Standard Operating Procedure for the Good Manufacturing Practice-Compliant Production of Human Bone Marrow
Mesenchymal Stem Cells
Livia Roseti,Marta Serra,and Alessandra Bassi Abstract
According to the European Regulation (EC 1394/2007),Mesenchymal Stem Cells expanded in culture for
clinical use are considered as Advanced Therapy Medicinal Products.As a consequence,they must be produced in compliance with Good Manufacturing Practice in order to ensure safety,reproducibility,and ef?cacy.Here,we report a Standard Operating Procedure describing the Good Manufacturing Practice-compliant production of Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells suitable for autologous implan-tation in humans.This procedure can be considered as a template for the development of investigational medicinal Mesenchymal Stem Cells-based product protocols to be enclosed in the dossier required for a clinical trial approval.Possible clinical applications concern local uses in the regeneration of bone tissue in nonunion fractures or in orthopedic and maxillofacial diseases characterized by a bone loss.
Keywords:Bone marrow,Mesenchymal stem cells,Good manufacturing practice,Quality control,Advanced therapy medicinal products,Bone regeneration
1
Introduction
Mesenchymal Stem Cells (MSCs)display a low density in bone
marrow,thus an in vitro expansion step is required in order to obtain a cell number suitable for clinical applications (1–3).Euro-pean regulations de?ne such expanded cells as Advanced Therapy Medicinal Products (ATMPs)that must be produced in accordance with the current Good Manufacturing Practice (GMP)(4,5).Those rules,which have been already encoded for conventional drugs,allow for the manufacture of medicinal products in a stan-dardized and controlled way minimizing,at the same time,con-tamination risks.
Here,we report a Standard Operating Procedure (SOP)describing the multistep GMP-compliant manual production of Bone Marrow-derived MSCs to be used for autologous implanta-tion in humans (6–8).MSCs,isolated from an eparinated (1,000I.U.of heparin)bone marrow sample harvested from the iliac crest of adult donors (9,10)(about 10–20ml),are expanded in monolayer
Methods in Molecular Biology (2015)1283:171–186DOI 10.1007/7651_2014_103
?Springer Science+Business Media New York 2014Published online:05August 2014
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up to 3weeks.The ?nal product is a small volume MSC suspension suitable for the clinical use only after passing proper quality con-trols.In fact,the procedure involves several GMP’s mandatory samplings for environmental and cell quality control analyses (3,11)that must be carried out by specialized laboratories and will not be described in detail.
Previous validation studies have stated ?nal product’s shelf-life (properly named stability):we demonstrated that MSC’s features (sterility,viability,and phenotype)are maintained at acceptable levels when the MSC suspension is stored at room temperature for a maximum of 72h.After this time the product expires and can no longer be transplanted.
To reach full GMP-compliance,the process generates two types of reference samples collected from the ?nal product—cells and supernatant—which should be both stored for at least 1year after implantation and analyzed if issues arise (12).
If implantation is delayed for organizational reasons or patient’s illness or if repeated doses at different times are required,cells are stored in liquid nitrogen as intermediate product.
This SOP can be utilized as a template for the development of investigational medicinal Mesenchymal Stem Cells-based product protocols to be enclosed in the dossier required for a clinical trial approval.Possible clinical applications concern local uses (cells alone or in combination with biomaterials and/or growth factors)for the regeneration of bone traumatic or degenerative damages,pseudoarthrosis and defects of consolidation,congenital disorders or maxillofacial injuries (13–15).
2
Materials
2.1
Raw Materials
Cell culture reagents suitable for cell therapy applications should be
purchased from Companies that guarantee their GMP compliance production.Sterility should be certi?ed by speci?c analyses,pre-formed in compliance with the requirements of the European Pharmacopoeia,current edition (16).
All reagents used in this protocols are:Dulbecco’s Modi?ed Eagle Medium (DMEM)low glucose (1g/l)(basal medium);Dul-becco’s Phosphate Buffered Saline (PBS)(1?);Fetal Bovine Serum (FBS)Pharma Grade,Australian Origin;L -Glutamine 200mM (recombinant origin)and Trypsin-Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)(1:250)1?(porcine source).
Trypsin-EDTA and FBS must be also certi?ed to be free from porcine and bovine mycoplasmas and viruses,respectively.In addi-tion,FBS must be attested to be produced in a Bovine Spongiform Encephalopathy/Transmissible Spongiform Encephalopathy
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(BSE/TSE)free Country,such as Australia or New Zealand,and
screened for prion absence (17).
L -Glutamine’s recombinant origin must be clearly indicated and certi?ed too.
CryoSure-Dimethyl Sulfoxide (DMSO)is purchased from WAK–Chemie Medical GmbH,Germany.
Plastic material must be certi?ed to be sterile,pyrogen free (latex free whenever necessary)and tested for cell culture (or stem cell tested).Vented culture ?asks are recommended.
To manage high cell numbers we use a multilayer ?asks system (Hyper?ask vessels,Corning Life Sciences).Double or triple packages should be preferred to eliminate/reduce the need for alcohol wipe downs and similar procedures required in clean room production facilities.
Quality control sampling:
–BacT/ALERT 1Aerobic Culture Bottles (SA)(BioMerieux
Inc.,Marcy L’Etoile,Craponne,France)(18).
–BacT/ALERT 1
Anaerobic Culture Bottles (SN)(BioMerieux
Inc.,(Biomerieux Industry,Marcy L’Etoile,Craponne,France)(18).–Apirogenic Bottles for endotoxin testing (Charles River Labor-atoires,l’Arbresle,France).
–PCR tubes for Real time PCR detection of Mycoplasma contam-ination (Venor 1GeM-qDual Mycoplasma Detection Kit for Real-Time PCR,Minerva Biolabs GmbH,Berlin,Germany).
–Settle and contact plates for environmental microbiological con-trol and glove prints (Heipha Dr M €u
ller GmbH,Eppelnheim,Germany).
–Particle counter for environmental particle control.
2.2
Location
In Europe,a GMP-facility (Cell Factory)allowed to ATMP pro-duction by the competent authority is required (5).A GMP-facility
consists in environments where speci?c parameters such as air ?ltration and ventilation,temperature,relative humidity,differen-tial pressure,number of air particles,and bacterial colony forming units are standardized and continuously monitored.The structure includes clean rooms of different classi?cation up to A (the local zone for high-risk operations i.e.biohazard hood)in B work places (the background environment for the grade A zone),according to European current GMP (5).High-risk operations include manip-ulations where the cells are exposed to environment such as trypsi-nization and medium change.For lower-risk operations,such as medium warming or centrifugation,grade B areas are appropriate.Only trained and equipped personnel are admitted to the facility.
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Operator’s equipment includes protective and disposable clothes to
wear(Fig.1).Raw materials must be introduced separately from
personnel,through a clean pass box.
2.3Equipment Biohazard hood;CO2incubator(set at37 C temperature,5%
CO2and95%relative humidity);centrifuge;phase contrast micro-
scope;incubator(work chamber temperature of37 C);vortex;
chilling plate/refrigerated racks;cell counter;refrigerator/freezer;
liquid nitrogen tank.
3Method
3.1Cell Isolation and Seeding (See Notes1–4)
1.Warm/thaw basal medium,L-glutamine and FBS in the
incubator.
2.Under the biohazard hood prepare complete medium(basal
medium supplemented with10%FBS and4mM L-glutamine): discard by aspiration60ml from a500ml bottle of basal medium,add10ml L-glutamine and50ml FBS;resuspend with a pipette.
Fig.1Disposable sterile garments for cell manipulation.Cell manipulating operators as well as personnel must wear disposable garments that ensure biological products protection.Only trained and equipped operators can enter the GMP-facility
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3.Aspirate the eparinated bone marrow with a 18-G needle inserted in a syringe and transfer in sterile tube/s.
4.Resuspend and measure bone marrow amount with a pipette.
5.Dilute the bone marrow samples 1:4with complete medium
and resuspend.6.Harvest samples for microbiological control:
–1ml with a sterile syringe to inoculate in a BacT/ALERT 1
Aerobic Culture Bottle (SA)(Fig.2);–1ml with a sterile syringe to inoculate in a BacT/ALERT 1
Anaerobic Culture Bottle (SN)(Fig.2);–2ml to collect in PCR tube for mycoplasma detection.
Collected samples are then to be sent to the proper specialized
quality control laboratories that will perform the analyses (see Note 5).
7.Seed cells in culture ?asks,typically T75(7ml/T25;14ml/T75;28ml/T150;560ml/multilayer ?asks).8.Place the ?asks in the CO 2incubator.9.Store the complete medium at 4 C.
Fig.2Quality control sampling on Mesenchymal Stem Cells.To harvest
samples for microbiological control during critical steps,1ml of supernatant is inoculated into a BacT/ALERT ?Aerobic Culture Bottle (SA)and 1in a BacT/ALERT ?Anaerobic Culture Bottle (SN)with a sterile syringe (see Note 5).The bottles are then sent to a GMP-compliant Quality Control Laboratory for the analysis
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3.2First Medium Change(See Notes 1and2)
1.After3days,warm complete medium and PBS in the incubator.
2.Pull out the?asks from the CO2incubator and observe the
macroscopic appearance of the culture medium:
–if the medium is opaque or dense and yellow there is the suspect of a contamination.In this case the procedure is
stopped and sampling for microbiological control is
needed(see Section3.1);
–if the appearance is clear and the color red or dark red go on with this procedure.
3.Under the biohazard hood?lter the amount of complete
medium required for processing with a vacuum?ltration sys-tems(or with a?lter and a syringe).
4.Aspirate medium from the?asks and place it in sterile tubes.
5.Centrifuge the medium at500?g for7min,at room
temperature.
6.In the meantime add to the?asks the PBS solution(5ml for
T25?asks,10ml for T75?asks,20ml for T150?asks,100ml for multilayer?asks)in order to wash out stromal matrix debris and red blood cells(see Note6and Fig.3a).
7.Close the?asks and placed them horizontally for1min,gently
shaking.
8.Aspirate and discard the PBS.
9.Run a second wash(only steps7and8).
10.Evaluate the cultures under a phase-contrast microscope
(Fig.3b),noting the following parameters:cell adhesion (absent,present,partial,poor);cell density(con?uence,non-con?uence,next to the con?uence);cells in the supernatant (presence,absence);matrix/red blood cells(presence, absence);unusual morphology.
11.Transfer the?asks under the biohazard hood and discard
the PBS.
12.Transfer the centrifuged tubes under the biohazard hood,
aspirate half supernatant volume of that normally used to each?ask(3.5ml for the T25?asks,7ml for T75?asks, 14ml for T150?asks,280ml for multilayer?asks)(see Note6).
13.Add to the?asks the same amount of complete fresh medium
and resuspend.
14.Place the?asks in the CO2incubator.
15.Store reagents at4 C.
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3.3Trypsinization
and Intermediate Product Freezing
(See Notes 1,2,and 7)
1.After 3–4days,macroscopically evaluate culture medium,not-ing the following parameters:clarity/turbidity,color (red orange,red violet,yellow).
2.Check the cells under a phase-contrast microscope noting the
following parameters:cell adhesion (present,absent,poor);con?uence (70–80%con?uent,noncon?uent,next to the con?uence);cell presence or absence in the supernatant;matrix/red blood cells (presence,absence);unusual morphology.
3.Make a decision based on both observations (see steps 4,5,6,
and 7).
Fig.3Phase-contrast microscope morphological observation of Mesenchymal Stem Cells at different steps of the Standard Operating Procedure.(a )Three days after seeding (First medium change )red blood cells and matrix hamper observation.(b)Adherent cells become more visible only after two PBS washes .Matrix debris and/or red blood cells are still evident and should disappear in a few days.(c)Cells have reached 70–80%con?uence and trypsinization is recommended.(d)Full cell detachment occurs as a suspension of cells with round morphology after Trypsin-EDTA incubation.All images were taken with a digital camera (magni?cation ?4)
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4.If 70–80%con?uence is not reached,trypsinization should be delayed until reached and a medium change is needed.
5.In particular,change the culture medium with complete medium in the case of red medium color and/or adhesion;change the culture medium with a 20%FBS supplement in the case of violet medium color and/or poor adhesion:–warm complete medium and FBS (if necessary);–prepare 10or 20%FBS medium;
–transfer the cultures under the biohazard hood;
–?lter the needed amount of medium,depending on ?asks size and number;
–aspirate the medium from the ?asks and add proper
medium—complete or with 20%FBS—(7ml for T25?asks,14ml for T75?asks,28ml for T150?asks;560ml for multilayer ?asks);–close and place ?asks in the CO 2incubator.
6.Trypsinization and freezing can be performed in case of about
70–80%con?uence (Fig.3c ):–prepare complete medium if necessary;
–warm complete medium and PBS in the incubator;–thaw Trypsin-EDTA in the incubator;
–?lter the amount of reagents required for processing;–transfer the cultures under the biohazard hood;–aspirate and discard the supernatants;
–add the PBS wash solution (5ml for T25?asks,10ml for T75?asks,20ml for T150?asks,and 100ml for multilayer ?asks);–close and place horizontally the ?asks,gently shaking for 30–60s;–run a second wash;
–add the Trypsin-EDTA solution (4ml for T25?asks,7ml for T75?asks,14ml for T150?asks,and 100ml for multilayer ?asks);
–close and place the ?asks in the CO 2incubator for 15min to
allow cell detachment;–pick the ?asks and check the cells under the phase-contrast microscope to verify cell detachment (which occurs as a suspension of cells with round morphology)(Fig.3d );
–if some cells are still adherent to the substrate,put the ?asks
again in the CO 2incubator for 3–5min to allow full detachment;
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–if detachment is completed,inactivate the Trypsin-EDTA solution by adding complete medium to the?asks under the biohazard hood(8ml for T25?asks,14ml for T75?asks, 28ml for T150?asks,and200ml for multilayer?asks);
–resuspend and transfer to50ml tubes;
–collect a0.5ml sample for cell counting;
–centrifuge7min at500?g,at room temperature;
–in the meantime count the cells;
–under the biohazard hood open the centrifuged tubes,care-fully discard the supernatants and gently shake the pellets (see Note8);
–set the number of cryovials to use for freezing:1cryovial up to3?106?0.5?106MSCs;
–place the empty cryovials in a refrigerated rack;
–prepare the cell freezing mixture in a tube:0.9ml of com-plete medium,0.2ml of DMSO and0.9ml of FBS(mixture for one cryovial)(see Note7);
–resuspend,?lter,and place the mixture in the refrigerated rack;
–carefully discard the supernatant of the centrifuged tubes and gently resuspend the cell pellet(see Note8);
–add1.6ml of the freezing mix to each pellet,drop by drop, using a sterile pipette while gently shaking the tubes with the other hand;
–gently resuspend and transfer into the cryovials;
–close the cryovials and house them in a storage box that enables a slow decrease of the temperature(about1 C per minute);
–exit the cleanroom and place the container into a freezer set at a75 C temperature;
–after about24h place the cryovials in the vapor phase of a liquid nitrogen tank(see Note7).
7.Collect samples for microbiological tests in case of suspected
contamination(yellow color,unusual morphology)as in Section3.1and stop the procedure until results(see Note5).
3.4Intermediate Product Thawing and Seeding(See Notes1, 2,5,and7)1.Open the liquid nitrogen tank and harvest the cryovials,check-
ing their integrity and identity.
2.Get samples in the cleanroom(through the pass box)within a
refrigerated rack.
3.Prepare and warm a20%FBS supplemented medium.
4.Place the cryovials in the incubator.
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5.After3–4min check if the cell suspension appears thawed.
6.If small ice chunks are still evident put the samples again in the
incubator for30–60s.
7.When no more ice residues are visible,place the cryovials under
the biohazard hood and transfer each cell suspension in a tube containing18ml of the20%FBS medium.
8.Close the tubes and vortex the solution for about10s.
9.Centrifuge at500?g for7min,at room temperature.
10.Transfer the supernatant into sterile tubes for quality control
sampling as in Section3.1.
11.Gently shake the pellets,add20%FBS medium(7ml for T25
?asks,14ml for T75?asks,28ml for T150?asks,560ml for multilayer?asks)and resuspend(see Note8).
12.Seed at low density in an adequate number of culture?asks(see
Note9).
13.Check cell presence under the phase-contrast microscope.
14.Place the?asks in the CO2incubator.
3.5Expansion(See Notes1,2,and10)1.Pull out?asks from the CO2incubator.
2.Macroscopically evaluate culture medium,noting the following
parameters:clarity/turbidity,color(red orange,red violet, yellow).
3.Check the cells under a phase-contrast microscope noting the
following parameters:cell adhesion(present,absent,poor);
con?uence(con?uent,noncon?uent,next to the con?uence);
cell presence or absence in the supernatant;matrix/red blood cells(presence,absence);unusual morphology.
4.Make a decision based on both observations as detailed below.
5.Change the culture medium with complete medium in the case
of red medium color and/or cell adhesion;change the culture medium with a20%FBS supplement in the case of violet medium color and/or poor adhesion,as described in Section3.3.
6.Trypsinization in case of about70–80%con?uence(see
Note10)(Fig.3c)or if matrix debris and/or red blood cells are still evident(see Note6)(Fig.3a,b):
–trypsinize(until centrifugation step)and count the cells,as detailed in Section3.3
–add to the pellets the necessary amount of complete medium in order to allow a low density seeding,resuspend and place in culture?asks(14ml for T75?asks,28ml for T150?asks,560for the multilayer?asks)(see Note9);
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–check cell presence in the?asks under the phase-contrast microscope;
–place the?asks in the CO2incubator.
7.Collect samples for microbiological tests in case of suspected
contamination(yellow color,unusual morphology)as in Sec-tion3.1and stop the procedure until results(see Note5).
3.6Final Product Packaging and Reference Samples Generation(See Notes 1and2)1.Warm reagents and prepare?nal medium:basal medium sup-
plemented with L-glutamine(no FBS)(see Note11).
2.Trypsinize and count the cells as detailed in Section
3.3,until
centrifugation step.
3.Gently shake the pellets and add40m?nal medium(see Note8).
4.Centrifuge7min at500?g,at room temperature.
5.Repeat steps3and4(see Note11).
6.Under the biohazard hood transfer the supernatant into sterile
tubes from which to collect the following samples that are then to be sent to the proper specialized laboratories of quality control:
–1ml with a sterile syringe to inoculate in a BacT/ALERT1 Aerobic Culture Bottle(SA);
–1ml with a sterile syringe to inoculate in a BacT/ALERT1 Anaerobic Culture Bottle(SN)(see Note5);
–2ml with a sterile pipette to be placed in a proper tube for PCR mycoplasma detection;
–0.5ml with a sterile pipette to inoculate in an a-pyrogenic Bottle for endotoxin testing;
–0.5ml with a sterile pipette to be placed in a tube and frozen as counter sample atà80 C.
7.Gently shake the pellets,add?nal medium in order to reach a
1–2?106cell concentration.
Resuspend and collect the following samples which are then to be sent to the proper specialized laboratories of quality control (see Notes5and12):
– 1.2?106cells in micro-tubes for the phenotypical analysis (immuno-phenotype and tri-lineage ability);
– 2.0?106cells for karyotyping;
– 1.0?106cells in a tube as a counter sample to be frozen as in Section3.3.
8.Transfer cell suspension into proper,identi?ed tubes(primary
container)(Fig.4a)
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9.Close each tube and put it in a secondary plastic sterile bag
(secondary container)(Fig.4a ).
10.Close and insert in outer jar container (Fig.4b ).
11.Put a label on the outer container,which must contain
(Fig.4b ):
–identi?cation of the Manufacturer;–identi?cation of the product;–indication of the use (i.e.autologous use only);–batch number;
–identi?cation code of the patient;–expiration date;
–
signature of the person in charge.
12.Exit the Cleanroom and store the ?nal product at room tem-perature for a maximum of 72h.13.For the shipment use a container with lock (Fig.4c ).
4Notes
1.To avoid the risk of cross-contamination during manipulation it is required to use disposable materials and not to share reagents between cultures.Moreover,it is not possible to simultaneously process cultures from different patient,but only sequentially and after decontamination of the biohazard hood and relative equipment.
2.Sampling for environmental (microbiological and particles)control is required during each phase of the process.At the
Fig.4Final product packaging.The ?nal cellular products is transferred into proper tubes (primary container,
a ),then put it into secondary sterile bags (secondary container,a ).The product is then inserted in a plastic jar,properly labeled (a and
b ).For the shipment a container with lock is utilized (
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end of cell manipulation,each operator should take glove prints
on agar plates.Recommended limits for contamination are indicated in EudraLex-Volume 4GMP Guidelines (5).
3.A peripheral blood sample from each patient is needed in order to evaluate the presence of transmissible pathologies (Acquired Immune De?ciency Syndrome,Hepatitis B and C,and syphilis)(12).If a GMP-facility does not have the possibility to manipu-late the infected cells in separated areas,positive patients must be excluded.Therefore,manipulation can start only after nega-tivity is stated.This usually takes 1or 2days.In the meantime the bone marrow samples can be stored at 5?3 C.
4.Density-gradient separation method is considered a standard
step for MSC isolation from bone marrow.However,such a procedure is time consuming and reagents are not often approved for clinical use.Therefore many GMP-facilities are trying to develop alternative methods,such as direct or diluted bone marrow seeding (9).
5.Microbiological control and Mycoplasma analysis are per-formed in the critical steps of isolation,thawing,and ?nal product packaging.Isolation and thawing criticism have been established by our GMP-facility on the basis that cell material is newly introduced or reintroduced in the cleanroom,respec-tively.Being “?nal product packaging”the most critical step since cells are then implanted in the patient,additional sam-pling for quality control analyses are required,such as for endotoxin detection,viability,phenotype,and genotype stabil-ity evaluation (4,5,7).If a cell contamination is detected,the process must be stopped.Since the here described orthopedic applications are not lifesaving,contaminated cells cannot be sterilized by irradiation or other treatments and must be discarded.
6.In the “?rst medium change step”matrix and red blood cells
presence (Fig.3a )should be reduced by two PBS washes.This makes also possible to check cell presence under the phase-contrast microscope (Fig.3b ).Usually,debris gradually reduces until disappearance in 7-8days.However,if residues still persist in the cultures,a trypsinization,which in general dissolves all of them,is recommended.The ?rst medium change is then per-formed using half of the centrifuged supernatants of the isola-tion step and half fresh complete medium.The supernatants,centrifuged in order to remove matrix debris and red blood cells,are utilized since rich of soluble factor produced by the cells themselves that can be useful for adhesion and growth.On the other hand,since it can carry also catabolic factors,fresh medium is added to enhance cell metabolism.
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7.If the intermediate product is not to be frozen,it is possible to switch directly out 3.2Section to 3.5one.Freezing procedure should be slow in order to lead to the deposition of ice in the extracellular environment.In fact,the rapid freezing leads to the formation of ice crystals within the cells,leading to the rupture of the plasma membrane at the time of thawing.Since the DMSO makes cell membranes permeable,the freezing mixture encloses also FBS at high concentration in order to maintain cell integrity.To avoid contamination (for example,mycoplasma),and for safety reasons,it is recommended to store cell cryovials in the upper gas phase and not to soak them in liquid nitrogen.Moreover,if the cryovials are stored by immersion in liquid nitrogen,the nitrogen may penetrate the samples.As a consequence,during defrosting,the vapor-ized nitrogen can generate a high pressure resulting in an explosion and release of material.During handling of cryogenic frozen vials,adequate protection measures should always be followed by wearing safety glasses and gloves and working on a suitable work surface.
8.After each centrifugation the supernatants are discarded and a ?rst cell resuspension is performed by gently shaking the pellets (or giving little shots to the tube).In fact small volumes allow the resuspension to occur without forming aggregates.The proper volume of medium can be then added and cells will be more easily resuspended with a pipette.
9.Increasing evidence in the literature suggests that MSC seeding
density affects their proliferation rate and required functions (6).Some clinical trials have involved high cell density,but some studies highlighted that lower densities have faster prolif-eration than those cultured at higher densities.However,low or very low densities requires wide culture surface and can be dif?cult to manage.A plating density of 1,000cells/cm 2has
been suggested by Sensebe
`et al.(6)for a high number of harvested cells.However,it is important for each GMP-facility to investigate and identify the “optimal”cell density condition,taking into account cell type and target,clinical protocol,appli-cation (local o systemic),and equipment/technology.
10.In the expansion phase,cells are checked twice a week and,
depending on their density status,a medium change or a trypsinization occurs.Based on our experience and given cell’s biological variability,the number of trypsinization may vary between 1and 2.
11.FBS,besides animal origin related problems,may imply
immune responses in patients.We justify our choice to use FBS in monolayer conditions because it allowed a better cell growth standardization.However,since its potentially danger-ous action could not be ignored,we decided to avoid FBS
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presence in the?nal products.Therefore,in order to reduce/
minimize FBS presence,cells are centrifuged twice and the?nal
product is resuspended in a serum free medium.However,it is
possible that FBS residues remain in the suspension and this
must be highlighted in the accompanying documentation.
12.The problem with living cells products is that they need to be
implanted before most quality control results are completed.
Therefore,a robust process validation must be performed
before starting the clinical trial and a careful risk analysis must
be carried out in order to assess the corrective actions to be
taken if the results are out of speci?cation(e.g.,the administra-
tion of antibiotics to a patient in case of microbial contamina-
tion).As a precaution we decided to routinely give the
permission to implantation only after24h occur from product
preparation,time that allows at least endotoxin results to be
already available.
Acknowledgments
This work was supported by the grant“Progetto di Medicina
Rigenerativa”from“Regione Emilia Romagna”(Delibera di
Giunta n.2233/2008).
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第5部分掘进 一、基本条件 生产矿井不应存在以下情况： （1）开拓煤量、准备煤是、回采煤量不满足规定要求：（2）使用明令禁止使用或者淘汰的设备、工艺。二、基本要求 1、生产组织 生产组织应符合以下要求： （1）按采煤工作面相对集中、效能最大的生产布局进行组织，实行 集约生产；（2）科学进行劳动组织；（3）采掘关系合理； （4）掘进工作面的生产运输系统合理、简单。 2、设备配置 设备配置应符合以下要求： （1）无国家明令淘汰、禁止使用的危及生产安全的设备； （2）运输系统设备配置合理，不应有制约因素，材料应采用机械运 输； （3）具备条件的应使用综合机械化掘进。 3、技术保障 技术保障应符合以下要求： （1）技术管理体系健全，有矿压观测、分析、预报制度；（2）按规定设置机构和人员，配齐仪器仪表； （3）作业规程和安全技术措施针对性、可操作性强，审批手续完备， 贯彻、考核和签字记录齐全，作业规程每2个月至少组织1次复审并有复审意见； （4）作业场所有规范的施工图牌板； （5）在支护、生产组织等方面应开展技术创新。 4、岗位规范 岗位规范应符合以下要求： （1）进行岗位人员培训，其能力符合相应岗位要求； （2）操作规范，无违章指挥、无违章作业、无违反劳动纪律的行为；（3）管理和技术人员应掌握专业技术，作业人员应熟知本岗位作业 规程和安全技术措施； （4）作业前进行隐患排查，并实行闭合管理。 5、工程质量 工程质量应符合以下要求： （1）临时支护措施到位，安全设施齐全可靠；（2）无不合格工程； （3）规格质量、内在质量、附属工程质量、工程观感质量按GB50213 中对应的支护方式或施工形式验收，未明确规定的支护方式或施工形式参照执行。 6、 文明生产 作业场所卫生整洁，照明适度，工具、材料等放置整齐，设备设施保持良好状态。作业范围内支护完好，无失修巷道。三、评分方法 按表5-1评分、总分为100分。全部掘进工作面按所检查存在的问题进行扣分（不同工作面中出现的同样问题不重复扣分），小项分数扣完为止。项目内容中有缺项时按下列计算公式进行折算： A=B/B-C×D 式中A——本项折合分数； B——本项标准分数； C——缺项标准分数； D——本项检查实得分数。 表5-1煤矿掘进安全质量标准化评分表
2021新版工资总额与安全质量标准化等级挂钩制度Safety management refers to ensuring the smooth and effective progress of social and economic activities and production on the premise of ensuring social and personal safety. ( 安全管理) 单位：_______________________ 部门：_______________________ 日期：_______________________ 本文档文字可以自由修改
2021新版工资总额与安全质量标准化等 级挂钩制度 煤矿安全质量标准化工作是搞好安全生产的重要基础，是建立安全生产长效机制的根本途径。为进一步改善安全标准化工作，不断提高矿井安全质量标准化等级，保证职工的收入稳定增长，现特制定工资总额与安全质量标准化等级挂钩制度。 一、安全质量标准化等级分为两级：一级质量标准化矿井和二级质量标准化矿井。 二、努力达到二级质量标准化矿井，力争达到一级质量标准化矿井。 三、安全质量标准化矿井必须与工资总额挂钩。
四、每月从工资总额中提取出20%用于质量标准化的奖惩。达到一级质量标准化矿井奖工资总额的30%，达不到一级质量标准化矿井罚工资总额的20%。达到二级质量标准化矿井奖工资总额的20%，达不到二级质量标准化矿井，罚工资总额的30%. 五、安全质量标准化的的考核工作由调度室考核。调度室必须派专人负责次项工作。 六、对每次的考核结果必须及时记录，公布，并根据具体情况对达标科室和有突出贡献的人员进行奖励，对没有达标的科室及不积极主动的人员进行处罚。 七、每月由分管质量标准化的分管矿长主持，组织相关科室对矿井的各个小项进行打分并记录存档，作为评先的条件之一。 可在本位置填写公司名或地址 YOU CAN FILL IN THE COMPANY NAME OR ADDRESS IN THIS POSITION
第6部分采煤 一、工作要求 1.基础管理 （1）采区回采率达到设计要求。采煤工作面回采率符合规定，其中薄煤层工作面不低于97%，中厚煤层工作面不低于95%，厚煤层工作面不低于93%（综采放顶煤工作面不低于85%）； （2）有批准的采（盘）区设计，采（盘）区内同时生产的采煤工作面个数符合《煤矿安全规程》的规定；按规定编制《采煤工作面作业规程》； （3）采煤工艺符合国家规定，持续提高采煤机械化水平； （4）有支护质量、顶板动态监测制度，技术管理体系健全。 2.岗位规范 （1）操作规范，无违章指挥、违章作业、违反劳动纪律（以下简称“三违”）行为； （2）管理人员、技术人员掌握采煤工作面作业规程，作业人员熟知本岗位操作规程、作业规程及安全技术措施相关内容； （3）作业前进行安全确认。 3.质量与安全 （1）工作面的支护形式、支护参数符合作业规程要求； （2）工作面出口畅通，进、回风巷作业范围内支护完好，无失修巷道，巷道断面满足通风、运输、行人、设备安装、检修的需要；
（3）工作面通信、监测监控设备运行正常； （4）工作面安全防护设施和安全措施符合规定。 4.机电设备 （1）设备能力匹配，系统无制约因素； （2）不使用国家明令淘汰的设备； （3）设备完好，保护齐全； （4）乳化液泵站压力和乳化液浓度符合要求，并有现场检测手段。 5.文明生产 （1）作业场所卫生整洁，照明符合规定； （2）工具、材料等摆放整齐，管线吊挂规范，图牌板内容准确、清晰。 二、重大事故隐患判定 本部分存在以下重大事故隐患： （1）矿井全年原煤产量超过矿井核定生产能力110%的，或者矿井月产量超过矿井核定生产能力10%的； （2）矿井开拓、准备、回采煤量可采期小于有关标准规定的最短时间组织生产、造成接续紧张的，或者采用“剃头下山”开采的。 （3）超出采矿许可证规定开采煤层层位或者标高而进行开采的； （4）超出采矿许可证载明的坐标控制范围而开采的； （5）擅自开采保安煤柱的。
When the lives of employees or national property are endangered, production activities are stopped to rectify and eliminate dangerous factors. （安全管理） 单位：___________________ 姓名：___________________ 日期：___________________ 煤矿安全质量标准化考核评级办 法、评分办法(新版)
煤矿安全质量标准化考核评级办法、评分办 法(新版) 导语：生产有了安全保障，才能持续、稳定发展。生产活动中事故层出不穷，生产势必陷于混乱、甚至瘫痪状态。当生产与安全发生矛盾、危及职工生命或国家财产时，生产活动停下来整治、消除危险因素以后，生产形势会变得更好。"安全第一" 的提法，决非把安全摆到生产之上;忽视安全自然是一种错误。 第一条为深入开展全国煤矿安全质量标准化工作，根据《安全生产法》、《国务院关于进一步加强企业安全生产工作的通知》（国发[2010]23号）和《国务院安委会关于深入开展企业安全生产标准化建设的指导意见》（安委[2011]4号）等法律法规、规定，制定本办法。 第二条本办法适用于全国所有合法的生产煤矿，新建、技改（包括重组整合）煤矿参照执行。 第三条考核评级标准执行《煤矿安全质量标准化基本要求及评分方法（试行）》。 第四条申报安全质量标准化煤矿的基本条件： 1、证照齐全有效。 2、实现安全生产目标：考核年度内达到安全生产目标要求。 3、隐患排查治理：按照《安全生产事故隐患排查治理暂行规定》（国家安全监管总局令第16号）建立安全生产隐患排查治理体系。
质量标准化管理制度 为深入持久地开展矿井质量标准化工作，真正使质量标准化工作自始至终贯穿在安全生产的全过程当中去，实现安全、文明生产的目的，特制定本规定。 第一条:每年初，要结合矿井生产实际，制订出矿及各专业切实可行的年度达标规划，要明确奋斗目标，实施规划办法及措施步骤，要有保证规划实施的奖罚规定。 第二条:要建立健全质量管理体系，矿要成立质量标准化领导小组。各专业、区队要成立以区、科长为组长的专业质量领导小组，并按职责范围要求，认真正常开展工作。 第三条:采、掘、机、运、通、地测、调度、“两堂一舍”、标准管理专业，都必须按照《苏天能集团公司矿井质量标准》的要求，认真贯彻实施开展工作。任何专业和单位，不的擅自作主，在工作过程当中降低标准。 第四条:矿质量标准化领导小组每月要定期召开会议，研究分析、总结和布置质量标准化工作及规划措施的落实情况。 第六条:各采掘区队，每班都要设立兼职或专职质量验收员，对当班质量存在问题要提出整改意见，及时消除隐患，并做好班组质量验收记录及评估记录，以备查。凡是不认真负责，检查记录不实，出现问题的，要追究责任。同时，班与班之间要搞好质量交接，工程质量不合格的，下一班不得接收，区队不给予收尺、
计分。 第八条:采掘工作面从投产到竣工，要设立竣工验收制度。竣工验收由生产矿长组织，生产、技术、安监人员参加，达不要求的严禁工程结算。 第九条:安全生产现场管理人员，实行分区域、头面、划片承包质量安全管理制度。凡是分管区域内工程质量低劣，上岗进面又没发现，或发现而没监管督改的，追究当班安全生产现场人员的责任。 第十条:机电、运输、通风、溜子队的施工、安装，都要对照标准及施工措施施工。凡发现不按要求施工、安装的，除责令重新施工外，要追究其单位负责人的责任，并给予处罚。 第十一条:所有生产区域的文明管理，都要严格按照生产科的划定，做到所属区域内的标志、标牌、图牌板、管线、轨道辅设、风筒吊掛、隔爆、喷雾、栅栏设置、材料码放等符合规定。同时做到区域内无淤泥、无积水、无浮煤矸、无杂物，否则按标准化奖罚规定给予处罚。 第十二条:所属两堂一舍管理的生活区，每月定期检查三次。由分管矿长组织，要对照两堂一舍的标准严格检查。对饭菜质量低劣，且不能保证24小时有热饭、热菜；浴池水温不适、无淋浴、集体宿舍混住、卫生达不到窗明几净；所有矿属区域内脏、乱、臭的责任单位，按规定实施处罚。 第十三条:供应科所有购买的设备、配件、坑木，都要严格按
山东能源龙矿集团 矿井安全质量标准化基本要求及评分方法 （试行）
目录 龙矿集团发[2013]56 号 (1) 山东能源龙矿集团矿井安全质量标准化检查考评实施意见 (2) 龙矿集团发[2013]57 号 (5) 龙口矿业集团有限公司矿井安全质量标准化考核评级办法(试行) (6) 龙口矿业集团有限公司矿井安全质量标准化基本要求及评分方法(试行) .8 第1 部分总则 (8) 第2 部分通风 (9) 第3 部分地测防治水 (19) 第4 部分采煤 (25) 第5 部分掘进 (28) 第6 部分机电 (32) 第7 部分运输 (37) 第8 部分安全管理 (41) 第9 部分职业卫生 (45) 第10 部分应急救援 (49) 第11 部分调度 (52) 第12 部分信息化 (58) 第13 部分地面设施 (67) 龙口矿业集团有限公司“三创”活动基本要求及评分方法 (71) 附件1-1 “精品采煤工作面”必备条件 (72) 附件1-2 “精品掘进工作面”必备条件 (75) 附件1-3 “精品峒室(机房)”必备条件 (79) 附件2 “样板采区”必备条件 (81) 附件3 “明星区队”必备条件 (83)
山东能源龙矿集团矿井安全质量标准化检查考评实施意见 为全面贯彻落实煤安监行管[2013]1 号《国家煤矿安全监察局关于印发〈煤矿安全质量标准化考核评级办法(试行)〉和〈煤矿安全质量标准化基本要求及评分办法(试行)〉的通知》，持续提升全公司矿井安全质量标准化管理水平，构筑安全生产长效机制，根据国家煤矿安全监察局、山东省煤炭工业局有关指导性文件精神，结合龙矿集团有关规定和要求，特制订本实施意见。 一、组织机构 (一)公司成立矿井安全质量标准化管理、检查考评领导小组。 组长：袁景安张若祥 副组长：杨跃林崔常兴石广超彭大华柳玉兴 成员：总经理助理、安全生产专业副总师，生产技术处、通防管理处、安全监察局、机(油)电管理处、经济运行处，人力资源部、信息中心、工程管理处、救护大队、防疫站、技术中心、财务部、董事会(党委)办公室、总经理办公室、审计考核部、党委组宣部和工会等部门负责人。 (二)考评领导小组下设办公室。办公室设在生产技术处，处长、副处长分别兼任正、副主任。日常工作由标准化管理科负责。办公室职责： 1、实施牵头考评职能； 2、组织日常动态检查、季度集中检查考评； 3、负责汇总各专业处室日常检查、考核结果，纳入季度、年度考评； 4、收集检查考评实施过程中存在的问题，运行考评协调机制； 5、建立检查考评(日常、月度、季度、年度)档案； 6、考评结果报经集团公司考评领导小组审核同意后，实施奖惩兑现。 二、工作目标 ⒈各生产矿井安全质量标准化保持“省级”，力争达到“国家级”； 集团公司达到安全质量标准化公司标准。 基建矿井参照标准达标和检查，不参与考评。 ⒉梁家矿、北皂矿保持行业级及以上安全高效矿井水平。 ⒊实现“三创”活动年度规划目标：年度内各矿精品工程达到 40%；明星区队达到 20%；样板采区力争达到1 个。外部开发矿井暂不考核，可参照执行。 三、考评范围 龙矿集团所属矿井单位。 四、考评方式 (一)采取专业日常动态检查和公司季度集中检查考评的方式。实行专业动态检查与联合集中检查相结合、重点检查与全面验收相结合、资料检查与现场落实相结合，实行全动态、全方位、全覆盖考评，要求做到“六查”：查思想、查领导、查现场、查隐患、查管理、查制度。 (二)按照专业分工，依据《龙矿集团矿井安全质量标准化基本要求和评分办法》，组织对各矿井单位日常动态考评，季度末组织一次集中考评。 (三)各处室要加强对分管范围内的安全质量标准化管理动态考评工作。日常考评由各处室根据考评办法和考评内容组织实施，按照百分制每月考评一次，并将考评结果报送标准化管理科汇总，作为季度末集中考评的依据。 (四)集团公司督察组对季度集中考评进行查后督查，重点对检查考评质量、真实性、准确性予以评价，对工作不认真、不公正、弄虚作假等现象，发现一起追究一起。 五、考评内容、标准和方法 1、参与考评的专业为：通风、地测防治水、采煤、掘进、机电、运输、安全管理、职业卫生、应急救援、调度、信息、地面设施等 12 个专业。 2、考评标准：《龙矿集团矿井安全质量标准化考核评级办法(试行)》和。《龙矿集团矿井安全质量标准化 基本要求及评分办法(试行)》。 3、各专业得分由日常考核得分、季度考评得分构成，以百分制按比例计算：本部矿井日常占 60%、季度占40%；外部矿井日常占 40%，季度考评占 60%；以此计算考核得分，排定名次。各专业检查过程中要综合考虑现 场现实条件和管理实际水平。 六、考评奖惩 资金来源：按照上级有关规定提取、使用。矿井安全质量标准化检查罚款纳入奖励基金，一并用于安全质
马蹄沟煤矿安全质量标准化考试题（卷） 出题单位：马蹄沟煤矿 专业：综合 一、填空题：（每题2分，共30分） 1、安全质量标准备化考核分为11个专业，即（ 采煤 ）、掘进、机电、运输、一通三防、地测防治水、信息调度、（ 安全管理 ）、地面设施、（应急救援）和职业健康，各专业采用（百分制）评分。 2、生产矿井必须有（2）个能行人的通达地面的安全出口，采煤工作面必须有（2）个畅通的安全出口，分别是（回风巷）、（皮带巷）；。 3、煤矿井下安全避险“六大系统”（监测监控系统）（人员定位系统）（紧急避险系统）（压风自救系统）（供水施救系统）（通讯联络系统）。 4、安全生产方针是（安全第一，预防为主，综合治理）。 5、局扇与掘进工作面的电气设备采用( 三专两闭锁 )。 6、爆破作业必须执行(一炮三检)和(三人连锁放炮)制度。 7、矿井主要通风机的反风设施按《规程》规定定期检查，每年进行(一)次反风演习。 8、机电设备综合完好率不低于（90%）；大型在用固定设备完好率（100%）；防爆电气设备(包括本安设备)及小型电器防爆率（100%）；小型电气合格率不低于（95%）。 9、现场作业人员操作规范，执行（敲帮问顶）制度，无（三违）行为。 10、管理和技术人员掌握专业技术，作业人员掌握熟知本岗位（规程） 和（ 技术措施）的内容。 11、安全管理机构和安全质量标准化管理机构主要负责(安全监督检查) (安全质量标准化)工作。 12、避险设施要求井下所有工作人员需配备（自救器）；井下应设置（避灾路线）和标识；建设井下（紧急避险）设施。 13、雨季“三防”是指（防洪）、（防排水）、（防雷电）。 14、矿井必须有独立的调度室，并实行（24）小时应急值守。 15、有工作面（地质）及水文地质预报，矿地质部门每月至少有（一）次预报，预报必须经矿总工程师(矿技术负责人)签字认可并有向相关(部门)和(施工单位)报告的记录。 二、选择题：（每题2分，共20分） 1、下面哪项（ D ）不是井工煤矿安全质量标准化体系中包括的内容部分。 A 地测防治水、 B 采煤、 C 地面设施、 D 爆破 2、采煤工作面必须至少有 （ B ）个畅通的安全出口。 A 1 、 B 2、 C 3、 D 1个或者2个 3、工作面温度超过( C )采取降温措施。 A 23、 B 25、 C 26、 D 30 4、煤矿用防爆电气设备必须有（ C ）。 A ，设备标志牌 B ，设备铭牌 C ，防爆合格证 5、采煤工作面回采结束后，必须在（ C )内撤出一切设备、材料，并进 行永久性封闭。 A 、24小时 B 、48小时 C 、45天 D 、60天 单位： 姓名： 职务： -------------------------------密----------------------------------封----------------------------线-------------------------
浅谈煤矿安全质量标准化建设 (最新版) Enterprises should establish and improve various safety production rules and regulations in accordance with national safety production laws and regulations. ( 安全管理 ) 单位：______________________ 姓名：______________________ 日期：______________________ 编号：AQ-SN-0317
浅谈煤矿安全质量标准化建设(最新版) 煤矿安全质量标准化是煤炭行业在几十年质量标准化工作实践基础上不断创新，逐步发展完善形成的一套行之有效的安全质量管理体系和方法。它突出安全生产的重要地位，强调安全生产工作的规范化、标准化，以及安全与质量的高度统一性。煤矿安全质量标准化就是煤炭企业自觉贯彻落实安全生产法律法规和国家、行业的技术标准规范、建立健全包括企业内部安全生产日常管理等在内的每个环节的安全生产工作标准、安全规程和岗位责任制，实现与安全生产相关联的每个岗位管理的标准化和规范化。煤矿安全质量标准化工作是一项长期的、复杂的系统工程，煤矿井下地质条件相对复杂，点多、面广、自然灾害多，以及煤矿企业特有的用工性质决定了搞好安全质量标准化工作的艰巨性、复杂性。在当前新形势下，煤矿安全质量标准化的内涵应该是:矿井的采煤、掘进、机电、运输、
通风、地测防治水等主要生产环节和相关岗位的安全质量工作，必须符合法律、法规、规章、规程等规定，达到和保持一定的标准，使煤矿始终处于安全生产的良好状态，以适应保障矿工的生命安全、身体健康和矿井的健康发展。 一、提高安全质量标准化思想认识 思想认识决定人们的行为。煤矿企业首先要切实提高广大干部、职工对安全质量标准化的认识，实现由被动接受向主动认识和提高的转变。必须正确处理好安全质量标准化与生产、效益和其它工作的关系。要广泛深入地开展好安全质量标准化宣传教育，统一思想，强化职工安全质量意识；认真贯彻执行“安全第一、预防为主”的方针，要让企业的各级领导从思想上认识到开展好安全质量标准化工作同其前途、命运紧密相连，保护好广大职工的生命与健康是搞好一切工作的前提与基础。安全与质量、安全与生产、安全与效益之间存在着相辅相成、密不可分的内在联系。讲安全必须讲质量，抓质量标准化必须抓安全工作标准化，生产与安全质量密不相悖，安全质量出效益的观点任何时候都不能偏废。
安全质量标准化图牌板管理制 度(最新版) Safety management is an important part of enterprise production management. The object is the state management and control of all people, objects and environments in production. ( 安全管理 ) 单位：______________________ 姓名：______________________ 日期：______________________ 编号：AQ-SN-0904
安全质量标准化图牌板管理制度(最新版) 为了进一步搞好我公司的安全质量标准化工作，规范标准化图牌板的使用、保管，保持标准化工作成果，根据“精品工程”的标准要求，特制定我公司标准化图牌板管理制度如下： 1、标准化图牌板的管理范围： 采煤队：转载机巷标语牌，标准化“四图”，支柱编号牌，小绞车标志牌、放行牌、警示牌，路标指示牌，物料标志牌； 掘进队：文明生产区域内的所有牌板及区域外小绞车牌板和压风机牌板； 运输区：斜井口、斜井底、井底车场标准化牌板，运输大巷、回风大巷、轨道巷、坡上、坡下标准化牌板； 通风区：全公司井下瓦斯检查牌，隔爆说明牌，风筒编号牌，
瓦斯巡监系统牌等通风标准化管理牌板； 井下队：井下配电室、泵房标准化牌板等； 机运队：所管辖皮带巷内的所有标准化牌板； 运行队：副井绞车房、地面变电所、主扇房内等标准化牌板； 调度室及监控中心：各种监测监控分站标准化牌板； 工会：安全文化长廊标准化牌板； 2、各单位管辖的标准化牌板，必须保持干净卫生，牌板上不得有煤尘和油污等，否则，每处处罚10元。 3、采煤队“四图”必须悬挂在转载机头处，高度一致，四块牌板不留间距悬挂，否则，每处处罚10元。 4、掘进队“四图一表”距工作面迎头的距离不得超过200米悬挂，否则，每处处罚10元。 5、所有采掘工作面及皮带巷的标准化牌板（除小绞车警示牌、安全标语牌外）悬挂高度（牌板上沿）均距巷道底板1.8米，否则每处处罚10元。 6、采煤队随着工作面的推进，标准化图牌板必须及时回收升井，
安全质量标准化管理办法(新 版) Safety management is an important part of enterprise production management. The object is the state management and control of all people, objects and environments in production. ( 安全管理 ) 单位：______________________ 姓名：______________________ 日期：______________________ 编号：AQ-SN-0601
安全质量标准化管理办法(新版) 为深化质量标准化建设，夯实安全生产基础，构建安全生产长效机制，根据国家煤矿安监局关于印发《煤矿安全质量标准化考核评级办法(试行)》和《煤矿安全质量标准化基本要求及评分办法(试行)》（煤安监行管〔2013〕1号）的通知以及河南能源关于标准化建设的有关规定，结合云顶煤业实际，经研究，制定本办法。 一、指导思想 牢固树立“以人为本，安全发展”理念，积极推行“012345”安全管理模式建设，坚持科技引领、创新管理，重现场、重实效、重落实，全面落实安全管理“红线”、薄弱环节管控、岗位流程化作业的“三步走”战略，努力实现安全管理程序化，质量达标动态化，行为操作规范化的“三化”工作目标。按照“朴素、实用、有效”
的原则，强力推动质量标准化工作持续纵深发展，全面实现岗位达标、系统达标和动态达标，实现矿井整体安全管理水平和安全质量标准化水平进一步提高。 二、组织领导 为加强对质量标准化工作的领导，公司成立质量标准化工作领导小组。 组长：总经理党委书记 副组长：安全副总经理党委副书记生产副总经理机电副总经理总工程师财务总监 成员：公司业务系统副总师、机关科室负责人 领导小组下设办公室，办公室设在安检科，办公室主任由安检科科长兼职。办公室具体负责公司质量标准化工作的规划、督察、考核。公司的质量标准化工作由总经理、党委书记总负责；具体工作由安全副总经理督办；安全管理专业由安全副总经理负责；采煤、掘进、调度专业由生产副总经理负责；机电、运输专业由机电副总经理负责；通风、地测防治水、应急救援专业由总工程师负责；职
运裕公司安全质量标准化考试题（卷） 单位：姓名：职务： -------------------------------密----------------------------------封----------------------------线------------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 出题单位：安监处 专业：采煤 题号一二三四五六合计标准分50分10分10分15分5分10分100分得分 一、填空题：（每空0.5分，共50分） 1、安全质量标准备化考核分为11个专业，即采煤、掘进、机电、运输、一通三防、地测防治水、信息调度、（应急救援）、（地面设施）、安全管理和（职业健康），各专业采用（百分制）。 2、采煤安全质量标准化考核共（6）大项，满分（100）分。 3、有工作面（地质）及（水文地质）预报，矿地质部门每月至少有（一）次预报，预报必须经矿总工程师(矿技术负责人)签字认可并有向相关(部门)和(施工单位)报告的记录。 4、矿井必须具有的“六证一照”是：（采矿许可证）、（安全生产许可证）、（煤炭生产许可证）、（矿长资格证）、（矿长安全资格证）、（营业执照）等证照。 5、山西省井工煤矿安全质量标准化矿井等级分为（一、二、三）级。 6、矿井采煤方法必须实现（正规壁式开采）或按批准的（采煤方法）开采，（布局）合理，（采掘关系）正常。 7、采煤工作面开采前必须编制作业规程，作业规程必须符合(《煤矿安全规程》)规定和技术规范要求。 8、生产现场有（作业规程）和经审批合格正在使用的（安全技术）措
( 安全技术 ) 单位：_________________________ 姓名：_________________________ 日期：_________________________ 精品文档 / Word文档 / 文字可改 机电专业安全质量标准化细化 标准(最新版) Technical safety means that the pursuit of technology should also include ensuring that people make mistakes
机电专业安全质量标准化细化标准(最新 版) 一、电气设备防爆 ㈠防爆电气设备入井前，必须由专职的经培训考试合格的防爆检查员进行检查，合格后应填写入井设备验收合格证，将入井合格证压膜贴在电气设备正面。 ㈡防爆电气设备有下列情况之一者即为失爆： 1、防爆电气外壳焊缝开焊、裂纹、严重变形长度超过50mm，凸凹深度超过5mm。 2、采用螺栓紧固的隔爆接合面缺螺钉和弹簧垫或螺母，弹簧垫圈未压平或螺栓松动，螺栓或螺孔滑扣。 3、隔爆接合面的间隙 （1）平面接合面和止口接合面在外壳容积≤100cm3，宽度范围
6≤L＜12.5时，间隙超过0.3mm；宽度范围12.5≤L＜25时，间隙超过0.4mm；宽度范围25≤L时，间隙超过0.5mm；平面接合面和止口接合面在外壳容积＞100cm3，宽度范围12.5≤L＜25mm时，间隙超过0.4mm；宽度范围25≤L时，间隙超过0.5mm （2）电机滚动轴承的转轴在外壳容积≤100cm3，宽度范围6≤L ＜12.5时，间隙超过0.45mm；宽度范围12.5≤L＜25时，间隙超过0.6mm；宽度范围25≤L时，间隙超过0.75mm；电机滚动轴承的转轴在外壳容积＞100cm3，宽度范围12.5≤L＜25时，间隙超过0.6mm；宽度范围25≤L时，间隙超过0.75mm。 4、隔爆接合面的粗糙度平均超过6.3微米。 5、隔爆接合面采用螺钉连接未满扣，沉孔螺纹啮合少于6扣，螺母连接螺纹未露出螺母3扣。 6、一个电缆引入装置穿入多根电缆；不用的电缆引入装置进线孔未用厚度2mm以上无锈钢制挡板封堵严密；连接电缆未使用合格的密封圈或老化、变质、失去弹性；密封圈割开套在电缆上；一个引入装置内用多个密封圈；密封圈没有完全套在电缆护套上；密封
新版质量标准化综合试 题 -CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
2 马蹄沟煤矿安全质量标准化考试题（卷） 出题单位：马蹄沟煤矿 专业：综合 一、填空题：（每题2分，共30分） 1、安全质量标准备化考核分为11个专业，即（ 采煤 ）、掘进、机电、运输、一通三防、地测防治水、信息调度、（ 安全管理 ）、地面设施、（应急救援）和职业健康，各专业采用（百分制）评分。 2、生产矿井必须有（2）个能行人的通达地面的安全出口，采煤工作面必须有（2）个畅通的安全出口，分别是（回风巷）、（皮带巷）；。 3、煤矿井下安全避险“六大系统”（监测监控系统）（人员定位系统）（紧急避险系统）（压风自救系统）（供水施救系统）（通讯联络系统）。 4、安全生产方针是（安全第一，预防为主，综合治理）。 5、局扇与掘进工作面的电气设备采用( 三专两闭锁 )。 6、爆破作业必须执行(一炮三检)和(三人连锁放炮)制度。 7、矿井主要通风机的反风设施按《规程》规定定期检查，每年进行(一)次反风演习。 8、机电设备综合完好率不低于（90%）；大型在用固定设备完好率（100%）；防爆电气设备(包括本安设备)及小型电器防爆率（100%）；小型电气合格率不低于（95%）。 9、现场作业人员操作规范，执行（敲帮问顶）制度，无（三违）行为。 10、管理和技术人员掌握专业技术，作业人员掌握熟知本岗位（规程）和（ 技术措施）的内容。 11、安全管理机构和安全质量标准化管理机构主要负责(安全监督检查) (安全质量标准化)工作。 12、避险设施要求井下所有工作人员需配备（自救器）；井下应设置（避灾路线）和标识；建设井下（紧急避险）设施。 13、雨季“三防”是指（防洪）、（防排水）、（防雷电）。 14、矿井必须有独立的调度室，并实行（24）小时应急值守。 15、有工作面（地质）及水文地质预报，矿地质部门每月至少有（一）次预报，预报必须经矿总工程师(矿技术负责人)签字认可并有向相关(部门)和(施工单位)报告的记录。 二、选择题：（每题2分，共20分） 1、下面哪项（ D ）不是井工煤矿安全质量标准化体系中包括的内容部分。 A 地测防治水、 B 采煤、 C 地面设施、 D 爆破 2、采煤工作面必须至少有 （ B ）个畅通的安全出口。 A 1 、 B 2、 C 3、 D 1个或者2个 3、工作面温度超过( C )采取降温措施。 A 23、 B 25、 C 26、 D 30 4、煤矿用防爆电气设备必须有（ C ）。 A ，设备标志牌 B ，设备铭牌 C ，防爆合格证 单位： 姓名： 职务： -------------------------------密----------------------------------封----------------------------线-------------------------
平禹四矿采煤线安全质量标准化考试题（卷） 一、填空题：（每空0.5分，共50分） 1、安全质量标准备化考核分为11个专业，即采煤、掘进、机电、运输、一通三防、地测防治水、信息调度、（应急救援）、（地面设施）、安全管理和（职业健康），各专业采用（百分制）。 2、采煤安全质量标准化考核共（6）大项，满分（100）分。 3、有工作面（地质）及（水文地质）预报，矿地质部门每月至少有（一）次预报，预报必须经矿总工程师(矿技术负责人)签字认可并有向相关(部门)和(施工单位)报告的记录。 4、矿井必须具有的“六证一照”是：（采矿许可证）、（安全生产许可证）、（煤炭生产许可证）、（矿长资格证）、（矿长安全资格证）、（营业执照）等证照。 5、山西省井工煤矿安全质量标准化矿井等级分为（一、二、三）级。 6、矿井采煤方法必须实现（正规壁式开采）或按批准的（采煤方法）开采，（布局）合理，（采掘关系）正常。 7、采煤工作面开采前必须编制作业规程，作业规程必须符合(《煤矿安全规程》)规定和技术规范要求。 8、生产现场有（作业规程）和经审批合格正在使用的（安全技术）措施。 。 9、现场作业人员操作规范，执行（“敲帮问顶”）制度，无（“三违”）行为。 10、管理和技术人员掌握（专业）技术，作业人员掌握熟知本岗位（规程）和（技术措施）内容。 11、支架初撑力不低于规定值的（80%），并且现场有检测手段(综放工作面检查前柱)。 12、支架要排成一条直线其偏差不得超过（±50mm)(50M拉线)。架间空隙不超过(200mm)，中心距按作业规程要求，偏差不超过(±100mm)。 13、机道梁端至煤壁顶板冒落高度不大于(300mm)。 14、安全出口的高度不得低于(1.8m)，宽度不得小于(0.8m)，上、下出口超前支护符合《煤矿安全规程》要求，并在（作业规程）中明确规定。 15、单体柱支设必须迎山有力、初撑力符合规定，柱体完好，并有可靠的(防倒)措施；无空载失效柱；底软时必须(穿鞋)支设。 16、顺槽输送机机头机尾、两巷小绞车有牢固的(压(戗)柱)或(地锚)；行人通过的输送机机尾加(盖板)；输送机行人跨越处有(过桥)；安全间距符合规定。 17、支架、支柱与条件相适应；支护强度选择有科学依据，支架工作阻力；坚硬顶板不低于(6000kN)，采深800m以上的不低于(4000kN)。 18、液压系统完好，乳化液浓度3%~5%、泵站压力不低于(30MPa)，现场有乳化液浓度(检测手段)和(定期清洗检修)记录；支架立柱、阀组、胶管无漏、串液，部件不缺损。 19、工作面温度超过(26℃)采取降温措施。 20、安全质量标准化煤矿分为（三）个等级。 21、煤矿安全生产方针是（安全第一）、（预防为主）、（综合治理）。 22、矿井采煤机械化程度不低于（75℅）。 23、采煤安全质量标准化岗位规范包括（持证上岗）、（规范作业）、（专
YF-ED-J7259 可按资料类型定义编号 安全质量标准化管理办法 实用版 In Order To Ensure The Effective And Safe Operation Of The Department Work Or Production, Relevant Personnel Shall Follow The Procedures In Handling Business Or Operating Equipment. （示范文稿） 二零XX年XX月XX日
安全质量标准化管理办法实用版 提示：该管理制度文档适合使用于工作中为保证本部门的工作或生产能够有效、安全、稳定地运转而制定的，相关人员在办理业务或操作设备时必须遵循的程序或步骤。下载后可以对文件进行定制修改，请根据实际需要调整使用。 为深化质量标准化建设，夯实安全生产基础，构建安全生产长效机制，根据国家煤矿安监局关于印发《煤矿安全质量标准化考核评级办法(试行)》和《煤矿安全质量标准化基本要求及评分办法(试行)》（煤安监行管〔2013〕1号）的通知以及河南能源关于标准化建设的有关规定，结合云顶煤业实际，经研究，制定本办法。 一、指导思想 牢固树立“以人为本，安全发展”理念，积极推行“012345”安全管理模式建设，坚持
科技引领、创新管理，重现场、重实效、重落实，全面落实安全管理“红线”、薄弱环节管控、岗位流程化作业的“三步走”战略，努力实现安全管理程序化，质量达标动态化，行为操作规范化的“三化”工作目标。按照“朴素、实用、有效”的原则，强力推动质量标准化工作持续纵深发展，全面实现岗位达标、系统达标和动态达标，实现矿井整体安全管理水平和安全质量标准化水平进一步提高。 二、组织领导 为加强对质量标准化工作的领导，公司成立质量标准化工作领导小组。 组长：总经理党委书记 副组长：安全副总经理党委副书记生产副总经理机电副总经理总工程师财
建筑施工安全质量标准化管理实施细则 青岛一建集团有限公司
建筑施工安全质量标准化管理实施细则 第一章 总则 第一条 为了提高公司建筑施工现场安全生产、文明施工管理水平，促进施工现场管理科学化、规范化和标准化，依据《建筑法》《安全生产法》和《建设工程安全生产管理条例》等有关法律、法规，按照国家建设部《关于开展建筑施工安全质量标准化工作的指导意见》要求，结合公司在建工程实际情况，制定本实施细则。 第二条 本实施细则适用于本公司建筑工程的施工现场管理。 第三条 公司安全部对公司建筑活动实施统一管理，负责建设工程安全生产的监督，指导项目部开展建筑施工安全质量标准化工作。安全部具体监督落实和管理施工现场安全质量标准化工作，定期检查和日常巡查施工现场安全质量标准化工作和安全施工措施的落实执行情况。 第四条 加强综合整治，安全部联合工程部、生产计划部等部门按照各自的职责分工，共同做好施工现场监督检查工作。 第五条 本实施细则是规范建筑施工现场各方责任主体行为，明确建设各方责任主体的职责和要求，考核建筑施工现场标准化管理的基本依据。 第六条 建筑施工现场管理，除应遵循本实施细则外，还应符合国家、省、青岛市有关法律法规和规范性文件要求。 第七条 项目部各方责任主体应建立和完善组织机构，并设专人负责施工现场标准化管理工作。 第八条 项目部各方责任主体应加强科学技术研究和先进技术的推广应用，推进建筑工程的科学管理。 第九条 本实施细则为管理性标准，有关技术要求应执行相应的技术标准和规范。 第二章安全管理基本术语 第十条 安全生产——为预防生产过程中发生事故而采取的各种措施和活动。本实施细则是指建筑施工过程中的安全生产。即为了确保职工在施工过程中的安全和设备、设施的安全可靠而采取的安全技术措施和安全管理活动。 第十一条 安全技术措施——为实现安全生产，在防护上、技术上和管理上采取的措施，所有建筑工程的施工组织设计（施工方案），都必须有安全技术措施。
附件2 煤矿安全生产标准化基本要求及评分方法 （试行） 第1部分总则 一、基本条件 安全生产标准化达标煤矿应具备以下基本条件： 1.采矿许可证、安全生产许可证、营业执照齐全有效； 2.矿长、副矿长、总工程师、副总工程师（技术负责人）在规定的时间内参加由煤矿安全监管部门组织的安全生产知识和管理能力考核，并取得考核合格证； 3.不存在各部分所列举的重大事故隐患; 4.建立矿长安全生产承诺制度，矿长每年向全体职工公开承诺，牢固树立安全生产“红线意识”，及时消除事故隐患，保证安全投入，持续保持煤矿安全生产条件，保护矿工生命安全。 二、等级设定 煤矿安全生产标准化等级分为一级、二级、三级。一级为最高级。 三、工作要求 1.建立和保持 煤矿是创建并持续保持标准化动态达标的责任主体。应通过实施安全风险分级管控和事故隐患排查治理、规范行为、控制质量、提高装备和管理水平、强化培训，使煤矿达到并持续保持安全生产标准化等级标准，保障安全生产。 2.目标与计划 制定安全生产标准化创建年度计划，并分解到相关部门严格执行和考核。 3.组织机构与职责
有负责安全生产标准化工作的机构，各单位、部门和人员的安全生产标准化工作职责明确。 4.安全生产标准化投入 保障安全生产标准化经费，持续改进和完善安全生产条件。 5.技术保障 健全技术管理体系，完善工作制度，开展技术创新；作业规程、操作规程及安全技术措施编制符合要求，审批手续完备，贯彻执行到位。 6.现场管理和过程控制 加强各生产环节的过程管控和现场管理，定期开展安全生产标准化达标自检工作。 7.持续改善 煤矿取得的安全生产标准化等级，是煤矿安全生产标准化工作主管部门在考核定级时，对煤矿安全生产标准化工作现状的测评，是对煤矿执行《安全生产法》等相关规定组织开展安全生产标准化建设情况的考核认定。取得等级的煤矿应在取得的等级基础上，有目的、有计划地持续改进工艺技术、设备设施、管理措施，规范员工安全行为，进一步改善安全生产条件，使煤矿持续保持考核定级时的安全生产条件，并不断提高安全生产标准化水平，建立安全生产标准化长效机制。 四、煤矿安全生产标准化体系 1.井工煤矿 （1）安全风险分级管控。考核内容执行本方法第2部分“安全风险分级管控”的规定； （2）事故隐患排查治理。考核内容执行本方法第3部分“事故隐患排查治理”的规定。 （3）通风。考核内容执行本方法第4部分“通风”的规定。 （4）地质灾害防治与测量。考核内容执行本方法第5部分“地质灾害防治与测量”的规定。 （5）采煤。考核内容执行本方法第6部分“采煤”的规定。 （6）掘进。考核内容执行本方法第7部分“掘进”的规定。 （7）机电。考核内容执行本方法第8部分“机电”的规定。 （8）运输。考核内容执行本方法第9部分“运输”的规定。 （9）职业卫生。考核内容执行本方法第10部分“职业卫生”