Liaoning Normal University
（2011届）
本科生毕业论文(设计)
题目：紫丁香ISSR-PCR反应体系优化研究
学院：生命科学学院
专业：生物技术
班级序号：3班5号
学号：20111132010006
学生姓名：韩莹莹
指导教师：张恒庆
2015年5月
目录
前言 ............................................................................................................................ - 3 -1.材料与方法 ............................................................................................................. - 5 -
1.1材料 ............................................................................................................... - 5 -
1.1.1试验材料 ............................................................................................. - 5 -
1.1.2主要试剂与仪器 ................................................................................. - 5 -
1.2方法 ............................................................................................................... - 5 -
1.2.1紫丁香基因组DNA的提取及检测 .................................................. - 5 -
1.2.2 ISSR-PCR反应体系.......................................................................... - 6 -
1.2.3 ISSR-PCR反应体系退火温度的确定.............................................. - 7 -
1.2.4 ISSR-PCR反应程序.......................................................................... - 7 -
1.2.5 ISSR-PCR产物的电泳检测.............................................................. - 7 -
2.结果 ......................................................................................................................... - 8 -
2.1 DNA模板浓度对ISSR扩增效果的影响 .................................................. - 8 -
2.2 TaqDNA聚合酶量对ISSR扩增效果的影响............................................ - 9 -
2.3 Mg2+浓度对ISSR扩增效果的影响 .......................................................... - 9 -
2.4退火温度对ISSR扩增效果的影响 .......................................................... - 10 -
2.5dNTPs浓度对ISSR扩增效果的影响 ...................................................... - 11 -
2.6引物浓度对ISSR扩增效果的影响 .......................................................... - 12 -
3.分析与讨论 ........................................................................................................... - 13 -致谢 .............................................................................................................. - 15 -参考文献 .................................................................................................................. - 16 -
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紫丁香ISSR-PCR反应体系优化研究
中文摘要:
以紫丁香为试验材料,采用改良CTAB法提取基因组DNA,为了获得最佳的紫丁香ISSR-PCR反应体系,本试验利用梯度试验对ISSR-PCR扩增结果有影响的dNTPs 的浓度、TaqDNA聚合酶量、Mg2+浓度、退火温度、模板浓度、引物浓度共6个因子进行摸索和优化。确定了25μL时优化的反应体系:10×PCR buffer（不含Mg2+）2.5μL、模板DNA10ng/μL、dNTPs0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.0U、引物
0.6mmol/L(筛选自UBC set.9)、Mg2+2.0mmol/L、退火温度49℃。
关键词:紫丁香;ISSR-PCR;体系优化
Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Natural Syringa oblate
Abstract:
Using Syringa oblata as material, genomic DNA of Syringa oblata was extracted by modified CTAB method,for optimizing ISSR-PCR reaction system of Syringa
oblate.gradient test was used to explore and optimize of ISSR-PCR system which included dNTPs concentration、TaqDNA polymerase amount、Mg2+ concentration、annealing temperature、DNA concentration、primer concentration.The twenty-five μL optimized reaction system contained 10×PCR buffer(without Mg2+)2.5μL、DNA 1.0 μL、dNTP 0.2 mmol/L、TaqDNA polymerase1.0U、primer0.6mmol/L(sift from UBC set.9)、Mg2+2.0mmol/L、annealing temperature49℃。
Key words:Syringa oblate;ISSR-PCR;optimization of ISSR-PCR reaction
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前言
紫丁香（Syringa oblata）在植物分类学上属于被子植物门（Angiospermae）、双子叶植物纲（Dicotyledoneae）、捩花目（Contortae）、木犀科（Oleaceae）、丁香属（Syringa）,俗称丁香、华北紫丁香、百节、紫丁白、情客、龙梢子,原产我国华北地区。紫丁香在中国已有1000多年的栽培历史,其花小芬芳,紫色、紫红色或蓝色,春季盛开时,硕大而艳丽的花序布满全株,观赏效果甚佳,是我国著名的观赏花木之一。同时,紫丁香还具有较高的药用价值,其鲜叶制成的溶液,对弗氏痢疾杆菌进行体外抑菌试验,效果较强,用于防治菌痢,既经济,又便于推广。因此,应当加强对其种质资源、遗传多样性的保护，实现可持续地开发利用。目前我国紫丁香的研究主要集中于栽培、生理等方面, 而分子生物学方面的研究少有报道,进行更为深入的基于分子生物学ISSR-PCR体系化的研究，有很广阔的应用空间和实际意义，可以广泛应用在如植物品种鉴定保护、遗传基因定位、作图等方面，对保护遗传多样性以及进化有深远影响。
目前我国紫丁香的研究主要集中于栽培、生理等，如:有关紫丁香开花授粉的生物学特性、花粉生活力和贮藏特性[4]以及花粉挥发性物质[5],国外有人对欧丁香进行过组培研究并在茎尖培养中获得成功,国内有李容群等人进行过丁香杂交胚
的组织培养研究,而分子生物学方面的研究少有报道,进行更为深入的基于分子生物学分子标记的研究，有很广阔的应用空间和实际意义，可以广泛应用在如植物品种鉴定保护、遗传基因定位、作图等方面，对保护遗传多样性以及进化有深远影响。
分子标记的概念有广义和狭义之分，广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性DNA片段。特异引物的PCR标记所用引物就是针对已知序列的DNA区段设计的，可在常规PCR复性温度下进行扩增，对基因组DNA的特定区域进行多态性分析。ISSR-PCR标记技术就是在此基础上通过SSR标记技术发展而来的。
SSR（Simple Sequence Repeat）简单重复序列标记,是被Hamade等人于1982年发现的一种序列标记技术，也可以叫做微卫星序列标记。因为真核生物基因组中存在大量重复且顺序复杂性低的串联重复序列，按重复序列长度可分为卫星DNA、小卫星DNA、微卫星DNA、中卫星DNA等。其中微卫星DNA重复单位序列最短，只有1~6bp,串联成簇，因此微卫星DNA又被成为短串联重复序列。每个微卫星DNA 都由核心序列和侧翼序列组成，其核心序列呈串联重复排列，侧翼DNA 序列位于核心序列的两端，为保守的特异单拷贝序列，能使微卫星特异地定位于染色体常染色质区的特定部位。因此，根据这两端的序列特点，设计
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特异引物，通过PCR技术将核心序列扩增出来，利用电泳分析技术得到其长度的多态性，这就是SSR标记的原理。虽然SSR标记有高度重复性、共显性、高度可靠性等优点，但却需要对所研究物种的微卫星位点进行克隆和测序分析来设计相应引物，极其耗时耗力，为它的利用带来了很大阻碍。
ISSR(Inter Simple Sequence Repeat)是一种基于简单重复序列（simple sequence repeat）发展起来的分子标记技术[6-7],是由加拿大蒙特利尔大学Zietk.iewicz等[6]
于1994年提出的。ISSR检测的是2个SSR之间一段短DNA序列上的多态性。ISSR技术的基本原理就是在SSR的3ˊ或5ˊ端加锚1～4个嘌呤或嘧啶碱基,然后以此为引物,对反向排列SSR间的一段DNA进行PCR扩增，即在PCR反应中，锚定引物可引起特定位点退火,导致与锚定引物互补的间隔不太大的重复序列间DNA片段进行PCR扩增，而SSR本身不被扩增，所扩增的inter SSR区域的多个条带通过凝胶电泳分辨，扩增谱带多为显性表现,它在引物设计上比SSR技术简单，无需知道DNA序列即可进行扩增。ISSR 技术在获得大量位点信息的同时,兼具有操作简单、成本低、重复性高、快速灵敏、DNA用量少且质量要求低、技术难度低、引物设计无需知道基因组序列等优点,只要目标区域的长度在可扩增范围内,就能扩增出微卫星重复间的DNA片段。与RFLP、RAPD技术相比,ISSR技术的重复性、稳定性较高[7-9]。目前已广泛应用在生物的种质鉴定[10-11]、遗传多样性分析[12-13]、亲缘关系分析[14-15]、遗传图谱绘制[15-16]、物种起源和分子标记辅助育种[17]、基因定位与克隆及数量性状基因座（Quantitative Trait Locus,QTL）定位等方面。最佳的PCR反应体系是获得可靠分子标记结果的前提。ISSR作为基于PCR的一种分子标记,其扩增结果易受DNA模板、TaqDNA聚合酶、Mg2+、退火温度、dNTPs、引物等因素影响,因此在研究时应对这些影响其PCR反应的因子建立起合适的反应体系。所以如果更为严谨的说，ISSR标记法也是需要改进的，不只是因为在PCR扩增时需要一定时间摸索最适反应条件，而且呈显性遗传标记，还不能区分显性纯合基因型和杂合基因型，这也将会是新一代标记技术研究发展的切入点。当下，这种分子标记技术广泛利用，但国内迄今为止还尚未见利用ISSR分子标记进行紫丁香研究的相关报道。
本试验对ISSR-PCR反应体系中DNA模板、TaqDNA聚合酶、Mg2+、退火温度、dNTPs、引物6种因素进行优化,分析比较各个因素对ISSR-PCR扩增结果的影响,找出适宜的反应体系，旨在通过研究ISSR-PCR反应中各项参数变化对扩增效果的影响，对ISSR-PCR反应体系进行优化，建立适用于紫丁香的ISSR-PCR 反应体系，为利用ISSR-PCR技术准确分析紫丁香遗传多样性和遗传结构奠定基础，为紫丁香品种ISSR指纹图谱建立、数量性状基因定位、新品种选育等工作提供科学依据。
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1.材料与方法
1.1材料
1.1.1试验材料
ISSR-PCR反应体系优化所用的材料为采自英歌石植物园的紫丁香。本试验在辽宁师范大学生命科学学院完成。
1.1.2主要试剂与仪器
本研究所使用的引物筛选自UBC set.9（由哥伦比亚大学设计并公布）
主要试剂:TaqDNA聚合酶购自上海Sangon biotech 公司;所用Mg2+、dNTPs、10×buffer（不含Mg2+）、DNA marker购于大连宝生物TaKaRa公司;Tris、H Cl、EDTA、CTAB、Na Cl、β一巯基乙醇、硼酸等均为国产分析纯试剂。
主要仪器:台式高速离心机（江苏金坛医疗仪器厂制造）,PCR仪（英国TECHNE TC-512T-512）,凝胶成像系统（美国InGenius LHR）
1.2方法
1.2.1紫丁香基因组DNA的提取及检测
利用张恒庆等改良CTAB法[1],在采集叶片后尽快提取基因组DNA,将DNA稀释保存于4℃备用。具体的实验步骤如下：
1)向2mL离心管中加入1.2mL的CTAB提取缓冲液，放于65℃的水浴锅中
预热。
2)取160mg左右的紫丁香叶片放于研钵中，倒入液氮后迅速研磨成粉末。
3)向预热后的CTAB提取缓冲液中加入20μl的β-巯基乙醇，再加入适量的
研磨好的植物粉末，充分混匀后放入65℃水浴锅中水浴30min，每隔3-5min 颠倒混匀一次。
4)水浴后冷却至室温，加入CI溶液（将2mL离心管加满），缓慢颠倒混匀
1h。
5)将离心管放于离心机中，4℃，10000rpm离心10min。吸取上清液，转移
至新的对应编号的离心管中。
6)重复步骤4）、5）。
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7)加入预冷的无水乙醇（将2mL离心管加满），颠倒混匀后放于4℃冰箱
中静置20min。
8)取出离心管，于4℃离心机中10000rpm离心5min。
9)倒掉上清液，在离心管中加入1mL75%酒精漂洗2次后，于室温条件下自
然风干。24小时后加入400μl1×TE溶液溶解，提取的DNA放于4℃冰箱中保存待用。
紫丁香样品DNA浓度的检测
1）配制1×TBE溶液用作电泳的缓冲液，并配制浓度为0.8％的含有染色剂EB（溴化乙啶）的琼脂糖凝胶，待其冷凝后放入电泳槽中待用。
2）点样。在封口膜上点3μl的6×Loading Buffer和5μl经过纯化的紫丁香DNA 样品，混匀后点入上样孔中。
3）点入5μl的DL15000DNAMarker，以它作为标准的分子量进行电泳，开始时，将电压调至120V使紫丁香DNA样品快速出孔，然后调至100V的稳定电压。
图1.2.1 紫丁香DNA凝胶电泳分析图
1.2.2 ISSR-PCR反应体系
以紫丁香DNA为试验材料,在预备实验基础上选加拿大哥伦比亚大学UBC
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公司的UBC set.9为引物进行扩增,ISSR反应体系优化采用单因素试验25μL反应体系中除10×Buffer含量固定为10μL外,模板DNA含量、dNTPs浓度、TaqDNA 聚合酶含量、引物浓度、Mg2+浓度、退火温度6因素各设置了不同水平。对ISSR 扩增反应某一成分设置梯度进行筛选时，保持其他成分不变，调整ddH2O用量使总体积。具体梯度设置见表1.
表1 ISSR-PCR反应体系优化的因素和水平
Tab.1 The factors and levels used in the
optimization of ISSR-PCR reaction system
模板DNA dNTPs浓度Taq DNA聚合酶含量/U 引物浓度退火温度Mg2+浓度
水平浓度/（ng/μL）/(mmol/L) TaqDNA /(mmol/L) /℃/(mmol/L) Level DNA primer dNTP polymerase primer annealing Mg2+ concentration concentration amount used concentration temperature concentration
1 1.0 0.05 0.75 0.04 48.6 1.5
2 5.0 0.1 1.0 0.20 48.7 1.8
3 1 0 0.15 1.5 0.40 48.9 2.0
4 2 0 0.2 2.0 0.60 49.2 2.2
5 3 0 0.25 2.5 0.80 49.4
6 5 0 0.3 49.6
7 49.9
8 50.1
9 50.3
10 50.4
1.2.3 ISSR-PCR反应体系退火温度的确定
引物834的Tm值为50.9℃,上调2.1℃,下调4℃对其退火温度进行摸索。1.2.4 ISSR-PCR反应程序
采用的反应程序：94℃预变性5min；94℃变性45s,40～62℃退火40s,72℃延伸1.5min, 共循环30次；然后72℃延伸7min；4℃保存。
1.2.5 ISSR-PCR产物的电泳检测
ISSR-PCR反应产物用1%琼脂糖凝胶（含溴化乙啶）电泳进行检测,电泳缓冲液为1×TBE。采用120V快速出孔,恒电压80V,电泳时间约120min。电泳完成之
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后,直接在凝胶成像系统（美国InGenius LHR ）下观察并拍照记录。
2.结果
2.1 DNA 模板浓度对ISSR 扩增效果的影响
试验设置6个模板DNA 浓度梯度参与PCR 反应，分别为1,5,10,20,30,50ng/μL,结果显示（图2-1）：DNA 模板浓度在1ng/μL ～50ng/μL,时，均能产生ISSR-PCR 扩增条带，1,5ng/μL 时扩增出的条带较模糊,10～50ng/μL 时扩增出的条带清晰,容易判读。建议在紫丁香ISSR-PCR 研究中，25μL 反应体系模板用量取10ng/μL 。
图2-1 DNA 模板浓度对ISSR 扩增效果的影响
DNA 模板浓度依次为1,5,10,20,30,50ng/μL,M 为DL2000DNA marker
Fig.2-1 Effects of DNA primer concentration on ISSR reaction
2.2 TaqDNA聚合酶量对ISSR扩增效果的影响
由图2-2,结果显示,通过5种不同TaqDNA聚合酶用量比较,在25μL的反应体系中,使用0.75、1.0、1.5、2.0、2.5U的TaqDNA聚合酶时均能扩增出条带,但高于2.0U时,非特异性扩增增强,背景也加深,因此基于扩增结果好且节约成本的原则,最终确定TaqDNA聚合酶最优含量为1.0U。
图2-2 TaqDNA聚合酶量对ISSR扩增效果的影响
TaqDNA聚合酶量依次为0.75,1.0,1.5,2.0,2.5U,M为DNA marker 2000
Fig.2-2 Effects of TaqDNA amount used on ISSR reaction
2.3 Mg2+浓度对ISSR扩增效果的影响
为了确定扩增反应的最佳反应Mg2+浓度,进行了不同浓度Mg2+的筛选。由图2-3可知,当Mg2+浓度超过1.5mmol/L时,大部分扩增条带亮度较好,特异性较强;当Mg2+浓度为2.0mmol/L扩增条带多且清晰。故Mg2+浓度在2.0mmol/L时扩增反应效果最佳。
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图2-3 Mg 2+浓度对ISSR 扩增效果的影响
Mg 2+依次浓度为1.5,1.8,2.0,2.2mmol/L,M 为DL2000DNA marker
Fig.2-3 Effects of Mg 2+ concentration on ISSR reaction
2.4退火温度对ISSR 扩增效果的影响
同一引物对于不同的物种，退火温度可能不同。引物834的Tm 值为50.9℃,上调2.1℃,下调4℃对其退火温度进行摸索,其温度范围内的扩增结果如图2-4,电泳结果表明,低于49℃时,产生的杂带多,条带弱;高于49℃时,产生的条带较少,因此根据扩增条带的清晰度和多态性选择了49℃作为引物834的最佳退火温度。
图2-4 退火温度对ISSR 扩增效果的影响
退火温度依次为48.6,48.7,48.9,49.2,49.4,49.6,49.9,50.1,50.3,50.4℃M 为DL2000DNA marker
Fig.2-4 Effects of annealing temperature on ISSR reaction
从图2-5看出,dNTPs的浓度对结果影响较为明显,6个dNTPs浓度梯度分别为0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mmol/L,dNTPs浓度为0.05,0.25,0.30 mmol/L 时,条带较暗,不利于计数,dNTPs浓度为0.10,0.15mmol/L时多态性较差,只有浓度为0.20mmol/L的扩增条数目多且清晰稳定,因此dNTPs浓度为0.20mmol/L较适宜。
图2-5 dNTPs浓度对ISSR扩增的影响
dNTPs浓度依次为0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mmol/L,M为DL2000DNA marker Fig.2-5 Effects of dNTPs concentration on ISSR reaction
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由图2-6可见,共设置5个不同引物浓度,试验中引物浓度的变化对产物的多少和条带的亮度影响较大,引物浓度为0.04mmol/L时不能扩增出条带,引物浓度为0.2-0.4mmol/L时条带模糊,引物浓度为0.8mmol/L时条带有一定的弥散出现,只有引物浓度为0.6mmol/L的处理条带较清晰,因此,引物浓度为0.6mmol/L较适宜。
图2-6 引物浓度对ISSR扩增的影响
引物浓度依次为0.04、0.2、0.4、0.6、0.8mmol/L,M为DL2000DNA marker
Fig.2-6 Effects of primer concentration on ISSR reaction ISSR技术在植物遗传多样性研究和亲缘分析、图谱构建和基因定位等方
面已经得到了广泛的应用[18-20]。虽然ISSR标记技术结合了SSR、RAPD等技
术的优点,但它同样是一种基于PCR的分子标记技术,必然会受到TaqDNA聚
合酶含量、模板DNA、引物、dNTPs和Mg2+浓度以及退火温度等因素的影
响[21]。且对于不同的物种,其试验参数均有差异,没有一种普遍适宜的反应条
件。因此,要保证ISSR-PCR实验结果的稳定性、重复性和可靠性。为了建立
紫丁香ISSR-PCR最优体系,对影响ISSR-PCR扩增的因素:模板DNA、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、Mg2+的浓度和退火温度设置了不同处理。综合上述
试验,确定紫丁香最终的ISSR-PCR反应体系为:在25μL 反应体系中,10×PCR buffer（不含Mg2+）2.5μL、模板DNA10ng/μL、dNTPs0.2 mmol/L、TaqDNA
聚合酶 1.0U、引物0.6mmol/L、Mg2+2.0mmol/L、退火温度49℃,ddH2O补充
至25μL。
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3.分析与讨论
适宜的模板DNA浓度是保证特异性扩增的前提。在适宜的模板DNA浓度范围内，模板DNA加入量对试验没有太大影响,由图2-1可见,紫丁香的ISSR反应体系对模板DNA加入量的变化不敏感,在所选浓度范围内均可扩增出条带,但在0.1,0.5μL时扩增出的条带较模糊,1.0～5.0μL时扩增出的条带稳定,清晰可辨。考虑到高浓度模板的加入使抑制TaqDNA聚合酶活性或螯合Mg2+的因素掺入的几率加大,因此在试验中在有效模板浓度范围内应尽量采用低浓度。
在PCR反应中,TaqDNA聚合酶是对ISSR-PCR扩增结果最具有显著影响一种试剂,其用量将直接影响多态性的检测及扩增结果的重复性和稳定性, 同时也是最昂贵的,用量过多不仅会增加成本,同时容易扩增出非特异性条带,甚至产生弥散现象,影响结果的准确性。本试验设置的TaqDNA聚合酶量梯度扩增结果如图2-2所示,随着TaqDNA聚合酶用量的增加,扩增产物量呈增多趋势;TaqDNA聚合酶过低,则会使新链合成效率下降,导致产物的合成效率下降,综合考虑,本试验所得TaqDNA聚合酶最佳用量为1.0U(25μL体系),既能保证试验结果的可靠性,又能减少试验成本。
Mg2+是ISSR-PCR的一个重要影响因素,它是Taq聚合酶的激活剂,同时可以与dNTPs、引物、模板相结合,影响引物与模板结合的效率和产物的特异性。但是,其浓度过高反应特异性降低,易出现非特异性扩增,导致扩增样品背景加深;浓度过低,TaqDNA聚合酶作用效率低,使反应产物减少[21-22],由图2-3可见,当Mg2+浓度超过1.5mmol/L时,大部分扩增条带亮度较好,特异性较强;当Mg2+浓度为
2.0mmol/L扩增条带多且清晰。因此Mg2+最适浓度选取2.0mmol/L。
有研究显示,退火温度对ISSR扩增谱带有明显的影响[23],因此本研究探讨了不同退火温度对紫丁香ISSR扩增的影响,以确定最佳的退火温度。一般较低的退火温度能保证引物与模板结合的稳定性,而在允许的范围内选择较高的退火温度则可减少引物与模板DNA之间的非特异性结合[24]。
dNTPs是PCR扩增体系中最不稳定的,不同浓度dNTPs对扩增出的条带数量和强弱影响较为显著,dNTPs是PCR反应的原料,必须达到一定的浓度才能满足要求,高浓度的dNTPs虽能加速反应,但易产生错误掺入,同时与TaqDNA聚合酶竞争Mg2+,使游离的Mg2+浓度降低[25],并且使TaqDNA聚合酶不能充分发挥聚合活性,因此,浓度过高则可能不扩增,使试验达不到预期效果;但如果dNTPs浓度过低,虽能提高准确性但又会影响合成效率,甚至会因dNTPs过早消耗而使产物单链化,降低扩增产物的产量[26]。本试验针对dNTPs设计了6个浓度梯度,结果（图2-5）表明:dNTPs浓度为0.05,0.25,0.30 mmol/L时,条带较暗,不利于计数,dNTPs浓度为0.10,0.15mmol/L时多态性较差,只有浓度为0.20mmol/L的扩增条带数目多且清晰
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稳定,因此可以确定,在该体系中dNTPs的最佳用量为0.20mmol/L。
引物浓度也是ISSR-PCR反应中的重要影响因素,关系到扩增产物的质量,浓
度过低,与模板结合位点减少,引起扩增条带减弱或没有条带（也可能是由于引物长期放置于4℃冰箱中,部分发生降解有关);浓度过高会使电泳背景加深,产生非特异性条带或增加引物二聚体的形成,竞争TaqDNA聚合酶和dNTPs[26],如图2-6所示,引物浓度为0.04mmol/L时不能扩增出条带,浓度过低,其与DNA模板结合位点少,引物浓度为0.2-0.4mmol/L时条带模糊,说明扩增出的片段量比较少,导致条带不稳定及清晰度下降[18、28-29]。引物浓度为0.8mmol/L时条带有一定的弥散出现,只有引物浓度为0.6mmol/L的处理条带较清晰,因此引物浓度选取0.6mmol/L。
本试验建立的体系是采用单因素梯度试验来进行摸索,每次实验结果选取的
最佳值组合，通过分析确定紫丁香最终的ISSR-PCR反应体系为:在25μL 反应体系中,10×PCR buffer（不含Mg2+）2.5μL、模板DNA10ng/μL、dNTPs0.2 mmol/L、TaqDNA聚合酶1.0U、引物0.6mmol/L、Mg2+2.0mmol/L、退火温度49℃,ddH2O 补充至25μL。鉴定得到清晰稳定的条带,这一优化的反应体系可以用于紫丁香遗传多样性的分析,为进一步利用ISSR分子标记技术对紫丁香资源鉴定、分类、分子遗传图谱的构建及分子标记辅助育种等分子生物学研究奠定了良好的基础。在试验过程中发现,不同体系对ISSR-PCR扩增多态性及扩增产物片段大小都有较大影响,充分说明了只有建立最适反应体系,才能获得多态性稳定、重复性和可靠性较高、信息量大的标记信息。但是，单因素试验设计可以直观地快速地表现出各因子对反应体系的影响，但不具有正交试验体现各因素间互作效应的特点。可是由于时间问题，并未进行正交试验，这也是此次试验的不足之处。此外，由于不同的厂家的产品质量存在很大的差异,甚至同一厂家的不同批次的产品都可能存在
差异,为确保试验的准确性,应尽可能选择同一厂家同一批次的产品。
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致谢
在本文的撰写过程中,张恒庆老师作为我的指导老师,他治学严谨,学识渊博,视野广阔,为我营造了一种良好的学术氛围。置身其间,耳濡目染,潜移默化,使我不仅接受了全新的思想观念,树立了明确的学术目标,领会了基本的思考方式,掌握了通用的研究方法,而且还明白了许多待人接物与为人处世的道理。其严以律己、宽以待人的崇高风范,朴实无华、平易近人的人格魅力,与无微不至、感人至深的人文关怀,令人如沐春风,倍感温馨。正是由于他在百忙之中多次审阅全文,对细节进行修改,并为本文的撰写提供了许多中肯而且宝贵的意见,本文才得以成型。
在此特向张恒庆老师致以衷心的谢意!向他无可挑剔的敬业精神、严谨认真的治学态度、深厚的专业修养和平易近人的待人方式表示深深的敬意!同时感谢陈秋月学姐几个月来对我的栽培和教育。
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参考文献
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膜生物反应器（MBR）介绍及设计应用 （内部资料） 北京碧水源科技发展有限公司 https://www.doczj.com/doc/de18008365.html,
目录 1膜生物反应器（MBR）介绍 (1) 1.1原理 (1) 1.2工艺特点 (1) 2设计 (3) 2.1设计进水水质 (3) 2.2设计出水水质 (3) 2.3优质杂排水→城市杂用水（中水） (3) 2.3.1工艺流程 (3) 2.3.2设计说明 (4) 2.4生活污水→二级出水 (5) 2.4.1工艺流程 (5) 2.4.2设计说明 (6) 2.5生活污水→国家一级A标准 (9) 2.5.1工艺流程 (9) 2.5.2设计说明 (9)
1膜生物反应器（MBR）介绍 1.1原理 膜生物反应器（Membrane Bio-Reactor）简称MBR，是二十世纪末发展起来的新技术。它是膜分离技术和生物技术的有机结合。它不同于活性污泥法，不使用沉淀池进行固液分离，而是使用微滤膜分离技术取代传统活性污泥法的沉淀池和常规过滤单元，使水力停留时间（HRT）和泥龄（STR）完全分离。因此具有高效固液分离性能，同时利用膜的特性，使活性污泥不随出水流失，在生化池中形成8000－12000 mg/L超高浓度的活性污泥浓度，使污染物分解彻底，因此出水水质良好、稳定，出水细菌、悬浮物和浊度接近于零，并可截留粪大肠菌等生物性污染物，处理后出水可直接回用。 图1 膜生物反应器工作原理简图 1.2工艺特点 （1）出水水质优良、稳定。高效的固液分离将废水中的悬浮物质、胶体物质、生物单元流失的微生物菌群与已净化的水分开，不须经三级处理即直接可回用。具有较高的水质安全性。
肌电生物反馈治疗仪（神经功能组织重建仪）生物反馈治疗仪就是利用肌电生物反馈技术并结合多种电刺激模式进行肌肉 训练治疗，以达到改善肌肉功能，帮助病人重建并恢复肌肉正常运动功能，脑血管、中枢神经系统损伤得运动功能障碍及盆底肌肉功能障碍等。 生物反馈治疗仪治疗原理： 生物反馈治疗仪就是利用肌电生物反馈技术并结合多种电刺激模式进行肌肉训练治疗，以达到改善肌肉功能，帮助病人重建并恢复肌肉正常运动功能，脑血管、中枢神经系统损伤得运动功能障碍及盆底肌肉功能障碍等。 生物反馈治疗仪结合生物反馈与神经功能重建得最新康复理念，集肌电、直肠、盆底得评估、治疗、训练于一身得康复专家。 什么就是生物反馈 生物反馈 (biofeedback) 又称生物回授。它在不同得场合下具有不同得涵义，既可以指有机体内发生得一种过程；又可以表示一种方法；还可以表示一种特殊得治疗手段。 生物反馈疗法 运用生物反馈疗法，就就是把求治者体内生理机能用现代电子仪器予以描记，并转换为声、光等反馈信号，因而使其根据反馈信号，学习调节自己体内不遂意得内脏机能及其她躯体机能、达到防治身心疾病得目得，由于此疗法训练目得明确、直观有效、指标精确，因而求治者无任何痛苦与副作用。据国内有关报道证实：生物反馈疗法对多种与社会心理应激有关得身心疾病都有较好得疗效。运用于生物反馈治疗得设备有：肌电反馈仪、皮肤湿度反馈仪、脑电反馈仪、脑电反馈仪及脉搏反馈仪等。仪器得操作者需经过专业训练，以保证结果得可靠性与科学性。
生物反馈治疗仪得作用 生物反馈治疗技术就是根据条件反射理论发展起来得，于20世纪60年代末首先在美国用于临床。生物反馈就是用电子仪器测定神经-肌肉与自主神经得正常或异常活动情况，并把这些信息放大成视觉与听觉信号，反映给受试人。医生帮助受试人了解原来不能感觉得机体得变化，通过学习控制这些反映信息，学会调节心理生理变化，来治疗与预防特定疾病。 治疗焦虑障碍 用脑电生物反馈等治疗后，多数人能控制焦虑与惊恐发作，不再影响其工作与生活，能更好地平稳发挥脑功能。 治疗睡眠障碍 生物反馈疗法，使失眠伴紧张情绪病人控制全身肌肉松弛水平，快速进入睡眠。可增加失眠不伴焦虑病人睡眠波，产生强烈得困倦感。 治疗纤维肌痛综合征 生物反馈治疗技术可作为纤维肌痛综合征综合性治疗措施，能改变患者得慢波活动。 治疗慢性疼痛 生物反馈治疗紧张性头痛与偏头痛，使患者得肌肉放松，头痛得症状减轻或消失。 治疗高血压病 用生物反馈治疗原发性高血压，病人收缩压、舒张压均下降；比药物治疗合并放松训练治疗效果好。
目录
技术参数： 1、进口电机（丹麦电机314100+113004A）和气弹簧（德国弹簧4218）双重保 护，安全稳定。 2、双轴承结构，床板运动平稳。 3、电机缓慢起动和停止，让患者更舒适。 4、宽大的固定绑带极为舒适，适用于胸、腰和膝等部位的固定。 5、连续可调的扶手和桌板，方便不同高度的病人。 ▲6、抗菌耐磨高弹力皮革，高阻燃性、抗菌、耐温、防划、床体弹力好、舒适。 7、宽敞的床面，可内外翻、上下调节的脚踏板。 电压： 220V±10%，50Hz 功率： 150VA 电源保险丝： 2A延时保险 控制方式：手动 床面尺寸： 65×185cm 起立角度： 0°～ 90°任意可调 脚踏板内外翻角度: -30°～ 30° 脚踏板上下翻角度：-20°～20°
技术参数： ▲电机驱动：电机驱动，气弹簧辅助 ▲最大推力：6000N ▲床面规格（长×宽）：205cm×120cm （大床）/195cm×74cm（小床） 高度范围：43-93cm 气动靠背可调范围：00 - 850 最大承重：150Kg 床重：100kg 特点及优势： 采用原装LINAK电机 进口电机（丹麦电机274500A1119040）和气动弹簧（德国弹簧2038）双重保护，增加稳定性和安全性。 采用原装德国气动弹簧，使用灵活安全 床面使用高强度高密度海绵长时间使用不容易变型 阻燃抗菌皮革长时间使用不容易损坏 可收缩脚轮便于固定及活动
技术参数及特点： 1、操作平台：笔记本电脑操作系统。 2、床体：采用抗菌耐磨高弹力皮革，高阻燃性、抗菌、耐温、防划、床体弹力好、舒适。 3、床体控制装置：3个丹麦进口直线电机。 4、配备减重吊带，使训练保持在减重状态下进行。 5、训练驱动装置：松下伺服马达。 6、训练模式：主动模式、被动模式。 7、多功能脚踏板：踏板间距可调；角度可调整，适应患者内、外翻足型；提供生物负载。 8、痉挛侦察功能：自动检测患者训练异常，当痉挛发生时反向放缓运动速度，原 点休后降低速度重新开始训练，减少患者痉挛发生。 9、治疗音乐：训练全程提供语音反馈提示信息，配合舒适的治疗音乐。 10、跟踪模式：描绘跟踪曲线，实时跟踪显示患者腿部受到的电机力矩大小。 11、评估模式：评估训练过程中左/右腿的僵硬度。 12、安全保护装置：紧急停止开关。 电源输入：a.c. 220V 50Hz 额定功率：500VA 保险管规格：3.15A /250V 承载重量：135 Kg 床体升降高度范围：52~86 cm； 床体站立角度范围：0~80 °； 床体后仰角度范围：0~10 °； 腿长调节范围：0~25cm 踏步角度范围：0~25 °； 踏步速度范围：1~80 步/min； 治疗时间：1-90min
生物反馈电刺激治疗仪的操作流程 发表时间：2016-04-25T10:27:05.117Z 来源：《中西医结合护理》2015年11月第11期作者：柏敏于红娟康小前[导读] 南京市中医院因社会趋向老龄化，越来越多的中老年妇女由于多种因素造成盆底松弛，压力性尿失禁一系列女性盆底功能障碍性疾病。 南京市中医院江苏南京 210001 【摘要】该文章依据多年应用生物反馈电刺激治疗仪的临床经验，制定和总结了本科室生物反馈电刺激治疗仪的临床操作流程、护理事项和心得体会，为该仪器规范性的运用和操作提供了依据，以供同道参考。 【关键词】生物反馈；电刺激治疗仪；操作流程 [中图分类号] R318.5 [文献标识码] A [文章编号]1672-5018（2015）11-267-02 因社会趋向老龄化，越来越多的中老年妇女由于多种因素造成盆底松弛，压力性尿失禁一系列女性盆底功能障碍性疾病。此病好发于更年期妇女．对生命威胁并不大，但严重影响患者的生活质量[1]。据报道经产妇患病率约20%，而大于60岁老年女性则达到35%以上。压力性尿失禁（SUI）是中老年妇女的常见病[2]。常常给女性带来精神和生活上的困扰，生活质量明显下降。针对此类疾病，我院于2006年引进加拿大生物反馈电刺激治疗仪（VROSTYM），治疗轻中度盆底功能障碍性疾病的妇女。该仪器引进后，因为是新技术，厂家没有提供规范的操作流程，且该仪器较精密，对其应用和护理，应有一套科学合理、系统、操作性好的工作流程，保证仪器在工作中正常使用，并在临床运用中规范行为，提高治疗效果。基于以上原因，根据临床运用情况，我们总结了一套实用性强的操作流程，使患者在安全，有效，舒适的氛围里接受治疗，为制定规范的操作流程提供了依据。现介绍如下，以供同道参考： 一、准备流程（表1） 1.打开电脑以及生物反馈电刺激仪开关。 2.电脑开机后，进入生物反馈文件夹。 3.创建新病人，填写病人信息资料，每次填写完成后储存。 4.病人平躺后取膀胱截石位，戴手套取出清洁后的探头，用2%洗必泰消毒液冲洗探头，再用0.9%生理盐水冲洗，用无菌纱布擦试干，将探头顺应病人阴道位置放置于阴道底部。 二．肌电评估操作流程（表2） 1.将任务菜单中的盆底肌评估（表面肌电） 选中，移动至任务栏后，点菜单上的开始。 2.嘱病人用最大力收缩盆底肌肉肌群，电脑银屏上显示病人肌肉收缩的最大值；嘱病人完全放松后用中等力量持续收缩盆底肌肉，显示屏上出现病人持续收缩时的肌电图。 3.测量肌电图上的最大收缩力和持续收缩时间，打印肌电图表。 三.电刺激操作流程（表3） 1.了解病人病情 2.排除禁忌症 3.根据病人病情选择相应的治疗方案 4．初次治疗病人选择初级电刺激程序，不同的疾病选择相应的电刺激程序。 1.将任务菜单中的电刺激程序选中，移至任务栏后，点击菜单栏上的开始。 2.调整菜单栏“+”“—”至病人能感受的最大耐受值后嘱病人放松肌肉接受电刺激治疗，嘱病人放松肌肉接受电刺激治疗，每次20分钟。 治疗完毕： 先关电刺激仪开关，拔出阴道探头，用2%洗必泰消毒液冲洗探头，再用0.9%生理盐水冲洗，用无菌纱布擦试干后将探头用消毒纱布包裹放入盒中。 病人整理完毕，操作者与病人交流并评估此次电刺激的感受，并制定下次电刺激强度方案。电刺激注意事项： 1.阴道探头专人专用，以免交叉感染。探头给予病人时交待要轻拿轻放，探头电源接头不能进水，扭曲，不能摔，否则探头极易损坏。 2.操作者掌握电刺激的禁忌症，特别注意的是胸部装有心脏起搏器的患者禁做，根据病情选择相应的电刺激程序。 3.电刺激时，嘱病人选择合适的刺激强度，以舒适为标准，循序渐进一点一点提高强度，而不是追求高强度，勿急必反。 4.探头应根据病人子宫位置放置，如子宫前屈位或后屈时，应将探头顺应子宫的位置放置到阴道底部，让探头金属环充分接触病人阴道组织。 四．生物反馈操作流程（表4） 1.掌握病人病情 2.排除禁忌症 3.根据病人病情选择相应的治疗方案 4.初次治疗病人选择初级生物反馈程序，不同的疾病选择相应的生物反馈程序。
你所不知道的脑电生物反馈技术，儿童注意力提升尖端技术！脑训练简介 脑电生物反馈训练（又名脑神经反馈训练，以下简称脑训练），是以高科技仪器实时采集人的脑电波状态，通过对采集到的数据进行科学的分析，将分析结果与大脑各项指标进行比对，并针对大脑的“短板”（注意力、记忆力、分析力、左右脑平衡力等）制定相应的训练方案，再通过“用大脑来控制电脑游戏”的形式，让学员在游戏的过程中，有针对性的对大脑的弱项进行训练，逐步提升指标，最终达到让大脑的各项指标达到一个较高水平的完美平衡状态的过程。 脑电生物反馈训练涉及到的技术：脑电波信号采集、脑电信号与数字信号的互译技术，脑电生物反馈技术，人机互动技术，脑神经生理学，脑智能教育研究，可穿戴移动设备学等，可以说是集中了目前世界上最前沿的科学理论、最先进的技术成果与一身。 脑电生物反馈训练在世界上除了广泛应用于教育领域之外，在针对问题儿童（自闭、多动、抑郁、狂躁、网瘾戒断等）的治疗、成年人的大脑开发、脑力工作者减压、中老年人预防阿尔兹海默症等领域方兴未艾。 意义及特点 1、脑训练是提升素质教育的基础 根据美国心理学家斯腾伯格提出着名的三元智力理论，构成智力的三大方面为：分析性智力、创造性智力、实践性智力。我们真正应该培养出的，是具有分析问题的能力，具备创造性思维，并且能够将思想顺利转化于实践的高素质综合性人才。 而中国之前几十年的教育与考试方法，过于注重培养和考查记忆力，而相对忽略了对学生分析、创造与实践能力的培养。进入二十一世纪以来，特别是近年来，党和国家领导人高度重视对学生的素质教育与德育教育，相关教育领导部门也大力提倡转变原有应试教育的思路，转向培养高能力、高素质、综合性人才的素质教育。 而无论是记忆力，还是分析、创造、实践的能力，其根源都在于大脑的运动。脑训练充分做到了这一点，一方面开发大脑的潜能，使大脑运动得更快，脑神经更发达，提升学生的智力水平，另一方面增强了大脑的自控力与平衡力，使大脑的工作更有效率，从而达到了记忆力、分析力、创造力与实践能力的全面提升。这样，无论是对知识的学习、技巧的掌握，还是对能力的提升、情绪的控制、性格的培养都将产生事半功倍的效果，是智育教育与素质教育真正 2、脑训练可以全面提升学生的八大方面能力 通过多年的研究与实践，脑训练已被证实可以有效提升学生八个方面的能力： ——提升注意力：提高注意力、观察力，社会性，适应性，表达能力、免疫能力，可以在很大程序上改善ADHD、ADD、抽动症（TIC），对学习障碍、自闭症等也有较明显的效果。
生物刺激反馈仪技术参数 1、*主机：原装进口，包括主机（含嵌入式软件）、上位机软件、电源适配器、 USB数据传输线、阴道电极、直肠电极、贴片电极等。 2、*产品适用范围：对患者的体表肌电信号进行采集、分析和反馈训练，可对 患者的肌肉施加电刺激来帮助恢复患者的肌肉功能障碍。同时必须有阴道电极的独立注册证，要求是生物反馈类仪器。 3、硬件要求 3.1专用的信号采集及刺激器，既可采集盆底表面肌电（SEMG），也可同时电刺激 （Stim），还可进行肌电触发电刺激（EMG Trigger Stim）； 3.2具有动态存储功能，表面肌电采集及刺激器支持内置CF卡，支持数据的动态存储； 3.3刺激器内置嵌入式软件，采用触摸屏操作方便快捷，并可直接在刺激器中编辑治疗 方案； 3.4电极接触不良时有自动断电的保护功能； *3.5该系统具有肌电触发—神经肌肉刺激模式（EMG Trigger Stim），来帮助患者提高主动运动的表现，在盆底肌肉障碍中帮助患者进行主动和被动相结合的治疗，重建中枢对盆底肌肉的控制 3.6单机也可进行生物反馈训练，对人体的而不同部位的肌肉预置了标准的监测参数和 工作流程，用户可以根据需要在列表中选择监测和电刺激部位，并且可以修改训练方案。 3、硬件参数要求 4.1 内置放大器带宽：30-450 Hz 4.2 表面肌电灵敏度：0.2uV 4.3 输出电流：0-100 mA 4.4 刺激频率：≤100Hz 2-100Hz 可调整 4.5 刺激波宽：≤400μs 50-400μs 可调整
4.6 具有产妇专用放松训练的SEMG电极，SEMG头带实时采集肌肉紧张及 放松度，进行放松训练，采集灵敏度小于0.2uV。 4.7 刺激上升和下降时间：0-10s 4.8 波形为平衡生理波，相同的刺激电流强度疼痛感更小。 5、软件配置 5.1 专用嵌入式的软件系统，具有开放式训练模式，标准化训练模式，数据库管理模式， 单机可以直接进行数据采集，电刺激治疗，生物反馈训练； *5.2 具有专用的盆底表面肌电采集，分析，评估功能，具有国际通用标准的Glazer 评 估软件（运营在BioNeuro Infiniti平台上），具有欧洲生物反馈协会（BFE）认可的数据库 和授权书； *5.3 具有系统开发工具，可自定义动画、可自行更换音乐，可以根据用户的需求自行定 义新的治疗和评估方案，该开发工具包括三个，数据通道编辑软件Channel Editor ，界 面编辑软件系统Screen Editor，训练和评估方案编辑系统Scrit Editor； 5.4具备多媒体肌电生物反馈训练，可进行音乐反馈和动画反馈，包括肌肉放松训练， 肌力增强训练，肌肉协调性训练，肌肉精准性训练、肌肉耐力训练； 5.5显示表面肌电原始波形，RMS值，并且对原始波形进行二维和三维频谱图分析； 5.6统计表面肌电图的最大值，最小值，标准差，平均值等，进行肌肉的功能状态的评估，记录原始数据。
技术规格及要求 第一节说明 1.总体要求 1.1交货期及交货地点 *1.1.1交货期：合同生效后30个日历日完成整个项目的交货、安装及调试。 1.1.2交货地点：采购人指定地点。 2.其他说明： 2.1本技术规格及要求提供的是最低限度的技术要求，并未对一切技术细节做出规定，也未充分引述有关标准和规范的条文，投标人应当保证提供符合本技术规格及要求和有关标准的优质产品。
第二节技术规格及要求 一、采购用途：自用 二、采购需求: （一）生物刺激反馈仪（评估+治疗） 一、技术参数及软件要求： （一）硬件参数： #1.通道≥4个，包括EMG/STIM/EMG-STIM通道，各通道相互独立。 #2.AD采样率：≥8100Hz。 3.采样位数：≥16位。 4.通频带：25Hz～480Hz(-3dB)。 5.最高分辨率：≤0.2μV(r.m.s)。 6.刺激电流强度可调范围：0～100mA。 #7.电刺激脉冲宽度可调范围：20～800μs。 8.电刺激脉冲频率：2～220Hz。 9.内置云模块，与其他筛查评估设备以及治疗设备无线共享诊疗数据。 10.一键式开、关机，开机后直接进入软件操作界面。 （二）软件参数： 1.内置筛查及评估双模式。 1.1.筛查模式用于短时间内筛查出盆底肌异常者，快速筛查耗时≤1分钟，标准筛查耗时≤2分半钟。筛查指标包括：前静息平均值、前静息变异性、快速收缩上升时间、快速收缩最大值、快速收缩下降时间、持续收缩平均值、持续收缩变异性、后静息平均值、后静息变异性。 #1.2.盆底表面肌电评估（Glazer评估），用于标准化全面的盆底肌评估，耗时≤6分钟。评估指标包括：前静息平均值，前静息变异性，快速收缩上升时间，快速收缩最大值，快速收缩下降时间，持续收缩平均值，持续收缩变异性，耐久收缩平均值、耐久收缩变异性、耐久收缩后前10秒比值、后静息平均值，后静息变异性。 2.评估报告包括评估指标数值、肌电图、报告简要解读说明和治疗建议。
膜生物反应器 科技名词定义 膜生物反应器 membrane bioreactor;MBR 定义1： 膜技术与生物技术结合的使系统出水水质和容积负荷都得到大幅提高的一种污水处理装置。 所属学科： 海洋科技（一级学科）；海洋技术（二级学科）；海水资源开发技术（三级学科）定义2： 一种含有固定酶或细胞、可用来促进特定生物化学反应的反应器。是工业生化在生产工艺上采用的一种膜技术。 简介 膜生物反应器 膜-生物反应器（Membrane Bio-Reactor,MBR）为膜分离技术与生物处理技术有机结合之新型态废水处理系统。是一种由膜分离单元与生物处理单元相结台的新型水处理技术，以膜组件取代二沉池在生物反应器中保持高活性污泥浓度减少污水处理设施占地，并通过保持低污泥负荷减少污泥量。主要利用沉浸于好氧生物池内之膜分离设备截留槽内的活性污泥与大分子固体物。因此系统内活性污泥（MLSS）浓度可提升至10,000mg/L，污泥龄(SRT)可延长30天以上，于如此高浓度系统可降低生物反应池体积，而难降解的物质在处理池中亦可不断反应而降解。故在膜制造技术不断提升支援下，MBR处理技术将更加成熟并吸引着全世界环境保护工业的目光，并成为21世纪污水处理与水资源回收再利用唯一选择。 用途
污水处理:中国是一个缺水国家,污水处理及回用是开发利用水资源的有效措施。污水回用是将城市污水通过膜生物反应器等设备的处理之后,将其用于绿化、冲洗、补充观赏水体等非饮用目的,而将清洁水用于饮用等高水质要求的用途。城市污水就近可得,免去了长距离输水:其在被处理之后污染物被大幅度去除,这样不仅节约了水资源,也减少了环境污染。污水回用已经在世界上许多缺水的地区广泛采用,被认为具有显著的社会、环境和经济效益。 迸出水水质比较: 设计进水水质:BOD5<30Omg/l CODcr<50Omg/l SS<30Omg/l T--N<4-5mg/l 出水水质:BOD5<5mg/l NH4+-N<1.Omg/l CODcr〈2Omg/l 浊度<1NTU 膜生物反应器 SS=Omg/l 细菌总数<20个/ml T-N<0.5mg/l 大肠杆菌数未检出 膜的种类繁多,按分离机理进行分类,有反应膜、离子交换膜、渗透膜等;按膜的性质分类,有天然膜(生物膜)和合成膜(有机膜和无机膜) ;按膜的结构型式分类,有平板型、管型、螺旋型及中空纤维型等。 工艺 膜生物反应器(MBR)是杨造燕教授及其领导的科研小组历经10年时间研究开发出来的新型污水生物处理装置,该技术被称为"21世纪的水处理技术",该项目曾被列为国家八?五、九?五重点科技攻关项目并被国家列为"中国21世纪议程实施能力及可持续发展实用新技术",此项技术在国内处于领先水平,部分指标达到国际领先水平。 MBR是膜分离技术与生物处理法的高效结合,其起源是用膜分离技术取代活性污泥法中的二沉池,进行固液分离。这种工艺不仅有效地达到了泥水分离的目的,而且具有污水三级处理传统工艺不可比拟的优点: 1、高效地进行固液分离,其分离效果远好于传统的沉淀池,出水水质良好,出水悬浮物和浊度接近于零,可直接回用,实现了污水资源化。
生物刺激反馈仪参数要求 生物刺激反馈仪一台，设备需为原装进口，并须满足下列参数要求。 1、EMG灵敏度：0.1uV。 2、输出电源：0-100Ma(1KΩ)。 3、脉冲宽度：50-400uS。 4、频率：2-100HZ。 5、上升和下降时间：0-10S。 6、波形：Balanced Biophasic双相平衡波。 7、需为触摸控制屏。 8、需具有两种储存方式（内部储存器、CF卡），两种传输方式（CF卡，CF卡至PC）。 9、需具有内部嵌入式软件OpenSession和Script Session两种工作模式，可根据不同的病情设计有效治疗方式。 10、需具有内置100种以上治疗方式，可自定义治疗方案并可储存。 11、需具有方案化神经肌肉电刺激：按人体肌肉的类型不同分为六大部分上肢、头颈、腹部、背部、下肢、盆底，设定不同的参数，包括频率、波宽、电流通断比时间。 12、需具有方案化的神经肌肉肌电触发电刺激：按人体肌肉的类型不同分为六大部分上肢、头颈、腹部、背部、下肢、盆底，设定不同的参数，包括频率、波宽、电流通断比时间。 13、需具有肌电触发电刺激的模式要求（3种模式），可进行阈值上刺激也可进行阈值下刺激的参数设置。 （1）手动模式：可自主设定阈值，在可随时在治疗中进行阈值的调整。
（2）自动模式：阈值在机器检测到表面肌电信号后，智能调整阈值，以适应患者的训练要求。 （3）学习模式：主动表面肌电反馈训练结合点刺激，二者循环交替。 14、需可搭配相应的盆底电极进行盆底神经肌肉电刺激和肌电触发电刺激的治疗盆底神经肌肉功能障碍。 15、需具有纯主动的肌电反馈训练：通过声音、肌电信号，进行主动的肌力反馈训练，通过声音、视觉信号提示患者是否放松或者肌力增强是否到位。16、需具有肌肉的静脉、等张、等长的表面肌电的评估，并提供相应的统计数值。 17、需可储存生物反馈时的训练数据，并可进行训练数据的动态回放，可进行表面肌电信号的标记。 18、整套设备自验收合格之日起质保期不低于两年。 许昌市中心医院
生物反馈电刺激用于脊髓损伤病人自主排尿训练的研究 发表时间：2016-06-24T10:25:44.173Z 来源：《医药前沿》2016年6月第18期作者：陈燕颜1 刘德清2 杨幸华1 肖喜辉1 [导读] 脊髓损伤患者排尿功能障碍是临床上研究的重点问题，由于临床治疗的局限性。 陈燕颜1 刘德清2 杨幸华1 肖喜辉1 （1广东省工伤康复医院脊髓损伤康复科广东广州 510440） （2广东省工伤康复医院创伤骨折康复科广东广州 510440） 【摘要】目的：研究脊髓损伤患者行生物反馈电刺激治疗对患者自主排尿训练的效果。方法：临床纳入96例我院2013年4月至2015年4月期间收治的脊髓损伤患者，根据随机数字表法将所有患者分为两组各48例。其中48例患者采用盆底肌肉锻炼法进行治疗作为对照组，另48例患者在上述基础上给予生物反馈电刺激治疗作为观察组。结果：对照组、观察组总有效率分别为77.08%、93.75%，观察组明显较高，P＜0.05。治疗前两组患者尿流动力学无差异，P＞0.05；治疗后观察组患者最大膀胱测压容积、充盈末逼尿肌压力以及最大尿流速均 优于对照组，P＜0.05。结论：生物反馈电刺激可有效提高脊髓损伤患者自主排尿功能，减少尿失禁的发生，值得临床应用及推广。【关键词】脊髓损伤；自主排尿；训练 【中图分类号】R681.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）18-0056-02 The study of biofeedback electrical stimulation in patients with spinal cord injury Chen Yanyan,Yang Xinghua, Xiao Xihui. Physiatry Department of Spinal Injury, Work Injury Rehabilitation Hospital of Guangdong Province, Guangdong Province, Guangzhou 510440,China; Liu Deqing. Physiatry Department of Trauma Fracture, Work Injury Rehabilitation Hospital of Guangdong Province, Guangdong Province, Guangzhou 510440,China 【Abstract】Objective To study the effect of biofeedback electrical stimulation treatment on patients with spinal cord injury.Method 96 cases of patients with spinal cord injury treated in our hospital from April 2013 to April 2015 according to the random number table method, all patients were divided into two groups, each of 48 cases. 48 patients were treated by pelvic floor muscle exercise as the control group, and the other 48 patients were treated with biofeedback electrical stimulation on the basis of the above.Result The total effective rate of the control group and observation group were 77.08% and 93.75% respectively, and the observation group was significantly higher, P < 0.05. There was no difference in the urine flow dynamics between the two groups before treatment, P > 0.05; After treatment, the observation group patients at the end of the maximum cystometric capacity and filling detrusor pressure and maximum urinary flow rate were better than the control group, P < 0.05.Conclusion Biofeedback electrical stimulation can effectively improve the autonomic micturition function of patients with spinal cord injury, and reduce the incidence of urinary incontinence, which is worthy of clinical application and promotion. 【Key words】Spinal injury; Automatic micturition; Train 脊髓损伤患者排尿功能障碍是临床上研究的重点问题，由于临床治疗的局限性，神经治疗等方式在患者中的应用效果并不理想，导致多数患者必须采用导尿管引流，不仅给患者日常生活带来不便，也增加了相关并发症的发生率，如何解决脊髓损伤患者自主排尿问题成为人们关注的重点。目前研究发现[1]，生物反馈电刺激调节可有效改善机体器官活动状态，使患者更好的控制自身情况。因此本文进一步研究生物反馈电刺激调节对脊髓损伤患者自主排尿功能的影响，现报道如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 本次选取96例我院2013年4月至2015年4月期间收治的脊髓损伤患者作为研究对象，所有患者经检查和诊断均符合脊髓损伤诊断标准[2]。纳入标准：①自愿参加本次研究的患者；②能配合主动康复训练的患者；③训练前无反射性膀胱及自律性膀胱的患者。排除标准：①合并心、脑、肾等功能不全的患者；②有泌尿系统感染的患者等。对照组中男性患者33例，女性患者15例，年龄19～58岁，平均年龄（36.2±5.4）岁。脊髓损伤类型：颈、胸、腰脊髓损伤分别为21例、10例、14例，脊髓圆锥、马尾损伤分别为2例、1例。观察组中男性患者35例，女性患者13例，年龄21～59岁，平均年龄（35.9±5.2）岁。脊髓损伤类型：颈、胸、腰脊髓损伤分别为20例、12例、14例，脊髓圆锥、马尾损伤分别为1例、1例。两组患者上述资料（性别、年龄、脊髓损伤类型等）无差异，P＞0.05。 1.2 方法 对照组患者给予盆底肌肉训练法，每天指导患者自主收缩盆底会阴部肌肉，用力收缩10s放松5s，每次50组，每日3次。①屈膝仰卧，大腿放松，做肛门收缩运动，收紧时间不少于3s，放松不少于5s，一收一放为1组，每次50组。②快速收放肛门为1组，每组2s，10组/次，3次/d。共治疗2个月。尽可能让患者进行半坐卧位或作为训练等。观察组患者在上述基础上联合生物反馈电刺激治疗，采用由南京伟思公司生产的YZB/CAN 1217-2010生物刺激反馈仪进行治疗，洗必泰浸泡电极30min进行消毒。患者取侧卧位，采用内窥式电极作为通道一，男性、女性患者分别采用肛门电极和阴道电极。普通电状电极为通道二，贴附于腰椎两侧平髂棘部位。采用自动编程盆底电刺激模式，一个循环60次，时间20min。让患者观看屏幕，嘱咐患者根据屏幕反馈信号进行主动收缩、舒张训练，1次/d，治疗2个月。 1.3 观察指标 观察两组患者治疗效果以及尿流动力学情况。根据治疗标准[3]，显效：治愈：治疗后尿失禁症状消失，腹压增加及日常活动无尿液漏出；显效：治疗后尿失禁症状明显改善，腹压增加及日常活动下漏尿次数少于治疗前的一半；有效：治疗后尿失禁症状有所改善，腹压增加及日常活动下漏尿次数多于治疗前的一半；无效：治疗后尿失禁症状及漏尿次数无改善。尿流动力学观察最大膀胱测压容积、充盈末逼尿肌压力以及最大尿流速。 1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0统计学软件包进行统计数据的处理以及分析，计量资料用x-±s表示，采用t检验，计数资料以百分比表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。 2.结果 2.1 两组患者治疗效果比较 对照组、观察组总有效率分别为77.08%、93.75%，观察组明显较高，P＜0.05。见表1。
生物反馈疗法 生物反馈疗法是利用现代生理科学仪器，通过人体内生理或病理信息的自身反馈，使患者经过特殊训练后，进行有意识的“意念”控制和心理训练，从而消除病理过程、恢复身心健康的新型心理治疗方法。由于此疗法训练目的明确、直观有效、指标精确，因而求治者无任何痛苦和副作用，深受广大患者欢迎。 概述 运用生物反馈疗法，就是把求治者体内生理机能用现代电子仪器予以描记，并转换为声、光等反馈信号，因而使其根据反馈信号，学习调节自己体内不遂意的内脏机能及其他躯体机能、达到防治身心疾病的目的，据国内有关报道证实：生物反馈疗法对多种与社会心理应激有关的身心疾病都有较好的疗效。以高血压为例，某院前用此法治疗264例，治疗有效率达80%以上。运用于生物反馈治疗的设备有：肌电反馈仪、皮肤湿度反馈仪、脑电反馈仪、脑电反馈仪及脉搏反馈仪等。仪器的操作者需经过专业训练，以保证结果的可靠性和科学性。在实施生物反馈疗法前，必须向病人解释清楚治疗的目的和治疗方法，以消除对电子仪器的顾虑，即使求治者明白，无电流通过的躯体，也无任何其他危险。并说明此疗法主要依靠自我训练来控制体内机能，且主要靠按时练习，仪器监测与反馈只是初步帮助自我训练的手段，而不是治疗的全过程。要每天练习并持之以恒，才会有良好效果，全部解释可用录音带播放，再作个别答疑和补充。 生物反馈是从20世纪20年代通过监测到的肌电活动，帮助病人进行放松训练开始的，由肌电反馈到现在，已发展出皮肤温度反馈、脑电反馈、心电反馈、血压反馈等多种生物反馈技术。生物反馈疗法就是将肌电活动、脑电、心率、血压等生物学信息进行处理，然后通过视觉和听觉等人们可以认识的方式显示给人们，训练人们，使人们能够有意识地控制自己的心 具体方法是让病人在安静的诊疗室里，躺在生物反馈仪旁，接上仪器的电极就可以进行治疗了。首先，进行肌感练习，以达到消除紧张的目的。病人一边注意听仪器发出的声调变化，一边注意训练部位的肌肉系统，逐步让病人建立起肌感。同时在进行训练时，要采取被动注意的态度，病人利用反馈仪会很快掌握这种技巧，迅速打破长期紧张的疾病模式而进入放松状态。其次，为了逐步扩大放松的成果，将仪器灵敏度减低，使病人适应性提高。这就是所谓的塑造技术，此技术能将放松水平提高到一个新的水平上。最后，病人学会在没有反馈仪的帮助下，也能运用放松技术来得心应手地处理所遇到的各种事件。这就是将技能转换成完全适应日常生活的技术，可以使病人完全自觉地运用放松技术，这就达到了治疗的目的了。生物反馈疗法主要适用于紧张性头痛、血管性头痛、支气管哮喘、消化性溃疡、高血压、腰背痛、儿童多动症、类风湿性关节炎、痛经、内分泌失调、生殖系统发育不良、精卵质量低下等。
产品名称：生物刺激反馈仪（评估版） 一、设备技术参数及配置要求 1、主机：原装进口，包括主机（含嵌入式软件）、上位机软件、电源适配器、USB数 据传输线、阴道电极、直肠电极、贴片电极等治疗软件全中文软件操作系统 2、产品适用范围：对患者的体表肌电信号进行采集、分析和反馈训练，可对患者的肌 肉施加电刺激来帮助恢复患者的肌肉功能障碍。同时必须有阴道电极的独立注册证，要求是生物反馈类仪器。 3、既可采集两通道的盆底表面肌电（SEMG），也可同时两通道电刺激（Stim），还可 进行两通道的肌电触发电刺激（EMG Trigger Stim） 4、具有动态存储功能，内置CF卡，支持数据的动态存储, 并能通过电脑软件进行数 据分析 5、主机内置嵌入式软件，采用触摸屏操作方便快捷，并可直接在刺激器中编辑治疗方 案 6、接触不良时有自动断电的保护功能。 7、内置放大器带宽：30-450 Hz 8、表面肌电灵敏度：0.2uV 10.输出电流：0-100 mA 11.刺激频率：≤100Hz 2-100Hz 可调整 12.刺激波宽：≤400μs 50-400μs 可调整 13.刺激波形：平衡生理波，相同的刺激电流强度疼痛感更小 14.具有专用的盆底表面肌电采集、分析、评估功能，具有国际通用标准的Glazer评估软件，具有欧洲生物反馈协会（BFE）认可的数据库和授权书。 15.具有标准的盆底表面肌电评估软件功能，表面肌电图的分析应包括原始表面肌电墨 迹图（Raw EMG）、平均曲线图分析、RMS分析、统计学分析（最大值、最小值、 平均值、标准差、变异性等分析）等多种分析模式 16.具有肌电触发—神经肌肉刺激模式（EMG Trigger Stim），来帮助患者提高主动运动 的表现，在盆底肌肉障碍中帮助患者进行主动和被动相结合的治疗，重建中枢对盆 底肌肉的控制。 17.至少具有针对盆底肌肉功能的KEGEL训练模板36个，包括一般模板15个和高阶模板 5个，控尿反射模板16个。 17.生物反馈训练分为固定刻度和灵活刻度两类。具有信号自动校准功能，防止基线过
光子嫩肤 什么是光子嫩肤 光子嫩肤实际上就是利用脉冲强光（intensive pulse light, IPL）对皮肤进行一种带有美容性质的治疗，其功能是消除/减淡皮肤各种色素斑、增强皮肤弹性，消除细小皱纹、改善面部毛细血管扩张、改善面部毛孔粗大和皮肤粗糙，也能改善发黄的皮肤色彩等。 光子嫩肤的治疗原理 平滑修复光作用于皮肤，被皮肤吸收后，组织发生改变，排列致密，促进胶原蛋白合成，加快皮肤循环系统，增强皮肤的免疫力和抵抗力 A、生物刺激作用:强脉冲光作用于皮肤后产生的光化学作用，使真皮层的胶原纤维和弹力纤维内部产生分子结构的化学变化，恢复原有弹性。另外，其所产生的光热作用，可增强血管功能，使循环改善，从而达到消除皱纹，缩小毛孔的治疗效果。 B、光热解原理:由于病变组织内的色素团含量远远多于正常皮肤组织，其在吸收光之后产生的升温也高于皮肤。利用它们的温差使病变血管封闭，色素破裂分解，而不损伤正常组织。 光子嫩肤仪适应症 无痛绝毛术、抗衰老修复工程、专业祛痘、淡化色素沉着、改善毛细血管扩张。 治疗前后对比 光子嫩肤的安全性 光子嫩肤是一种先进的高科技美容项目，采用一特定的宽光谱彩光，直接照射于皮肤表面，它可以穿透至皮肤深层，选择性作用于皮下色素或血管，分解色斑，闭合异常的红血丝，解除您肌肤上的各种瑕疵，同时光子还能刺激皮下胶原蛋白增生，让您的肌肤变得清爽、年轻、健康有光泽。而且光子嫩肤技术是一种非剥脱的物理疗法，具有高度的方向性，很高的密度和连贯性，光子嫩肤可被聚集到很小的治疗部位，因而其作用
部位准确，不会对周围组织和皮肤附属器官造成损伤;同时，光子嫩肤非介入的治疗方法适应不同的皮肤状态，安全有效，不会对皮肤造成损坏。所以，光子嫩肤是一种比较安全的治疗方法。 光子嫩肤的优势 1、光子嫩肤在治疗的时候，求美者不会感受到任何的疼痛感，完全是微创的治疗方法，而且在术后不会出现任何的副作用，是很安全的。 2、光子嫩肤在时间上有绝对的优势，不仅在治疗过程中，还是治疗之后所需要的时间都比较的少，一次治疗半个小时左右，术后不需要过多时间的护理，不会对生活造成任何的影响。 3、光子嫩肤的治疗效果是持久的，对于肌肤的小问题在很快解决后，一般的也就不会再复发了。 光子嫩肤涉及项目 小针拉面皮手术 最新的美容手术崇尚无疤痕，创伤小及康复时间迅速的手术方法，令病人可以于同一天或一至两天内恢复工作，所以特别适合于较年轻，爱美及活跃的一族。 红血丝 去除红血丝就是利用光子嫩肤的选择性光热反应，这种光含有被血红蛋白强烈吸收的波长，当血管中的血红蛋白吸收以后，会将其转化为热能给整个血管加热，然后被人体吸收，达到治疗红血丝的目的。而且光子嫩肤治疗能刺激皮肤产生更多的胶原蛋白，使其与弹力纤维重新排列，让皮肤更有弹性。 红色痘印 红色痘印只有找对了治疗方法，才能又快又好的去除，还我们一个紧致光滑的肌肤。光子嫩肤治疗仪中含有被血红蛋白强烈吸收的波长，对痘印进行治疗，在不损伤正常肌肤的前提下，使血管凝固，色素分解，让皮下的胶原蛋白和强力纤维重新排列，从而让痘印消失无踪。
电刺激生物反馈盆底治疗仪可行性报告 关于电刺激生物反馈盆底治疗仪可行性报告 一.电刺激生物反馈盆底治疗仪适用的范围 1. 治疗慢性前列腺炎 医学专家指出，目前前列腺病病种多、发病率高、发病年限长，且有逐年增多的趋势。前列腺疾病在男人的一生中随时都可能发生，一般年轻人前列腺炎较多见，而老年人则良性增生为多。据统计，20岁以上男性，31％~40％患有慢性前列腺炎；而60岁以上的老年人中约有50％患有前列腺增生，70岁以上发病率高达88％。前列腺器官虽小，但它带给男性的问题、麻烦却不少，前列腺是男性体内的“三岔口”，它是排尿的必经之路，又兼射精通道，而且还分泌前列腺液营养精子。一旦前列腺发生病变，其伴随出现的性功能障碍及生殖障碍却严重地影响了患者的生活及身心健康，甚至造成夫妇感情不和，家庭破裂。因此，前列腺疾病常被人们称之为“男性健康的杀手”。前列腺炎是男性常见病，绝大多数发生在青壮年，临床上前列腺炎可分为急性和慢性两种。急性前列腺炎临床上较少见，慢性前列腺炎在成年人群中发病较高，约占泌尿外科门诊病人的1/5左右，因慢性前列腺炎多伴有精囊炎，故又称为前列腺精囊炎。 （一）病因 慢性前列腺炎其病因较为复杂，少数由急性前列腺炎未能彻底治愈迁延而来，绝大多数病人则未曾经历过明确的急性阶段。 引起慢性前列腺炎的致病微生物主要是细菌，其次有病毒、支原体、衣原体以及其它致敏原等。性欲过旺、前列腺充血、下尿路梗阻、会阴部压迫、损伤，邻近器官炎症病变波及前列腺以及全身抵抗力下降等等，都可能是造成慢性前列腺炎的原因之一，甚至病人的精神状态也是影响症状轻重的一个因素。总之，慢性前列腺炎病因复杂，造成经久不愈的原因，很可能不同时期存在着不同的病因，或在同一时期存在一个以上的致病因素。 （二）临床表现 不同病人症状表现相差很大，实验室检查结果与病人自觉症状可不完全一致，一些病人症状显著，但前列腺触诊、前列腺液检查可无特殊发现或改变轻微，而另一些病人前列腺液有大量脓细胞，前列腺质地变硬，却可全无症状。因此，症状的轻重可能还和病人的精神因素有一定关系。常见的症状有： 1．疼痛 后尿道可有烧灼感、蚁行感，会阴部、肛门部疼痛可放射至腰骶部、腹股沟、耻骨上区、阴茎、睾丸等，偶可向腹部放射。 2．泌尿系症状：炎症累及尿道，病人可有轻度尿频、尿急、尿痛，个别病人尚可出现终未血尿，清晨排尿之前或大便时尿道口可有粘液或脓性分泌物排出。 3，性功能障碍：可有性欲减退、阳萎、早泄、射精痛、遗精次数增多等，个别病人有血精或因输精管道炎症而使精子活动力减退，导致不育。 4，神经衰弱症状：由于病人对本病缺乏正确理解或久治不愈，可有心情忧郁、乏力、失眠等。 5．继发症状：由于细菌毒素引起的变态反应，可出现结膜炎、虹膜炎、关节炎、神经炎等。 典型举例 湖北省荆州市中心医院泌尿外科采用Laborie公司的Urostym生物反馈治疗仪治疗慢性前列腺炎，治疗前后行尿动力检查及前列腺炎症状评分（NIH-CPSI）,观察并评价疗效。（周家杰张先觉杨光华熊泽安）