联系个人所学专业，选取某种或某类疾病，设计相关实验的动物模型，详细描述其方法及步骤，并阐述所选动物种类和级别的理由以及该动物日常生活和实验的环境要求（包括进出该环境的顺序），实验过程中的注意事项
MicroRNA-378(miR-378)在心肌肥厚中的研究
一、实验原理：
microRNA(miRNA)是一类小分子非编码单链RNA，长约22个碱基，能通过与靶mRNA3’非翻译区(3’UTR)互补配对，使其翻译受到抑制，从而在转录后水平对生物体内基因时序性表达起到精细调节作用。miRNA的表达变化与心肌肥厚的发生、发展密切相关。本实验通过异丙肾上腺素和去甲肾上腺素诱导实验动物心肌肥厚，然后用PCR技术测定心肌细胞中miRNA的变化。
二、实验目的：
通过统计学方法观察miRNA在正常心肌细胞和心肌肥厚的心肌细胞中的差异，从而将miRNA作为诊断心肌肥厚的潜在的生物学标志。
三、实验材料及步骤：Wistar雄性大鼠30只（200～250g/只，SPF级别），异丙肾上腺素（ISO），去甲肾上腺素（NE），生理盐水。
3.1 分组及造模
3.1.1采用随机数表的方法讲30只wistar大鼠随机分成三组，每组10只，分别为对照组、ISO处理组、NE组。
3.1.2 ISO处理组：10只大鼠连续7天背部皮下注射ISO（ 4 mg/kg/天），制成心肌肥厚模型。
NE处理组：10只大鼠连续7天背部皮下注射NE（ 4 mg/kg/天），制成心肌肥厚模型。
对照组：10只大鼠同法背部皮下注射生理盐水（4 mg/kg/天），制成心肌肥厚模型。
3.2检测造模是否成功
3.2.1高频超声检测
分别于造模后第2周，称取大鼠质量，10％水合氯醛麻醉大鼠后，仰卧固定，将其胸前部剃毛，应用TOSHIBA-6000超声诊断仪，频率为7.5 MHz的探头置于其胸左侧，取径(LVEDD，LVESD)。左室射血分数(EF，%)、左室短轴缩短率(FS，%)、计算左室左室长轴切面，图像深度调至3.0 cm，由二维超声引导，将M型超声取样线置于二尖瓣腱索水平，垂直于室间隔及左室后壁，经M型超声曲线进行测量，每一超声测定值取3个连续心动周期测量均值。超声测量指标：舒张末期及收缩末期室间隔厚度(IVSTd，IVSVTs)、舒张末期及收缩末期左室后壁厚度(LVPWTd，LVPWTs)、舒张末期及收缩末期左室内质量(LVM，mg)。
3.2.2大鼠心肌质量指数的测定
称取大鼠体质量（body weight, BW），摘眼球取血备用，脱颈椎处死，快速打开胸腔取心脏，去除心房组织，分离左、右心室，生理盐水漂洗去血，用滤纸吸干表面水分，电子天平准确称取左心室质量（left ventricle weight, LVW）和全心质量（heart weight, HW）。计算左心室质量与体质量的比值（LVW/BW）、全心质量与体质量的比值（HW/BW），分别记为左心室质量指数（left ventricular weight index , LVWI）和全心质量指数（heart weight index, HWI）。
3.2.3心肌细胞横断面面积测定
每组随机取3只大鼠，取左心室中段，10%福尔马林液固定的心肌组织经乙醇梯度脱水、透明、浸蜡包埋后，切成5 μm的切片，将左心室心肌进行HE染色，选择横断心肌的切片（细胞核清晰，细胞膜完整）放大400倍。用Image Pro Plus 4.0图像分析软件，测量左心室心肌细胞横断面面积。每一标本随机测量20个心肌细胞，计算其细胞平均横断面面积。
3.3测量miR-378水平
3.3.1 RNA提取：用RNA提取试剂盒提取各组大鼠先前在3.2.2中备用的血中的RNA，一切步骤按照试剂盒说明书。
3.3.2逆转录：将提取的RNA作为模板加入到20μlPCR体系中，在一定的反应
条件下反应成 cDNA。
3.3.3miR-378水平的检测：将3.3.2中反应的 cDNA作为模板在20μlPCR体系中，在一定的反应条件下进行实时荧光定量PCR反应。
3.3.4用统计学方法比较观察处理组与对照组之间miR-378水平差异。
五、选择SPF级别Wistar雄性大鼠的理由：
现已遍及世界各国的实验室，价格便宜易得。
10周龄时雄性大鼠体重可达280～300g，性情温顺。
对传染病的抵抗力较强。
自发性肿瘤发生率低。
大鼠是研究心血管疾病的首选动物。
SPF动物( specific pathogen free animal)
即无特定病原体动物,指除清洁动物应排除的病原外，不携带重要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原。饲养在屏障系统中，是通过无菌动物、悉生动物而获得的。笼具、饲料饮水都要经过特殊处理，并有严格的检疫、消毒、隔离制度。所以科研实验主要使用SPF动物。
六、Wistar大鼠日常生活：
昼伏夜动 2、喜独居 3、胆小怕惊 4、喜啃咬 5、抗病力较强 6、敏感性强
七、SPF级动物实验室实验要求：
温度：18~29度，相对湿度：50%~80% 12h昼12h夜。
1.从事SPF级实验大、小鼠的饲养管理工作的饲养员必须经过有关专业培训，持证上岗。
2.每次进入屏障环境前，须用塑料桶内配制消毒液，并消毒液擦拭桶壁后，紫外照射20分钟后待用。
3.饲养人员在进入屏障环境前，应在外更衣室脱去外衣，除下手表、手机、饰品等物品，换拖鞋，洗手（眼镜）。后进入内更衣室，穿戴净化衣、帽、口罩、手
套，换拖鞋。拉开风淋室外门，人员进入后，立即关闭外门，风淋自动启动1分钟（已设置），进入清洁走廊。
4.饲养人员先从清洁储藏室把动物用的笼具、饲料、饮用水等物品经清洁走道分配至各区域的饲养室。
5.小鼠饲养笼具的更换周期至少2次/周，饲养人员应逐间更换饲养室的饲养笼、饮水瓶，添加饲料，每次更换下来的笼具、饮水瓶等物品通过污物走廊运至缓冲间，然后，擦拭笼架、地面、侧壁及门把等，检查饮水瓶有无漏水，喷雾消毒饲养室，再进入另一间饲养室同样操作。
6.饲养人员在工作中如发现有死亡动物时，应立即取出动物尸体，用塑料袋包装，记录笼号、动物死亡数、日期，并更换该鼠笼、笼盖、饲料及饮水瓶，把更换下来的物品及动物尸体一起送至污物走廊前端的缓冲间。
7.每月第一周周三更换各饲养室的排风口滤材，消毒擦拭顶壁、进风口及灯具罩。
8.每批动物实验结束后，应把该批动物的笼器具拿出屏障环境清洗，高压灭菌后再使用。
9.每次更换笼具工作结束后，饲养人员应检查各饲养室的门是否全部关闭，拖拭清洁走道、清洁储藏室、缓冲间、更衣室、次清洁走道的地面，然后走出屏障环境外。
10.在确认屏障环境内无人员后，开启紫外灯，照射20分钟。
八、进出该环境的顺序
人员：更衣－淋浴－更衣－清洁走廊－饲养室或动物实验室－污染走廊－洗刷消毒室--更衣--外部区域。
物品：包装－高压消毒（已包装消毒的可经传递窗，清结笼具经有消毒液的渡槽）－清结准备室－清洁物品储存室－饲养室或动物实验室－（污物经包装处理）污染走廊－外部区域。
动物：动物（带专用包装）－传递窗－检疫室－清洁走廊－饲育室或实验室－（实验后或生产供应）－（经包装）污染走廊－外部区域。
九、注意事项：
1.防止病原菌的污染，要严格按照SPF级实验室规定操作。
2.注意观察实验室的环境条件，保持环境温度，湿度等在规定的条件下。
3.注意观察动物的活动状况，观察有无生病或死亡的。
动物实验室的设计布局是规范工作流程和人员、动物、物品等相互关系和移动，并确保实验室安全，此外，对形成屏障结构具有重要意义。本文将从三个防护区（外围防护区、建筑防护区、饲养防护区）和四条控制路线（人员控制路线、动物控制路线、物料控制路线、废物控制路线）等方面详细介绍。 动物实验室 1.外围防护区 外围防护区主要指建筑外围的区域。鉴于实验动物饲养的特殊性，外围可能需要设监控设备、人员进出的控制、卫生防护带等。如果设施内从事涉及高致病性病原微生物的动物实验活动，须考虑设施的安保要求，以及一旦发生意外事故后对周围控制区域、疏散和救援的需求。外围的防护主要通过设置栅栏、围墙等方式实现。鉴于景观的需求，使用栅栏更显人性化。栅栏不应低于2米，栏杆的间距不大于10厘米，栏杆要坚固、易于清洁。 此外，需要设置照明系统、报警系统和视频监控系统，更高级别的防护包括地下的电磁场报警、红外线报警和运动物体报警、低压电击等措施。防护区内一般不布置绿化，以免影响监控，同时也可减少昆虫、老鼠等。为保证正常的外来服务，如邮件、送货、访客等，通过风险评估决定是否需要建设安检、特殊通道、中转站等措施。对控制区域应设置警示牌，避免无意闯入。对防护要求高的设施，
应保证外来车辆不能靠近设施，距离保持至少30米。在外围防护区，宜设专用的外部人员和车辆入口。 2.建筑防护区 建筑防护区主要指动物实验室所在的建筑。建筑内有动物设施和其它设施之分，其它设施可以与动物设施有关，也可以无关;动物设施可以就是建筑的主体，也可以是其部分。需要考虑的主要问题是动物设施环境与建筑物内其它区域环境的相互隔离与相互关系，人员、动物、物料和废物的进出路线。使用时，动物设施及其相关的设施宜集中布置，从事感染动物活动的设施需要单独布置。建筑除主入口外，要考虑设置动物、大型设备和废物的出口和入口。 出于安全考虑，必须评估和明确对门窗的性能要求。在合理控制数量的前提下，对门窗的大小、形状、耐冲击能力、耐火性、保温性、光学特性等均要有要求。可能的风险来自于异常的气候、自然灾害、人为破坏、设备异常等，如，通风系统的异常可造成室内压力急剧变化，造成门窗损坏。 3.饲养防护区 饲养防护区设施基本的形态是由入口、走廊(或通道)、功能间和出口组成。走廊是连接各功能区的纽带，各种通道发挥快捷、隔离、消毒等作用。实验动物设施的特点是不相容的因素多，需要利用走廊和通道对不相容的因素作合理的安排。走廊的形式包括双走廊、单走廊、U型走廊、环廊等。设施内部的安排应根据工作流程和利于控制风险的原则确定，此外，还要考虑工程可行性和日常维护的方便性，可以组成相对独立的单元。 1.人员控制路线 进出动物实验室的人员主要包括动物管理人员、动物实验人员和清洁人员。此外，还有送货人员、维护人员、来访人员、检查人员、安保人员等。为保证各类人员的进出有序，需要合理设计路线和设置不同级别的物理限制。人员的移动具有主动性，可以到达任何区域，要通过SOP和物理控制措施管理人员的移动。
动物实验方案申请书 中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所（实验动物管理委员会批准不超过两年期的《动物实验方案申请书》）动物实验方案名称: 动物实验方案编号(由实验动物管理委员会填写) : 动物实验方案研究期限: 动物实验方案首次提交日期: 动物实验方案更新日期（方案到期前个工作日内）: 以下内容由实验动物管理委员会填写 实验动物管理委员会审查意见： 实验动物管理委员会决定: 实验动物管理委员 兽医（签章）：日期: 实验动物管理委员会（签章）: 日期:
★如实验动物管理委员会在审批过程中发现，该实验中有涉及生物安全及伦理审查方面的内容，则由实验动物管理委员会各成员在充分讨论后填写本页内容送生物安全与伦理委员会进行审批： 实验方案中涉及到生物安全及伦理审查方面的内容是： 该内容可能带来的潜在的生物安全风险及伦理考虑点主要是: 如该问题未能得到有效的管理监督及控制,可能的严重后果是: 基于以上原因,可采取的应对方式包括有: *** 动物实验方案参与人员*** 研究组长 姓名: 单位： 办公电话: 移动电话： 电子邮件：传真：
学位：职位： 请在下列方框内填写是或否 [] 是否有参加过实验动物及动物实验的相关培训？ [] 是否有从事动物实验或动物模型的工作经历、经验？ [] 是否有参加过实验动物导致的意外伤害及生物安全培训？ 请简要描述本人与该实验方案中所用的实验动物及动物模型有关的工作经验或培训经历： 紧急联系人 姓名: 单位： 办公电话: 移动电话： 电子邮件：传真： 学位：职位： 请在下列方框内填写是或否 [] 是否有参加过实验动物及动物实验的相关培训？ [] 是否有从事动物实验或动物模型的工作经历、经验？ [] 是否有参加过实验动物导致的意外伤害及生物安全培训？ 请简要描述本人与该实验方案中所用的实验动物及动物模型有关的工作经验或培训经历： 其他人员(如涉及多于一人参与本实验方案，请按需要拷贝并增加本页，至完成所有实验人员信息的填写) 姓名: 单位： 办公电话: 移动电话： 电子邮件：传真： 学位：职位： 请在下列方框内填写是或否 [] 是否有参加过实验动物及动物实验的相关培训？ [] 是否有从事动物实验或动物模型的工作经历、经验？ [] 是否有参加过实验动物导致的意外伤害及生物安全培训？
动物实验室设计布局要求与规范 动物实验室包括普通的动物实验室规划设计和洁净动物实验室规划设计，一般由前区、饲养区、动物实验室、辅助区组成。 1.动物实验室布局的设计:计符合实验室标准和使用要求的产品布局规划;确定实验室内产品的类别规格数量。 2.水电预留位置的设计:在确定了平面布局后，提供全面水电位置图，方便客户工程精准施工。 3.通排风系统的设计:在实验室新建或改造项目中，在规划阶段就参与其中，派专业的工程师到现场与相关的人员联系，根据实验室内通风载体的数量(如通风柜、集气罩、排气罩)设计出完整的通风方案;方案内容包括：建筑内预留排风管井的位置及尺寸，管道的分布及规格。确保通风的载体使用时的风速、排风量、噪声等指标符合国家标准，并与建筑内的空调、消防、照明等线路互不干绕。 4.气路管道系统的设计:根据实验对气体供应的需要，结合现场布局，提供供气系统设计方案，在保证气体纯度的同时，精密调控气体的压力和流量。 5.环保的设计:提供完善的废气净化处理解决方案，使实验中产生的废气得到有效的解决，符合环保的排放指标。 6.产品个性设计:根据实验流程及人员的特殊要求，调整产品结构和功能，设计出个性的产品以满足不同用户的需要。 7.安全设施的设计:按照国际标准，在实验室合理配置安全柜、毒品柜及紧急事故淋洗器，急救洗眼器等安全设施。 动物实验室的级别： 一级普通动物(CV)，系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和积少数的实验动物烈性传染病的病原体。为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性(即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几乎相同的结果)。 二级清洁动物(CL)，要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。 三级无特殊病原体动物(SPF)，要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。其除菌与灭菌的方法，可使用高效空气过滤器除菌法、紫外线灭菌法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。 四级无菌动物(GF)或悉生动物(GN)。无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。悉生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。 在病理学检查上，四类实验动物也有不同的病理检查标准。 一级外观健康，主要器官不应有病灶。 二级除一级指标外，显微镜检查无二级微生物病原的病变。 三级无特殊病原体动物。无二、三级微生物病原的病变。
如何设计动物实验 一般来说，动物实验的研究工作应该明确描述，研究的目的和/或者需要验证的假说。1、选择特定动物模型的原因。2、动物种、品系、来源和类型。3、每个独立实验步骤的详细描述，包括研究设计和使用动物数量。4、数据分析所用的统计学方法。动物实验设计有重要的意义的意义1、正确的动物实验设计对提高科学研究质量、发表高水平的学术论文非常重要2、目前许多动物实验质量不高。3、一个好的实验设计，对统计学分析来说帮助很大，可以使问题变得更加容易解决4、一个不正确的实验设计，导致结果信息无用。实验设计的主要目的一是保证所测变量的任何差异是由处理造成的，而不是其他非对照变量引起；另一个目的是通过控制确定的变量在尽可能小的范围内，减少所测反应的变异性，这样对处理效应的评介更准确。我将它分为以下几个步骤 一、实验设计的最初步骤 1、查阅文献 A: 明确研究焦点B：明确方法 C：明确模型D：评估实验 2、科研方法 A：观察和描述科研中的现象B：系统的陈述问题和解释问题的假说C：利用假说预测新的观察结果D：验证假说 3、问题的陈述、研究的目标和提出假说 ?问题提出：实验将说明的问题是什么，意义 ?研究目标：总目标，特殊问题 ?假说：对每一个至少给出两个预计结果 ４、动物模型的确定 ?使用系统发育水平最低的动物，符合３Ｒ原则 ?使用的动物具有研究要求种属或品系专一特点，特定研究目的必须特点?实验期间动物模型维持条件 ?动物模型来源渠道 ?最终确定动物模型前征询实验动物兽医意见 ５、实验合作者的确定 ?在研究的过程中，明确应用的试验技术操作，并确认具有相应操作专长的人员来完成。 ?让合作者了解实验：设计、计算、样品收集．．．． ?实验动物中心可以提供动物实验有关技术操作培训及昂贵设备服务 二、动物实验设计 １、研究方案 根据问题、目标、假说，提出实验操作安排的计划并文字化 考虑的方面： A：动物模型持续时间B: 模型中预期疾病的进程（决定测定的最适时间点） Ｃ：人员参加的时间，实验花费Ｄ：给药方法 Ｅ：风险评估Ｆ：统计学方法选定 ２、实验单元 可以是一个动物，也可以是一组动物群体
联系个人所学专业，选取某种或某类疾病，设计相关实验的动物模型，详细描述其方法及步骤，并阐述所选动物种类和级别的理由以及该动物日常生活和实验的环境要求（包括进出该环境的顺序），实验过程中的注意事项 MicroRNA-378(miR-378)在心肌肥厚中的研究 一、实验原理： microRNA(miRNA)是一类小分子非编码单链RNA，长约22个碱基，能通过与靶mRNA3’非翻译区(3’UTR)互补配对，使其翻译受到抑制，从而在转录后水平对生物体内基因时序性表达起到精细调节作用。miRNA的表达变化与心肌肥厚的发生、发展密切相关。本实验通过异丙肾上腺素和去甲肾上腺素诱导实验动物心肌肥厚，然后用PCR技术测定心肌细胞中miRNA 的变化。 二、实验目的： 通过统计学方法观察miRNA在正常心肌细胞和心肌肥厚的心肌细胞中的差异，从而将miRNA作为诊断心肌肥厚的潜在的生物学标志。 三、实验材料及步骤：Wistar雄性大鼠30只（200～250g/只，SPF级别），异丙肾上腺素（ISO），去甲肾上腺素（NE），生理盐水。 3.1 分组及造模 3.1.1采用随机数表的方法讲30只wistar大鼠随机分成三组，每组10只，分别为对照组、ISO处理组、NE组。 3.1.2 ISO处理组：10只大鼠连续7天背部皮下注射ISO（4 mg/kg/天），制成心肌肥厚模型。 NE处理组：10只大鼠连续7天背部皮下注射NE（4 mg/kg/天），制成心肌肥厚模型。
对照组：10只大鼠同法背部皮下注射生理盐水（4 mg/kg/天），制成心肌肥厚模型。 3.2检测造模是否成功 3.2.1高频超声检测 分别于造模后第2周，称取大鼠质量，10％水合氯醛麻醉大鼠后，仰卧固定，将其胸前部剃毛，应用TOSHIBA-6000超声诊断仪，频率为7.5 MHz的探头置于其胸左侧，取径(LVEDD，LVESD)。左室射血分数(EF，%)、左室短轴缩短率(FS，%)、计算左室左室长轴切面，图像深度调至3.0 cm，由二维超声引导，将M型超声取样线置于二尖瓣腱索水平，垂直于室间隔及左室后壁，经M型超声曲线进行测量，每一超声测定值取3个连续心动周期测量均值。超声测量指标：舒张末期及收缩末期室间隔厚度(IVSTd，IVSVTs)、舒张末期及收缩末期左室后壁厚度(LVPWTd，LVPWTs)、舒张末期及收缩末期左室内质量(LVM，mg)。 3.2.2大鼠心肌质量指数的测定 称取大鼠体质量（body weight, BW），摘眼球取血备用，脱颈椎处死，快速打开胸腔取心脏，去除心房组织，分离左、右心室，生理盐水漂洗去血，用滤纸吸干表面水分，电子天平准确称取左心室质量（left ventricle weight, LVW）和全心质量（heart weight, HW）。计算左心室质量与体质量的比值（LVW/BW）、全心质量与体质量的比值（HW/BW），分别记为左心室质量指数（left ventricular weight index , LVWI）和全心质量指数（heart weight index, HWI）。 3.2.3心肌细胞横断面面积测定 每组随机取3只大鼠，取左心室中段，10%福尔马林液固定的心肌组织经乙
动物实验（小鼠）的一般操作技术 一目的和要求： 通过实际操作，使学生掌握实验的一般操作方法，包括动物的抓去和固定、编号被毛的 去除给药途径麻醉采血和处死等方法。 二实验内容： 1 实验动物的抓取 2 实验动物性别、发情和配种的鉴定 3 实验动物编号的标记方法 4实验动物被毛的去除术 5 实验动物的给药途径和方法 6 实验动物的麻醉 7实验动物的采血 8 实验动物的处死方法 9 雄性不育小鼠的制备 三实验的方法 1 小鼠的抓取： 抓取时先用手将鼠尾提起，放在实验台上，轻轻拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠两耳 和头颈部皮肤，将鼠置于左手中心，用左手无名指和小指按住尾巴和后肢，即可做其他实验 操作作用。 2 实验动物性别、发情和配种的鉴定： 1抓取小鼠后，观察动物肛门与生殖器之间的距离。距离远的为雄性，距离性别鉴定： ○ 近的为雌性。成熟的雄性小鼠可看到小鼠睾丸的轮廓, 雌性肛门与生殖器之间有一无毛 2 动物仰卧保定，观察乳头。雄性乳头不能明显，雌性乳头明显。小沟。○ 发情鉴定（阴道分泌物检查） 材料：生理盐水，蒸馏水，显微镜，载玻片，细棉签，性成熟小鼠 原理：哺乳类雌性动物性成熟后出现情动周期，啮齿类动物在动情周期不同阶段，阴道 膜发生典型的变化。 操作: . 用左手拇指和食指固定小鼠的颈部，将小鼠倒放在手掌上，用左手小指固定小 鼠尾巴，然后用适宜大小的移液器吸取20至30ul生理盐水于小鼠阴道内反复抽吸5次。 2. 将抽吸得到的液体滴在用多聚赖氨酸预先处理过（防止脱片）的载玻片上，用移液 器吸头将其均匀涂抹开。 3. 涂片自然干燥后，用甲醇固定3分钟。 4. 待其干燥后， 先用瑞氏染液染色5至8分钟，冲洗后立即吉姆萨染液染色5至8分钟，用水漂洗后自然干 燥，待检。 5. 显微镜下观察阴道涂片的变化，见下图。附：小鼠发情周期阴道细胞的 变化小白鼠性周期4～5天，发情持续时间大约9～12小时或20小时，排卵是在发情开始后 2～3小时。 配种鉴定：○1 阴道栓法 ○2 涂片检查法。 3 小鼠编号的标记方法： 用被毛染色法做小鼠编号。用苦味酸（黄色），一般左前肢为1，左侧腹部为2，左后肢 为3，头颈部为4，背部为5，尾根部为6，右前肢为7，右腹部为8，右后肢为9。用两种颜 色可以染到99。 4 小鼠被毛去除： 给药途径和方法：有剪毛法，拔毛法，剃毛法，用硫化钠脱毛法。 5
奥扎格雷注射液治疗急性心肌梗死课题来源：自选 设计班级：2012级在职研究生 设计人员：郭红前T2012044 设计日期：2012年10月26日
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实验技术方法 (1) 随机抽样：选正常成年健康重量相近的SD大鼠100只，从造模成功的大鼠中选出 80只大鼠按体重由小变大编号后，从随机数字表中查取随机数字，依次抄录于SD大鼠编号。 (2) 实验编号与分组：先将试验大鼠称重，然后先按体重每10g为一个重量级， 从小到大排列为若干个组，随后用龙胆紫和苦味酸将大鼠进行标记，龙胆紫表示个位，苦味酸表示十位，从大鼠的左爪开始标记，记为1，随后依次将左侧腹部，左后爪，右前爪，右侧腹部，右后爪，颈部，背部，尾部记为2，3，4，5，6，7，8，9。随后得到大鼠1至80的编号，再在随机数表中查询数字并分组。 (3) 实验手术：抓取手术大鼠，观察其是否健康，如果老鼠身体状况有异，应要更换老鼠。然后在电子称上称其重量，并做好记录，根据体重严格计算麻醉剂量，采用胸部注射麻药。大约三分钟左右，大鼠出现站立不稳，醉酒样步态。四肢固定与手术台上，松紧适中，手术过程中注意观察四肢是否出现瘀血，注意按摩。此时，可用大头针刺激大鼠尾巴，如果大鼠的反应不强烈，预示着可以开始手术。首先剪除大鼠前胸区域毛，而后均匀喷洒碘伏溶液于备皮区域。开通人工呼吸，BL一410生物机能实验系统行心电监测，从左胸纵切口分层开胸。 (4) 模型复制：于胸骨左缘第4肋间用血管弯钳稍用力穿透肋间肌进入胸腔，并迅速沿肋间隙方向撑开血管钳而钝性分离肋间肌;术者用另一血管弯钳垂直肋间隙撑开肋骨，暴露心脏。在肺动脉圆锥和左心耳之间，距左冠状动脉起始2mm处穿5—0号无创伤丝线，结扎该段冠状动脉。结扎后可见左室前壁失去原有光泽，变苍白，并出现搏动减弱，心电监测可见肢体导联R波振幅明显升高，随后出现I、aVL导联ST段明显抬高，证实制作AMI模型成功。术后注射青霉素预防感染。 (5) 处理措施： 1.奥扎格雷注射液：建模成功后即刻注射奥扎格雷注射液0.2mg/100g，以后每隔24h按上述剂量注射一次。[10] 2.损伤组：建模成功后不给予任何治疗措施。 (6) 取材：将压力传感器与BL-410生物信号采集系统连接，测量并记录所需要的各项指标。经股静脉注入10%KCl 2 ml，使心脏停搏于舒张期，迅速取出心脏，用PBS液洗去血液，滤纸吸净水分后用电子天平(精确到0.1 mg)分别称取左、右心室实际重量(LV AW、RV AW)，计算其与体质量(BW)的比值，得到左、右心室相对重量(LVRW、RVRW)。将心脏从心尖到心底沿长轴横切4等分，用4%多聚甲醛固定24 h后分别石蜡包埋。各取一张5 μm的病理切片作HE染色。[11]用HPIAS彩色病理图文分析系统测量每张切片的心内膜缘总长及心梗部位心内膜缘长度，计算梗死面积。 (7) 指标检测： ①心电图：于术后0h、24h、1w、2w、3w、4w，分别观察其心电图的变化。 ②HE染色切片观察：在24h、1w、2w、3w、4w，时分别从5组中每组随机取出4只大鼠处死，并迅速取出心脏，PBS液洗去血液。用甲4%多聚甲醛固定24 h后分别石蜡包埋。各取一张5 μm的病理切片作HE染色并观察。 ③血流动力学检查（SBP、DBP、LVSP、LVEDP、左室内压最大上升和下降速率) 在24h、1w、2w、3w、4w，时分别从5组中每组随机取出4只大鼠，用3%戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔注射麻醉，气管切开插管，保持呼吸道通畅。分离右侧颈总动脉，插入2F聚乙烯
动物实验方案设计 动物实验指在实验室内，为了获得有关生物学、医学等方面的新知识或解决具体问题而使用动物进行的科学研究。以下小编为你整理了动物实验方案设计，希望对你有所参考帮助。 实验设计就是拟定实验方案，在进行科学研究时，对研究方案作合理的安排，以减少随机误差的影响。采用适当的研究实验次数，减少实验的成本并能对数据进行有效的分析，提高实验研究的可靠性，从而实现研究的目的。 研究设计包括专业设计与统计设计两个部分。统计设计主要是依据研究目的，从研究的现况条件出发，规定研究因素、选择效应指标、确定研究对象的引入方式方法和规模，拟实施的方法、方案，及数据收集、整理分析的模式，直至结果的解释，进行系统的安排，使其消耗最少的人力物力和时间，而获得可靠的信息与结论。 实验设计的基本要素为：实验单位、处理因素和实验效应。 (1)大多数情况下，实验单位等同于实验对象、受试对象，在动物实验中的动物即为实验单位。 (2)处理要素：是研究者根据研究目的施加于实验单位，在实验中需要观察并阐明其效应的因素，是实验单位分组的标志。而非处理因素则是指实验中非人为施加的、与处理因
素同时存在，同样可以使受试对象产生实验效应的因素，如实验动物的雌雄、体重等因素。突出研究因素的主导作用，排除混杂因素的干扰作用，可以通过相应的实验设计方法，尽量使非处理因素在各处理组中的分布达到一致或均衡，以便分离出处理因素的效应。另外，处理因素的施加方法、强度、频率和持续时间等，在整个实验中应始终保持不变，以保证实验结果评价的可靠性和稳定性；处理因素作用于受试对象的反应，是研究结果的最终体现，其基本要求客观性、特异性、灵敏性和精确性。 (3)实验效应：处理因素作用于实验动物后，出现实验效应，一般是用各种指标来反映的。指标按其性质可分为计数(含等级)指标和计量指标，计数指标如“是”“否”“有”“无”，“阳性”“阴性”，“痊愈”“显效”“好转”“无效”，“存活”“死亡”等。计量指标指可测量(含间接测量)的指标，如很多检查和检验指标。 在对指标进行观察时应注意： ①实验效应的观察应避免偏性。研究者的心理往往偏于阳性结果，为了消除或减少测量偏差，设计时常采用盲法。 ②应注意处理和效应的关系：处理与效应之间存在一定的关系，如剂量反应曲线。做实验应选择一个合适的实验剂量。 实验设计的三大原则即为重复(replication)、随机化
奥扎格雷注射液治疗急性心肌梗死 课题来源：自选 设计班级：2012 级在职研究生 设计人员：郭红前T2012044 设计日期：2012 年10 月26 日 一、实验设计的目的意义：实验设计的目的意义，国内外研究现状，存在的问题，解决冋题的思路。 目的与意义：复制急性心肌梗死动物模型，观察奥扎格雷注射液的疗效，从而探讨奥扎 格雷注射液是否对急性心肌梗死有较好的临床效果，为临床上提供抗血小板注射药治疗急性 心肌梗死的新思路。 国内外研究现状：急性心肌梗死(AMI)是由冠状动脉供血不足所引起的心肌坏死的临床综合 征，AMI发病突然、凶险、病死率高，抢救治疗必须争分夺秒。急性心肌梗死常导致冠心病患者心律失常及心脏骤停，严重可导致患者猝死[1]。患者由于冠状动脉病变，动脉内粥样斑 块破裂，使冠状动脉供血不足而导致心肌急性坏死。其治疗原则是尽快抢救恢复心肌的血液 灌注和及时、充分开通闭塞的血管，以挽救存活及濒死心肌[2];防止梗死扩大或缩小心肌缺 血范围，限制和缩小梗死面积可以最大限度地减少心脏泵功能衰竭或与其相关的致命性心律失常以及心脏破裂的发生，保护和维持心脏功能；及时处理并发症[3];是急性心肌梗死治疗 的重要目标之一。而治疗时如何使急性闭塞的梗死相关血管尽早恢复前向血流，实现早期再 灌注(早期血运重建)是达到上述目标的关键。近年来，对AMI的治疗进展较快，而且对改善 AMI的预后起到了积极重要的作用，取得了很好的效果，AMI的治疗方法包括溶栓治疗、经皮
冠状动脉介入(PCI)、冠状动脉搭桥术(CABG卜心肌干细胞移植等。⑷ 奥扎格雷为血栓烷(TX)合酶抑制剂，能阻碍前列腺素H2( PGH2生成血栓烷A2 (TXA2)，促使血小板所衍生的PGH2专向内皮细胞。内皮细胞用以合成PGI2,从而改善TXA2与前列腺素PGI2的平衡异常。理论上能抑制血小板的聚集和扩张血管作用。主要用于急性脑梗塞的治疗。 冠状动脉粥样斑块的不稳定性决定了不稳定性心绞痛的发生机制，脂质斑块的破裂是由纤维 帽变薄和脂质斑块增大，以及炎症的发生，炎性细胞的侵润，血管壁所受的剪切力增大，产 生斑块破裂、冠状动脉就可能被纤维蛋白原、血小板聚集物和红细胞集合而堵塞，导致腔内不全性狭窄、阻塞，而形成临床不稳定型心绞痛。由血小板激活释放的TXA2可以诱发冠脉痉 挛，加重冠脉狭窄。UAP的血栓大多数是以血小板为主要成分，纤维成分少的白血栓”或灰血栓”]，因此，抗血小板凝集的治疗意义非常大。目前普遍认为体内血栓调节机制是由前列腺素G2(PGG2和前列腺素H2(PGH2在凝血恶烷A2(TXA2)合成酶的作用下形成TXA2,从而促使血小板聚集而形成血栓；另一方面PGG和PGH又在前列环素I2合成酶作用下可转化成前列环素I2(PGI2)，抑制血栓的形成，促使血栓溶解。奥扎格雷钠为凝血恶烷 A2(TXA2)合成酶抑制剂，能选择性抑制TXA2合成酶，同时也能增强 PGI2合成酶达到消除血栓[6] 存在的问题：目前临床上奥扎格雷注射液主要用于治疗急性脑梗塞，蛛网膜下腔出血脑 血管痉挛等疾病。但在急性心肌梗死方面治疗应用经验不足。 解决问题的思路：复制急性心肌梗死的动物模型。对急性心肌梗死动物给予奥扎格雷注射药，观察治疗疗效。 参考文献： [1] 项建立.急性心肌梗死的治疗进展[J].医学理论与实践，2009，22 (8) : 907 — 911 . [2] 贾浩.急性心肌梗死不同时期溶栓的疗效观察和分析[J].临床医学，2006，26(10) : 66 —67. [3] 叶任高，陆再英?内科学?人民卫生出版社，2006: 283-297 . [4] 中华医学会心血管病学分会. 急性心肌梗死诊断和治疗指南. 中华心血管病杂志，2001，
实验动物广泛应用于医学、药学、生物学、兽医学、胚胎学、遗传学等众多研究领域，对生命科学的研究，特别是对生物医学的研究有着重大意义。近年来，我国实验动物科学发展迅速，医学实验特别是药效及药物安全性评价必须依赖于高品质的实验动物。SPF(specific pathogen free)动物，即无特定病原体实验动物，能排除病原体的干扰，保证实验结果的准确性，已成为生命科学研究中广泛认可的标准实验动物。 一、装饰材料 实验动物房的装修材料如门窗、墙体和地面材料的选择非常重要，用于动物实验室的建筑材料和表面涂料均要达到生物安全要求。因此，本实验动物房严格按国家标准，选择环保耐用、便于清洁维护的建筑材料。墙、顶和门均采用δ=50 mm厚度的优质彩钢夹芯保温板和专用电泳铝合金型材。要求材料的表面平整性好，隔音量≥28 dB(A)；保温性能好，保温板传热系数为 W/m2·K。室内墙与墙、墙与顶板、墙与地面均由专用铝合金型材圆弧过渡连接，无积尘死角，以达到净化要求。无菌区及相关区域选用防静电PVC地板，具有不吸尘、不产尘、耐酸碱腐蚀及耐冲洗等特点。 二、环境控制系统 1、温湿度、噪音及照度控制系统 实验动物的健康生长和繁育极易受到环境的影响，温度变化对实验动物的健康影响较大。按照国标的要求，动物房对不同区域的温湿度分别进行控制，结合重庆市气候潮湿的特点，温湿度控制的具体参数设置如下：万级区的温度为20～26℃，最大日温差3℃，相对湿度40%～70%；10万级的温度为18～27℃，相对湿度30%～70%。噪音能引起实验动物的躁动、恐慌，对实验动物的健康生长和繁育产生负面影响，啮齿类动物对噪音尤为敏感。为使实验动物健康生长，保证噪音≤60 dB(A)，同时在送回风管相应位置装有微孔板消声器，以减少噪音的产生。根据功能需要，并保证动物的正常生长，动物照度和工作照度分别控制在15～20 lx和150～300 lx，明暗交替时间为12/12 h。净化系统内采用吸顶式净化灯，该灯具有不吸尘、不产尘、防静电等特点，可满足净化系统照明的要求。 2、洁净度、换气次数及压差控制系统 为避免实验动物受到污染，减少不必要的损失，严格要求动物房及其设施的洁净度。饲养室、洁净走道和洁物暂存室等空气洁净度为万级(粒径≥μm的粒子密度≤万颗/m3)；污物走道、更衣室和缓冲区等空气洁净度为10万级(粒径≥μm的粒子密度≤万颗/m3)。沉降菌最大平均浓度为：万级区个/min、￠90皿，10万级区个/min、￠90皿。净化过滤系统分初、中、高3级过滤，有效阻止外源性病原体的进入，保证动物房不被外界环率高、容尘量大、使用寿命长、初阻力小的特点，降低系统运行能耗。由于实验动物自身及其代谢产物散发的气味，会影响动物的健康生长，其中尿液散发的氨气危害最大，所以需通过换气系统排出动物代谢所产生的二氧化碳、氨等有害气体，净化实验室空气，确保实验动物的正常生活条件。换气次数影响温度和相对湿度，且实验动物对气流速度及其声音十分敏感，因此换气次数并不是越多越好，而是需要合理控制。设计方案要求:万级区换气次数≥20次；10万级
动物实验室的设计要求和方案 21世纪以来，医学与生命科学领域高速发展，实验动物作为这些领域的重要载体受到日益广泛的重视，大众对于动物实验室的设计要求也更加严谨。SAREN三仁实验室今天将从以下几个方面来进行详细的介绍。 1.选址 实验动物的种类以及级别不同会有不同的需求，我们要根据实际需要，建立相应设施的动物房、活动场所和相应的辅助用房。在选址方面要选择能保持安静、清洁、无不良外界影响的地方。另外，光线充足、通风良好的地址最佳。还要保证地面整洁，不积水；顶棚、墙壁易于清洁、消毒；外墙、屋顶、顶棚、门窗及通外面的管道等能杜绝外界动物、蚊蝇及其它虫害钻入。
2.流线分明 动物房实验室的屏障环境强调人流、物流和动物流分开，三者需要循单向路线流动，清污分流，做到净化、灭菌和防虫。为了避免交叉污染，工作人员在进出动物房时要依次按照顺序：洗澡-更衣-清洁走廊-饲育室或实验室-循污物走廊。 清洁物顺序则为：脱外包装-洗刷间清洗-传递舱或渡槽进入（或双扉高压消毒柜消毒）-储藏于清洁物品储藏间-清洁走廊-饲育室或实验室。 3.布局 我们在前面的多篇文章中也提到要充分考虑动物实验室设计的布局。主要包括三个防护区和四条控制路线（具体可看下图）。防护区包括外围防护区、建筑防护区和饲养防护区；四条控制路线包括人员控制路线、动物控制路线、物料控制路线和废物控制路线。 通过设监控设备、控制人员进出、设卫生防护带以及人员、动物、物料和废物的进出路线这
样的布局能够规范工作流程和人员、动物、物品等相互关系和移动，并确保安全。 动物实验室的建设和设计是一套复杂的系统工程，不管是从选址到规划，还是从建设到运营，都需要综合考虑供电，供水，供气，通风，温度，湿度，安全措施，环境保护等诸多因素。
动物饲养试验方案设计原则及试验数据分析方法 金玲陈婉如 （福建省华龙集团饲料有限公司福州350003） 摘要介绍了动物饲养试验方案的设计原则及Excel软件在动物饲养试验数据分析中的应用。 关键词Excel 动物饲养应用 1 动物饲养试验方案的拟定及设计原则[1] 1.1试验方案的拟定 试验方案是根据试验目的与要求而拟定的进行比较的一组试验的总称。饲料企业常用的饲养试验方案包括以下两种： 1.1.1 单因素试验方案是指整个试验中只比较一个试验因素的不同水平的试验。 1.1.2 多因素试验方案是指在同一试验中同时研究两个或两个以上试验因素的试验。 1.2 试验设计的基本原则 1.2.1 试验要有代表性生物学代表性：要求研究对象的品种、个体具有代表性；环境条件代表性：要求试验环境条件与将来推广试验成果地区的自然和生产条件基本一致。 1.2.2 试验要有正确性在进行试验的过程中，应严格执行各项试验要求，将非试验因素的干扰控制在最低水平，以避免系统误差，降低试验误差，提高试验的正确性。 1.2.3 试验要有重复性重复性是指在相同条件下，重复进行同一试验，能够获得与原试验相类似的结果，即试验结果必须经受得起再试验的检验。 2 利用Excel软件进行动物试验数据分析 2.1 Excel相关功能安装 以Excel 2003用户为例，电脑中未安装Excel 2003的用户仅需在安装Office软件时选择“完全安装”即可；电脑中已经安装Excel 2003，且为“典型安装”的用户需要安装Excel扩展功能，操作方法如下：选择“工具”→“加载宏”，在“分析工具库”前打勾后，放入Office安装盘，确定后即可加载。 2.2 利用Excel数据分析工具进行方差分析（实验所获得的数据按某些项目分类后，再分析各组数据之间有无差异的一种统计方法）。 2.2.1单因素随机分组试验[2]例：用4种不同饲料饲养尼罗罗非鱼，经过一段时间饲养后，尼罗罗非鱼的增重如表1。 表1 4种不同饲料饲喂尼罗罗非鱼增重情况 g 饲料每组每鱼平均增重量 1 2 143 152 141 157 150 159 146 163 149 160 3 13 4 136 132 127 134 4 129 127 138 121 116 2.2.1.1 分析步骤①将数据录入Excel工作表中；②利用数据分析工具进行方差分析。选择“工具”→“数据分析”→“方差分析：单因素方差分析”按“确定”。在出现的对话框“输入区域”中选择数据区域；在分组方式中根据输入数据情况选择“行”或“列”；在“α(A)”框中输入F统计临界值的置信度(0.05或0.01)，本例输入0.01；在“输出选项”中，选定要粘贴计算结果的位置。单击“确定”，就得到净增重的方差分析表2。 表2 4种不同饲料对尼罗罗非鱼增重影响的方差分析表（α(A)=0.01） 差异源SS df MS F P-value F crit 组间3040.60 3 1013.53 35.91 0.00 5.29 组内451.60 16 28.23 总计3492.20 19 其中：SS为平方和；df为自由度；MS为均方；F为F值；P- value为P值；F crit为F0.01(3,16)时临界F值 2.2.1.2结果分析由表2得出结论，F=35.91>F0.01(3,16)=5.29，P<0.01。表明4种不同饲料对尼罗罗非鱼平均净增重的影响达到1%极显著水平。 方差分析结果中F值仅表明试验各处理平均数间的差异是否显著或极显著，并不意味每两个处理平均数间差异都显著或极显著。借助Excel对上述数据的初步处理，可以方便地进行LSD法(最小显著差数法)、LSR法(最小显著极差法)等多重比较，以判定两两处理间的差异显著性。 2.2.1.3 LSD法 2.2.1. 3.1 基本原理经F检验显著的前提下，先计算出显著水平为α的LSD a ，然后将任意两个处理平均
大鼠血紅素再生法 1实验鼠要求：雄性，约四周大，体重小于70克，温度25±2℃，湿度 50%，光照周期各12小时，供给水为去离子水。 2饲料配方 基础饲料：采用AIN-76配方，碳水化合物全用玉米淀粉，矿物 质不加铁，铁小于3PPm。 标准组饲料：基础饲料添加FeSO4·7H2O，铁含量分別有6、12、 18 及24 ppm，四种不同浓度饲料 试验饲料：样品提供铁质，加上基础饲料，铁含量分別为6、12、 18 及35 ppm，，四种不同浓度饲料。每一种样品需 要一套含四种浓度度之「试验饲料」， 3实验设计 （1）基础饲料组：6-7只鼠，全程基础饲料 （2）标准对照组：四组，每组6-7只鼠，再生期饲喂标准饲料，每组一个浓度。 （3）实验组：一个样品四组，每组6-7只鼠，再生期饲喂试验饲料，每组一个浓度。 4实验步骤 耗铁期：全部喂饲基础饲料，每周记录体重，尾巴采血追踪血红素变化，直到降至6 g/dL 以下，大約需14 至21 天。 再生期：依体重分组，每组6-7只，一组饲喂基础饲料，四组饲喂标准饲料，每组一种铁浓度。一种样品需要四组鼠，饲喂试验饲料，每
组一种铁浓度。定时记录饲料摄取量，10-14天采血测血红素 5分析项目及方法 铁量分析：测试样品灰化，灰分用浓盐酸溶解，适当稀释后，以原子吸收光谱法配合铁标准溶液与铁标准检量线而定量 血紅素分析：取5mlHiCN到一试管，加入20ul老鼠静脉血，静置3-5分钟，测其血红素。 6计算统计分析 再生期铁摄取量以各组饲料铁浓度乘以饲料摄取重量而得。大鼠的血液体积以每克体重有0.067 mL 估計，血紅素的含铁量以0.335% 計算。代表铁利用之生物指标可采用再生后血紅素浓度、再生期血红素浓度增加量或再生期血红素铁增加量，其計算原則列於表三。 表三血红素再生法可用的铁利用率指标，铁可用率相关項目计算原則 血红素增加量（mmol/L）：再生期之血红素浓度－耗铁期结束之血红素浓 度 血红素总铁量（μmol Hb/ rat）：大鼠体重×0.067 ×血红素浓度× 0.335% 血红素铁增加量（μmol Fe/ rat）：再生期之血红素总铁量－耗铁期结 束之血红素总铁量 7结果评定 若「试验饲料」各组之铁利用指标均显著高于铁浓度相当之「铁标准饲料」组，而且试验样品之相对生物价大于100时，表示其铁可用率优于FeSO4，可利用为促进铁吸收之健康食品。 若「试验饲料」各组之铁利用指标与铁浓度相当之「铁标准饲料」组无显