西南大学
硕士学位论文
碱性脂肪酶生产菌株的诱变选育、碱性脂肪酶的分离纯化与固
定化初探
姓名：徐榕敏
申请学位级别：硕士
专业：生物化学与分子生物学
指导教师：唐云明
20070401
文献综述
＼ｊＬ．ｈ
Ｏ
ｏ
Ｈ…ａ—掣
＼Ａｓｐ
图４脂肪酶催化甘油三酯水解过程中形成的四面体中间态
Ｆｉｇ．４Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓｔａｔｅｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｆｏｒｍｅｄｄｕｒｉｎｇｌｉｐａｓｅ—ｃａｔａＩｙｚｅｄｈｙｄｒｏＩｙｓｉｓｏｆ
ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌｓ
除此之外，有些种类的脂肪酶还需要有一额外的Ａｌａ的存在爿。能发挥高催化的活性。虽然脂肪酶蛋白的氨基酸序列总体的同源性不高，但底物结合部位的氨基酸的同源性较高；绝大多数已知序列的脂肪酶的Ｓｅｒ均存在于Ｇｌｙ—Ｘｘｘ?Ｓｅｒ－Ｘｘｘ?Ｇｌｙ的保守序列中。
图５Ｐ
ａｅｒｕｇｉｎｏｓａＩｉｐａｓｅ活性位
点的三维结构活性位点残基为
Ｓｅｔ”．Ｈｉｓ２”和＾ｓＤ８：残基２６１和
２５７的羰基氧原子为Ｃａ＇‘配基：顶
端的ａ一螺旋（浅色的）表示“盖子”
状结构。
Ｆｉｇ．５Ｔｈｒｅｅ—ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａＩ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｆｏｒ
户ａｅｒｕｇ／ｎｏｓａＩｉｐａｓｅ．ｔｈｅ
ｒｅｓｉｄｕｅｓａｔｔｈｅａｃｔｉｖｅｓｉｔｅａｒｅ
Ｓｅｒ”．Ｈｉｓ４。ａｎｄＡｓｐ２８；ｔｈｅｃａｒｂｏｘｙｌ
ｏｘｙｇｅｎａｔｏｍｓａｔｒｅｓｉｄｕｅ一２６１ａｎｄ一２５７ａｒｅｔｈｅＩｉｇａｎｄｏｆＣａ”：ｔｈｅｏ－ｈｅＩｉｃａＩａｔｔｈｅｔｏｐ（ｉｎｔｈｅｓｈａＩＩｏｗｃｏｌｏｒ）ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ
ｔｈｅ“ｌ；ｄ”
脂肪酶的亲核催化部位丝氨酸埋在分子中，表面被盖状结构覆盖（又称“盖子”）。如图５ｔ坩’所示，盖子是由相对疏水的氨基酸残基形成的一个或两个ａ一螺旋构成，对三联体催化部位起保护作用。这一发现使得人们对脂肪酶催化的机理有了新的认识，也就是说脂肪酶在催化水解时经历了构像转变。吸附于油水两相界面的脂肪酶在油相疏水作用的诱导下，“盖子”被打开，底物得以靠近催化中心，这一