 二、测定操作： 1 .在GeneXpert Dx系统窗口的工具栏点击『创建测试』； 2.在“扫描患者ID条形码”弹窗，选“手动输入患者条形码”，再输入患者的姓名； 3.在“扫描样品ID条形码”弹窗选“手动输入”，再在弹窗内输入痰检的实验室编号； 4.在“扫描检测盒条形码”弹窗内，用扫码方法（或手动）输入测试盒上的条码，成功后软件自动指定待运行板块（(注意：为了保障每个模块有均等的运行机会，软件会选择运行次数最少的模块；但手工可以选择不同的模块）。此时板块顶部绿色指示灯亮起并开始闪烁，点击“开始测试”。 ⑤打开指定的测定板块（顶部指示灯闪动），将Cartridge反应盒放入其中，