《孔业科学与技术》２００３年第３期（总第１０４期）９７｝＾Ⅳ一一一＾
１乳品研究≈
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人乳铁蛋白多克隆抗体的制备、初步纯化及其应用
方或聃．颜景斌
（上海医学遗传研究所，上海２０００４０）
摘要：制备并初步纯化人乳铁蛋白的多克隆抗体，然后将抗体用于该蛋白的检测。分别对８周龄的昆明白小鼠和１２周龄的新西兰白兔进行多次皮下免疫注射，采集血清并用硫酸铵沉淀法进行抗体的初步纯化、将初步纯化的抗体用于抗体夹心ＥＬＩｓＡ法检测转基因小鼠乳汁中人乳铁蛋白的表迭量。经三次免疫后的新西兰白免和昆明白小鼠血清中抗体的效价分别达到了ｌ：４８（｝００和ｌ：２４０【）Ｏ，并能在较高水平上维持两周以上，经初步纯化后抗体纯度得到很大提高。用抗体夹心ＥｕｓＡ法能够测出转基因小鼠乳汁中人乳铁蛋白含量。使用皮下注射的方法对昆明白小鼠和新西兰白兔进行免疫来制备多克隆抗体是可行的，硫酸铵沉淀法纯化后的抗体去除了走多数杂蛋白，可以满足测定的需要。
关键词：人乳铁蛋白；多克隆抗体；纯化：效价
中图分类号：Ｑ５１３，Ｑ５０３文献标识码：Ａ文章编号：１６７１—５１８７（２００３）０３—００９７—０３
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抗体夹心ＥＬＩＳＡ法是一种较为灵敏的测定特定抗原的方法，但使＿Ｌ｝１该方法需要有两种不同宿主来源的针对同一种抗原的抗体，对于较为罕见的蛋白来说市售的抗体往往不能满足这一要求。本文建立了一套人乳铁蛋白多克隆抗体的制备与初步纯化方法，成功测定转基因小鼠乳汁中人乳铁蛋白含量。同时为将来进行转基冈大动物（牛，收稿日期：２００３一０５一１０羊）乳汁中人乳铁蛋白含量的测定打下基础。
１材料和方法
１．１实验动物
体重２．０—２．５ｋｇ，１２周龄左右的雄性新西兰白兔１只，购自上海医科大学实验动物中心；体重３０一４０９，８周龄左右的雄性昆明白小鼠３只，由本所实验动物房提供。
万方数据