ELISA的标准曲线一般使用专门的曲线拟合工具，如：Curve Exert1.3 下面以Curve Exert1.3为例说明怎么样制作：
1 启动“Curve Expert1.3”
2 X轴输入标准品的OD值，Y轴输入所对应的浓度值，如图：
2 X轴输入标准品的OD值，Y轴输入所对应的浓度值，如图：
3．单击[运行] 按钮，出现如下对话框
4．单击[ok]按钮，出现如下两个对话框，关闭下面一个对话框
关闭下面一个对话框
5. 在对话框的右上角出现一些曲线的名称，从“1”开始依次点击曲线名称，在右下角会出现相应拟合的曲线，。
根据拟合的曲线选取ELISA拟合度最佳的曲线双击，出现如下对话框：注意：选择系数（即“r”值）最好的曲线方程来进行运算。在下面的对话框右上角有“r”值，当“r”值越接近1拟合度越好
7．按[Ctrl]键[L]键，出现如下对话框：
8．输入标准的OD值，单击[Calculate]按忸，即可得到待测蛋白的实际含量。（标本稀释了N倍，运算出的数值应在成以N）。
9. 如想得到ELISA拟合曲线的方程，可在步骤6的对话框空白处右击，选择”Information”
10. 得到如下对话框：点击“Copy”
在你需要的位置粘贴即可得到如下数据：
Rational Function: y=(a bx)/(1 cx dx^2)
Coefficient Data:
a =
b =
c =
d =
当抗原或抗体浓度过高时，对应的ELISA读数不会再显著升高，这时会达到一个平台期，同样在低浓度时也有一个平台期。只有在适当的浓度时才会出现类似直线的曲线，所以一般数据都要进行多参数拟和，才能得到能更准确反映实验结果的曲线，常用的有sigmoid、logistic曲线等，一半的软件如sigmaplot 或origin 都有这个功能
标准曲线绘制 calfstone 任何科学实践必须有科学理论的支撑。在这个意义上讲，经验有时候是一种误导。在寻求某个困扰自己的问题答案的时候，我提倡用理论支撑的观点来表达自己和说服自己。任何的盲从和权威都是不可取的。标准曲线的做法问题也是如此。 1、标准曲线的本质。标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性。如果有不需要标准曲线的方法，比如绝对校正，我想大家都会高兴。 2、标准曲线的适用性。这是做标准曲线的重要前提，这个问题实际很简单，就是这样一个问题：我的样品的仪器响应能否用我们所建立的标准曲线来推导其理化属性？答案建立在仪器响应的特异性和标准系列和样品的匹配性上面。一方面我们总是力求仪器的响应对于标准和样品是一视同仁；同时我们也要求我的样本跟标准基体匹配。所以最好的标准是基体匹配标准，最好的标准曲线是工作曲线。这样，我们也很好理解为什么大多数分析要求标准曲线和样品同批测定（除非经过实验，标准曲线的变化不大），同样的道理也可以理解为什么我们在做大批量检测的时候要插入QC检验样本，以考察仪器的稳定性。即使在任何信息未知的情况下，我们还是要做我们的分析测试的（要不，我们都失业了），因为大家都是用同样的方法做，要错大家一起错；同时也因为我们相信伴随科学的进步，我们所测试的结果的准确性就越接近真理。 3、简单的标准曲线----单点校正。对于分析成本高的测试，单点校正是不得以的选择。现在应用最多的是色谱分析，很多国家标准或国际标准都采用单点校正，实际是建立在色谱分析的高选择性上面：我们的空白一般都很小，我们的线性一般都很好。在有这么多验前概率的支撑下，色谱分析中大量的单点校正不失为一个合理的选择。但单点校正要丢失很多的信息量，这个信息量就是不确定度。 4、标准曲线的点的分布。从不确定度理论推算样本的不确定度时，有二个重要的结论：一、标准曲线的重心点处，所查出来的样品不确定度最小。二、标准的点数越多，样品的不确定度越小。基于这两个结论的标准曲线的做法应该是：在样品浓度的附近尽量的多布标准点。点做多做少，点分布如何，影响的是标准曲线所查出来的样品的理化属性的不确定度。好的测量应该是不确定度小的测量，这在判断样品的结果是否超标或符合限值的时候至关重要。 bingfan56 国标方法的话一般是五个点（不包括零浓度）； 一般以检出限的5~10倍为第一个点，以后根据1倍（或接近一倍）递增，最高浓度是最低浓度的10~20倍为宜。当然，要根据仪器的灵敏度来调整。 一般方法要求线性大于0.99，其实〉0.99是判断是否为线性相关的一个标准，实际应用中线性〉0.999才是比较理想的。线性在0.99到0.999之间的监测结果只用接近最高浓度一半（中间浓度）的位置才比较准确，如果线性大于0.999的话，在整个线性范围内都会有一个比较满意的结果。 如果检测的线性不好，可以减少标准的覆盖范围，将标准的浓度调整到待测样品浓度附近，这样结果也是非常准确的。例如，样品的浓度约20ppb,但在0~50ppb范围建立标准曲线，但线性非常不理想，这时可以将标准范围调整到15~25ppb之间，作五个标准。 loacao 1.范围：如前面的朋友们所说不能跨度太大，因为标准曲线的高浓度延长线通常是曲线，那样定量会不准。最小点当然可以从LOQ开始。
用Excel绘制级配曲线图步骤 1、建立图表：在图表向导中选择XY散点图，点击下一步，点击数据区域中红色箭 头选择任意数据区域；点击下一步，选择标题，输入图表标题（筛分级配曲线图）、数值X轴（筛孔尺寸mm）、数值Y轴（通过率%）；选择网格线，选择数值X 轴，选择主要网格线，点击下一步，点击完成。 2、修改坐标轴：双击X轴数字，设置筛孔尺寸。选择刻度，将最小值设为0、最 大值设为级配类型最大粒径对应的泰勒曲线值（如AC-25，最大粒径为31.5mm，对应的泰勒曲线值为y=100.45lgdi=4.723）；选择字体，设置需要的字体大小，点击确定。双击Y轴数字，将最小值设为0、最大值设为100、主要刻度单位设为10、次要刻度单位设为0，选择字体，设置需要的字体大小，点击确定。 3、设置筛孔尺寸系列：在图表区点击鼠标右键，选择数据源，选择系列，选择添 加，选择X值输入筛孔尺寸对应的泰勒曲线值[如筛孔26.5mm(将孔径作为系列名称输入更方便)为4.370,4.370[）,选择Y值输入0,100。再选择添加输入其它筛孔尺寸。选择确定。双击系列，设置系列格式。选择图案，设置系列线格式，选择数据标志，点击确定。双击数据标志，将数字修改为对应的筛孔尺寸。
4、输入级配范围和级配中值线：在图表区点击鼠标右键，选择数据源，选择系列， 选择添加，选择X值输入筛孔尺寸对应的泰勒曲线值（4.723，4.370，3.762……）, 选择Y值输入级配上下限和中值。点击确定。 5、输入设计级配线：在图表区点击鼠标右键，选择数据源，选择系列，选择添加， 选择X值输入筛孔尺寸对应的泰勒曲线值（4.723，4.370，3.762……）,选择Y 值点击红色箭头选择任意设计级配区域。
标准曲线绘制 在分析化学实验中， 常见标准曲线法进行定量分析，一般情况下的标准工 作曲线是一条直线。 标准曲线的横坐标（X）表示能够精确测量的变量（如标准溶液的浓度）,称为 普通变量，纵坐标（Y）表示仪器的响应值（也称测量值，如吸光度、电极电位 等）, 称为随机变量。当X取值为X1, X2,……Xn时，仪器测得的丫值分别为丫1, 丫2,……Yn。将这些测量点Xi, Yi描绘在坐标系中,用直尺绘出一条表示X 与丫之间的直线线性关系，这就是常见的标准曲线法。用作绘制标准曲线的标准物质，它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量，标长准曲线不能任意延。用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太 大或太小，应能近似地反映测量的精度。 由于误差不能完全避免，实验点完全落在工作曲线的的情况是极少的，特别是在误差较大时，实验点比较分散，它们一般并不在同一条直线上，这样凭直觉很难判断怎样才能使所连接的直线对于所有实验点来说误差是最小的，当前较好的方法是对实验点（数据）进行回归分析。 研究随机现象中变量之间相关关系的数理统计方法称为回归分析，当自变 量只有一个或X与丫在坐标图上的变化轨迹近似一直线时，称为一元线性回归。 甦2.6.1 —元线性回归方程的求法 确定回归直线的原则是使它与所有测量数据的误差的平方和达到极小值 设回归直线方法为 9 (2 - 15)
式中a表示截距，b表示斜率 9 (2 - 15)
假设Xi和Yi （i=1,2,3, ……,n）是变量X和Y的一组测量数据。对于每一个Xi值,在直线（卩“+^ ）上都有一个确定的旳“从X】值。但哲值与X 轴上Xi处的实际测定值Yi是不相等的, 与Yi之差为： 筈厂& +返AY’F-碍（2—佝 上式表示与直线（）的偏离程度，即直线的误差程度。如果全部n个测定引起的总偏差用￡（节厂印'表示,则偏差平方和s为 (2 - 17) 在所有直线中，偏差平方和s最小的一条直线就是回归直线，即这条直线 的斜率b和截距a应使s值达到最小，这种要使所有数据的偏差平方和达到最小 的求回归直线法称为最小二乘法。 根据数学分析的极值原理,要使s达到最小,对式（2 —17）中的a、b分别 求偏微分后得到 (2 —18) (2 —19) 是所有变量Xi和Yi的平均值。由于计算离均差较麻烦，可将式（2 — 18）变换为 n是测量的次数，也就是坐标图中实验点的数目。 (2 —20)
荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制 1. 绝对定量定义 绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。 将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。 * Log(起始浓度)与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系 * 由样品CT值，就可以计算出样品中所含的模板量 2. 绝对定量标准品 标准品的一些标准 * 必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同 * 标准品必须是经过准确定量的（我们通常用的是ASP-3700紫外光/可见光微量分光光度计） * 标准品必须是标准化的（例如，同一化的细胞数） * 在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定CT值
标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA，也可以是比扩增片段长的纯化后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA，甚至cDNA，但前提是所有的作为标准品的核酸都必须保证稳定。 3. 标准品的制备 一般一条标准曲线取四到五个点，浓度范围要能覆盖样品的浓度区间，以保证定量的准确性。一般一个点重复三至五次，对于常期稳定使用的标准品可以适当减少重复的次数。倍比梯度稀释方法： 1v原液（标准品i）+9v稀释缓冲液，得标准品ii 1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii 1v标准品iii+9v稀释缓冲液，得标准品iv 1v标准品iv+9v稀释缓冲液，得标准品v 依次倍比稀释 拷贝数的计算：详见核酸拷贝数的计算 4. 实例 标准品的制作：将标准品依次进行10倍稀释，ASP-3700 测得其拷贝数1.55×108copy /ul 标准曲线的绘制（1cycle=1min）
应用EXCEL绘制ELISA标准曲线及计算样本浓度 整体思路：在ELISA实验结束后，我们得到的是经酶标仪读出的标准品以及样本的OD值。其中，标准品的浓度已知，我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度，以OD值为横坐标，浓度为纵坐标，做一条标准曲线，并用公式表示出来。这样，我们把样本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即样本浓度。 下面我们就一步步来实现这个目标: 1. 首先，将数据整理好输入Excel，分别为经酶标仪读出标准品的OD值及其对应的浓度值。 2. 拖动鼠标选取完成的数据区，并点击图表向导，在图表类型中选“XY散点图”，并选择子 图表类型的“散点图”（第一个没有连线的）。如下图所示。
3. 点击“下一步”，出现如下图界面。如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如 果是纵向列表就改选“列”。
在做ELISA标准曲线，并通过此曲线求样本浓度时，因样本OD值是已知的，因此，我们需要将OD值设为X。根据上图我们可以看到，横坐标X值为OD值，纵坐标Y为标准品浓度，这正是我们想要的。 4.有时需要我们手动选择X值，这时可以点击“系列”来更改，如下图。
如果要对横坐标和纵坐标进行掉换，我们可以就点击X值和Y值文本框右边的小图标，结果如下图：
出现上图后，拖动鼠标选取正确的数据区域以调整X或Y。 5.调好之后，然后点击“下一步”出现图表选项界面，如下图。 6.点击“下一步”，在弹出的窗口再点击“完成”现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。
7.到了这一步，散点图便完成了。我们可能会问，曲线在哪里啊？ 其实很简单，先点击图上的标准值点（记住一定要点选上)，然后单击右键，点击“添加趋势线”。如下图:
折线图 折线图是用来表示某种现象在时间序列上的动态，或者某种现象随另一种现象而变化的情况，可以大致反映两者之间的数学函数关系。 由于折线图表现的是数据的动态或变化趋势，因此先必须明确表达资料的目的，尽可能的做到把主要概念表达出来。 如果要了解种群的消长规律时，一般采用单位时间的消长曲线，以时间单位为x轴，种群数量为y轴。 如果要了解种群的增长规律时，就必须把逐个单位时间的数据依次累加起来作为y轴的数据，这样的折线图称为增长曲线图。 例如诱蛾灯下每天的发蛾量可以做成消长曲线图。消长曲线可以清楚的看出每一个世代的发生型，如前峰型、中峰型、双峰型等，但不能够确切的了解任一单位时间的发蛾量在整个种群中的进度。只有把每个单位时间的发蛾量依次累加起来，才能表达出发蛾的增长规律。
实例 用下表数据，作三化螟发蛾消长曲线。 调查日期 6/246/266/286/307/27/47/67/87/10（月/日） 发蛾量(头)862066820690701209318459780782505625
1 输入数据 启动Microsoft Excel 2003，在工作表里按上表的形式输入数据。然后将数据整理为如下图所示。 操作步骤： 定义为“文本”数据类型 定义为“数值”数据类型 定义为“数值”数据类型
2 使用图表向导 在主菜“插入”中选中“图表”命令，或者直接点击工具栏里的快捷按钮启动图表向导
⑴选择图表类型 选中折线图选中这个子类 点击“下一步”
⑵设置图表数据源 选中系列产生在行 在数据区域栏输入表达式： =Sheet1!$A$3:$J$5 或者用鼠标在“Sheet1”工作表中框选 A3:J5 点击“系列”卡片按钮，进入数据源编 辑
Excel是Microsoft offices系统的重要组成，它是界于WORD字处理软件与ACCESS数据库软件之间的电子表格工具，功能十分强大，特别适合于日常工作使用。使用得好，完全比目前所有的检验科办公系统优秀。 现就先介绍一下如何使用Excel绘制标准曲线。 首先，将数据整理好输入Excel，并选取完成的数据区，并点击图表向导，如下图所示。 点击图表向导后会运行图表向导如下图，先在图表类型中选“XY散点图”，并选了图表类型的“散点图”（第一个没有连线的）。 点击“下一步”，出现如下图界面。如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”。 如果发现图不理想，就要仔细察看是否数据区选择有问题，如果有误，可以点击“系列”来更改，如下图。 如果是X值错了就点击它文本框右边的小图标，结果如下图： 出现上图后，如图在表上选取正确的数据区域。然后点击“下一步”出现图表选项界面，如下图，上应调整选项，以满足自己想要的效果。 点击“下一步”，现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。 完成了散点图，现在需要根据数据进行回归分析，计算回归方程，绘制出标准曲线。其实这很简单，先点击图上的标准值点，然后按右键，点击“添加趋势线”。如下图。 由于本例是线性关系，在类型中选“线性”如下图 点击“确定”，标准曲线就回归并画好了。 标准曲线是画好了，可是我们怎么知道回归后的方程是什么样呢？这了简单，点击趋势线（也就是我们说的标准曲线）然后按右键，选趋势线格式，如下图： 在显示公式和显示R平方值（直线相关系数）前点一下，勾上。再点确定。好了，现在公式和相关系数都出来了。如图：呵R的平方达0.996，线性相当好。 可是有时候有的项目是成指数增加的，散点图如下图， 从上图看并不值关，除了最大的一个点外其余的几乎都成了直线。这不难理解，对于10000000而言，10与10000都差不了多少。因此我们平时常使用半对数坐标纸画图。对于Excel也可以，先点中Y坐标轴，再按右键，选“坐标轴格式”如下图
引用用Excel函数画曲线的方法1．用Excel函数画曲线图的一般方法 因为Excel有强大的计算功能，而且有数据填充柄这个有力的工具，所以，绘制曲线还是十分方便的。用Excel画曲线的最大优点是不失真。大体步骤是 这样的： ⑴用“开始”→“程序”→“Microsoft office”→”Excel”,以进入Excel窗口。再考虑画曲线，为此： ⑵在A1 和A2单元格输入自变量的两个最低取值，并用填充柄把其它取值自动填入； ⑶在B列输入与A列自变量对应的数据或计算结果。有三种方法输入： 第一种方法是手工逐项输入的方法，这种方法适合无确定数字规律的数据：例如日产量或月销售量等； 第二种方法是手工输入计算公式法：这种方法适合在Excel的函数中没有 列入粘贴函数的情况，例如，计算Y=3X^2时，没有现成的函数可用，就必须自己键入公式后，再进行计算； 第三种方法是利用Excel 中的函数的方法，因为在Excel中提供了大量的 内部预定义的公式，包括常用函数、数学和三角函数、统计函数、财务函数、 文本函数等等。 怎样用手工输入计算公式和怎样利用Excel的函数直接得出计算结果，下 面将分别以例题的形式予以说明； ⑷开始画曲线：同时选择A列和B列的数据→“插入”→“图表”→这时出现如下图所示的图表向导:
选“XY散点图”→在“子图表类型”中选择如图所选择的曲线形式→再点击下面的…按下不放可查看示例?钮，以查看曲线的形状→“下一步”→选“系列产生在列”→“下一步”→“标题”（输入本图表的名称）→“坐标”（是否默认或取消图中的X轴和Y轴数据）→“网络线”（决定是否要网格线）→“下一步”后，图形就完成了； ⑸自定义绘图区格式：因为在Excel工作表上的曲线底色是灰色的，线条的类型（如连线、点线等）也不一定满足需要，为此，可右击这个图，选“绘图区格式”→“自定义”→“样式”（选择线条样式）→“颜色”（如果是准备将这个曲线用在Word上，应该选择白色）→“粗细”（选择线条的粗细）。 ⑹把这个图形复制到Word中进行必要的裁剪； ⑺把经过裁剪过的图形复制到Word画图程序的画板上，进行补画直线或坐标，或修补或写字，“保存”后，曲线图就完成了。 2.举例 下面针对三种不同的情况举三个例子说明如下： 例1. 下图是今年高考试题的一个曲线图，已知抛物线公式是Y=2X^2 ，请画出其曲线图。 因为不能直接利用Excel给出的函数，所以，其曲线数据应该用自己输入公式的方法计算出来，画图步骤如下：
-/ 黄酮标准曲线绘制的实验报告 1.总黄酮的测定 1.1 实验仪器 电子天平AR2140; 紫外可见分光光度计UV2754; 型数控超声波清洗器KQ3200DB; 超级恒温槽; Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ; FD21C250 冷冻干燥机2 1.2 试剂及药品 芦丁标准品 硝酸铝国产分析纯（配成5 %） 亚硝酸钠国产分析纯（配成10 %） 氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L） 95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇） DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基） Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸） 没食子酸对照品：基准纯。 大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔 1.3实验步骤： 1.3.1准备工作及波长的确定 样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。 1.3.2参照品芦丁标准溶液的制备 精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。 1.3.3标准品的测量及绘制标准曲线 精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于、0.3mg/ml、0.15mg/ml、0.0mg/ml容量瓶中，并定容至刻度线。得到10mL -/ 、0.6mg/ml、0.75mg/ml、0.45mg/ml0.9mg/ml的标准品溶液，分别取1ml到试管中各加5 %亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,2011）。（以试剂空白做参比） 以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行2。R 与A 的线性回归方程以及相关系数线性拟合,得c序号浓度（ug/ml）吸光度
怎么用Excell软件绘制ELISA标准曲线 许多试剂检测都涉及到标准曲线的问题,究竟如何绘制或制作标准曲线呢? 用Excell和SPSS的软件能做出来吗?,怎么操作?能一起求出计算公式吗? 有没有专门的软件来处理呢?介绍几种? 希望有这方面经验的介绍自己的经历,与大家分享,“与众同乐才是真的快了” 的确,标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果,甚至是关系到实验的成败。 首先,做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意: 1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。 2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段,即曲线几乎成直线的范围内。 3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。 4、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。 5、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。 6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999.
怎样绘制标准曲线? 标准曲线浓度得到后,可通过计算器、Excell或SPSS统计软件进行绘制,并得到相关的回归方程(即计算公式和相关系数(回归系数,个人认为,Excell 软件比较好用一些;SPSS也行,不过是英文的,初学者不是很容易掌握;计算器嘛太麻烦了,所以现在一般不用。 双抗夹心法ELISA拟和曲线: 拟和曲线: 打开EXCEL软件;在工作表中 输入第一行:浓度值,如0 10 50 100 400 输入第二行:该浓度下的调整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42 选择这些输入的数据,用插入里的图表按钮,进入图表向导,在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”,按“下一步”;选择“系列产生在行”,按“下一步”;数据标志,可以填写:如数据y 轴,OD值;数据x轴,浓度;按下一步,点击完成。可得曲线图。 单击曲线,按右键,选择“添加趋势线”,在类型中,选择多项式;在选项中,选择显示公式,选择显示R平方值。得到公式和R平方值。 也可以用上面说的方法,在公司已经提供的图表上,双击图表,把它输入到图表的数据中,就可以拟和新的曲线。 计算浓度: 举例:第一次实验: 标准曲线为:
荧光定量P C R 之绝对定量分析——标准曲线的绘制 1. 绝对定量定义 绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。 将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT 值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。 * Log（起始浓度）与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系 *由样品CT值，就可以计算出样品中所含的模板量 2. 绝对定量标准品 标准品的一些标准 * 必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同 *标准品必须是经过准确定量的（我们通常用的是ASP-3700紫外光/可见光微量分光光度计）* 标准品必须是标准化的（例如，同一化的细胞数） *在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定CT值 标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA也可以是比扩增片段长的纯化 后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA甚至cDNA但前提是所有的作为标准品的核酸
都必须保证稳定。 3. 标准品的制备 一般一条标准曲线取四到五个点，浓度范围要能覆盖样品的浓度区间，以保证定量的 准确性。一般一个点重复三至五次，对于常期稳定使用的标准品可以适当减少重复的次数。倍比梯度稀释方法： 1v 原液(标准品i ) +9v 稀释缓冲液，得标准品ii 1v 标准品ii+9v 稀释缓冲液，得标准品iii 1v 标准品iii+9v 稀释缓冲液，得标准品iv 1v 标准品iv+9v 稀释缓冲液，得标准品v 依次倍比稀释 拷贝数的计算：详见核酸拷贝数的计算 4. 实例 标准品的制作：将标准品依次进行10倍稀释，ASP-3700测得其拷贝数1.55 X 108copy /ul 标准曲线的绘制( 1cycle=1min ) 设置对照：浓度为 1.55X107、1.55X106、1.55X105、1.55X104、1.55X103、1.55X102、1.55 X 101的标准样品各一个，设空白对照
正态分布函数的语法是NORMDIST(x，mean，standard_dev，cumulative)cumulative为一逻辑值，如果为0则是密度函数，如果为1则是累积分布函数。如果画正态分布图，则为0。 例如均值10%，标准值为20%的正态分布，先在A1中敲入一个变量，假定－50，选中A列，点编辑－填充－序列，选择列，等差序列，步长值10，终止值70。然后在B1中敲入NORMDIST（A1，10，20，0），返回值为0.000222，选中B1，当鼠标在右下角变成黑十字时，下拉至B13，选中A1B13区域，点击工具栏上的图表向导－散点图，选中第一排第二个图，点下一步，默认设置，下一步，标题自己写，网格线中的勾去掉，图例中的勾去掉，点下一步，完成。图就初步完成了。下面是微调把鼠标在图的坐标轴上点右键，选坐标轴格式，在刻度中填入你想要的最小值，最大值，主要刻度单位（x轴上的数值间隔），y轴交叉于（y为0时，x多少）等等。确定后，正态分布图就大功告成了。 PS：标准正态分布的语法为NORMSDIST(z)， 正态分布 （一）NORMDIST函数的数学基础 利用Excel计算正态分布，可以使用函数。 格式如下：变量，均值，标准差，累积， 其中： 变量：为分布要计算的值； 均值：分布的均值； 标准差：分布的标准差； 累积：若1，则为分布函数；若0，则为概率密度函数。 当均值为0，标准差为1时，正态分布函数即为标准正态分布函数 。 例3已知考试成绩服从正态分布，，，求考试成绩低于500分的概率。 解在Excel中单击任意单元格，输入公式： “500，600，100，1 ”，
得到的结果为0.158655，即，表示成绩低于500分者占总人数的15.8655%。 例4假设参加某次考试的考生共有2000人，考试科目为5门，现已知考生总分的算术平均值为360，标准差为40分，试估计总分在400分以上的学生人数。假设5门成绩总分近似服从正态分布。 解设表示学生成绩的总分，根据题意，，。 第一步，求。 在Excel中单击任意单元格，输入公式： “ ”， 得到的结果为0.1587，即，表示成绩高于400分者占总人数的15.87%。 第二步，求总分在400分以上的学生人数，为（人）。 （二）正态分布函数的上侧分位数 利用Excel计算正态分布的上侧分位数，可以使用函数。 格式如下：概率，均值，标准差。 例5已知概率，均值，标准差，求函数的值。 解设，根据题意有，求的值。 在Excel中单击任意单元格，输入公式： “ ”，得到的结果为400，即
标准样品的准备 由于你做的是基因表达分析，样品的准备就比较简单了，因为你要知道都是相对的数值（你的对照样品和实验样品中基因表达的比值），这样就不需要知道精确的拷贝数，所以标准品也就无须知道精确的拷贝数，只需知道稀释的倍数就可以了。 你实验中的标准品可以是来源比较丰富的细胞或组织的RNA转录得到的cDNA。将这种cDNA进行梯度的稀释，可以是稀释10倍，100，1000，10000等倍（具体到你的实验要根据具体的情况来调整稀释倍数。最好能作一个预实验来看看什么样的稀释倍数比较适合你的这种基因的扩增）。而对于各个稀释倍数我们要对它的拷贝数进行赋值，这个值当然不是标准品中真实含有的基因数量（在基因表达分析中也不需要），而是我们根据稀释倍数给每一个稀释度人为赋予的拷贝数，这只是为了方便实验最终结果的计算而已。比如我们把前面稀释十倍的样品赋值为10000个拷贝，100倍的赋值为1000个拷贝依次类推把10000倍的赋为10等。要注意，赋值的数目的倍数差异和你稀释的倍数是一样的，比如前面是10稀释，后面赋值也是10倍变化。 如何做标准曲线 在定量实验中标准品是要和你的未知样品一起进行定量实验的，这样在实验结束，无论是标准品还是未知样品都将跑出曲线，获得Ct值。那么我们先可以把未知样品放到一边，对于标准品来说，我们既获得了Ct值，还知道他们的拷贝数（虽然这个拷贝数是我们自己赋予的）。这样我们可以通过标准品的Ct值和拷贝数做一条标准曲线（以拷贝数为横坐标，而Ct值为纵坐标）。一旦作出了标准曲线，而未知样品的Ct值我们知道（通过实验求得的），这时候就在标准曲线上进行定位，就可以得到未知样品的拷贝数了。 事实上，操作起来没有那么复杂，你只需要告诉软件你的哪个孔是标准品，哪个是未知样品，以及标准品的拷贝数等必要信息，软件会自动帮你把标准曲线和未知样品的拷贝数计算出来。 举例来说如何进行设置 先进入软件，在板设置中选择所放样品的位置，并标上unknow或standard等信息。 选择要使用的荧光染料。
黄酮标准曲线绘制的实验报告1.总黄酮的测定 1.1 实验仪器 电子天平AR2140; 紫外可见分光光度计UV2754; 型数控超声波清洗器KQ3200DB; 超级恒温槽; Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ; FD21C250 冷冻干燥机2 1.2 试剂及药品 芦丁标准品 硝酸铝国产分析纯（配成5 %） 亚硝酸钠国产分析纯（配成10 %） 氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L） 95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇） DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基） Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸） 没食子酸对照品：基准纯。 大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔 1.3实验步骤： 及波长的确定 样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。 精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。 及绘制标准曲线 精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。得到0.0mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml、0.45mg/ml、0.6mg/ml、
0.75mg/ml、0.9mg/ml的标准品溶液，分别取1ml到试管中各加5 %亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,2011）。（以试剂空白做参比） 以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合,得c与A 的线性回归方程以及相关系数R2。 序号浓度（ug/ml）吸光度 1 0 0 2 15 0.180 3 30 0.349 4 4 5 0.546 5 60 0.727 6 75 0.884 7 90 1.063 表1-1：芦丁标准曲线测定数据 图1-2：芦丁标准曲线 根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。取黄酮提取液，取提液2ml至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。其余各份各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol 氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min后,分别在510nm处测定其吸光度。代入标准曲线回归方程可得浓度数据（以芦丁为参比）,三次结果取平均值。经换算后得样品中总黄酮含量。 /( V *W) 样品总黄酮含量(mg/g)=X*n*V 1 式中：X—测出的浓度，mg/ mL;（直接代入，不用换算。） n—稀释倍数，量纲为1; —样液总体积，mL; V I V—测定时取样体积，mL; W—样品质量，g。 2.总分含量的测定 2.1 实验仪器 ALZO4型电子分析天平:上海梅特勒一托利多仪器有限公司;
HPLC标准曲线的制作 你可以随便弄一个浓度进一针样品看一看你这个样品的吸收度如何，再根据你样品的吸收度配置适当的底浓度样品逐个稀释这样可以连检测线定量限一起做了，一举3得(最后将你得到的峰面积根据你的进样浓度做一个线性回归就行啦，线性好的话R的平方一般接近于1 。 请问下各位在上样的时候是进同浓度的不同体积的样液绘制标准曲线好还 是先配好不同浓度的样液再以相同体积进样好呢, 这2个有什么区别吗, 请你看看分析化学书，有关精密度和线性的关系就知道了，实在不行，可以查看2005版药典一部附录新药质量标准的技术要求项下。自己看看就知道了。 我觉得进不同浓度相同体积好.因为你进样体积不同.在同样的方法下,系统的 各项参数可能会发生变化.而且你要通过进样体积的变化来控制浓度范围,这样也不大可行.一般我们进样的体积是5到20微升.而这个狭小的范围我们能调控的浓度线性范围非常窄.而通过事先调配不同浓度的话,就简单可行,而且浓度范围可以任意去控制.在实际操作中,老师也一直是教我们通过控制不同浓度来制作标准曲线的.以上只是个人的粗浅看法,欢迎高手们前来批评指正!!!!!!!!!! 前面几个站友说得都很好。我简单再补充一点自己的看法。 一般而言，还是不同浓度进相同体积做标曲是最规范的做法，而且可以有效避免人为误差。比如说，你的一个浓度配错了，如果以这个浓度为基准进不同的体积，会导致你最后的结果会整体偏大或偏小。所以要特别注意。 但实际工作中，如果你们的产品做得比较成熟了，而且做实验的经验比较丰富，大家为了省事还是多采用配一个浓度进不同的体积。 以进样量做标准曲线和以不同浓度进样相同体积做标准曲线差别不大。
灵活运用EXCEL绘制沉降观测曲线图 康政虹李世涌（河海大学土木工程学院南京 210098） 早在1985年，Microsoft Excel一经问世，就被公认为是世界上功能最强大、技术最先进、使用最方便的电子表格软件之一。她不仅是一种功能齐全的电子表格处理软件，也是一种操作简便的制图工具。它可以根据表格中枯燥的数据迅速便捷地生成各种直观、生动的图表。 在路基沉降及路堤稳定的观测工作中，为掌握路基沉降规律和趋势、控制和安排施工进度，就必须按要求进行长期沉降及稳定观测，随之即来的便是大量的观测数据。如何利用Excel强大的数据表格和图表功能，对观测资料进行处理，提高成果的精确度及美观性，工程技术人员为此进行了不倦的探索。本人在沉降观测数据资料整理中使用Excel时深深体会到它的方便快捷，在此想谈谈用Excel绘制沉降观测中XX测点的时间～荷载～沉降量关系曲线图时的一点小技巧。除了编程之外，若各位行家还有更好的方法，请不吝赐教。 按委托单位的要求，沉降观测报告中必须包括部分测点的时间～荷载～沉降量关系曲线图，而且为了形象直观，填土荷载要画成台阶状。为达到此目的，笔者曾做了许多尝试，发现通过编程固然可行，但运用Excel本身强大的数据处理功能，稍稍把数据作一点调整，也能达到同样的效果。 下面以某一测点为例简要说明绘制方法，该测点桩号（测点号）为K28+920中（H017），填土情况及观测数据如下表所示： 表1
单纯从上表中的数据是没办法画出所需的曲线图的，填土高度要呈台阶状就意味着对于同一个日期，势必要有两次填土高度与之对应。基于此认识，我们只需将以上数据稍作改进：把前一层填土的高度延续到下一层填土成型的时间。当然，我们完全可以按照要求的不同而调整数据，使之尽可能与实际吻合。 为了图形的美观，不妨将填土高度的单位以分米(dm)计，新的观测数据如下表所示： 表2
Excel 是Microsoft offices系统的重要组成，它是界于WORD 字处理软件与ACCESS 数据库软件之间的电子表格工具，功能十分强大，特别适合于日常工作使用。使用得好，完全比目前所有的检验科办公系统优秀。 现就先介绍一下如何使用Excel 绘制标准曲线。 首先，将数据整理好输入Excel ，并选取完成的数据区，并点击图表向导，如下图所示。 点击图表向导后会运行图表向导如下图，先在图表类型中选“XY散点图”，并选了图表类型的“散点图”（第一个没有连线的）。 点击“下一步”，出现如下图界面。如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”。 如果发现图不理想，就要仔细察看是否数据区选择有问题，如果有误，可以点击“系列”来更改，如下图。 如果是X 值错了就点击它文本框右边的小图标，结果如下图： 出现上图后，如图在表上选取正确的数据区域。然后点击“下一步”出现图表选项界面，如下图，上应调整选项，以满足自己想要的效果。 点击“下一步”，现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。 完成了散点图，现在需要根据数据进行回归分析，计算回归方程，绘制出标准曲线。其实这很简单，先点击图上的标准值点，然后按右键，点击“添加趋势线”。如下图。 由于本例是线性关系，在类型中选“线性”如下图 点击“确定”，标准曲线就回归并画好了。
标准曲线是画好了，可是我们怎么知道回归后的方程是什么样呢？这了简单，点击趋势线（也就是我们说的标准曲线）然后按右键，选趋势线格式，如下图： 在显示公式和显示R 平方值（直线相关系数）前点一下，勾上。再点确定。好了，现在公式和相关系数都出来了。如图：呵R 的平方达0.996，线性相当好。 可是有时候有的项目是成指数增加的，散点图如下图， 从上图看并不值关，除了最大的一个点外其余的几乎都成了直线。这不难理解，对于10000000而言，10与10000都差不了多少。因此我们平时常使用半对数坐标纸画图。对于Excel 也可以，先点中Y 坐标轴，再按右键，选“坐标轴格式”如下图 将左下方的对数刻度选中，确定。完整的一个半对数标准曲线就做好了。
标准曲线绘制 在分析化学实验中, 常见标准曲线法进行定量分析, 一般情况下的标准工 作曲线是一条直线。 标准曲线的横坐标(X)表示能够精确测量的变量(如标准溶液的浓度), 称为普通变量, 纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值, 如吸光度、电极电位等), 称为随机变量。当X取值为X1, X2,…… Xn时, 仪器测得的Y值分别为Y1, Y2, …… Yn。将这些测量点Xi, Yi描绘在坐标系中, 用直尺绘出一条表示X 与Y之间的直线线性关系, 这就是常见的标准曲线法。用作绘制标准曲线的标准物质, 它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量, 标长准曲线不能任意延。用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太 大或太小, 应能近似地反映测量的精度。 由于误差不能完全避免, 实验点完全落在工作曲线的的情况是极少的, 特 别是在误差较大时, 实验点比较分散, 它们一般并不在同一条直线上, 这样凭 直觉很难判断怎样才能使所连接的直线对于所有实验点来说误差是最小的, 当前较好的方法是对实验点(数据)进行回归分析。 研究随机现象中变量之间相关关系的数理统计方法称为回归分析, 当自变 量只有一个或X与Y在坐标图上的变化轨迹近似一直线时, 称为一元线性回归。 2.6.1一元线性回归方程的求法 确定回归直线的原则是使它与所有测量数据的误差的平方和达到极小值, 设回归直线方法为 (2－15) 式中a表示截距, b表示斜率。
假设Xi和Yi (i=1,2,3,……,n)是变量X和Y的一组测量数据。对于每一个Xi值, 在直线( )上都有一个确定的值。但值与X 轴上Xi处的实际测定值Yi是不相等的, 与Yi之差为: (2－16)上式表示与直线()的偏离程度, 即直线的误差程度。如果全部n个测定引起的总偏差用表示, 则偏差平方和s为 (2－17) 在所有直线中, 偏差平方和s最小的一条直线就是回归直线, 即这条直线的斜率b和截距a应使s值达到最小, 这种要使所有数据的偏差平方和达到最小 的求回归直线法称为最小二乘法。 根据数学分析的极值原理, 要使s达到最小, 对式(2－17)中的a、 b分别 求偏微分后得到 (2－18) (2－19) 是所有变量Xi和Yi的平均值。由于计算离均差较麻烦, 可将式(2－ 18)变换为 (2－20)
E X C E L绘制级配曲线图 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】
一、用Excel绘制级配曲线图步骤 建立图表：在图表向导中选择XY散点图，点击下一步，点击数据区域中红色箭头选择任意数据区域；点击下一步，选择标题，输入图表标题（筛分级配曲线图）、数值X轴（筛孔尺寸mm）、数值Y轴（通过率%）；选择网格线，选择数值X轴，选择主要网格线，点击下一步，点击完成。1、修改坐标轴：双击X轴数字，设置筛孔尺寸。选择刻度，将最小值设为0、最大值设为级 配类型最大粒径对应的泰勒曲线值（如AC-25，最大粒径为31.5mm，对应的泰勒曲线值为y=100.45lgdi=4.723）；选择字体，设置需要的字体大小，点击确定。双击Y轴数字，将最小值设为0、最大值设为100、主要刻度单位设为10、次要刻度单位设为0，选择字体，设置需要的字体大小，点击确定。 2、设置筛孔尺寸系列：在图表区点击鼠标右键，选择数据源，选择系列，选择添加，选择X 值输入筛孔尺寸对应的泰勒曲线值[如筛孔26.5mm(将孔径作为系列名称输入更方便)为 4.370,4.370[）,选择Y值输入0,100。再选择添加输入其它筛孔尺寸。选择确定。双击系 列，设置系列格式。选择图案，设置系列线格式，选择数据标志，点击确定。双击数据标志，将数字修改为对应的筛孔尺寸。
3、输入级配范围和级配中值线：在图表区点击鼠标右键，选择数据源，选择系列，选择添 加，选择X值输入筛孔尺寸对应的泰勒曲线值（4.723，4.370，3.762……）,选择Y值输入级配上下限和中值。点击确定。 4、输入设计级配线：在图表区点击鼠标右键，选择数据源，选择系列，选择添加，选择X值 输入筛孔尺寸对应的泰勒曲线值（4.723，4.370，3.762……）,选择Y值点击红色箭头选择任意设计级配区域。