附录：常用试剂配制及应用
一、常用缓冲液、试剂的配制
碳酸盐缓冲液（Carbonate-Bicarbonate Buffer）
由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）\
附表1. 0.2 mol/L 碳酸盐缓冲液（?）
磷酸缓冲液(Phosphate Buffers , PB)
磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa值, 所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽。NaHPO4 pKa仁，pKa2=; Na2HPO4
pKa1=，pKa2=。
另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如L缓冲液稀释10倍其pH变化小于。
磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（CsT）、镁离子（Mg+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。
NaHPQ的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液。
NaHPO的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液。
而pH= 6?8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaHPQ与NaHPQ两种磷酸盐混合配制（附表2）。
附表2. 0.2 mol/L 磷酸盐缓冲液（?）
磷酸盐缓冲溶液(Phosphate-buffered saline, PBS)
磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCI以维持溶液的渗透压，因此, PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。
NaCl8g
KCl0.2g
NaHPQ 1.44
g
KHPQ0.24g
在800ml蒸馏水中溶解，用HCI调节溶液的pH值至?加水定容至1L，15psi （1.05kg/cm2 ）高压灭菌20min,室温保存备用。
Tris 缓冲液(Tris-HCI Buffer, TB )
Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加HCI调节pH至所需值，Tris-HCI 缓冲液的离子强度(moI/L )是专指Tris的浓度，如某一特定pH的moI/L Tris 缓冲液的配制是将50ml moI/L Tris 碱溶液与附表3所示相应体积(ml)的moI/L HCI混合，加水至将体积100ml，即为mol/L Tris 缓冲液。
另外，按附表3制备的缓冲液，由于试剂来源的不同，缓冲液pH可能与所需略有差异，此时可通过稍许减少或增加HCI用量，精细调节pH至所需值。
附表 4. 0.05 mol/L Tris 缓冲液\
Tris盐缓冲液是在Tris缓冲液基础上添加NaCI以维持溶液的渗透压，因此，TBS也适用于做细胞缓冲液，常用TBS配制如下。
8g NaCI、0.2g KCI以及3g Tris 溶解于800ml蒸馏水中，加入0.015g酚红并用HCI调pH至用蒸馏水定容至1L,分装后在15psi ( 1.05kg/cm2)高压灭菌20min,室温保存。
现在常用Tris盐缓冲液通常不加pH指示剂，而且该溶液如果不用于细胞培养，通常不加KCI及酚红。
Hank' s 液(Ha nk ' s Bala need Salt Solutio n)
Hank's液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗等。
贮存液A液：
(I) NaCI 80g
KCI 4g
MgSO 7H2O 1g
MgC2 - 6H2O 1g
用双蒸馏水定容至450ml。
(II) CaCI 2 1.4g ( 或CaC - 2H2O 1.85g)
用双蒸馏水定容至50ml。
将I和II液混合，即成A液。
贮存液B液：
NaHPO? 12H2O 1.52g ,
KHPO 0.6g,
酚红0.2g,
葡萄糖，
酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解，用双蒸馏水定容至
500ml。
(3)应用液：A、B储存液分别经112.6 C湿热灭菌20min,取A和B液各25ml, 加无菌双蒸馏水至450ml，使用前用无菌的％或% NaHCO调至所需pH。
注意：药品必须全部用试剂，并按配方顺序加入，用适量双蒸水溶解，待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品，最后补足水到总量。
无Ca2+、Mg+Hank's 液(Hank' s Solution without calcium, magnesium sulfate ) NaCl 80g,
KCl 4g,
NaHPO? 12H2O 1.52g ，
KHPQ 0.6g,
葡萄糖I0g,
用双蒸馏水溶解后，加入％酚红溶液50ml，再加入双蒸水至1000ml, 112.6 C 湿热灭菌20min, 4C冰箱保存。临用前将原液用无菌双蒸水作1：10倍稀释，
用无菌的%或% NaHC3调至所需pHo
柠檬酸盐缓冲液(Citrate Buffer)
柠檬酸0.327
g
柠檬酸钠 2.63g
磷酸氢钠
葡萄糖
蒸馏水加至100ml o
枸橼酸-磷酸盐缓冲液(Citric acid- Phosphate Buffer)
L citrate acid , L NazHPO,等量混合，调节pH至。
mol/L EDTA, pH
EDTA 2H2O 186.1 g
NaOH ?20 g
将EDTA 2H2O加入800ml水中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌。用NaOH调节pH 至，EDTA直到接近pH才完全溶解，定容至1L。分装后高压蒸汽灭菌。
%酚红溶液
取酚红置于研钵中逐滴加入1mol/L NaOH溶液，边研磨边使酚红转变为钠盐
溶于水中，加双蒸水至100ml,过滤后，4C冰箱保存。
醋酸钾(Potassium Acetate )
在60ml 5mol/L醋酸钾溶液中，加入冰醋酸和水。该溶液用于碱性裂解。
3mol/L 醋酸钠(Sodium Acetate )，和
在800ml水中溶解408.1g三水醋酸钠，用冰乙酸调pH至或用稀释乙酸调pH 至，加双蒸水至1L。分装后高压灭菌。
柠檬酸钠缓冲液(Sodium Citrate Buffer)
柠檬酸钠 1.8g
HCI(1mol) 4ml
无水乙醇95ml
先用100ml去离子水溶解柠檬酸钠，然后加入HCI和无水乙醇，再补充去离子水至总量200ml o
饱合硫酸铵溶液(Saturated Ammonium Sulfate Solution)
取500ml双蒸馏水，加入约400克硫酸铵，水浴加热至70C，磁力搅拌器充分搅拌，直到加入的硫酸铵不再溶解，以氨水(也可用NaOH调，室温保存。
二、酶免疫检测常用试剂配制
包被液(Coating Buffer) (碳酸盐缓冲液)
N Q CO?10HO 8.58g
NaHCO 5.8g
溶于双蒸水至1000ml。
封闭液(Confining liquid) (5%兑脂乳-PBS溶液，)
脱脂乳50g
加L磷酸盐缓冲液(PBS至1000ml溶解。
洗液(washi ng liquid)
氯化钠8.0g
磷酸二氢钾0.2g
磷酸氢二钠(12H2Q 2.9g
吐温-20
加去离子水至1000ml溶解即可。
终止液(stop buffer) (2mol/L H 2SO):
H 2SO加去离子水至200ml o
缓冲甘油(glycerine buffer)
甘油9 份
PB () 1 份
将9份甘油与1份PB合并，充分混匀。
%HQ-甲醇液(Hydrogen Peroxide-Methanol Solution) (总体积120ml) 3%H2Q 20ml
甲醇100ml
DAB-HQ底物缓冲液(DAB- H2Q Substrate Buffer)
取6mg二氨基联苯胺(3,3 ' -Diaminobenzidine Tetrahydrochloride DAB) 溶解于10ml Tris-HCI 。使用前取％H2加入到DAB容液中(H2Q的终浓度为％)。如有沉淀生成，则用滤纸过滤。
5-溴4 氯-3吲哚磷酸/四唑氮蓝底物显色液(BCIP/NBT Substrate Solution ) 贮存液配制：
NBT在10ml 70%的乙醇中溶解0.5g NBT。\
BCIP:在10ml 100%二甲基甲酰胺中溶解0.5g BCIP。
贮存液4C保存，可稳定一年。
底物显色液：
取66卩l NBT贮液与33卩l BCIP加入到10ml碱性磷酸酶缓冲液中，充分混匀，底物显色液应在用前1小时内配制。
三、细胞相关试剂配制
L-谷氨酰胺(L-G)溶液(L-glutamin Solution ) ( mol/L )
称2.9 g L-谷氨酰胺(分子量为)用去离子水溶解至100 ml，过滤除菌，
分装小瓶，4?5 ml/瓶，-20C冻存。
100x 青-链霉素(双抗)溶液(P/S Penicillin/Streptomycin Solution )取青霉素G (钠盐)100万单位和链霉素(硫酸盐)1 g，溶于100 ml去离子水中，分装小瓶，4?5 ml/瓶，-20°C冻存。
% NaHC3溶液(NaHCOSolution )
称分析纯NaHCO7.5 g，用去离子水溶解至l00ml，过滤除菌，分装小瓶，4?5 m1/瓶，盖紧瓶塞，4C保存。
HEPESS液(HEPES Solution ) (1mol/L )
称23.83 g HEPES( N-2-Hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic
acid，N-2-羟乙基呱嗪-N'-2-乙基磺酸，分子量为)，用去离子水溶解至100 ml，过滤除菌，分装小瓶，4?5 m1/瓶，4C保存。
氨基喋呤(A)贮存液(Aminopterin Stocking Solution ) (100X , 4X 10-5 mol/L )称mg氨基喋呤(Aminopterin, 分子量)，溶于90 m1去离子水中，滴加l mol/L NaOH).5 m1,并不断搅动，待氨基喋呤完全溶解后，加1 mol/L的HCI 0.5m1 中和，再