胰岛素及胰岛素样生长因子一１在大鼠多囊卵巢综
合征中的研究
摘要
目的：本研究采取Ｂｏｇｏｖｉｃｈ法制成大鼠多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）动物模型，行口服葡萄糖耐量（ＯＧＴＴ）测定及胰岛素（ＩＮＳ）释放试验；观察下丘脑、垂体和卵巢的光镜（ＨＥ染色）及透射电镜改变；用免疫组化（ＩＨ）方法观察胰岛素样生长因子．１（ＩＧＦ．１）在下丘脑、垂体和卵巢的分布和表达。研究该大鼠ＰＣＯＳ模型是否存在胰岛素抵抗（ＩＲ）及下丘脑、垂体和卵巢在ＰＣＯＳ发病中的作用。
材料与方法；选２４日龄未成年雌性ＳＤ大鼠３６只，随机分成两组，每组１８只。其中一组建立ＰＣＯＳ模型作为实验组。另一组为正常对照组。两组大鼠均于３６曰龄行ＯＧＴＴ实验，测定血清ＩＮＳ及血糖（ＧＣ）。腹腔注入４％水合氯醛（４００ｍｇ／ｋｇ体重）麻醉，心室灌注，取脑、垂体和卵巢，进行免疫组化处理。每组各有三只行电镜观察。根据Ｐａｘｉｎｓ等大鼠脑定位图谱确定弓状核（ＡＲＣ）所在的平面。
血清ＩＮＳ的水平用放免（ＲＩＡ）测定（上海生物制品研究所），１２５Ｉ标记ＩＮＳ，一抗为豚鼠抗ＩＮＳ特异性抗血清抗体，二抗为羊抗豚鼠抗体。灵敏度及特异性较高。血糖测定：ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＰｌｕｓ血糖试纸，美国雅培制药有限公司生产。
下丘腩、垂体和卵巢中的ＩＧＦ．１的寝达厢ＩＨ方法测定，ＩＧＦ－１免疫缝纯酶一抗是兔抗大鬣ＩＧＦｑ荤竞隆抗体（美黧ＳＡＮＴＡＣＲＵＺ公司生产，Ｏ。ｌｍｌ，稀释１：２００蜃应用），
免疫组化结果判断标准：同一样本至少重复染色一次，蠢至少两位经验丰富的专垃人员独立阕片。以ＰＢＳ麟代～抗｛乍为阴性对照，以纲胞内出现棕黄色颗粒为阳性结果。每张切片在４００倍高倍视野下随机取５个视野，计数阳性细胞数占全部细胞数的比例，染色结采按比例分为：一；辩链细憝数占１０％以下；＋：鬻性缨憨数占１０－３３％『；十＋：阳性细胞数占３３－．－６６％；＋＋＋：阳性细胞数占６６％以上。
统计学分析：砥Ａ结果的数据筒ｘ±ｓ表示，组闻差异耀ｔ检验；ＩＨ结果矮ｆ检验。所有数据均照ＳＰＳＳ软件包进行统计。Ｐ＜０．０５为差别显著
结果：
ｌ大鼠体蓬实验组与对照组无差剐。
２大体形态；羚ＯＳ大鬣模型的双侧卵巢骥显增大，毒见多个囊泡。卵巢重量实验组显著离于对照组（Ｐ＜Ｏ．０１）。下丘脑和垂体的大体形态与正常对照组无裙显差异。
３ＯＧＴｒ测定及ＩＮＳ释放试验：实验缎服糖后６０ｒａｉｎ翻１２０ｍｉｎＩＮＳ明显赢于对照组，Ｐ＜０。０１。实验组服糖后６０ｍｉｎ和１２０ｍｉｎＩＮＳ敏感率（ＩＮＳ与ＧＣ比值ＩＮＳ／ＧＣ）魂显高于对照缰，Ｐ＜０．０１。ＰＣＯＳ大鬣存在ｌＲ。秀组ＩＮＳ均值分别为：６０ｍｉｎＰＣＯＳ缒
２２．８０８＋２．６５５，正常对照组为１７．６８３４－３．０１５；１２０ｍｉｎＰＣＯＳ组１７．６４７４－３．３０１，正常对照组为１２．８２８＋２．９９６。
两组ＩＮＳ／ＧＣ均值分别为：６０ｍｉｎＰＣＯＳ组为３．０３４－０．３８，正常对照组为２．３５＋０．４６；１２０ｍｉｎＰＣＯＳ组为２．６３４－０．４２，正常对照组为１．９８＋０．４４。
４下丘脑、垂体、卵巢光镜及透射电镜改变：
４．１ＰＣＯＳ大鼠下丘脑弓状核与正常大鼠相比：光镜下神经元细胞和神经胶质细胞区别不明显；电镜下ＰＣＯＳ大鼠促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）神经元核大而饱满，高尔基复合体和线粒体增多，线粒体小而圆，肿胀明显，胞浆中清亮小泡和致密芯分泌颗粒增多。
４．２ＰＣＯＳ大鼠垂体与正常对照大鼠相比：光镜下嗜碱性细胞区别不明显；电镜下ＰＣＯＳ大鼠垂体促性腺激素细胞核旁高尔基复合体和线粒体增多，分泌颗粒增多，大小不一，电子密度增高。
４．３ＰＣＯＳ大鼠卵巢与正常对照大鼠相比：光镜下卵泡颗粒细胞减少而膜细胞层增加，后者常发生黄素化，卵巢皮质间质细胞明显增生，其中可见散在丛状的黄素化细胞巢；电镜可见卵泡颗粒细胞核型不整，
含多个核仁的胞核较多见；线粒体呈不同程度的肿胀，愈接近外层的颗粒细胞中其线粒体的肿胀愈明显，嵴部分断裂甚至消失：滑面内质网减少，而扩张成池的粗面内质网增多，脂滴亦增多，电子密度较高。泡膜细胞中线粒体亦有不同程度的肿胀；并可见大量扩张成池的滑面内质网和粗面内质网，内
一。～一士查笾墨—一＿－——●————Ｐ—＿＿＿———＿＿－——＿＿－——＿＿＿＿—＿————＿———＿———一——一
有絮状物；脂滴增多，电子密度较高。
５ＩＧＦ．１在下丘脑、垂体和卵巢的分布和表达。
５，ｌ下丘脑；免疫缀嗣二发瑗ＰＣＯＳ缝和正常组ＩＧＦ—ｌ在弓状核神经元细胞和神经胶质细胞上均有表达，
ＩＧＦ．１在ＰＣＯＳ组神经胶质细胞表达比正常对照组表达强（Ｐ娟．０５）。
ｓ。２蓬镩；ＩＧＦ－１在正豢组和ＰＣＯＳ组藿体缎腿土均有表达，ＰＣｏＳ组与对照组相比无区别。
ｓ．３卵巢；观察发现，正常对照组和ＰＣＯＳ组卵泡膜细施胃袭达ＩＧＦ．１，小卵泡及闭锬羚沲的颗粒缁脆也可表达ｌＧＦ．１，闻矮缨胞不表达ｌＧＲｌ，ＩＧＦ—ｌ褒ＰＣＯＳ组颗粒细胞比正常组表达增高（Ｐ＜ｏ．０５），而农泡膜细胞中的染色强度与正常对照组无显著差笄。
结论：
ｌ本研究酋次发现：本模型的ＰＣＯＳ大鼠除了爨巢形态学符合多囊卵巢以外，还存在ＩＲ。ＯＧＴｒ后６０ｍｉｎ、
１２０ｍｉｎＩＮＳ及ＩＮＳ敏感率明驻高于对照组。提示此模鍪可作为Ｐｃ◇Ｓ磅究的蓬驽动物模型。
２婚Ｆ－ｌ作为～个中介因素在郛泡的生长、发育与成熟中起到重要的调节作用。本研究首次报道ＩＧＦ．１在ＰＣＯＳ大鼠下丘脑和卵巢中的分布与正常大鼠相比表臻出苓阂的模式。提示ＩＧＦ．１参与了Ｇ拣灌、黄体生成素（ＬＨ）、卵泡刺激素（ＦＳＨ）和雄激素的分泌异常，是导致ＰＣＯＳ发生的～个煎要因素。
３本研究首次报道ＰＣＯＳ模型下丘脑、垂体形态学特点。ＰＣＯＳ丈鼠下豆脑、豢体移雾巢镜下的表瑷不慝
中文摘要
于正常对照组，说明下丘脑．垂体．卵巢性腺轴在ＰＣＯＳ发病中起重要作用，形态学的改变是其分泌激素改变的基础。
关键词：多囊卵巢综合征，大鼠，胰岛素，胰岛素抵抗，胰岛素样生长因子一ｌ，下丘脑，垂体，卵巢。
一。叁查塑墨一一
——＿——————————ｍ－—＿——＿＿——————————＿—————————一一
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎａｎｄ
ｉｎｓｕｌｉｎ＿ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈ
ｆａｃｔｏｒ－１ｉｎｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃｏｖａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｒａｔｍｏｄｅｌ
ＡＢＳＴＲＡＣＴ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃｏｖａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｒａｔｍｏｄｅｌｗａｓｍａｄｅｕｓｉｎｇＢｏｇｏｖｉｃｈｍｅｔｈｏｄ．Ｏｒａｌｇｌｕｃｏｓｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｅｓｔａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｌｅａｓｉｎｇｔｅｓｔｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ。Ｔｈｅａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｏｆｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙａｎｄｏｖａｒｙｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｔｈｅｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎ—ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－１（ＩＧＦ－１）ｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｉｎｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙａｎｄｏｖａｒｙｕｓｉｎｇｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｔｈｅａｉｍｗａｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃｏｖａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｒａｔ
ｍｏｄｅｌｗｈｅｔｈｅｒｈａｓｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｒｎｏｔａｎｄｔｈｅｒｏｌｅｏｆｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙａｎｄｏｖａｒｙｉｎＰＣＯＳｐａｔｈｏｌｏｇｙ．
Ｍａｔｅｒｉａｌｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓ：２４?－ｄａｙ—－ｏｌｄｉｍｍａｔｕｒｅｆｅｍａｌｅＳＤｒａｔｓ（ｎ一３◇ｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｉｎｔｏｔｗｏｅｑｕａｌｇｒｏｕｐｓａｔｒａｎｄｏｍ．ＯｎｅｇｒｏｕｐｗａｓｃｒｅａｔｅｄＰＣＯＳａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌ，ａｎｏｔｈｅｒｇｒｏｕｐｗａｓｕｓｅｄａｓｃｏｎｔｒ０１．Ｂｅｉｎｇ３６ｄａｙｓｏｌｄ，ｔｈｅｒａｔｓｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｉｎｓｕｌｉｎａｎｄｇｌｕｃｏｓｅｗｉｔｈｏｒａｌｇｌｕｃｏｓｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｅｓｔ．Ａｆｔｅｒ４％ＣｈｌｏｒａｌＨｙｄｒａｔｅ（４００ｍｇ／ｋｇ）ｗａｓｉｎｊｅｃｔｅｄｉｎａｂｄｏｍｉｎａｌｃａｖｉｔｙｆｏｒａｎｅｓｔｈｅｓｉａ，ｃａｒｄｉａｃｖｅｎｔｒｉｃｌｅｗａｓｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙａｎｄｏｖａｒｙｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｏｒｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｔｈｒｅｅｒａｔｓｆｏｒｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｆｉｘｅｄｆｏｒｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ
６
荚文摘要
ｂａｓｅｄｏｎＰａｘｉｎｓ’ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｌｏｃａｔｉｏｎｏｆａｒｃｕａｔｅｎｕｃｌｅｕｓｗａｓ
ｔｈｅｒａｔｂｒａｉｎ．
ＴｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＩＮＳｉｎｓｅｒｕｍｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＩｕＡ．ＡＧｕｉｎｅａｐｉｇｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ（ｍａｄｅｉｎＳｈａｎｇｈａｉｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｕｂｓｔａｎｃｅＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ、ａｇａｉｎｓｔｈｕｍａｎＩＮＳｌａｂｅｌｌｅｄｂｙ１２５１ｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｐｒｉｍａｒｙａｎｔｉｂｏｄｙ．１１ｌｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｗｅｒｅｌｌｉｇｈ．ＢｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＰｒｅｃｉｓｉｏｎＰｌｕｓｔｅｓｔｐａｐｅｒｍａｄｅｂｙａｂｂｏｔｔｌａｂｏｒａｔｏｒｙｉｎＵＳＡ．
ＡｒａｂｂｉｔｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｒａｔＩＧＦ－１（ＳＡＮＴＡＣＲＵＺＣｏｍｐａｎｙ，ＵＳＡ．０．１ｍｌ。Ｄｉｌｕｔｅｄｌ：２００ｂｅｆｏｒｅｕｓｅ）ｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｐｒｉｍａｒｙａｎｔｉｂｏｄｙｉｎｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇ．
１ｒｔｌｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｒｅｐｅａｔｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｔｈｅｓａｍｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓａｎｄｂｙｍｏｒｅｔｈａｎｔｗｏｏｂｓｅｒｖｅｒｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｐｒｉｍａｒｙａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｏＩＧＦ－１ｗｅｒｅｒｅｐｌａｃｅｄｂｙＰＢＳｓｏｌｕｔｉｏｎａｓｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｓ．ａｕｆｆｙｄｒｏｐｓｉｎｃｅｌｌｓｗｅｒｅｒｅｇａｒｄｅｄａｓｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｆｉｖｅｓｉｇｈｔｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｉｎ４００ｘｓｉｇｈｔａｔｒａｎｄｏｍ，ａｎｄｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｓ／ａｌｌｃｅｌｌｓｒａｔｉｏｗｅｒｅｃｏｕｎｔｅｄ．Ｉｔｗａｓｇｒａｄｅｄａｓ（一）ｆｏｒ＜１０％，（＋）ｆｏｒ１０－３３％，（＋＋）ｆｏｒ３３－６６％，ａｎｄ（卅）ｆｏｒ＞６６％．
Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ：ＲＩＡｒｅｓｕＩｔｓｗｅｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｓｍｅａｎ±ＳＥ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐｓｗａｓｕｎｄｅｒｔａｋｅｎｕｓｉｎｇｐａｉｒｅｄｔ－ｔｅｓｔｓ．Ｔｈｅ妒ａｎａｌｙｓｉｓＷａＳｕｓｅｄｔｏｃｏｍｐａｒｅｒｅｓｕｌｔｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍＩＨ．ＡｌｌｄａｔａｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｗｉｔｈｔｈｅＳＰＳＳｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｐｒｏｇｒａｍ．Ｐ＜０．０５ｗａｓｄｅｆｉｎｅｄａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．
７
英文摘要—＿—————————ｗ—————————————————————————————一一
Ｒｅｓｕｌｔｓ：
ｌＴｈｅｍｗｅｒｅｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｂｅｔｗｅｅｎＰＣＯＳ
ｒａｔｓａｎｄｎｏｒｍａｌｒａｔｓ。
２Ｅｘｔｅｒｎａｌａｐｐｅａｒａｎｃｅ：ｔｈｅｏｖａｒｉｅｓｏｆＰＣＯＳｒａｔｓｗｅｒｅｏｂｖｉｏｕｓｌｙｅｎｌａｒｇｅｍｅｎｔｗｉｔｈｍａｎｙｖｅｓｉｃｌｅｓ．ＴｈｅｏｖａｒｙｗｅｉｇｈｔｏｆＰＣＯＳｒａｔｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｎｏｒｍａｌｒａｔｓ（Ｐ＜埝。０１）。Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆａｐｐｅａｒａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓａｎｄｐｉｔｕｉｔａｒｙｉｎｎａｋｅｄｅｙｅ?
３Ｏｒａｌｇｌｕｃｏｓｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｅｓｔａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｌｅａｓｉｎｇｔｅｓｔ：ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎａｆｔｅｒｏｒａｌｇｌｕｃｏｓｅ６０ｍｉｎａｎｄ１２０ｒａｉｎｉｎＰＣＯＳｒａｔｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｎｏｒｍａｌｒａｔｓ．Ｐ＜Ｏ．０１．Ｉｎｓｕｌｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅｒａｔｅ（１ＮＳ／ＧＣ）ａｆｔｅｒｏｒａｌ
ｉｎ陀ｏＳｒａｔｓＷａＳｇｌｕｃｏｓｅ６０ｍｉｎａｎｄ１２０ｍｉｎ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｎｏｒｍａｌｒａｔｓ，Ｐ瑚。０１。
ＰＣＯＳｒａｔｓｈａｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＩＲ、．Ｔｈｅ６０ｍｉｎＩＮＳｎｌｅａｎｓｏｆｐＣｏＳｇｒｏｕｐａｎｄｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅ２２．８０８圭２．６５５ａｎｄ１７．６８３士３．０１５ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ１２０ｒａｉｎｒＮＳｍｅａｎｓｏｆＰＣｏＳｇｒｏｕｐａｎｄｎｏｒＩｎａｌｇｒｏｕｐＷｅｒｅ１７．６４７士３．３０１ａｎｄ１２．８２８土２．９９６ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ６０ｍｉｎｆＮＳ—乏酡ｍｅａｎｓｏｆＰＣＯＳｇｒｏｕｐａｎｄｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐＷｅｒｅ３。０３圭０．３８ａｎｄ２。３５：ｋ－０，霹６ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．霹１ｅ１２０ｒａｉｎＩＮＳ／ＧＣｍｅａｎｓｏｆＰＣｏＳｇｒｏｕｐａｎｄｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅ２．６３士０．４２ａｎｄ１．９８士０．４４ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
４Ｔｈｅａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｏｆｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙａｎｄｏｖａｒｙｗａｓａｌ
８
叁叁苎墨一————————————————————————————————————————————————一一。
ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ．
４．１ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎａｒｃｕａｔｅｎｕｃｌｅｕｓｏｆＰＣＯＳｒａｔｓｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｒａｔｓｗａｓｎｏｔｃｌｅａｒｉｎｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ＴｈｅｆｏｒｍｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆａｒｃｕａｔｅｎｕｃｌｅｕｓＧｎＲＨｎｅａｒｏｆＰＣＯＳｒａｔｓｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓｉｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：ｔｈｅｎｕｃｌｅｕｓｏｆＧｎＲＨ
ｔｈａｎｎｅｕｒｏｆＰＣＯＳｒａｔｓｗｅｒｅｍｏｒｅｂｉｇｇｅｒａｎｄｆｕｌｌｅｒ
ｎｏｒｍａｌｒａｔｓ．ＡｎｄｔｈｅｒｅｗｅｒｅｍｏｒｅＧｏｌｇｉｃｏｍｐｌｅｘａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｗｅｒｅｓｍａｌｌｅｒ，ｒｏｕｎｄｅｒａｎｄｍｏｒｅｓｗｅｌｌｉｎｇ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｍｏｒｅｂｒｉｇｈｔｖｅｓｉｃｌｅｓａｎｄｐｙｋｎｏ－ｃｏｒｅｓｅｃｒｅｔｏｒｙｇｒａｎｕｌｅｓｉｎｔｈｅｐｌａｓｍ．
４．２ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｂａｓｏｐｈｉｌｉｃｅｅｌｌｏｆＰＣ：ＯＳｒａｔｓ
ｎｏｒｍａｌｒａｔｓｗａｓｎｏｔｃｌｅａｒｉｎｌｉｇｈｔｐｉｔｕｉｔａｒｙｗｉｔｈ
ｆｏｒｍｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｔｈｅｐｉｔｕｉｔａｒｙｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｔｈｅ
ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｃｃｅｌｌｓｉｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：ＧｏｌｇｉｃｏｍｐｌｅｘｏｆｎｅａｒｎｕｃｌｅｕｓｏｆｔｈｅｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｃｃｅｌｌｓｏｆＰＣＯＳｒａｔｓａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｗｅｒｅｍｏｒｅｔｈａｎｎｏｒｍａｌｒａｔｓ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｍｏｒｅｂｉｇｇｅｒｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ．ＳｅｃｒｅｔｉｏｎｓｗｉｔｈｈＪ曲ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｄｅｎｓｉｔｙｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ．
４．３Ｔｈｅｆｏｒｍｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｔｈｅｏｖａｒｙｃｅｌｌｓｉｎｉｎｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：ｔｈｅｇｒａｎｕｌｏｓａｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｔｈｅｃａｃｅｉｌｓｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｌａｔｔｅｒｗｅｒｅｏｆｔｅｎｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ，ｔｈｅｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｅｌｌｓｏｆｏｖａｒｉａｎｃｏｄｅｘａｐｐａｒｅｎｔｌｙｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｍｏｎｇｉｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｏｍｅｐｌｅｘｉｆｏｒｍｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇｃｅｌｌｎｅｓｔｓ．Ｔｈｅｆｏｒｍｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆ
９
英文摘要
ｔｈｅｏｖａｒｙｃｅｌｌｓｉｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：ｉｎｍｅｇｒａｎｕｌｏｓａｃｅｌｌｓ，ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｗｅｒｅｓｗｅｌｌｉｎｇｉｎ
ａｎｄｅｖｅｎｖａｎｉｓｈｅｄ；
ｅｖｅｒｙｇｒａｄｅ，ｃｒｉｓｔａｅｗｅｒｅｂｒｏｋｅｎ
ｓｍｏｏｔｈｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｂｕｔｒｏｕｇｈｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｗｉｔｈｃｉｓｔｅｍａｅｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｗｉｔｈｈｉ【ｇｈｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｄｅｎｓｉｔｙｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｏｏ．Ｉｎｔｈｅｔｈｅｃａｃｅｌｌｓ，ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｗｅｒｅｓｗｅｌｌｉｎｇｉｎｅｖｅｒｙｇｒａｄｅ；ａｎｄａｇｒｅａｔｑｕａｎｔｉｔｙｏｆｓｍｏｏｔｈａｎｄｒｏｕｇｈｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｗｉｔｈｃｉｓｔｅｒｎａｅｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ；ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｗｈｉｃｈｗｉｔｈｈｉｇｈｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｄｅｎｓｉｔｙｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ．
５ＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｏｆＩＧＦ—ｌｉｎｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ．
ａｎｄｏｖａｒｙｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇ．
ｐｉｔｕｉｔａｒｙ
５．１Ｉｎｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ．ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＩＧＦ?１ｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｎｅａｒａｎｄｎｅｕｒｏｇｌｉａｌｃｅｌｌｓｏｆａｒｃｕａｔｅｎｕｃｌｅｕｓ．ＳｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＩＧＦ—ｌｉｎｔｈｅｎｅｕｒｏｇｌｉａｌｃｅｌｌｓｉｎＰＣＯＳｒａｔｓｗｅｒｅｍｏｒｅｔｈａｎｎｏｒｍａｌｒａｔｓ（Ｐ＜∞．０５）．
５．２Ｉｎｐｉｔｕｉｔａｒｙ，ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＩＧＦ一１ｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎＰｉｔｕｉｔａｒｙｃｅｌｌｓｏｆＰＣＯＳｒａｔｓａｎｄｎｏｒｍａｌｒａｔｓ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｓｔａｉｎｉｎｇｂｅｔｗｅｅｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ．
５．３Ｉｎｏｖａｒｙ，ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＩＧＦ一１ｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅｔｈｅｃａｃｅｌｌｓａｎｄｉｎｔｈｅｇｒａｎｕｌｏｓａｃｅｌｌｓｏｆｓｍａｌｌｆｏｌｌｉｃｌｅａｎｄａｔｒｅｓｉｃｆｏｌｌｉｃｌｅｓｉｎｎｏｒｍａｌａｎｄＰＣＯＳｒａｔｓ．ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｔａｉｎｉｎｇｏｆＩＧＦ—ｌｉｎｔｈｅｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｅｌｌｓ．ＳｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＩＧＦ－】ｉｎｔｈｅｇｒａｎｕｌｏｓａｃｅｌｌｓｉｎＰＣＯＳｒａｔｓｗｅｒｅｍｏｒｅｔｈａｎｎｏｒｍａｌｒａｔｓ（Ｐ＜∞．０５）．ｗｈｅｒｅａｓｓｉｍｉｌａｒｉｎｔｈｅｔｈｅｃａ
０
英文摘要———————————————————————————————————————————＿—————————————————————一一
ｃｅｌｌｓｂｅｔｗｅｅｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ．
Ｃｏｎｅｌｕｓｉｏｎ：
１Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅｔｈａｔｔｈｉｓＰＣｏＳｒａｔｍｏｄｅｌｈａｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｂｅｓｉｄｅｓｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｏｖａｒｙａｎｄｓｅｒｕｍｈｏｒｍｏｎｅｓｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃｏｖａｒｙ．Ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎａｆｔｅｒｏｒａｌｇｌｕｃｏｓｅ６０ｍｉｎａｎｄ１２０ｍｉｎｉｎＰＣＯＳｒａｔｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｎｏｒｍａｌｒａｔｓ，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１．ＩｔｉｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔｈｉｓＰＣＯＳｒａｔｍｏｄｅｌｃｏｕｌｄｂｅａｇｏｏｄａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｏｆＰＣＯＳ．
２ＩＧＦ－ｌｐｌａｙｅｄ觚ｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅａｓａｎｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙｒｅｇｕｌａｔｏｒｉｎｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｍａｔｕｒａｔｉｏｎ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｒｅｐｏｒｔｅｄｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅｔｈａｔＩＧＦ－ｌｓｈｅｗｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎｔｈｅｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓａｎｄｏｖａｒｙｏｆＰＣＯＳｒａｔｓａｎｄｎｏｒｍａｌｒａｔｓ．ＩｔｉｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔｈａｔＩＧＦ．１ｔｏｏｋｐａｒｔｉｎａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙｅｘｃｒｅｔｉｏｎｏｆＧｎＲＨ、ＬＨ、ＦＳＨ、ａｎｄｒｏｇｅｎｉｃｈｏｒｍｏｎｅａｎｄｏｃｃｔ“ｔＴｅｎｃｅｏｆＰＣＯＳ．
３Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｒｅｐｏｒｔｅｄｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅｔｈａｔｔｈｅ
ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓａｎｄｐｉｔｕｉｔａｒｙ．ＰＣＯＳｒａｔｓｈａｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔＰｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｏｆｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙａｎｄｏｖａｒｙｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｒａｔｓ．Ｉｔｉｎｓｔｒｕｃｔｅｄｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｏｖａｒｉａｎａｘｉｓｈａｄｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｅｐｉｓｏｄｅｏｆＰＣＯＳ．Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｗａｓｔｈｅｂａｃｋｇｒｏｕｎｄｏｆｅｘｃｒｅｔｉｏｎｈｏｒｍｏｎｅａｌｔｅｒａｔｉｏｎ．
一叁墨塑墨———Ⅲ——————————————＿—————————－———＿———＿—————一
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃｏｖａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｒａｔ，ｉｎｓｕｌｉｎ，ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＩＧＦ－１，ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙ，ｏｖａｒｙ．
１２
胰岛素及胰岛素样生长因子一１在大鼠多囊卵巢综
合征中的研究
翦畜
多囊卵巢综合征（ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃｏｖａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＣＯＳ）是一组因下丘脑。垂体．卵巢轴的平衡失调号ｌ起的综合鲑，叉称为Ｓｔｅｉｎ－Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ综合征，其主要表现为月经稀发或闭经、不孕、卵巢多囊性变、肥胖、多毪、高雄激素血症和胰岛素抵抗以及由此弓ｌ起的高胰岛索血症等静ｌ。最耨研究佶诗，窍龄麓妇女ＰＣＯＳ的发病率约为４％．一１２％１２１。发病因素存在异源性。它既是～种下丘脑垂体异常的内分泌失调ｆ３】；也可能是一种代谢性疾患【４ｌ。ＰＣＯＳ的病因尚未十分清楚，有，乙个方面的问趱曾被讨论过，懿肾土腺雾舞巢的酶的功裁异常，裹ＩＮＳ盘癜、肥胖、生长激素（ｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ，ＧＨ）和胰岛索样生长因子系统（ｉｎｓｕｌｉｎ—ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｓｙｓｔｅｍｆａｃｔｏｒ，ＩＧＦｓ）的失调，下丘脑调节健链艨激素分泌功髓不琵等，均可麓是ＰＣＯＳ的致病原因，但确切的病因仍然是不清楚的。
ＰＣｏＳ发病机制是近年研究的热点，尤其是ＩＮＳ和ＩＧＦｓ及其调节因子在ＰＣＯＳ发病中所起的作用日益受到望视洛６１。毽蓠已知，ｌＲ参与了ＰＣＯＳ静发生与发展，多数ＰＣＯＳ患者具有胰姑素抵抗１７，ｇｌ。近甥研究发现大约有半数ＰＣＯＳ患者的发病与ＩＮＳ受体丝氨酸磷酸化缺陷有关。因而认为胰岛素在其发病中占有重要地位。
番资料证实ＩＮＳ、ＩＧＦｓ和雌激素对ＧｎＲＨ神经元的
活性起调节作用１９?１０，１１’１２１。它们的受体在ＧｎＲＨ神经元上也有表达。假定在肾上腺功能出现时或青春期这些因子中的一个或全部改变，导致ＧｎＲＨ脉冲发生器功能失常，引起ＰＣＯＳ发病。有人提出ＰＣＯＳ患者卵巢间质组织的胰岛素样生长因子．１受体（ＩＧＦ一１Ｒ）数比正常卵巢间质组织高，所以ＰＣＯＳ患者的高１ＮＳ作用是通过ＩＧＦ．ＩＲ的媒介而产生的１１３１。
本研究采用Ｂｏｇｏｖｉｃｈ法制备ＰＣＯＳ大鼠模型【１４】，行ＯＧＴＴ和ＩＮＳ测定，分析其是否存在ＩＲ及高ＩＮＳ血症；观察ＩＧＦ一１在卵巢、垂体、下丘脑弓状核的表达；电镜观察下丘脑、垂体和卵巢的形态学变化，探讨其在ＰＣＯＳ发病中的作用。
材料与方法
ｌ仪器设备：
１．１低温冰柜（一８０℃）：ＭＤＦ．３８２型（日本）
１．２放免丫自动分析仪：ＦＴ－６８４Ａ型微机单头放免仪（北京核仪器厂）
１．３切片机：ＬＥＩＣＡ．ＲＭ２１３５型（德国）
１．４电热恒温烤箱：ＤＨ－６４型（上海医疗器械厂）
１．５光学显微镜及照相系统：ＡＨ—ｖ型（日本ＯＬＹＭＰＵＳ公司）
１．６光学显微镜：ＢＨ型（日本ＯＬＹＭＰＵＳ公司）
１．７透射电子显微镜：Ｈ－７５００型（日本）
１．８天平：ＰＢ３００２．Ｓ／Ａ（瑞士）
１．９快速血糖测定仪：ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＰｌｕｓ－ｒＭＥｌｅｃｔｒｏｄｅｓ（美国）２试剂：
２．１１８一甲基炔诺酮硅胶棒：上海达华制药厂，上海市计划生育科学研究所
２．２人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）：上海第一生化药业公司，上海生物化学制药厂
２．３生理盐水：丽珠集团丽宝生物化学制药有限公司２．４蒸馏水：河北医科大学第四医院制剂科
２．５３％Ｈ２０，：北京中山生物制品有限公司
２．６ＰＢＳ粉：北京中山生物制品有限公司
２．７ＳＰ试剂盒：北京中山生物制品有限公司
２．８ＤＡＢ显色试剂：北京中山生物制品有限公司
２．９苏木素：美国进口分装
２．１０ＩＮＳ放免药盒：上海生物制品研究所
２．１１血糖测定：ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＰｌｕｓ血糖试纸，美国雅培制药有限公司
２．１２ＩＧＦ．１免疫组化染色试剂盒：天津市灏洋生物制品科技有限责任公司
３动物：
３．１准备：２４日龄未成年雌性ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠３６只，平均体重为６０＿＿＋５９。随机分成两组，
每组１８只。均在２１日龄断奶，喂以颗粒饲料。由
河北医科大学实验动物中心提供，合格证号为：医
动字第０４０５７号（清洁级），清洁级饲养，每日光
照１２小时，喂以大鼠颗粒饲料。
３．２建立ＰＣＯＳ模型：实验组在２４日龄时皮下埋植１８．
甲基炔诺酮硅胶棒（每只３ｍｍ），２７日龄时皮下注射１．５ＩＵＨＣＧ（３０９１），彩霞。另一蕴律为正常对照，
予２７耳龄时皮下注射生理盐承３０｝ｔｌ，２／Ｈ。强缀均注射９曰至３６日龄【１４１。
４标本采集；
霹．１大鼠均予浇药第９天晚２０时开始禁食，次嚣上午称体重，８对按３９甍麓揪ｇ体重的剂量灌服５０％麓
镯糖液，在灌服后０、３０、６０、１２０ｍｉｎ鼠尾尖取血，测定撒清胰岛索及血糖瞰ｌ。ＯＧＴＩ＂中胰岛索敏感性参照枚敦联等计算９６ｔ。
４。２腹腔、捩入４％水会氯醛（４００ｍｇ／ｋｇ体重）麻醉屠，刹开胸腔暴露心脏，经左心室升主动脉插管，先以预冷的０．９％生理盐水１００～２００ｍｌ遮灌冲洗，同时剪搿右心房，直至流爨液体交清为止；继之插管内灌入冰预冷的４％多聚甲醛溶液（ｏ．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ配制，
ｐＨ７．４）２００－－４００ｍｌ，３０ｍｉｎ内灌完；取卵巢称重，
歼颅取脑及垂体，将三者置于４％多聚甲醛（４℃）
中后固定２４ｈ，做成嚣蜡包块，ＨＥ染色，免疫缝纯测定ＩＧＦ．１在下丘脑、垂体和卵巢中的分布和表达。
根据Ｐａｘｉｎｓｌｌ７１等大鼠脑定位图潜确定ＡＲＣ所在的平舔。
４。３每组各有三只灌注毫镜固定液（含粕多聚擎醛帮２．５％戊二醚）２００－－４００ｍｌ（０．１ｍｏｉ／ＬＰＢＳ配制，
ｐＨ７．４），取前脑－间脑组织块（嗅结节后至乳头体前），参考Ｐａｘｉｎｓｌｌ蛩的大鬣脑定位图谱在ＡＲＣ所在平西切片，取大鼠腺垂体（垂体外上侧）及旁巢，
１６
翌壅垒墨一迅速修切组织块成ｌｍｍ的小块，固定于４％戊二醛中４８小时后，行电镜观察。
５ＲＩＡ测定：应用ⅪＡ测定大鼠血清中的ＩＮＳ水平‘”１。５．１试剂盒介绍：该方法应用１２５Ｉ标记ＩＮＳ，一抗为豚鼠抗ＩＮＳ特异性抗血清抗体，二抗为羊抗豚鼠抗体。
非特异性结合率（ＮＳＢ）．３．７５％，相关系数丫＞Ｏ．９９９０，
灵敏度：２ｕＩＵ，回收率：９５—９８．５％，工作范围：
１０ｕＵ／ｍ１．８０ｕＵ／ｍｌ，批内变异（ＣＶ％）：６．５，批间变异（ＣＶ％）：９．５。
５．２步骤：
５．２．１设置ＮＳＢ管、０管、１０管、２０管、４０管、８０管、１６０管和样品管。
５．２．２ＮＳＢ管中加入分析液１００ｐ１；０管、１０管、２０管、４０管、８０管和１６０管中分别加入相应ＩＮＳ校正品
１００９ｌ及ＩＮＳ抗体１００９ｌ；样品管中加入大鼠血清
１００ｕｌ及ＩＮＳ抗体１００９ｌ；
５．２．３充分混匀后，置４℃反应６－７ｈ。
５．２．４每管中各加入１２５Ｉ．ＩＮＳｌｏｏｐｌ，充分混匀，置４℃反应１６ｈ。
５．２．５每管中各加入二抗１０Ｃｌ山，充分混匀。３７℃，３０分钟。出现絮状沉淀。
５．２．６出现絮状沉淀后，１０℃以下，３５００ｒ／ｍｉｎ，离心１５ｍｉｎ。
５．２．７弃去上清，用放免１，自动分析仪读结果。
５．３结果的可靠性：根据ＮＢＳ管、０管、１０管、２０管、４０管、８０管、１６０管计数及ＣＰＭ值所画出的标准
曲线如Ｆｉｇ，ｌ所示，说明试剂盒使用正常。
６免疫组化（ＩＨ）：应用ｍ检测ＩＧＦ一１在两组大鼠下丘脑１９，１１１、垂体和卵巢１１３’１３１ｔ：的分布。
６．１ＩＧＦ．１试剂盒：一抗是兔抗大鼠ＩＧＦ．１单克隆抗体，为美国ＳＡＮＴＡＣＲＵＺ公司产品。稀释１：２００后应
用。二抗是生物素标记羊抗兔ＩｇＧ。该试剂盒为ＳＰ
染色。阳性细胞为胞浆着色，呈棕黄色。
６．２步骤：
６．２．１石蜡包块连续切片，厚度为６０ｒｎ。
６．２．２用ＡＰＥＳ处理的防脱片载玻片捞片。
６．２．３切片脱蜡至水。
６．２．４３％Ｈ，０２灭活内源性酶，置１０ｍｉｎ。蒸馏水冲洗３ｍｉｎ×３次。
６．２．５微波抗原修复：将切片侵入Ｏ．０１Ｍ枸橼酸盐缓冲液，ＰＨ６．０，电炉加热至沸腾后断电，间隔５～ｌＯ分
钟，反复２￣３次，冷却。０．０１Ｍ的ＰＢＳ冲洗５ｍｉｎ
Ｘ４次。
６．２．６滴加血清封闭液，室温孵育１０ｍｉｎ。
６．２．７倾去血清，滴加一抗，置４。Ｃ过夜。０．０１Ｍ的ＰＢＳ冲洗３ｍｉｎｘ３次。
６．２．８滴加二抗，３７。Ｃ孵育３０ｍｉｎ。０．０１Ｍ的ＰＢＳ冲洗３ｍｉｎ×３次。
６．２．９滴加辣根酶标记的链霉卵白素，３７。Ｃ孵育３０ｒａｉｎ。
０．０１Ｍ的ＰＢＳ冲洗５ｒａｉｎｘ４次。
６．２．１０ＤＡＢ显色：镜下控制显色时间，一般为１０．２０ｍｉｎ。
蒸馏水洗涤。
６．２．１ｌ苏木素复染。脱水，透明，封片。
６．３结果判断标准：同一样本至少重复染色一次，由至少两位经验丰富的专业人员独立阅片。以ＰＢＳ替代
一抗作为阴性对照，以细胞内出现棕黄色颗粒为阳
性结果。阳性细胞必须符合下列要求：镜下组织细
胞结构清楚；阳性颗粒定位好；染色明显高于背景。
每张切片在４００倍高倍视野下随机取５个视野，计数阳性细胞数占全部细胞数的比例，染色结果按比
例分为１１９１：一：阳性细胞数占１０％以下；＋：阳性
细胞数占１０～３３％；抖：阳性细胞数占３３～６６％；＊＋：阳性细胞数占６６％以上。
７透射电镜：
７．１．将卵巢切成Ｉｍｍ３大小的组织块，用４％戊二醛固定至少２ｈ。缓冲液清洗组织３ｈ，中间换液数次。７．２．１％锇酸后固定１￣４ｈ。缓冲液清洗组织Ｏ．５ｈ以上。７．３．系列丙酮逐级脱水，每级５～１５ｍｉｎ。
７．４．环氧丙烷浸透１５～３０ｍｉｎ，环氧树脂浸透过夜。７．５．环氧树脂包埋。
７．６．６０℃下聚合２扣３６ｈ。
７．７．超薄切片，厚度约为５０ｎｍ。
７。８。醋酸铀、柠檬酸铅双重染色各ｏ．５ｈ。
８统计学分析：ＲＩＡ结果的数据用ｘ±ｓ表示，组间差异用ｔ检验；ＩＨ结果用？ｃ２检验。所有数据均用ＳＰＳＳ软件包进行统计。Ｐ＜０．０５为差别显著。
一．翌壅垒查
————＿＿————＿＿＿————＿———－＿－——————＿———＿＿—●——－－＿——————一一
结果
１．大鼠体重如Ｔａｂｌｅ．１所示，实验组及对照组无差别。２．大体形态：ＰＣＯＳ大鼠模型的双侧卵巢明显增大，可见多个囊泡。卵巢重量实验组显著高于对照组
（Ｐ＜Ｏ．０１）（Ｔａｂｌｅ．２）。下丘脑和垂体的大体形态与正常对照组无明显差异。
３．ＯＧＴＴ测定及ＩＮＳ释放试验：实验组服糖后６０ｍｉｎ和１２０ｍｉｎＩＮＳ明显高于对照组，Ｐ＜０．０１（１’ａｂｌｅ．３）。
实验组与对照组血糖相比无统计学意义（Ｔａｂｌｅ．４）。
实验组服糖后６０ｍｉｎ和１２０ｍｉｎＩＮＳ敏感率（ＩＮＳ与ＧＣ比值ＩＮＳ／ＧＣ）明显高于对照组，Ｐ＜０．０１
（Ｔａｂｌｅ．５）。两组ＩＮＳ均值分别为：６０ｍｉｎＰＣＯＳ组２２．８０８士２．６５５，正常对照组为１７．６８３＋３．０１５；１２０ｍｉｎＰＣＯＳ组１７．６４７４－３．３０１，正常对照组为１２．８２８＋２．９９６。
两组ＩＮＳ／ＧＣ均值分别为：６０ｍｉｎＰＣＯＳ组为３．０３士０．３８，正常对照组为２．３５＋０．４６；１２０ｍｉｎＰＣＯＳ组为２．６３＝ｔ＝０．４２，正常对照组为１．９８１０．４４。ＰＣＯＳ大鼠存在ＩＲ。ＩＮＳ释放曲线及ＧＣ曲线见图Ｆｉｇ．２，
Ｆｉｇ．３。
４．下丘脑、垂体、卵巢光镜及透射电镜改变。
４．１下丘脑弓状核：ＰＣＯＳ大鼠与正常大鼠相比，光镜下神经元细胞和神经胶质细胞区别不明显；电镜下：①正常对照大鼠：ＧｎＲＨ神经元核较大，圆形或椭圆形，通常一个核仁，靠近核膜，粗面内质网发达，
游离核糖体、高尔基复合体和线粒体较多，溶酶体
２０
实验探究“动物激素的功能”练习卷 1．15只同种并同时孵化的体长约15 mm的蝌蚪，随机分成三个组（每组5只），饲养的水、饲料和温度等条件等同。A组加入甲状腺激素，B组加入甲状腺抑制剂，C组不加入药剂。饲养10～12 d，定时用坐标纸观测、记录蝌蚪的生长发育变化情况。本实验中，同等的蝌蚪对象、同等的饲养条件等属于 A．实验变量B．反应变量 C．无关变量D．额外变量 2．某制药厂研制出一种降血糖药物X，若要验证一定量的药物X能使患糖尿病小鼠的血糖浓度降至正常值，有关这一实验设计的叙述错误的是 A．用糖尿病小鼠做实验组，注射一定量的用生理盐水配制的X溶液 B．建立正常小鼠和糖尿病小鼠两个对照组，都注射一定量的生理盐水 C．三组小鼠都要在实验前和实验后测定血糖浓度 D．三组小鼠都要在实验前摘除胰腺 3．摘除大白鼠的胰腺后，再将胰腺的一部分植入大白鼠的皮下，该鼠未出现糖尿病症状；一段时间后，将皮下的移植物（胰腺组织）除去，该鼠立即出现血糖浓度升高并出现了糖尿病症状；随后注射一定量的胰岛素，该鼠血糖水平恢复正常，且糖尿病症状消失。该实验不能说明 A．胰岛素能降低血糖浓度 B．胰岛素是蛋白质类激素 C．胰岛素的产生与胰腺有关 D．胰岛素能治疗糖尿病 4．为验证胰岛素能降血糖，某同学给几只刚进食的小鼠腹腔注射一定剂量的胰岛素溶液（用酸性生理盐水配置），观察现象，若出现惊厥，则达到目的。该实验不需要完善的是 A．为使反应现象出现得较快且明显，实验前应将小鼠饥饿处理，以消耗肝糖原 B．应设置注射等量酸性生理盐水的对照组，且注射的部位、方法同实验组 C．应设置口服胰岛素的实验组，对照组灌喂等量的清水 D．出现昏厥现象后，还应对其中的一半注射葡萄糖溶液抢救，另一半不予抢救，进一步观察 5．选取同种、年龄与生长状况相同的健康大鼠若干只，实施切除手术，一段时间后随机等分成四组，分别注射激素及生理盐水30天，结果如图所示： 下列叙述错误的是 A．该实验为对照实验 B．该实验需要切除大鼠的胰腺和下丘脑以排除内源性激素的干扰 C．实验结果表明胰岛素和生长激素均能促进大鼠的生长
目次 目次 引言 (1) 第1章实验研究 (3) 1.1 材料与方法 (3) 1.1.1 实验动物与实验药物 (3) 1.1.2 实验动物处理方法、分组及所需实验试剂和器材 (3) 1.1.3 标本收集 (4) 1.1.4 放射免疫实验所需主要试剂、仪器及实验方法 (5) 1.1.5 免疫组化实验所需主要试剂、仪器及实验步骤 (5) 1.2 结果 (8) 1.2.1 三组大鼠在不同给药周期血清E2水平的比较 (8) 1.2.2三组大鼠在不同给药周期血清FSH水平的比较 (9) 1.2.3三组大鼠在不同给药周期血清LH水平的比较 (10) 1.2.4 各组大鼠子宫组织中ER表达强度的比较 (11) 1.2.5 各组大鼠阴道壁组织中ER表达强度的比较 (14) 1.3 讨论 (15) 1.3.1 围绝经期性激素的改变 (15) 1.3.2 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的疗效 (16) 1.3.3 黑升麻提取物的非激素样作用 (17) 1.3.4 黑升麻提取物的作用机制假说 (18) 1.3.5 黑升麻提取物的用药周期 (20) 1.3.6 展望 (21) 参考文献 (21) 第2章综述 (26) 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的作用机制 (26) 2.1 摘要 (26) 2.2 概述 (27) 2.2.1 黑升麻提取物来自欧洲 (27) 2.2.2 引进中国 (28) - V -
华北理工大学硕士学位论文 2.3 黑升麻提取物作用机制假说 (29) 2.3.1 神经内分泌作用假说 (29) 2.3.2 选择性雌激素受体调节剂(SERM)作用机制假说 (30) 2.3.3 抗氧化作用和炎症反应作用机制假说 (30) 2.4 黑升麻提取物临床疗效的评价 (30) 2.5 黑升麻提取物在临床应用时的不良反应 (31) 2.6 黑升麻提取物临床应用的前景 (32) 参考文献 (33) 结论 (36) 致谢 (37) 导师简介 (38) 作者简介 (39) 学位论文数据集 (40) - VI -
影响药物作用的因素实验报告 课程：机能学实验系级班 姓名：学号： 组员： 实验原理 1，硫酸镁不同给药途径，药理作用不同：口服，泻下、利胆；注射，松弛平滑肌，肌肉松弛，降压；外敷，消炎祛肿。 2，氯丙嗪广泛引起中枢抑制，抑制延髓催吐化学感受区及下丘脑体温调节中枢。不同剂型对氯丙嗪的吸收效果不同。 3，钙离子对钠通道有屏蔽作用，可降低心肌兴奋性和传导性，快速注射钙离子使血钙浓度升高导致房室传导阻滞、心脏骤停等。而慢速注射可由血液稀释，引起的不良反应较弱。4，尼克刹米可直接兴奋延髓呼吸中枢或刺激颈动脉体和主动脉体化学感受器，反射性兴奋呼吸中枢。过量导致中枢兴奋及惊厥。 5，胰岛素是机体唯一降血糖的激素。机体血糖突然降低会导致脑缺氧，产生心悸、出汗、、动物发生惊厥、抽搐等现象。可用葡萄糖解救。 【实验目的】 1.观察不同给药途径对药物作用的影响。 2.比较不同剂型、剂量、给药速度对药物作用的影响。 3.观察胰岛素的降低血糖作用，胰岛素惊厥的表现并掌握其解救方法。 【实验动物】
动物：小白鼠 药品：10%硫酸镁、墨汁生理盐水0.1%氯丙嗪水溶液0.1%氯丙嗪阿拉伯胶溶液（含10%阿拉伯胶溶液）1% CaCl2 溶液 1.25%尼可刹米溶液5%尼可刹米溶液10%尼可刹米溶液40U/ml胰岛素溶液、50%葡萄糖 器材：注射器（1ml 5ml 10ml 20ml) 小鼠笼、天平、大镊子、小鼠灌胃器大烧杯剪刀 【实验步骤】 一、观察不同给药途径对药物作用的影响。 （1）称量体重，将小鼠分为1，2，3三组，每组1只. （2）1号小鼠腹腔注射0.3ml/10g的硫酸镁溶液，2号小鼠灌胃0.3ml/10g硫酸镁墨汁溶液，3号小鼠灌胃0.3ml/10g生理盐水溶液。观察现象 二、不同剂型、剂量、给药速度对药物作用的影响 1.不同剂型 1）称量体重，将小鼠分为甲、乙两组，每组两只。 2）甲组小鼠皮下注射0.2ml/10g的0.1%的氯丙嗪水溶液，乙组小鼠皮下注射0.2ml/10g 的0.1%的氯丙嗪阿拉伯胶溶液，观察并记录小鼠入睡的时间。 2.不同给药速度 1）称量体重，将小鼠分为1#、2#两组，每组一只。 2）1#小鼠尾静脉注射0.25ml/10g的1%Cacl溶液，10s注射完，2#小鼠尾静脉注射 0.25ml/10g的1%Cacl溶液，3min注射完，观察小记录鼠生存情况。 3.不同剂量
人体内环境的稳态与调节 一、选择题25小题（50分） 1．以下关于动物内环境和稳态的叙述，错误的是() A．葡萄糖、生长激素、抗体属于人体内环境的成分 B．若内环境稳态不能维持，机体的正常生命活动就会受到威胁 C．血浆渗透压的大小主要取决于血浆中无机盐和蛋白质的含量 D．人体剧烈运动时产生的乳酸会导致血浆pH显著下降 2．人体稳态的调节能力是有一定限度的。下列现象属内环境稳态失调的是() A．寒冷时骨骼肌不自主战栗B．胰岛B细胞受损出现尿糖 C．剧烈运动后，人体血液pH由7.42下降到7.38 D．饮水不足时，抗利尿激素释放增加 3．PM2.5是指大气中直径小于或等于2.5 μm的颗粒物，富含有毒、有害物质，易通过肺部进入血液。目前PM2.5已成为空气污染指数的重要指标。下列有关PM2.5的推测不合理的是() A．PM2.5进入人体的肺泡中时还没有进入人体的内环境 B．PM2.5可能成为过敏原，其诱发的过敏反应属于免疫异常 C．颗粒物中的一些酸性物质进入人体血液一定会导致血浆呈酸性 D．颗粒物进入呼吸道引起咳嗽属于非条件反射，其中枢不在大脑皮层 4．下列诸多因素中，可能引起病人组织水肿的是() ①毛细血管壁破损②长期蛋白质营养不足③淋巴管阻塞④花粉等过敏原引起毛细血管的通透性增加 ⑤肾炎导致血浆蛋白丢失 A．只有①②③B．只有②③④C．只有①③⑤D．①②③④⑤ 5.右图中当环境温度从25 ℃降到3 ℃时，小白鼠体内甲状腺激素含量、尿量及酶活性 的变化曲线分别为() A．①②③B．①③③C．③①②D．①①② 6．硝酸甘油(C3H5N3O9)在医药上用作血管扩张药，是预防和紧急治疗心绞痛的特效药。 该药的正确使用方法是舌下含服而不是吞服，将药片含在舌下，硝酸甘油溶于水后，立即通过舌下丰富的毛细血管吸收，最终到达心脏血管壁外的平滑肌细胞的细胞质基质中释放NO，NO可调节平滑肌的收缩状态，使血管舒张，从而在几分钟内缓解心绞痛。在上述整个过程中，硝酸甘油至少穿过几层磷脂分子() A．5 B．7 C．10 D．14 7．下图是人体某组织结构示意图，①②③④分别表示人体内不同部位的液体。据图判断下列说法正确的是() A．人体的内环境是由①②③④组成的 B．②中含激素、呼吸酶、乳酸、CO2等物质 C．浆细胞分泌的抗体先进入③，再进入④ D．血浆中的氧进入组织细胞的途径是②→③→④ 8．某成年人从25 ℃环境来到10 ℃环境中，体温维持正常，其散热变化如 下图所示。下列叙述正确的是() A．a～b段的散热量少于产热量B．b～c段散热加快是由于汗液分泌增加 C．c～d段皮肤血管逐渐舒张D．d～e段的产热速率大于a～b段 9．下面为人体细胞内液与细胞外液进行物质交换过程的示意图，有关叙述正确 的是() A．①～③分别代表血浆、淋巴和组织液 B．正常情况下，①～③的成分保持不变 C．抗体主要存在于③中D．蛋白质长期供应 不足，①处的液体会减少 10.右图表示某人从初进高原到完全适应，其 体内血液中乳酸浓度的变化曲线，下列对ab段和bc段变化原因的分析，正确的 是() A．ab段上升是由人初进高原，呼吸频率加快造成的 B．bc段下降的原因：一是乳酸被血液中的缓冲物质转化为其他物质；二是造血功能逐渐增强，红细胞数量增多 C．ab段上升是因为此段时间内，人体只进行无氧呼吸，产生大量的乳酸进入血液 D．ab段产生的乳酸，在bc段与Na2CO3反应
实验14.1 胰岛素引起的低血糖痉挛 Hypoglycemic Convulsion Induced by Insulin 胰岛素是调节机体血糖的重要激素，可促使细胞外液中的葡萄糖进入组织细胞，促进糖原合成，加速糖的氧化，也可抑制糖异生和分解，从而使血糖降低。当体内胰岛素含量增高时，可引起低血糖症状，动物出现惊厥现象。本实验通过大量注射胰岛素来观察低血糖症状，了解胰岛素调节血糖水平的功能。 1 材料和方法 1．1 材料 小白鼠，1 ml 注射器，2 U/ml 胰岛素溶液、50％葡萄糖溶液、酸性生理盐水（pH 2.5～3.5）。 1．2 方法 取小白鼠6只，称重后分实验组（4只）和对照组（2只）。给实验组动物腹腔注射胰岛素溶液0.1 ml/10 g 体重。给对照组动物腹腔注射等量酸性生理盐水。将两组动物均放在30～37℃的环境中，并记下时间，注意观察并比较两组动物的神态、姿势及活动情况。当实验组动物出现角弓反张、乱滚等惊厥反应时，记下时间，并立即给其中2只皮下注射葡萄糖溶液（0.1 ml/10 g 体重），另2只不予抢救。 注意事项 ①动物在实验前必须禁食18～24小时。 ②需用pH 值为2.5～3.5的酸性生理盐水配制胰岛素溶液，因为胰岛素在酸性环境中才有效。 ③酸性生理盐水的配制：将10 ml 0.1 mol/L 盐酸溶液加入300 ml 生理盐水中，调整其 pH
值至2.5～3.5，如果偏碱，可加入同样浓度的盐酸调整。 ④注射胰岛素的动物最好放在30～37℃环境中保温，夏天可为室温，冬天则应高些，可到36～37℃。因温度过低，反应出现较慢。 2 结果 比较对照组动物、注射葡萄糖的动物以及出现惊厥而未经抢救的动物的活动情况。 3 讨论 分析胰岛素调节机体血糖的机制。 探索性问题 设计一个实验，确定胰岛素引起低血糖痉挛的阈剂量。 吴莉萍 周新妹 实验14.2 大鼠性周期的观察 Observation of Sexual Cycle in Rat 伴随着性周期时间的推移，周期性排卵动物表现出生殖器官和附属生殖器官的形态学和功能学变化。动情周期正常的大白鼠性周期一般为4～7天，性周期包括四个期，即动情前期、动情期、动情后期和动情间期。光镜下阴道分泌物中可见满视野的白细胞和少量上皮细胞的为动情间期。动情前期可见膨大而略呈圆形的有核上皮细胞。 动情期可见无核的角化上
胰岛素致低血糖效应 一：实验目的 了解胰岛素调节血糖水平的机能 二：实验原理 胰岛素是调节机体血糖的激素之一，当体内胰岛素含量增高时，便引起血糖下降，动物出现惊厥现象。 三：实验过程 ◆实验动物与器材 小白鼠（4只），1ml注射器，鼠笼，胰岛素溶液（2U/ml），50%葡萄糖溶液，酸性生理盐水 ◆实验方法与步骤 1、取4只小白鼠称重后，分实验组2只和对照组2只 2、给实验动物腹腔注射胰岛素溶液（0.1ml/10g体重） 3、将两组动物都放在室温环境下，并记录时间，注意观察并比较两组动物的神态，姿势及活动情况 4、当实验组动物出现角弓反张、乱滚等惊厥反应时，记录时间，并立即给其中两只皮下注射葡萄糖溶液（0.1ml/10g体重），另两只不予抢救 5、比较注射葡萄糖的动物以及出现惊厥并未抢救的动物的活动情况，并分析结果 6、试验结束后，试验动物全部断颈处死。 ◆数据记录如下： 第一组注射胰岛素后12分钟呼吸变急促28分钟角弓反张35分钟僵直43分钟死第二组注射胰岛素后25分钟角弓反张，马上注射葡萄糖，很快恢复平静 四：思考题 1、正常机体内胰岛素如何调节血糖水平？ 答：胰岛素促进细胞对葡萄糖的摄取和利用，促进肝脏和肌肉糖原的合成及贮存，抑制糖异生，促进葡萄糖转化为脂肪酸并贮存于脂肪组织中，上述作用使血糖水平降低。 2、试分析糖尿病产生的原因及治疗方法？ 胰岛素是体内惟一能降低血糖浓度的激素，一旦某种原因引起胰岛素缺乏，葡萄糖的转运和利用将发生障碍，由于代偿机制，血糖浓度将升高，如超过肾糖阈，尿中将出现葡萄糖。治疗方法：只要按时注射胰岛素即可。 五：讨论 ◆注射胰岛素后，报纸上出现一滩血迹，可能为注射时刺伤内脏所致，单个只小鼠身上均无血迹。 ◆实验中被小鼠咬伤，故未完成实验，试验数据和现象均为同组实验者提供。
老鼠胰岛素惊厥实验 （1）原理： 胰岛素是调节机体血糖水平的激素之一。给动物注射大量胰岛素后，引起血糖降低，动物出现惊阙现象。 （2）准备 小白鼠、注射器、胰岛素溶液、50%葡萄糖、酸性生理盐水、0.01%肾上腺素、20%葡萄糖。 （3）操作步骤 1．取4只体重相近的小鼠，分为实验组与对照组，每组二只。 2．给实验组小鼠腹腔注射（左手提起并固定小鼠，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。注射量为0.1-0.2ml/10g体重。）胰岛素溶液（0.1毫克/10克体重），胰岛素溶液浓度为2 国际单位/毫升。3．给对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。 4．将两组动物做好标记后，放在室温下观察，比较两组动物的神态、姿势及活动情况。 5．当小老鼠出现抽搐、翻滚等惊阙反应时，记录时间，并将其中一只立即皮下注射（常选项背或大腿内侧的皮肤。操作时，常规消毒注射部位皮肤，然后将皮肤提起，注射针头取一钝角角度刺入皮下，把针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。拔针时左手拇、食指捏住进针部位片刻，以防止药物外漏。注射量约为0.1-0.3ml/10g体重。）50%葡萄糖（0.1毫升/10克体重）。 6．比较对照组动物、注射葡萄糖的动物、以及出现惊阙而未经注射葡萄糖的动
1．动物在实验前必须饥饿18-24小时。 2．用pH2.5-3.5的酸性生理盐水配制胰岛素。酸性生理盐水配制：将10毫升0.1N HCl 加入300毫升生理盐水中，调pH值为2.5-3.5。 3．若实验在冬天进行，注射胰岛素后，最好将动物放在30-37℃环境下保温，以加快反应的出现。
第七组： 学号：2011414419班级: 11动医创新班姓名：林夏蘅 学号：2011414428班级: 11动医创新班姓名：梁海豪 学号：2011414423班级: 11动医创新班姓名：胡炜捷 学号：2011414422班级: 11动医创新班姓名：郑璐 《动物机能学》实验报告 一．实验名称： 实验验证胰岛素对血糖的调节作用。 二．实验目的： 通过观察过量的胰岛素导致小鼠低血糖的作用来验证胰岛素对血糖的影响。 三．实验原理： 胰岛素是由胰岛β细胞受内源性和外源性物质和葡萄糖、乳糖、核糖、精氨糖、胰高血糖素的刺激等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质的合成。给动物注射大量胰岛素之后，动物出现惊阙现象。 四．实验器材： 棉花、烧杯、小鼠笼、镊子、1ml注射器、0.9%生理盐水、0.1mol/L HCl、50%葡萄糖溶液，胰岛素溶液、棉花、布条 五．实验前准备： 1.酸性生理盐水的配置：将10毫升0.1mol/L HCl溶于300ml的生理盐水当中。 2.胰岛素溶液的配置：用酸性生理盐水配成的胰岛素溶液（2U/mL）（每次用量0.1mL/10g）、酸性生理盐水。 3.保温器皿：用棉花或者碎布条将小鼠笼的底部铺满，留着备用。 六．实验步骤： 1. 将八只生长状况相仿的小鼠（实验前饥饿处理）随机分成四组并标号，第一组为1号、2号，如此类推将小鼠标记为1~8号。分别称量并记录小鼠的体重。 2.第一、二组的1234号小鼠为对照组，即往第一、二组小鼠的腹腔内注射0.25ml 0.9%生理盐水，然后将其放入保温器皿当中。 （腹腔注射方法：左手提起并固定小鼠，使小鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。）
第5节验证性实验. 1、下列有关酶的实验中自变量的叙述,不正确的是( ) A.鉴定酶的化学本质是蛋白质的实验中,自变量是待测酶溶液和已知蛋白液 B.验证酶的高效性的实验中,自变量是与底物相对应的酶溶液 C.验证酶的专一性的实验中,自变量是不同种类的酶或不同的底物 D.探究酶的最适温度的实验中,自变量是不同温度 2、“验证酶的催化效率”的实验结果如图所示。实线表示在最适温度下过氧化氢酶催化，虚线表示相同温度下用二氧化锰催化。下列有关叙述错误的是( ) A.过氧化氢酶能提供过氧化氢分子活化所需的能量 B.在酶催化下，过氧化氢分解速率是逐渐减小的 C.若降低温度，M点右移 D.该实验可以说明酶具有高效性 3、现有四个纯种果蝇品系，其中品系①的性状均为显性，品系②～④均只有一种性状是隐性，其余性状均为显性。这四个品系的隐性性状及控制该隐性性状的基因所在的染色体如下表所示。 品系①②③④ 隐性性状残翅黑身紫红眼 相应染色体Ⅱ、ⅢⅡⅡⅢ 现要设计验证孟德尔遗传定律的第一步杂交实验，相关叙述正确的是( ) A.若通过观察体色验证分离定律，可选择交配品系组合为②×④ B.若通过观察翅型验证分离定律，必须选择交配品系组合①×② C.若验证自由组合定律，可选择观察体色与眼色两对相对性状 D.若验证自由组合定律，可选择观察翅型和体色两对相对性状
4、为验证胰岛素能降血糖,某同学给几只刚进食的小鼠腹腔注射一定剂量的胰岛素溶液(用酸性生理盐水配制),观察现象,若出现惊厥,则达到目的。该实验需要完善的是( ) ①为使反应出现得较快且明显,实验前应将小鼠饥饿处理,以消耗肝糖原 ②应设置注射等量酸性生理盐水的对照组,且注射的部位、方法同实验组 ③应设置口服胰岛素的实验组,对照组灌喂等量的清水 ④出现惊厥现象后,还应对其中的一半注射葡萄糖溶液抢救,另一半不予抢救 A.①②③ B.②③④ C.①②④ D.①② 5、为了验证胚芽鞘尖端确实能产生促进生长的某种物质,用胚芽鞘和琼脂块等材料进行实验时,对照实验的设计思路是( ) A.完整胚芽鞘分别置于单侧光照射和黑暗条件下 B.胚芽鞘尖端和未处理的琼脂块分别置于胚芽鞘切面的同一侧 C.未放过尖端的琼脂块和放过尖端的琼脂块分别置于胚芽鞘切面的同一侧 D.胚芽鞘尖端和置于胚芽鞘尖端一段时间后的琼脂块分别置于胚芽鞘切面的同一侧 6、已知大麦在萌发过程中可以产生α-淀粉酶,用GA (赤霉素)溶液处理大麦可使其不用发芽就产生α-淀粉酶。为验证这一结论,某同学做了如下实验: 注:实验结果中“+”越多表示颜色越深。表中液体量的单位均为。 1.α-淀粉酶催化__________水解可生成二糖,该二糖是__________.
【2019最新】精选高考生物二轮复习三激素调节的相关实验分析试题 考情分析 动、植物生命活动的调节是高考必考的知识点之一，常以表格和图像、实验设计等为载体考查，多为选择题，也以非选择题的形式出现。主要考查角度有以下 三个方面： (1)人体内激素的作用及特点，如2015年浙江10月学考，9T 。 (2)激素的作用与实验探究。 (3)通过不同设置的对照实验来验证外界因素对植物生长的影响。 一、常见动物激素的分泌异常分析与功能实验探究 1．激素分泌异常症状分析 类别 激素 分泌异常疾病 分泌过多 分泌过少 甲状腺激素 甲状腺机能亢进(食量大增、消瘦、心率快、血压高、易激动) ①成年：黏液性水肿(结缔组织水肿、精神萎靡、反应慢等) ②幼年：呆小病 胰岛素 低血糖 糖尿病 生长激素 ①成年：肢端肥大症 ②幼年：巨人症 幼年：侏儒症(身材矮小、智力正常) 性激素 第二性征不明显或消退，性周期不正常 2. 激素 方法 实验验证 甲状腺激素 饲喂法 用含有甲状腺激素的饲料喂养蝌蚪，蝌蚪迅速发育成小青蛙 摘除法 手术摘除小狗甲状腺，小狗发育停止；摘除成年狗的甲状腺，狗出现行动呆笨、精神萎靡、代谢中耗氧量显著降低，产热量减少等现象
1．验证生长素的产生部位在尖端 实验组：取放置过苗尖端的琼脂块，置于去掉尖端的幼苗一侧(如图甲)。 对照组：取未放置过苗尖端的空白琼脂块，置于去掉尖端的幼苗一侧(如图乙)。2．验证感光部位是苗尖端 (1)实验操作 (2)实验现象：①直立生长；②向光弯曲生长。 3．验证生长素的横向运输发生在苗尖端 (1)实验操作 (2)实验现象：装置a中幼苗直立生长；装置b和c中幼苗弯向光源生长。 4．验证生长素的极性运输即只能从形态学上端向形态学下端运输 5．探究重力和单侧光对生长素分布的影响程度 (1)实验操作：如图所示(注：A盒下侧有开口，可以进光)。 (2)结果预测及结论 若A、B中幼苗都向上弯曲生长，只是B向上弯曲程度大，说明重力对生长素分布的影响大于单侧光。 若A中幼苗向下弯曲生长，B中幼苗向上弯曲生长，说明单侧光对生长素分布的影响
第3课时 血糖调节 [目标导读] 1.结合教材P 16～17的图文，概述血糖调节的过程。2.结合教材P 18的内容，分析糖尿病的常见症状及其原因，学会尿糖的检测。 [重难点击] 血糖调节的过程。 一、血糖调节过程 1．血糖含量 血浆中的__________称为血糖。正常人空腹时血糖浓度为________________，口服或静脉注射葡萄糖2 h 后血糖浓度低于____________。 2．血糖调节的因素 (1)调节器官：________是调节血糖浓度的重要器官。 (2)调节激素 ①胰岛素由________________分泌，是______________的唯一激素。 ②胰高血糖素由____________分泌，起到升血糖的作用。 (3)激素的作用 ①胰岛素???? ?? ????促进????? 血糖进入组织细胞 血糖合成 或 转化为脂肪等非糖物质抑制????? 分解脂肪等 转化为葡 萄糖使血糖浓度降低 ②胰高血糖素????? 促进 分解成葡萄糖抑制葡萄糖转化为 3．构建血糖平衡的调节模型
问题探究 1．分析血糖调节过程，试回答： (1)该图体现的调节方式是________调节。 (2)参与的调节激素有__________和________________，____________是使血糖浓度下降的激素，而________________是使血糖浓度升高的激素。这两种激素的作用相互拮抗，共同维持血糖的相对平衡。 (3)调节过程主要是胰岛、________和肾脏等器官的共同作用。 2．完善下列图解，理清胰岛素与胰高血糖素之间的关系 由上图血糖的调节过程得出：血糖平衡调节中存在__________调节机制。 3．饭后，人体中血糖、胰高血糖素、胰岛素三者之间的变化关系分析如下图所示： (1)若a代表血糖浓度，则b代表__________，c代表______________。 ①血糖浓度较高时，可降低血糖浓度的__________含量增加，而升高血糖浓度的______________含量相对较低。 ②当血糖浓度较低时，________________含量增加。 ③__________和________________相互协调，共同维持血糖平衡，起拮抗作用。 (2)由上述血糖的调节过程得出，血糖平衡调节中存在____________机制。
有关动物实验的伦理学问题 班级：1003 学号：10300302 姓名：陈维 [摘要] 动物实验是生物医学研究中必须采用的手段,对生物医学的发展起着十分重要的作用,但随着动物保护运动的兴起 ,动物实验的伦理问题引起了广泛的关注.对动物实验的伦理学争论及发展、现状、存在问题、立法状况、实施的必要性等方面进行了详细的分析,对如何正确认识和对待实验动物的生命,如何科学、合理而人道地使用实验动物进行科学研究,如何加强并改善我国实验动物福利伦理工作等方面进行了系统的阐述,强调了生物医学研究与实验动物伦理必须协调发展,才能使实验动物更好地服务于科技进步、人类健康和社会发展。 [关键词] 动物实验伦理学安全性 [前言] 进入20世纪之后，医药业通过动物实验取得了辉煌的成就，生物医学也有了突飞猛进的发展。生物医学的每一次重大发展与进步 ,几乎都与动物实验息息相关 ,动物实验由此而奠定了在整个生物医学发展中的重要地位。但是 ,随着人类社会的进步和发展 ,保护动物权利的呼声愈来愈高，相反，公众对动物实验的支持也在缓慢下降。动物实验仍面临动物权利论的伦理挑战。 动物实验伦理争论 20世纪70年代初，动物权利拥护者将边沁的人类功利主义理论-苦乐感觉，作为伦理判断标准的道德观，并将它延伸扩展到动物实验之中。他们认为： 1.动物也是智慧和知觉能力的生物，它们的感觉能力和人类并没有很大不同。而动物感觉痛苦和恐惧的能力，就是它们内在的价值的载体，强调动物的这种价值应该得到人类道德的重视、同情和平等对待。 2.基于动物具有的内在价值，因此动物同样具有生存权，具有作为一个独立的物种完成它们的命运。 3.动物作为独立存在的物种，它们同样具有主宰自己生命的权利，它们同样具有应该受到人类尊重的愿望和意图。 4.人类无权为了自身利益使用动物作为实验材料，甚至杀死它们。人类使用动物做一些“残忍”的实验，是破坏了动物作为独立物种的完整性。 但是，研究人员则认为动物实验在现代生物医学研究中是起着关键、不可替代的作用，为了人类的健康和幸福，仍然不可避免使用实验动物。他们是以仁义伦理为依据，提出了自己的伦理观点： 1.动物是否具有思维、意识、情感和能力，生物学家至今还难给出答案。如
小老鼠胰岛素惊厥实验报告 组员：胡欣、郑宁博、朱靖、马凯、於梦秋 （1）原理： 胰岛素是调节机体血糖水平的激素之一。给动物注射大量胰岛素后，引起血糖降低，动物出现惊阙现象。 （2）准备 小白鼠、注射器、胰岛素溶液、酸性生理盐水、生理盐水、10%葡萄糖。 （3）操作步骤 1．取4只体重相近的小鼠，分为实验组与对照组，每组二只。（实验前饥饿26小时） 2．给实验组小鼠腹腔注射胰岛素溶液（0.1毫克/10克体重），胰岛素溶液浓度为2 国际单位/毫升。 腹腔注射方法：左手提起并固定小鼠，使小鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。 胰岛素溶液的配制：用pH2.5-3.5的酸性生理盐水配制胰岛素。 酸性生理盐水配制：将10毫升0.1N HCl 加入300毫升生理盐水中，调pH 值为2.5-3.5。 3．给对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。 4．将两组动物做好标记后，放在室温下观察，比较两组动物的神态、姿势及活动情况。 5．当动物出现抽搐、翻滚等惊阙反应时，记录时间，并将其中一只立即皮下注射10%葡萄糖（0.1毫升/10克体重）。 皮下注射方法：选项背或大腿内侧的皮肤。操作时，常规消毒注射部位皮肤，然后将皮肤提起，注射针头取一钝角角度刺入皮下，把针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。拔针时左手拇、食指捏住进针部位片刻，以防止药物外漏。 6．比较对照组动物、注射葡萄糖的动物、以及出现惊阙而未经注射葡萄糖的动物的活动情况，分析所得结果。 （4）实验结果及结论
组员：刘炎炎 吴颖川 邹琳 张雪娇 顾琦欣 一 实验目的 通过此次实验说明胰岛素具有降血糖的作用，同时也掌握了腹腔注射和皮下注射等常规的实验操作。 二 实验原理 胰岛素是调节机体血糖水平的激素之一。给动物注射大量胰岛素后，引起血糖降低，动物出现惊阙现象。 三 实验材料 小白鼠、注射器、胰岛素溶液（浓度为2 国际单位/毫升）、酸性生理盐水、生理盐水、50%葡萄糖溶液。 配制 胰岛素国际单位的换算：一个国际单位=0.03846 mg 的标准人胰岛素所含的活性成份。 胰岛素溶液的配制：用pH2.5-3.5的酸性生理盐水配制胰岛素。 酸性生理盐水配制：将10 mL 0.1mol/L HCl 加入300毫升生理盐水中，调pH 值为2.5-3.5。 四 实验步骤 1．取4只体重相近的健康小鼠，分为A 、B 两组并标记，A 组为对照组，B 组为实验组，每组2只。 2．将4只小鼠在实验前饥饿24小时，称量体重并记录。 3．给B 组小鼠腹腔注射胰岛素溶液（0.1mL/10 g 体重）。 腹腔注射：左手提起并固定小鼠，使小鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3mm 左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。 4．给A 组小鼠腹腔注射等量生理盐水。 5．将两组动物放在室温下观察，比较两组动物的神态、姿势及活动情况。 6．当小鼠出现抽搐、翻滚等惊厥反应时，记录时间，并将其中一只立即皮下注射50%葡萄糖溶液（0.1mL/10 g 体重）。 皮下注射：选项背或大腿内侧的皮肤。操作时，常规消毒注射部位皮肤，然后将皮肤提起，注射针头取一钝角角度刺入皮下，把针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。拔针时左手拇、食指捏住进针部位片刻，以防止药物外漏。 7．比较对照组动物、注射葡萄糖的动物、以及出现惊厥而未经注射葡萄糖的动物的活动情况，分析所得结果。 注意事项：若实验在冬天进行，注射胰岛素后，最好将动物放在30-37℃环境下保温，以加快反应的出现。
生物：实验鼠实验专题专项训练2 5．胰岛素是调节机体血糖的激素之一，当体内胰岛素含量增高时，便引起血糖下降，动物出现惊厥现象。现有小白鼠4只，1mL注射器、鼠笼、胰岛素溶液（酸性生理盐水配制）、酸性生理盐水、50%葡萄溶液。已知注射了胰岛素的动物最好放在30—37℃环境中保温。 （1）请设计观察胰岛素增高时出现惊厥现象的相关实验步骤。 步骤一：将四只小白鼠饥饿18—24小时 步骤二： 步骤三： 步骤四： （2）当动物出现惊厥反应后，给其中一只注射葡萄糖溶液，预测结果并分析原因： （3）人的胰岛素由含51个氨基酸的两条肽链构成，通过基因工程技术可由转基因的大肠杆工程菌来生产胰岛素。那么胰岛素将在大肠杆菌的（细胞器）中合成，合成1个胰岛素分子将脱去分子水。 （1）步骤二：分成实验组和对照组，每组两只。 步骤三：给实验组动物注射适量胰岛素溶液；给对照组注射等量酸性生理盐水。 步骤四：将两组动物放在30—30℃相同环境中保温，记下时间，观察并比较两组动物神态、姿势及活动情况 （2）惊厥反应减缓或消失 注射胰岛素使体内胰岛素含量增高，血糖下降，脑细胞供能不足，出现惊厥反应；注射葡萄糖溶液后，血糖升高，脑细胞得到充足葡萄糖，供能充足，功能恢复正常，惊厥反应减缓或消失 （3）核糖体49 6．（一）在一封闭饲养的有毛小鼠繁殖种群中，偶然发现一对有毛小鼠生产的一窝鼠仔中有几只无毛小鼠，无毛小鼠全身裸露无毛，并终身保留无毛状态。科研人员为了研究无毛小鼠的遗传特性，让上述这对有毛小鼠继续杂交，仍有无毛鼠出生；让无毛鼠与亲代有毛小鼠回交，生产出10只无毛小鼠和12只有毛小鼠，其中无毛小鼠雌、雄各5只，有毛雌小鼠7只，雄小鼠5只。 （1）科研人员初步判断：①该小鼠无毛的原因是种群中基因突变造成的，而不是营养不良或其他环境因素造成的；②控制无毛性状的基因位于常染色体上。写出科研人员作出上述两项判断理由。 （2）由于该种无毛小鼠有极大的科研价值，科研人员需要将其扩大繁殖。已知无毛是由隐性基因控制，无毛雄鼠能正常生育，无毛雌鼠繁殖力低，哺乳困难。若利用上述回交实验得到的小鼠做实验材料，理论上有四套交配方案能获得无毛小鼠。 其方案一为：杂合有毛小鼠♀×杂合有毛小鼠♂ 写出另三套方案，指出最佳方案并说明理由。 方案二：。 方案三：。 方案四：。
体液调节 人教版全日制普通高级中学教科书（必修）生物第一册 北京市十一学校乔文军 指导思想与理论依据 尝试以“提高科学素养，面向全体学生，倡导研究性学习，注重与现实生活的联系”的课程理念来设计教与学的过程。最想突出的处理：1．还原科学研究的历史面貌，突出生物学的“实验学科”特点；2．建构内分泌调节的内在联系，避免激素和腺体名称罗列。 教学背景分析 教学内容：体液调节的重点是激素调节，学生在初中生物课中学习留存的知识很少，更多的只留下生活经验，应在此基础之上建立新的知识。在教学过程中，教师要尽量创设学生活动的机会，让学生成为学习活动的主体，教师只是为学生的学习提供必要的指导和知识铺垫。本节内容与社会和个人生活是密切相关的。要引导学生把所学的知识与社会和个人生活相结合。这种结合一方面可体现在以社会生活中的实际问题作为背景，分析挖掘这些问题中包含的科学知识，另一方面体现在运用知识去分析和解决社会生活中的问题。教学重点，内分泌调节的组成和功能，科学研究的方法。教学难点，内分泌腺的构造，下丘脑—垂体分级调节，实验设计的严谨思想。 学生情况：基于现场课的特殊性，课题的选择尽量往后面章节选择。学生对“动物新陈代谢”、“神经调节”的内容可能还没有涉及，但具有一定的生活经验，实际的学习活动中主要设计相对独立的教学内容，传统的知识性的目标可能不会全然达成。 教学方式：大体遵循“生命现象”→“经典实验”→“结果讨论”→“掌握研究方法，形成内分泌调节知识体系”的过程。注重唤起学生对问题解决的追求，注重强调师生之间，师生与题目素材之间的对话与交流。 教学手段：讲述方法的运用的过程，是为了铺垫和突显设问；电教手段处理图片和分步呈现，是为了弥补语言和板书的不足，并起到控制课堂节奏和划分知识板块的作用；板书提纲，是内分泌系统的组成和内在关系，力求图文并茂和重点突出。 技术准备： 1．准备演示实验。 2．搜集相关图片和素材，并整理成ppt课件。 教学目标 1．知识目标 ①能描述动物和人体的激素调节； ②能说出主要的几种动物激素调节的关系。 2．情感态度与价值观目标 ①关注人和动物激素与生产和生活的关系，认识生物科学的价值； ②讨论科学史上的经典人物和实验，避免知识“去背景”和“简单化”。 3．能力目标 ①运用模型实验的方法，设计实验步骤、预期实验结果和解释实验现象； ②尝试运用反馈调节的原理，解释一些生命现象。