课程名称：病原生物学与免疫学实验指导老师：陈玮__ _____成绩：______________ 实验名称：凝集反应和吞噬作用______实验类型：_____________同组学生姓名：钟一鸣____ 1.直接凝集反应——ABO血型鉴定
【实验原理】
细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。常用的包括玻片法和试管法两种。
玻片凝集试验为定性实验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒性抗原如菌液或红细胞，各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便、快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。
在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含有A、B抗原而分为A（含A抗原）、B（含B抗原）、AB（含A、B抗原）、O（均不含A、B抗原）型。将受试者的红细胞加入抗B抗体试剂和抗A抗体试剂中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞上有无A、B抗原。
表1 ABO血型鉴定表
血型抗A分型试剂抗B分型试剂
A+-
B- +
AB++
O- -
【实验现象】
1）.在抗A抗体中，可见红细胞均匀分散，虽有时会见红细胞在圆孔中间沉积，但再加以摇晃便可发现红细胞分散。整体液体较为浑浊
2）.在抗B抗体中，可见红细胞在圆孔中央凝集成块，加以摇晃也不分散，周围液体较为澄清。
【实验结论】
该受试者血液红细胞含B抗原，为B型血
【实验讨论】
1）实验时应当注意抗体和抗原的比例。即滴加的血液含量以及抗体含量应适当，而不要一个特别多一个特别少，会影响实验结果
2）当看到有红细胞类似在圆孔中间凝集时，可多加晃动，看其是否会分散——有可能是因为圆圈状离心晃动使红细胞向中间沉积，而不是因凝集产生的现象。若分散则为干扰现象，并不是凝集反应。
2.间接凝集反应——血清类风湿因子测定
【实验原理】
以红细胞为载体，将人丙种球蛋白（可溶性抗原）吸附在载体表面而成为致敏红细胞，然后用此致敏红细胞检测类风湿性关节炎患者血清中的类风湿因子（抗变性IgG抗体），当患者血清中含有类风湿因子时红细胞发生凝集。此方法常用于检测血清中的抗体，辅助诊断疾病。
【实验现象】
理论上第九孔阴性对照中，孔中的红细胞应紧密集中与孔中央，成为一暗红点，孔周围整齐光滑。第十孔阳性对照红细胞均凝集并均匀地铺于孔的四周，孔中央无红细胞沉积的暗红点。第1-8孔，若有类风湿因子，则应随着稀释度增加，红细胞由完全凝集于孔四周看不到中央红点，逐渐转变为可看见中央有疏松的红点，若最终稀释过多可致如阴性对照的结果。
本次实验，所有孔中，包括阴性对照，红细胞均凝集并均匀地铺于孔的四周，孔中央无红细胞沉积的暗红点。
【实验结论】
十个孔均为“++++”，无法判断凝集效价以及结果是否阳性
【实验讨论】
1）.本次实验阴性对照仍出现完全凝集并均匀铺于孔四周的现象。经分析可能是由于稀释液遭到污染，使得所有孔中红细胞均发生完全凝集。
2）.实验时从恒温槽中取出96孔板时要注意轻拿，防止铺于孔四周已经凝集的红细胞因震动向孔心滑动，出现类似阴性的现象。
3）.加致敏红细胞悬液时应从第9孔阴性对照开始一次从低浓度向高浓度进行。
3.协同凝集实验
【实验原理】
金黄色葡萄球菌细胞壁含有一种蛋白质，称为金黄色葡萄球菌A蛋白SPA。SPA具有与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性。利用SPA这一特性，将一直的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。此方法常用于未知抗原的检测。
【实验现象】
注：图中三格由左到右分别为致敏金黄色葡萄球菌液+脑脊液，致敏金黄色葡萄球菌液+生理盐水，未致敏金黄色葡萄球菌液+脑脊液
1）.第一格中细菌形成白色凝集块，晃动后不分散，周围液体较为澄清。2）.第二格中对照中细菌不凝集，液滴为白色浑浊状
3）.第三格中对照中细菌不凝集，液滴也为白色浑浊状
【实验结论】
病人脑脊液中A群脑膜炎球菌阳性
【实验讨论】
1）.晃动玻片时要防止两格之间的液滴相互混合
2）.凝集不明显时可将玻片置于显微镜下观察以判断细菌是否有凝集现象。