提取植物DNA方法
1、取植物叶片装入2ml EP管,装入钢珠。液氮冷激后,在研磨器中研磨。加入900 ul 65℃预热的2×CTAB(实验前加入终浓度0.2%的β-巯基乙醇),65℃,水浴20min, 上下颠倒数下/5min。
2、加入700ul氯仿:异戊醇(24:1),上下颠倒1min,静置5min。10000rpm,5min。
3、移上清500ml至1.5ml EP管,加50ul 3M NaAc,再加550ul异丙醇,上下颠倒摇匀。10000rpm,10min,弃上清(白色沉淀即为DNA)
4、加500ul 70%乙醇,12000rpm,5min。弃上清,干燥,加TE(200ul)。
提取植物DNA方法
5 将母液DNA浓度稀释至20 ng/μl用于PCR反应的工作液(一般稀释10倍)。OD260/OD280比值在1.7--1.9之间说明所得的DNA 纯度较好。比值若低于1.7可能有蛋白污染,若高于2.0则DNA 很可能已降解。
EXTRACTION BUFFER (100 ml) ?10(1L)
10%PEG 8000 10ml 1g 10g 5g
1M Tris-HCl, pH7.0 10ml 10ml 100ml 50ml
5M NaCl 28ml 8.19g 81.9g 40.95 5% CTAB 40ml 2g 20g 10g
500mM EDTA, pH8.0 4ml 4ml 40ml 20ml 10% SLS(sodium lauryl sarcosine) 3ml 0.3g 3g 1.5g
dH2O 5ml 50ml 补足1L 补足500ml
灭菌备用
1?TE(500ml)
1M Tris-HCl, pH7.0 5ml
500mM EDTA, pH8.0 1ml
dH2O 补足500ml
3M NaAc 100ml
NaAc 24.6g 水定容100ml