临床医药文献杂志
Journal of Clinical Medical
2019 年 第 6 卷第 6 期2019 Vol.6 No.6
179
公共场所公共用品的微生物检测分析
李 莎
（贵阳市疾病预防控制中心，贵州 贵阳 550000）
【摘要】目的?研究某地区公共场所的公共用品的卫生情况。方法?依据我国《公共场所卫生检验方法》GB/T18204.4—2013标准，对本次研究选用的公共用品进行微生物检测，通过试验分析用品卫生合格率。结果?经研究，美发理发样品合格率最低，宾馆旅店卫生条件较好。结论?相关部门还需加强对公共经营场所的监管，提升经营者的消毒意识，为消费者营造干净、卫生的消费场所。
【关键词】公共场所；公共用品；微生物；检测；分析
【中图分类号】R1 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.06.179.01
1?资料及方法
1.1 一般资料
在2017年对本地区洗浴场所、旅店、美发理发等几类公共场所的800份公共卫生用品进行了微生物检测。
主要检测样本为毛巾、浴袍、床单、拖鞋等公共用品，主要检测项目为细菌总数、大肠菌群等。
1.2 采用方法1.
2.1 细菌采集
随机选取已消毒且未使用的公共用品进行采样操作，在采样操作中需使用灭菌干燥棉进行采样，使用10毫升灭菌生理盐水浸湿灭菌干燥棉，使用灭菌绵擦拭公共用品的适当部位，以采集其样本，然后利用灭菌剪刀剪去操作人手接触的部分，然后把棉拭子放置在剩下的生理盐水当中。
1.2.2 培养细菌
检验人员需依据细菌的特点，判断菌种，并依据培养基上的菌落数，依据相关标准计算公共用品合格率。在此过程中，主要使用的设备及培养基为：干热灭菌箱、恒温培养箱、乳糖发酵管、胰酪胨大豆肉汤、氯化钠肉汤、葡萄糖肉浸液肉汤、匹克氏肉汤等。
1.2.3 检验步骤
（1）样品稀释：首先，检验人员需振动装有样本的试管。然后，检验人员需使用无菌吸管吸取适量的1:10样品匀液，并将其注射到相应的装有生理盐水稀释液的无菌试管当中，在注射完成之后需振动试管，将其制作成均匀样液。
（2）细菌总数的检验：依据对样品污染情况的评估，选择样品匀液。检验人员在进行稀释操作时，需在每个稀疏度的样品匀液中吸取1毫升匀液，并且将其滴在不同的平皿中，同时还需制作相同稀释度、相同容量的稀释液作为对照样本滴在不同的无菌平皿中。之后，向平皿中注入 45到50℃、15到20毫升的营养琼脂，检验人员需注意的是，必须保证营养琼脂与匀液混合均匀。在营养琼脂凝固之后才可将平皿放到培养箱中培养两天时间。
（3）菌落计数：检验人员需在检验过程中需选择菌落数在30到300CFU 之间、且无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数；若试验中配制的所有稀释液中的菌落总数都大于300CFU ，则需按照稀释度最高的进行计数；反之，则需按照稀释度最低的进行计数。
（4）大肠菌群检测：首先，乳糖胆盐发酵试验：检验人员需将样品放到双料乳糖胆盐发酵培养液中，然后将其放置到相应的培养箱中培养一天时间。培养结束之后，检验人员需观察培养液是否存在发酵情况，假若未出现发酵情况，则表示为大肠菌群阴性；反之，则需进行分离培养及试验。
其次，分离培养：检验人员需在发酵管中抽取一部分培养液，并将其滴在伊红美兰琼脂平板上，然后将其放到
培养箱中培养18到24小时时间，在取出之后观察菌落生长情况，使用革兰氏染色镜进行检验。
最后，试验：在平板中，选择可疑大肠菌群菌落接种乳糖发酵管，将其放置在培养箱中培养1天时间。其他菌落的检测工作则依据各个菌种的生长特点进行检测。
1.3 统计学分析
本次研究涉及的数据信息均使用SPSS19.0统计学软件进行分析。
2?结?果
研究发现，本地区大型宾馆、美容院、大型洗浴的卫生条件较好，美发理发、小型浴池的卫生条件较差。经过微生物检测，公共场所的公共用品卫生合格情况详见表1。
表1 公共场所的公共用品卫生合格情况
行业样品数合格数合格率美发理发21218887大型宾馆363597小型旅店18617292大型洗浴11010595小型浴池15013489美容院10610296合计
800
736
92
3?讨?论
经过此次研究发现，本地区公共场所公共用品的卫生合格率为92%，致病菌检出率较低，真菌检出率较高，相较于小型公共场所来说，大型公共场所的卫生合格率较高，且经营者的消毒意识较强，可按照规定做到一客一换一消。因此，相关部门需加强对小型公共场所公共用品消毒情况的检查，尤其是小型浴池拖鞋的消毒情况，以督促经营者健全消毒制度，完善消毒设施，同时还需指导消毒人员正确使用这些消毒设备，以保证消毒质量可满足我国相关规定。此外，还需不断完善微生物检验设备，提升检验人员的专业能力及专业知识水平，确保检验结果的正确性及合理性。
参考文献
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[J].职业卫生与应急救援,2018,36(01):57-58+69.
本文编辑：李 豆
公共场所检测项目及依据 检测项目检测依据 温度公共场所卫生检验方法第1部分：物理因素GB/T18204.1-2013 湿度公共场所卫生检验方法第1部分：物理因素GB/T18204.1-2013 风速公共场所卫生检验方法第1部分：物理因素GB/T18204.1-2013二氧化碳公共场所卫生检验方法第2部分：化学污染物GB/T18204.2-2014一氧化碳公共场所卫生检验方法第2部分：化学污染物GB/T18204.2-2014甲醛公共场所卫生检验方法第2部分：化学污染物GB/T18204.2-2014 氨公共场所卫生检验方法第2部分：化学污染物GB/T18204.2-2014 可吸入颗粒物 （PM10） 公共场所空气中可吸入颗粒物（PM10）测定方法光散射法WS/T206-2001空气细菌总数公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物GB/T18204.3-2013照度公共场所卫生检验方法第1部分：物理因素GB/T18204.1-2013 新风量公共场所卫生检验方法第1部分：物理因素GB/T18204.1-2013 噪声公共场所卫生检验方法第1部分：物理因素GB/T18204.1-2013大肠菌群公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物GB/T18204.4-2013细菌总数公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物GB/T18204.4-2013真菌总数公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物GB/T18204.4-2013金黄色葡萄球菌公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物GB/T18204.4-2013浊度生活饮用水标准检验方法感官性状和物理指标GB/T15750.4-2006 PH值生活饮用水标准检验方法感官性状和物理指标GB/T15750.4-2006游离性余氯生活饮用水标准检验方法消毒剂指标GB/T15750.11-2006水温公共场所卫生检验方法第1部分：物理因素GB/T18204.1-2013 尿素公共场所卫生检验方法第2部分：化学污染物GB/T18204.2-2014大肠菌群游泳池水微生物检验方法大肠菌群测定GB/T18204.10-2000 细菌总数游泳池水微生物检验方法大肠菌群测定GB/T18204.9-2000 送风中细菌总数WS394-2012公共场所集中空调通风系统卫生规范附录D集中空调送风中细菌总数检验方法
食品微生物快速检测方法的研究进展 【摘要】本文从食品安全与卫生的角度出发，介绍了分子生物学方法中的核酸探针检测法、基因芯片检测法、PCR技术检测法的检测原理及优缺点、在食品微生物检测中的应用。 【关键词】食品微生物、快速、检测、分子生物学 随着世界食品开发、生产、销售的迅速发展与人们生活水平的不断提高，研究和建立食品微生物快速检测方法以加强对食品卫生安全的监测越来越受到各国科学家的重视，其关键是及时、准确地检测出食品中的微生物。传统的检测方法准确性、灵敏性均较高，但有涉及的实验较多、操作繁琐、效率低等缺点。近年来，微生物的快速检测和自动化研究进展声速，主要包括微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等方面及其它们的结合应用。本文主要介绍分子生物学方法中的核酸探针检测法、基因芯片检测法和PCR技术检测法 分子生物学方法 随着微生物学、生物化学和分子生物化学的飞速发展，对微生物的鉴定已不再局限于对它的外部形态结构及生理特性等一般检验上，而是从分子生物学水平上研究生物大分子，特别是核酸结构及其组成部分。在此基础上建立的众多检测技术中，核酸探针和聚合酶链反应，以其敏感、特异、简便、快速的特点成为世人瞩目的生物技术革命的新产物，已逐步应用于信源性病原菌的检测。 1 核酸探针法 细胞核酸DNA 和RNA 是唯一一类可以传递遗传信息的大分子，而每一种病原体都有独特的核酸片段，核酸探针是带有将已知核苷酸DNA或RNA片段用同位素或其它方法标记的基因特异片段，它主要利用碱基配对原理，使互补的2条核酸单链形成双链。 根据核酸探针中核苷酸成分的不同，可将其分为DNA探针或RNA探针；根据选用基因的不同又可分为两种，一种探针能同微生物中全部DNA分子中的一部分发生反应，它对某些菌属、菌种、菌株有特异性，另一种探针只能限制性同微生物中某一基因组DNA发生杂交反应，它对某种微生物中的一种菌株或仅对微生物中某一菌属有特异性。 美国GENE-TRAK公司研制出了脱氧核糖核酸杂交筛选比色法，主要利用特异的基因探针对沙门菌、李斯特菌和大肠杆菌的rRNA进行检测。检测步骤如下：先设计出与细菌rRNA互补的基因探针，待检样经过增菌培养后，溶解细菌并加入带有标记的探针进行液相杂交：如果待检样中存在靶细菌rRNA、荧光素标记的检测探针和多聚脱氧腺嘌呤核苷酸末端捕获将与目标rRNA序列杂交；此后，把包被多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸的固相载体测杆插入杂交溶液中，利用多聚脱氧腺嘌呤核苷酸与多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸间的碱基配对将杂交核酸捕获于固体载体中，并将固相载体真培养于过氧化酶-抗荧光素接合剂中，使探针上的荧光素与结合剂结合；最后，将固相载体置于酶底物-色原溶液中，使过氧化酶与底物反应，在450nm处测量吸光度值，以确定样品中是否存在靶细菌。 总的来说，核酸探针技术是一种理想的快速检测技术，它最大优势是特异性和敏感性，而且兼备组织化学染色的可见性和定位性，主要用于食品致病性病原微生物的检测。但是也存在一定问题，如每检测一种菌就需要制备一种探针，而且目前尚未建立所有菌种的探针；要达到检测量还要对样品进行一定时间的培养；对毒素污染的食品有时因样品中不含产毒菌而无法检测出，所以该技术还有待进一步发展。 2基因芯片技术 基因芯片的基本原理是将各种寡核苷酸点样于芯片表面，微生物样品DNA经PCR扩增制备荧光标记探针，然后再与芯片上寡核苷酸点杂交，最后通过扫描仪定量和分析荧光分布模式来确定检测样品是否存在某些特定微生物。
公共场所现场检测项目及标准值
表1 宾馆客房现场检测项目和卫生标准值 项目3—5星级饭店、宾馆限定值检测结果温度℃ 冬季>20 合格或不合格 夏季<28合格或不合格相对湿度，% 40—65 合格或不合格 风速，m/s ≤0.3合格或不合格 二氧化碳，% ≤0.07合格或不合格 一氧化碳，% ≤5合格或不合格 甲醛，mg/m3 ≤0.12合格或不合格可吸入颗粒物，mg/m3 ≤0.15合格或不合格 空气细菌总 数 撞击法cfu/m3 ≤1500合格或不合格 沉降法个/皿≤10合格或不合格台面照度，lx ≥100合格或不合格噪声，dB(A) ≤45合格或不合格新风量m3/(h·人) ≥30合格或不合格床位占地面积，m2/人≥7合格或不合格 项目细菌总数个/50cm2 大肠菌群致病菌个/50cm2 茶具<5cfu/Ml 不得检出阴性或阳性 毛巾和床上卧具<200cfu/25cm2 不得检出阴性或阳性 表2文化娱乐场所卫生标准值
项目 影剧院、音乐厅 录像厅（室）游艺厅、舞 厅 酒吧、茶座 咖啡厅 检测结果 温度，℃ 有空调装置 冬季>18 >18 >18 合格或不合格 夏季≤28≤28≤28合格或不合格相对湿度，% 有中央空调装置40—65 40—65 40—65 合格或不合格风速，m/s，有空调装置≤0.3≤0.3≤0.3合格或不合格二氧化碳，% ≤0.15≤0.15≤0.15合格或不合格一氧化碳，mg/m3——≤10合格或不合格甲醛，mg/m3≤0.12≤0.12≤0.12合格或不合格可吸入颗粒物，mg/m3≤0.20≤0.20≤0.20合格或不合格 动态噪声，dB(A) ≤85≤85（迪斯 科舞厅 ≤95） ≤85 合格或不合格 新风量m3/(h·人) ≥20≤30≥10合格或不合格 空气细菌总 数撞击法，cfu/m3≤2500≤2500≤2500合格或不合格沉降法，个/皿≤30≤30≤30合格或不合格 表3公共交通等候室卫生标准值 项目候车室标准值检测结果 温度℃ 有空调装置 冬季18-20 合格或不合格 夏季24-28 合格或不合格无空调装置的采暖地区冬季≥ 14合格或不合格相对湿度，％- 合格或不合格风速，m／ｓ≤ 0.5合格或不合格二氧化碳，％≤ 0.15合格或不合格一氧化碳mg／m3≤10合格或不合格甲醛，mg／m3≤0.12合格或不合格可吸入颗粒物，mg／m3≤0.25合格或不合格
GB/T 18204 4-2000 前言 为贯彻执行《公共场所卫生管理条例》和GB 9663～9673- 1996、GB 16153-1996《公共场所卫生标 准》，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。 本标准中的方法是与GB 9663—9673-1996，GB 16153-1996相配套的监测检验方法。 本标准第一法为xx。 本标准为首次发布。 本标准由xx卫生部提出。 本标准起草单位： 江苏省卫生防疫站、广东省卫生防疫站、天津市卫生防疫站、辽宁省卫生防疫站。 本标准主要起草人： xxxx： xx、xx、xx万双、xx玟、张淑兰； 戳印法： 姜淑荣、xx、xx、付亚书。 xx国家标准 公共场所xx、床上卧具微生物检验方法 细菌总数测定
Methods of microbiological examination for towel and bedclothes in public places -Determination of aerobic bacterial count GB/T 18204.4-2000 1范围 本标准规定了公共场所毛巾、床上卧具细菌总数的测定方法。 本标准适用于公共场所内公用毛巾、床上卧具细菌总数的测定． 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T 18204. 2-2000公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定 3定义 本标准采用下列定义。 细菌总数aerobic bacterial count 指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性 质等）．25cm^2表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上 生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。 细菌总数主要作为判定公用毛巾，床上卧具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用毛巾、床上卧具清洗消毒效果的判定和评价提供依据。
土壤微生物监测常规测定指标的分析方法和适用范围
其他方法： 一、土壤DNA提取和纯化： 方案1，参考(1, 2) 1.称取样品土样5g, 加入灭菌的石英砂，液氮研磨；
不要液氮研磨，这样子对DNA伤害很大，几乎全部片段化了。可以加上PBS洗涤下土壤，一是能够去除些杂质，二是能够使得土壤处于悬浮状态，然后可以在涡旋仪上剧烈涡旋2－3min，使得土壤颗粒破碎。然后12000rpm离心5min，弃上清。 2.加入1 3.5mL的DNA提取Buffer，100微升20mg/mL蛋白酶K，37℃225rpm摇30min-2h 3.加入700微升20%SDS，65℃水浴2h,间隔15min颠倒摇匀数次； 4.6000rpm室温离心15min,收集中间液相层；向沉淀中加入3mLDNA提取液，300微升20%SDS，65℃水浴30min，同上离心，收集中间液相层，合并；重复一次；可考虑再 增加抽提一次。或者用5mL而不是3mL。最后实在装不下了可以分在两个50mL离心管里面离心。 5.向收集的液相层中加入等体积氯仿：异戊醇（24：1）抽提一次，8000rpm离心10min，收集上部液相层； 6.第5步收集液相层中加入0.1倍体积的乙酸钠，0.6倍体积的异丙醇，4℃过夜沉淀； 这个千万不要4度过夜啊，四度过夜你会发现很多的絮状悬浮物，我之前犯过类似错误，这个是SDS和高浓度的盐在低温条件下析出来了。室温放置1－2h就好。 7.过夜沉淀物12000rpm离心15min，弃上清；向沉淀中加入10mL冷乙醇洗涤，12000rpm离心5min，弃上清；12000rpm离心30sec，移液枪析出残留液体； 8.室温自然干燥沉淀，干燥后向沉淀中加入400微升TE溶解。 方案2： 购买DNA提取试剂盒，如SoilMaster DNA Extraction Kit (Epicenter) 或UltraClean Soil DNA Isolation Kit (MO BIO) 二、DNA定量和质量检测： 提取后的DNA使用紫外分光光度法进行浓度和纯度检测。DNA纯度以OD260/ OD280比值来反映。当OD60 /OD80比值<1.8时，说明样品存在蛋白质或酚等杂质，可采用平衡酚/氯仿/异戊醇再抽提除去蛋白质或用乙醚抽提去除残留酚，再用无水乙醇沉淀，TE悬浮后再测定。当OD60/OD280比值>2.0，说明样品存在RNA污染，可以用RNA酶处理样品去处RNA 。和定量，应用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA大小及完整度。 三、土壤宏基因组测序 将质检合格的土壤DNA随机打断，加接头序列构建测序文库，利用Roche 454或Illumina Hiseq系统进行测序反应。 四、生物信息分析： 1.原始数据整理、过滤及质量评估： 应用中科院青能所自主开发的质量控制软件QC-Chain进行原始测序数据的质量控制，去除低质量碱基和read，并进行污染序列的监控(3)。
(一)、概述 食用被微生物污染的食品而导致的疾病，称作食源性疾病。导致这类疾病的微生物叫食源性致病菌。随着人们居住和卫生条件的不断改善，以及抗生素的滥用，人类对病菌的抵抗能力却在不断下降，食源性疾病一直呈上升的趋势。因此，对食品中致病菌的监测和检验也就越显示其重要性，常规的检验大多依靠培养目标微生物的方法来确定食品是否受到此微生物的污染，这些方法需要一定的培养时间，少则2～3天，多至数周，才能确定。而现行有效的一些快速检测方法不仅可以大大缩短检测时间提高微生物检出率并可用于微生物计数、早期诊断、鉴定等方面，以做到快速、简便、准确。快速方法包括了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等领域。 （二）、常见、常用的快速、简便的检测微生物数量的方法如下： 1、活细胞计数的改进方法 （1）、旋转平皿计数方法 （2）、疏水性栅格滤膜法（HGMF）或等格法（isogrid method） （3）、血膜系统（Pertrifilm） （4）、酶底物技术（ColiComplete） （5）、直接外荧光滤过技术（DEFT） （6）、“即用胶”系统（SimPlate） 2、用于估计微生物数量的新方法 （1）、阻抗法 （2）、A TP生物发光技术 3、其他方法 （1）、微量量热法 （2）、接触酶测定仪 （3）、放射测定法 （三）、食品中沙门氏菌的快速筛检方法 1、沙门氏菌显色培养基法 2、免疫学方法 3、分子生物学方法 4、自动传导法 （四）、大肠杆菌O157：H7快速检测方法 大肠杆菌O157：H7肠出血性大肠杆菌的主要血清型，自1982年在美国被分离并命名以来，陆续发现本菌与轻度腹泻、溶血性尿毒综合症、出血性肠炎、婴儿猝死综合症等多种人类病症密切相关，是食源性疾病的一种重要致病菌。E.coli O157：H7属于肠杆菌科埃希氏菌属，为革兰氏阴性杆菌，有鞭毛。近年来作为食品卫生及流行病学的研究热点，E.coli O157：H7的分离和鉴定方法已取得了较大进展。利用其生化特征、免疫原性建立的方法以及现代分子生物学技术的应用，可以从多方面对E.coli O157：H7进行检测。 1、E.coli O157：H7鉴别培养基及显色培养基 2、免疫学检测方法 3、分子生物学方法 （五）、金黄色葡萄球菌的快速检测方法 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈普通串状排列无芽孢，无鞭毛，不能运动。该菌在自然界中分布广泛，如空气、水、土壤、饲料和一些物品上，是最常见的化脓性球菌之一，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌食物中毒是其肠毒引起的，目前已确认的肠毒素至少有A,B,C1,C2,C3,D,E和F8个型。由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的中毒爆发事件，近年来
公共场所现场检测收费标准一览表 行业名称现场检测项目及收费监测点计算 旅店客房卫生标准值GB 9663-1996 包含(温度、湿度、风速、CO-、CO2- 、PM10- 、照度、噪音、甲醛、空气细菌总数) 1.客房数（间）≤100, 客房数5～10%、＞100客房数1～5%； 2.采样频率、发证、复证监测：1）星级宾馆，或相当于星级宾 馆，每三小时采样一次，监测一天（7点～22点）2）普通旅 店、招待所等监测一天（上午、下午、晚上各一次）； 3.经常性卫生监测：对星级宾馆或相当于星级宾馆、普通旅店、 招待所等进行一次性监测。 理发店、美容店卫生标准GB9666-1996 包含(CO-、CO2-、 PM10-、甲醛、、空气细菌总 数) 1.座位数（个）：≤10，1个点、≤30，2个点、＞30，3个点； 2.采样频率、发证、复证监测：营业时间内监测一天，一天采样 2－3次； 3.经常性卫生监测：营业时间内一次性采样监测 卡拉OK文化娱乐场所卫生标准 GB9664-1996 包含(温度、湿度、风速、CO2-、CO- 、PM10- 、甲醛、噪音、空气细菌总数、新风量) 1.座位数（个）：≤300，1-2个点、≤500，2-3个点、≤1000，3-4 个点、＞1000，5个点； 2.采样频率、发证、复证监测：监测一日，一日监测1-2场，每 场采样3次（开映前10分钟，开映后10分钟，结束前15分 钟）； 3.经常性卫生监测：监测一场，采样3次（开映前10分钟，开映 后10分钟，结束前15分钟）。 歌舞厅文化娱乐场所卫生标准 GB9664-1996 包含(温度、湿度、风速、CO2-、CO-、PM10-、 甲醛、噪音、空气细菌总数、新风量) 1.面积（m2）：≤50，1个点、≤100，2个点、≤200，3个点、＞ 200，3-5个点； 2.采样频率、发证、复证监测：监测一场，采样三次（开场前30 分钟，营业高峰和结束前30分钟各一次）。 3.经常性卫生监测：同发证，复证监测
微生物取样方法、微生物检测标准 举例一： 一、空气采样及检验方法 1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制 2采样（空气沉降法） 2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。 2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。 2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。 3培养：于37℃培养24小时。 4检测频率：每周 空气质量标准： 生车间、熟车间、成品车间：低于100个 半成品库、成品库：低于10个 二、设备的采样与检验方法 根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。 1采样方法 1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面） 取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面） 将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 2检验方法 2.1细菌总数的检验 将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。 结果计算 表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2 2.2致病菌的检验 沙门氏菌，参照GB4789.4进行 金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行 4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2， 5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2 一般区域：细菌总数≤100个∕cm2 三、人员手表面细菌污染情况的检验
山东大学实验报告2017年11月27日 _________________________________________________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定， 需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每格长0.01mm（即 10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格 和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直径约为0.8μm， 枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接计数法是将少 量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操作简单。但此法的缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。目前已有一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色微室培养（短时间）以及加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的。本实验以血球计数板为例进行显微镜直接计数。 2.用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载 玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上
临床微生物检验标本的采集及微生物检验报告的解读 一临床微生物检验标本的采集 1.临床微生物检验的思路和原则 确保标本可靠（（分析前质量） 保证检验质量 全面了解机体的正常菌群 快速准确提供信息 微生物学的定性、定量和定位分析 结合病情，与临床联系 2.微生物结果的影响因素 2.1针对性的检验申请、病人准备、标本的采集、标本的运输标本的保存和处理（46~68.2%）；标本检验（ 4-15% ）；结果审核和批准、危急值报告（18.5-47%） 2.2正确采集、转运与保存微生物标本直接关系到致病微生物培养的正确性与阳性率，是从临床微生物检验获得正确结果的最关键一步。 2.3Garbage-In- Garbage-Out 不合格的标本-不正确的检验结果-错误的诊断-错误的治疗-卫生资源的浪费、病人费用增加、耐药菌株增加 2.4成功治疗感染症的重要前提:正确的微生物学检验始自标本采取。否则工作人员水平再高也不可能得到正确的结果，临床医师、护士及检验人员都必须通晓其要领 3.标本采集前临床医师及护士要考虑的问题 3.1是否感染？细菌感染？真菌感染还是病毒、寄生虫感染？ 3.2何时采集样本？ 3.3采集什么样的标本？怎样采集？样本是否足量？ 3.4采用哪种无菌容器或运送培养基采集标本？ 3.5如何完善的填写标本申请单？针对某些特殊致病菌的排查要求应怎样写？（申请单信息越详尽，越有助于实验室出具符合临床情况的结果报告，如疑似诊断、准确的取材部位、甚至取样时用抗菌药物。） 3.6关键需要特别重视的问题：标本采集是否规范；标本保存、运送是否规范？；无菌体液培养重视与否？ 4.微生物检查的样本收集原则： 4.1收集样本时应使用严格的无菌技术，将污染情形降至最低。
微生物检验标本采集运送程序 1．目的 规范微生物检验标本采集、运送，保证实验检测前标本质量。 2．范围 微生物检验标本。 3．职责 3.1 医护人员和检验人员负责指导病人如何正确留取标本。 3.2 门诊抽血人员和病房护理人员负责临床标本的采集，特殊标本由临床医师采集。 3.3 标本运送人员负责及时送到检验科细菌室，急诊检验标本和值班采集的标本由临床科室相关人员直接送到细菌室（备注：周一至周五8：00AM～5：30PM、节假日8：00AM-12：00AM 送细菌室，余下时间送门诊检验室）。 4．程序 4.1 采集标本前，采样人员根据检验项目的要求，确认采样计划并进行适当的准备工作。包括核对医嘱，打印条形码，选择合适的标本容器，粘贴条形码及指导病人做好采样前的准备工作等。 4.2 认真核对病人、标本容器和检验申请是否一致，严防差错。 4.3 选择正确的解剖部位，采用适当的技术和设备来采集标本，注意避免自身正常菌群的污染，各标本采集技术、设备和方法参见微生物标本采集指南。 4.4 采集厌氧菌培养标本时一般情况下不要使用拭子，最好选择活检或抽吸物；厌氧菌培养标本的运输应避免接触空气，立即送检，切不可冷藏；厌氧标本采集与需氧标本采集均参见微生物标本采集指南。 4.5 收集足够量的标本，量少可能导致假期阴性结果。 4.6 在每份标本容器上贴上条形码标识，标识中包含有病人基本信息与检验项目，有时还需标明标本来源、采集部位、采集时间。 4.7 将标本放置于合适的密封容器中。 4.8 采集样品所用材料需按照废弃物处理程序处置，参见《废弃物处理程序》）。 4.9 采集标本后，运送人员及时送到检验科细菌室。 4.10 标本运送人员收集标本时，需核对标本数，用硬质、密闭防泄漏的二级容器将标本安全送抵细菌室，参见微生物标本采集指南。
化妆品微生物检测结果分析 [中图分类号]R168[文献标识码]A[文章编号]1005-2720(2009)14-0666-01 [关键词]化妆品；微生物；检测中国保健> 2009年第14期 化妆品是指以涂抹、喷洒或者其他类似方法，散布于人体表面任何部位(皮肤、毛发、指甲、口唇、口腔黏膜等)，以达到清洁、消除不良气味、护肤、美容和修饰目的的产品。化妆品成分中含丰富的蛋白质、脂肪、维生素和水分等，极利于微生物的生长和繁殖，容易导致化妆品腐败变质，直接造成人体皮肤感染或者微生物通过使用者的手直接或间接进入消化道，引起肠道传染病。为了解市场销售的化妆品的微生物污染状况，对各化妆品销售商抽检和送检的392份化妆品进行微生物检测，结果如下： 1材料和方法 1.1一般资料：对市场化妆品生产企业和销售商随机抽检和部分送检样品共392份。其中清洁类：清洁霜、面膜、洗发水、护发素、沐浴露、洗面奶、洗手液，共147份(37.5 0％)；护肤类：各种润肤膏、霜、蜜、香脂及添加氨基酸、维生素、微量元素、生物括性体等各种营养霜，共150份(38.27％)；美容修饰类：胭脂、香粉、唇膏、眼部用化妆品、指甲油、香水、化妆水、煽油、摩丝、喷发胶，共62份(15.82％)；特殊用途类：育发、染发、烫发、脱毛、除臭、祛斑、防晒，共33份(8.42％)。 1.2检测项目：菌落总数，粪大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌总数。 1.3检测方法及评价标准：按《化妆品卫生规范》卫法监发(2007)进行。6项指标中的任何1项超出卫生标准即为不合格产品。 2结果 本次共检测392份化妆品，合格产品379份，总合格率为96.68％。各类化妆品合格率分别为：清洁类95.92％，护肤类96.67％，美容修饰类98.39％，特殊用途类96.97％。在被检测的392份样品中，检出菌落总数超标8份，超标率为2.04％，超标样品主要分布在清洁类和特殊用途类。霉菌和酵母菌超标10份，超标率为2.55％，超标样品分布基本与菌落总数超标样品一致。铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌未检出。 3讨论 不同种类化妆品检测结果显示：清洁类和特殊用途类育发类合格率最低，菌落超标与原材料消毒不彻底有关。原因是此类化妆品水分含量高，易于细菌生长繁殖；该类化妆品配料中添加了各种营养成分，如蛋白质、氨基酸、微量元素、中草药和各种维生素等，为细菌的生长繁殖创造了条件；另外这类化妆品大多数为中性、弱碱性或弱酸性，为微生物生长提供了良好的环境。而其他类化妆品不适于微生物生长，有的甚至有抑菌作用，故不易检出。
第十章临床微生物检测仪器 一、名词解释 1.自动血培养检测和分析系统：主要由培养系统和检测系统组成。培养系统包括培养基、恒温装置和震荡培养装置。检测系统由计算机控制，对血培养实施连续、无损伤瓶外监测。通过自动监测培养基中的混浊度、pH 值、代谢终产物CO2 的浓度、荧光标记底物或代谢产物等的变化，定性地检测微生物的存在。 2.检测导电性和电压的血培养系统：血培养基中因含有不同电解质而具有一定导电性。微生物在生长代谢的过程中可产生质子、电子和各种带电荷的原子团 （例如在液体培养基内CO2 转变成CO3－ ） ，通过电极检测培养基的导电性或电压 可判断有无微生物生长。 3.应用测压原理的血培养系统：许多细菌生长过程中，常伴有吸收或产生气体现象，如很多需氧菌在胰酶消化大豆肉汤中生长时，由于消耗培养瓶中的氧气而首先表现为吸收气体。而厌氧菌生长时最初均无吸收气体现象，仅表现为产生气体（主要为 CO2），因此可利用培养瓶内压力的改变检测微生物的生长情况。 4.采用光电检测原理的血培养系统：微生物在代谢过程中必然会产生终代谢产 物C O2，引起培养基p H 值及氧化还原电位改变。利用光电比色检测血培养瓶中某 些代谢产物量的改变，可判断有无微生物生长。 5.BacT/Alert自动血培养系统：系统在每个培养瓶底部装置一带含水指示剂的CO2 感受器，当培养瓶内有微生物生长时，其释放出的CO2 可渗透至感受器， 并与感受器指示剂上饱和水发生化学反应，产生游离氢离子使pH 值降低，感 受器上的指示剂由绿变黄。感受器上方的光发射二极管每 10min 发一次光投 射到感受器上，再由一光电探测器测量其产生的反射光。反射光强度传送至 微机后，会自动连续记忆并绘成生长曲线图，由微机分析判断阴性或阳性， 以此确定是否有微生物生长。 6.Bactec9000自动血培养系统：系统利用荧光法作为检测手段，其C O2 感受器上含有荧光物质。当培养瓶中有微生物存在时，产生的C O 可与感受器中的水发生反应 产生H + ，使pH 值降低，酸性环境促使感受器释放出荧光物质。从光发射二极管发射 的光激发荧光感受器而产生荧光。光电比色检测仪每10min 直接对荧光强度进行检测，此荧光强度随C O2 的产生量增多而增强。数据传输到计算机后，生长监测系 统根据荧光的线性增加或荧光产量的增加等特有标准，分析细菌的生长情况，最终判断阳性或阴性。 7.Vital血培养系统：系统采用同源荧光技术来监测微生物的生长。与培养基结合
微生物检验标本的正确采集及注意事项 正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。据相关统计：微生物标本的检测误差来源：80%来源于分析前20%来源于分析中和分析后其它检验样本的检测误差来源：45%分析前10%分析中（仪器））45%分析后.检验标本采集质量控制的重要性,分析前的误差来源所占比例的这个数据是惊人的，在我们的大型医院都存在这个问题，而在我们医院应该不会低于这个数据。 可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。为此应正确采集各种细菌学标本。 一、血液标本的采集 1、采集方法 （1）75%酒精清洁局部皮肤。 （2）待皮肤干后，再用2%—2.5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm （直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。 （3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5-10ml，婴幼儿1-5ml。 （4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。 2、注意事项 （1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。 （2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，应在抗菌药物浓度最低时采集也即在下次用药前采血。切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。 （3）培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。 （4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。 （5）每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。 （6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。 （7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。 （8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。 二、呼吸道 1、痰标本 （1）采集方法 ①清晨起床后用凉开水漱口多次，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出肺深部的脓痰，置于清洁干燥容器中或无菌管中送检。 ②痰量极少者可用45℃ 3%-10%的氯化钠溶液约25ml雾化。对于咯痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，当其咯痰后用无菌棉棒采集标本。
一、误差的表示方法 (一)准确度与误差 1．准确度：指测量结果与真值的接近程度 2．误差 （1）绝对误差：测量值与真实值之差 （2）相对误差：绝对误差占真实值的百分比 注：μ未知，δ已知，可用χ代替μ （二）精密度与偏差 1．精密度：平行测量的各测量值间的相互接近程度 2．偏差： （1）绝对偏差 ：单次测量值与平均值之差 （2）相对偏差：绝对偏差占平均值的百分比 （3）平均偏差：各测量值绝对偏差的算术平均值 （4）相对平均偏差：平均偏差占平均值的百分比 （5）标准偏差： （6）相对标准偏差（变异系数） （三）准确度与精密度的关系 1. 准确度高，要求精密度一定高，但精密度好，准确度不一定高 2. 准确度反映了测量结果的正确性 精密度反映了测量结果的重现性 练习 例：用丁二酮肟重量法测定钢铁中Ni 的百分含量，结果为 10.48%,10.37%,10.47%,10.43%,10.40%;计算单次分析结果的平均偏差，相对平均偏差，标准偏差和相对标准偏差。 解： x δμ=-%100%100%x RE δμμ μ -=?=?%100% R E x δ = ?i d x x =-100%100% i x x d x x -?= ?n x x d i ∑-=1)(1 2 --= ∑=n x x S n i i x 100%100% xi x d x n x -?= ??∑ 100% x S RSD x = ?0.18%0.036%5i d d n ===∑10.43%x =0.036% 100%100%0.35% 10.43%d x ?=?=
相对标准偏差= 二、可疑数据的取舍 在一组测定值中有时会出现过高或过低的数据，称可疑数据。如测得4个数据：21.30、19.25、19.30和19.32，显然21.30可疑。使人怀疑可能是实验中出现了什么差错，但在计算平均值和标准偏差时不能随意把它舍弃。因舍弃一个测定值要有根据，不能合意者取之，不合意者舍之。 对于舍弃可疑值的问题，曾提出过许多标准，目前用得最多的统计学方法是G-检验法。 G-检验法也称格鲁布斯法（Grubbs ），此法的优点是在判断可疑值的过程中，引入了正态分布的两个最重要的样本参数平均数和标准差（S ），该方法的准确性较好。 G-检验法的检验步骤如下： 计算包括可疑值在内的平均值；计算可疑值与平均值之差；计算包括可疑值在内的标准偏差；用标准偏差除可疑值与平均值之差，得G 值；||X X G S -=；查G 检验临界值表，若计算的G 值大于表中查到的临界值，则把可疑值舍弃。 例 标定一个标准溶液得到4个数据：0.1014、0.1012、0.1019和0.1016mol/L 。用Grubbs 法判断数据0.1019是否应该舍弃。 解 算G 值：|| |0.10190.1015| 1.330.0003 X X G S --= = =可疑 查G 检验临界值表（表1），得到n=4时，0.05G =1.48，因为1.33<1.48，所以0.1019应保留 。 表1 Grubbs 检验部分临界值G (95%的置信度，α=0.05) 三、有限量实验数据的统计检验 在定量分析中，常需要对两组有限的实验数据分析分别得出的结果，或两种分析方法的分析结果的平均值与精密度是否存在着显著性差别作出判断，这些问题都属于统计检验的内容，称显著性检验或差别检验或假设检验。统计检验的方法很多，在定量分析中最常用的是t 检验与F 检验，分别主要用于检验两组或多组分析结果是否存在显著的系统误差与偶然误差等。 4 4.610 0.046% s -== =?=0.046%100%100%0.44% 10.43 s x ?= ?=
药品微生物限度检查结果影响因素分析及控制方法 blueski推荐 [2010-3-4] 出处:来自网上 作者:房宇辉董艳丽 摘要:微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法,包括染菌量及控制菌的检查,是对生产单位所用的药品原料、器具设备、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生评价的综合依据。由于微生物限度检查程序繁琐,操作严格,检查周期长,干扰因素多等原因都会造成检验结果误差,这样难...... 微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的检查方法,包括染菌量及控制菌的检查,是对生产单位所用的药品原料、器具设备、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生评价的综合依据。由于微生物限度检查程序繁琐,操作严格,检查周期长,干扰因素多等原因都会造成检验结果误差,样难以对生产做出系统、科学的管理。现就微生物检查时,容易引起误差的几方面原因以及控制方法分析如下。 1 实验者主观因素及操作技能中的误差 1.1 无菌观念淡薄一些操作者认为,微生物限度范围定得宽,多几个、少几个菌对结果影响不大,因此操作马虎、随意,这样容易造成供试品的再次污染以及已污染菌的繁殖及死亡,从而不能真实的反映供试品的染菌情况。因此每一个检验者应明确的了解,在检验过程中的每一个环节,每个空间,每个操作,每个工具及材料,没灭菌者都是带菌者,都会对检验结果产生不确定影响,因而应牢固的建立无菌观念。 1.2 操作技能中误差一些操作者在操作不熟练,及实验条件控制不严格,细节不够注意,每次操作前的消毒处理必须彻底,不得留有死角,对实验所用器具根据材料的性质进行相应的灭菌;开启供试品包装的工具,如剪刀、砂轮等也应消毒,实验用的器具
公共场所试题（微生物部分） 一、填空 1、GB/ T 18204. 1-2000 公共场所空气微生物检验方法中规 定细菌总数测定的方法有撞击法和自然沉降法。 2、茶具细菌总数的计算是经采样处理，一定条件下培养，1cm2 表面积所含的菌落总数。 3、风管内表面微生物采样为每一点采样50cm2面积。 4、微生物检验样品的处理应在洁净区域进行，并有明显标示。 5、病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安全实验室进行。 二、单选 1、公共场所饮用水卫生指在一定培养后，1ml水样中所含菌落 的总数 A 1 B 10 C 100 D 1000 2、霉菌和酵母菌的测定指50cm2面积检样中所含霉菌和酵母 菌落数。 A 10 B 25 C 50 D 100 3、耐热大肠菌群的培养温度是44.5℃ A 37 B 37.5 C 44.5 D 50 4、国家消毒技术规范中规定紫外线灯在距离照射1米处，要求 其强度为≥90uw/ cm2 A 80 B 85 C 90 D 99。 5、各类专业人员的基本要求中微生物人员至少2名
A 1 B 2 C 3 D 4 三、多选 1、风管内表面微生物的采样方法有：AB A刮拭法B擦拭法C撞击法D自然沉降 2、金黄色葡萄球菌ABCD A血平板生长良好B分解甘露醇产酸C血浆凝固酶阳性D革兰氏阳性 3、高压灭菌锅的控制方法有：ABC A生物指示法B化学变色纸片C高压灭菌锅温度计 4、培养基的质量控制包括ABC A物理指标B微生物指标C企业提供资料 5、公共场所毛巾大肠菌群的测定方法有ABC A随机法B发酵法C纸片法D指示法 四、是非 1、公共场所饮用水卫生指在一定培养后，100ml水样中所含 菌落的总数（错） 2、实验室使用的仪器应定期对其进行校核，并保持良好工作状 态。（对） 3、相同的设备可以使用相同的仪器标识来管理。（错） 4、使用50立方以上高压灭菌锅应取得安检部门发放的上岗 证。（对） 5、申报公共场所场所技术服务项目中致病菌检测项目可以不
微生物实验室间比对试验结果分析 [摘要] 目的通过微生物室间比对，评价其检测结果的准确性，从而带动微生物实验室的质量控制工作及检测能力的提高。方法对2009-2011年发放的考核样品通过场景分析，依据《食品卫生微生物学检验》、《食品安全国家标准食品微生物学检验》等方法进行检测。结果2009年比对样品中检出山夫登堡沙门菌和单核细胞增生李斯特菌；2010年比对样品中检出大肠埃希菌O157：H7和小肠结肠炎耶尔森菌；2011年比对样品中检出奇异变形杆菌和阪崎肠杆菌。结论比对试验有助于实验室检测质量及检测能力的提高。 室间比对是实验室以外的组织和机构对其质量水准进行的评价,可以考察各实验室的检测能力和检验结果的准确性[1]。2009-2011年，仪征市疾控中心连续3年参加了扬通徐镇泰五市联合开展的疾控机构实验室间比对，均获得了满意的结果，现将这3次微生物比对结果分析如下： 1 材料与方法 1.1 样本与要求3次比对试验分别由镇江、泰州及扬州市疾控中心牵头并组织实施，模拟场景描述：均为××年×月×日，某医院的肠道门诊在12或24h内陆续接收到腹泻患者若干名，临床表现：部分患者有发热、感冒、恶心呕吐症状，体温在38.0℃～39.0℃之间波动；患者主诉均在一天前参加宴席或聚餐。当地疾控中心赴现场开展流行病学调查，初步认定是一起由食源性致病菌引起的食物中毒事件，同时采集就诊患者肛拭子送实验室进行检验。比对试验提供的是1份半固体培养基保存的模拟肛拭子样品，样品需要室温保存，于一个星期内检测，要求结合所提供的公共卫生突发事件场景相关信息进行食源性致病菌分离鉴定。1.2 试剂所用干粉培养基、血平板、细菌生化鉴定管为杭州天和微生物试剂有限公司及北京陆桥技术有限责任公司生产；科玛嘉显色培养基购于郑州博赛生物技术股份有限公司；诊断血清为兰州生物制品研究所生产；API20E微生物鉴定试纸条及配套试剂购于法国梅里埃中国有限公司。所有检测试剂均在有效期内。 1.3 检测标准依据《食品卫生微生物学检验》[2]、《食品安全国家标准食品微生物学检验》[3]、变形杆菌食物中毒诊断标准及处理原则(WS/T 9-1996)[4]、感染性腹泻的诊断标准及处理原则（GB17012-1997）[5]、扬通徐镇泰实验室间比对试验作业指导书（微生物部分）。 1.4 方法 1.4.1 2009年比对样品将检样直接接种于血平板、SS、TCBS、EMB、山梨醇麦康凯上，36.5℃培养22h，除血平板上生长两种菌落外，其余选择性培养基均为一种菌落生长，将此菌株定为1号菌，血平板上生长较慢细小菌落定为2号菌，继续培养至48h， 挑取单个菌落转种血平板分离培养20h，转种科玛嘉李斯特菌显色培养基，36.5℃培养48h，挑取1号菌接种TSI斜面培养基，TCBS上的单个菌落接种3.5%NacL TSI斜面培养基，36.5℃培养20h。 1.4.2 2010年比对样品将检样直接接种于血平板、SS、EMB、山梨醇麦康凯、科玛嘉李斯特菌显色培养基、科玛嘉弧菌显色培养基上，36.5℃培养24h，除科玛嘉显色培养基上无菌生长外，其余选择性培养基上均有两种菌落生长，分别编以1、2号菌。挑取单个菌落接种于TSI斜面培养基上，36.5℃培养21h。 1.4.3 2011年比对样品将检样直接接种于血平板、SS、山梨醇麦康凯、TSA、EMB、普通营养琼脂、科玛嘉李斯特菌显色培养基、科玛嘉弧菌显色培养基、科玛嘉O157显色培养基、沙门菌属显色培养基上，36.5℃培养24h，四种显色培养基上均无菌落生长，其余培养基上均有两种菌落生长，分别编以1、2号菌。挑取单个菌落接种于TSI斜面培养基上，36.5℃培养24h。 2 结果