水中细菌总数的检测
令狐采学
一、实验的目的要求
1、学习并掌握水的细菌学检测方法
2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
二、实验原理
细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
平板菌落计数法的优点：
能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。
缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。
生活饮用水细菌卫生标准
我国饮用水卫生标准：
≤ 3个大肠菌群/1L饮水，≤ 100个细菌总数/1ml饮水
三、实验仪器和材料
1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。
2、消毒酒精、消毒水。
3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处理好备用）
4、培养基
蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml
制备方法：
按照实际的需要量，按上述配方称取各成分混合后，加热
溶解，调整pH为7.4~7.6，，分装于玻璃容器中，用高压蒸
汽灭菌锅121℃灭菌20min，倒制成平板后储存于冷处备用。
5、水样：自来水、中水。
四、实验内容：
（一）、培养基的制备：
实验前事先准备好培养基平板（方法见上），每小组2-4个平板。（二）、取水样：
1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用
酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水1-2分钟，用无菌空三
角瓶接取水样200毫升。
2、纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走
部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。
3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样，先
将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，
除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从
水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。（三）、接种培养：（要求无菌操作）
用无菌吸管吸取1毫升水样，加入平板中（每个水样平行做两个平板），用无菌涂布器涂抹均匀，在培养皿侧面标注清楚后，置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后，统计细菌菌落的总数。
（四）、菌落记数：
菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落产生时，则不宜采用，而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数
后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。
五、实验注意事项
六、实验报告内容；
1、记录实验方法和步骤。
2、列表说明检测结果。
（1）自来水
（2）饮用水
3、思考题：
（1）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？
（2）你所测的水样污秽程度