收稿日期:20050808
基金项目:国家科技部资金项目(2005EA 106-26);广西农科院科技发展基金项目(2002006)作者简介:陈少珍(1958),女,广西博白县人,工程师,主要从事食用菌育种、栽培和植物组织培养工作。
兰花组织培养中常见问题及解决方法
陈少珍, 卜朝阳, 闭志强, 周嘉运, 蒋慧萍
(广西农科院生物技术研究所, 南宁 530007)
摘要:对从台湾引进的兰花品种在组培苗生产过程中出现的褐化、黄化、污染、死亡等问题的原因进行分析,并提出采用适宜的外植体材料和适宜的无机盐成分、蔗糖浓度和激素水平,适当调节pH 、光照和温度,使用适当的外植体消毒剂种类、浓度和处理时间,按照获取无菌外植体的基本操作和外植体灭菌操作规程等措施,可有效减少兰花组培苗的褐化、黄化、污染和死亡现象的发生。
关键词:兰花;组培苗;褐化;黄化;污染;死亡;解决方法中图分类号:S 682.31
文献标识码:B 文章编号:1002—8161(2006)01-0072-03
Comm on problem s i n tissue culture of orch id and the ir solution s
CH EN Shao 2zhen ,B u Zhao 2yang ,B i Zh i 2qiang ,ZHUO J ia 2yun ,J I AN G H u i 2p ing
(Institu te of B iotechnology ,Guang x i A cad e m y of A g ricu ltu ral S ciences ,N anning 530007)
Abstract :T he paper analyzed the causes of common p roblem s of brow ning ,yellow ing ,contam inating and dy 2ing in the p rocess of p roducing tissue 2cultured p lantlets of o rch id varieties introduced from T ai w an .T he m easures of app lying the p roper exp lants ,ino rganic m ineral elem ents ,sucro se concentrati on ,ho r mone levels ,regulating the pH value ,ligh ting and temperature ;p roper type and concentrati on of antisep tic ,ti m e of antisep tic treatm ent fo r exp lants etc .w ere recomm ended to reduce the occurrence of the m enti oned p roblem s .
Key words :o rch id ;tissue 2cultured p lantlet ;brow ning ;yellow ing ;contam inating ;dying ;so luti ons
20世纪70年代以后,随着兰花组织培养技术
的日趋成熟和完善,世界各地的兰花组织培养研究和产业化应用进入了迅速发展阶段,目前我国兰花试管苗、温室大棚苗的产业化发展已成规模,组培快繁的商业性应用也正在全国各省市蓬勃发展。虽然兰花组织快繁技术已成熟,但在组培过程中常会出现许多问题,迫切需要解决。现就从台湾引进的兰花品种(蝴蝶兰、大花惠兰、文心兰、卡特兰、石斛兰等)在组培苗生产过程中出现的褐化、黄化、污染、材料死亡等问题的原因归纳如下,并提出解决方法。
1 外植体材料和增殖材料褐化问题
1.1 发生原因
1.1.1 品种(如:M 811、M 802、M 8124、M 8126等)。
不同的兰花品种之间常有很大差异,一般来说,外植体材料中单宁类和多种羟酚类化合物含量高的品种
易引起褐化。
1.1.2 外植体年龄。通常是幼嫩部位产生褐化较轻,随着组织的老龄化而褐化加重。
1.1.3 外植体取样时间和取材部位。一般在春夏季,尤其是在春季采取生长旺盛部位作外植体较好。1.1.4 培养基成分。在初级培养阶段,选择适宜的
无机盐成分、蔗糖浓度和激素浓度对防止褐化也能起到较好的作用。
1.1.5 外植体大小及受伤害程度。外植体组织受伤害程度直接影响褐变。在切取易褐变的兰花外植体时,应尽可能减小伤口面积,伤口剪切要尽可能平整;同时还要考虑外植体的粗、细度,材料切取以细短,粗长为原则。
1.1.6 环境pH 。试验表明,pH 5.5时的成活率明显比pH 4.6～5.0时高。因此,在培养时培养基应保持较高的pH 。
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1.1.7 温度和光照。在培养初期,较高的温度和光照对易产生褐化的兰花培养不利。
1.1.8 培养方式。培养方式包括外植体在培养基中的放置方式和材料转瓶周期、材料接种密度等。
1.1.9 外植体表面消毒剂种类及使用浓度和消毒时间。
1.2 解决方法
1.2.1 采用适宜的外植体。在切取外植体之前对母株或枝条进行遮光处理20d左右,或把母株置于温室内培养,不要喷水(喷水易感染病菌)。因为酶在自然光照条件下生长的植物体内非常活跃,从这样的植株上取得外植体很容易发生褐变,而把取材母株设置在黑暗或弱光条件下生长,植株组织内光诱导的那些参与酚类合成的氧化酶活性就大大减弱,以致酚类化合物的合成减少,其氧化产物醌类也相应减少,使褐变得到控制[1]。
1.2.2 使用适宜的无机盐成分、蔗糖浓度(1%～2%)、激素水平、温度及在黑暗条件下培养可以减轻材料的褐化。
1.2.3 对那些褐化严重的品种,如M811、M802、M8124、M8126,最好在培养基中加入适量抗氧化剂和一些抑制剂,如:维生素C、柠檬酸、半胱氨酸盐酸盐、谷胱甘肽和巯基乙酸、蛋白质、蛋白质水解产物、硫脲、二氨基二硫代甲酸钠、亚硫酸氢钠、氰化钾、二硫苏糖醇多氨等,具体加入那种抗氧化剂和抑制剂视品种而定。
1.2.4 尽可能减少新鲜外植体材料切割、接种操作过程中在空气中暴露的时间,以减轻外植体的褐化。
1.2.5 降低环境的pH。因为多酚氧化酶的活性在pH6.5时最大,随着pH的降低活性下降[2]。在培养基中适量加入维生素C或柠檬酸等还原剂,也能降低pH,但不能低于5.5,因为培养基在pH5.2～5.8范围内兰花都能正常生长,以pH5.5为宜,所以加入还原剂在降低pH的同时,也能降低多酚氧化酶的活性,从而减轻材料的褐化。
1.2.6 对褐化严重的兰花品种,将材料反复转移(或连续转移)到新培养基上和在培养基中加入吸附剂活性炭(0.1%～2.5%)或5～20g L的PV P或加倍Fe-ED TA(螯合铁)的用量,具体加入那种成分视品种而定。在使用吸附剂吸附兰花有毒酚类的同时,也会吸附培养基中的生长调节剂,因此在添加有活性炭的培养基中,生长调节剂的浓度也应适当提高,以利芽球分化。1.2.7 使用适当的外植体消毒剂种类、浓度和处理时间。常用消毒剂有氯化汞和次氯酸钠,但氯化汞易引起褐化,次氯酸钠次之,其浓度与褐化程度呈正相关。处理时间越长,消毒效果越好,但褐化也越严重,因而要正确选择消毒剂浓度及消毒时间,才能保证较高的外植体存活率。
1.2.8 对褐化严重的兰花可适当降低培养温度,以15～25℃为宜,在此温度下培养7～14d。不能长期低温培养,长期低温培养虽然可以减少褐化现象,但是组培苗存活率低,分化率亦低。
1.2.9 大部分兰花品种对光照极为敏感,光照强芽球和苗生长粗壮,叶色绿、厚,质量好,但对褐化严重的品种的初级培养和增殖培养极为不利,因此对此类品种,在诱导外植体的初级培养和增殖培养阶段应先在200～500lx的光照强度下培养7～14d,然后逐渐增加到1500～2000lx光照培养。
2 黄化苗的问题
2.1 发生原因
引起黄化的主要原因是培养基中Fe含量不足,各种矿物质营养不均衡,培养环境通气不良,瓶内乙烯含量增高,激素配比不当,糖用量不足或长时间不转移,培养基内的糖已耗尽,pH变化过大,培养温度不适(时高时低),光照不足,材料污染(特别是被细菌污染)等。
2.2 解决方法
首先检查母液配制是否正确,及时转接培养物(材料),降低密度,使用透气的棉花塞或透气的封口纸(或膜)来改善瓶内通气状况,去除污染,控制培养温度,适当增加光照,适当调节pH、激素配比和无机盐浓度。另外,在培养基中加有抗生素的兰花组培苗有时也会出现幼苗黄化现象,如果黄化严重,应适当减少用量或停止使用。
3 污染问题
3.1 主要原因
微生物(细菌、霉菌、病毒)污染是研究工作者感到最棘手的问题,也是影响兰花组培苗成败的重要指标之一。在兰花组培过程中,细菌污染率高于霉菌污染率,占总污染率80%以上。细菌污染又分为外生细菌、内生细菌的污染,外生细菌污染多数是培养基、外植体接种、母瓶材料、接种工具、接种员工违反操作规程而引起,有人认为在组培中较常见的细菌
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陈少珍等:兰花组织培养中常见问题及解决方法
性潜在污染可能是由器具消毒不彻底,带有半致死性细菌引起[3]。而内生细菌污染情况比较复杂,可能是外植体材料本身携带,所以选择适宜的外植体材料常常是生产兰花组培苗成败的关键。
3.2 解决方法
3.2.1 定期对培养器皿和接种工具进行高压灭菌消毒。消毒出锅后的接种纸最好放入烘箱烘干水分后2d内用完,刀、剪、镊子等金属用具,在每次操作(接种)开始前需要在75%酒精中浸泡5～10m in,再在酒精灯的火焰上灼烧消毒或在带有石英砂的消毒器内高温消毒5～10m in,冷却后使用。在接种期间接完一瓶母瓶材料,器具消毒一次。切割完一瓶母种材料后及时更换无菌纸,以免材料间交叉污染。定期检查无菌纸是否有破损如洞眼、破裂等,对已破损的无菌纸及时更换。
3.2.2 定期检查超净工作台污染情况。检查方法是将真细菌培养基的培养皿数个,放在台面不同部位,开启超净工作台5～10m in后将皿盖打开,放置30m in,然后盖上培养皿,用透明胶将培养皿封好,放入35℃恒温箱中恒温培养3～7d,如果无细菌和霉菌生长即表明无菌效果良好。
3.2.3 定期用高锰酸钾和甲醛薰蒸接种室,使用浓度按常规。做好培养环境管理,定期(一个月)开臭氧发生器对培养室灭菌消毒一次,消毒时间1～2h。接种前,无菌室用紫外灯照射消毒30m in以上,并开超净工作台紫外灯照射消毒15～20m in,然后启动超净工作台,吹风10～15m in后使用。接种完毕后塞紧内瓶盖,及时盖上外套(塑料套),避免内瓶盖上的棉花滋生霉菌。
3.2.4 检查和监督接种员工遵守接种操作规章,避免接种工具碰到污染物,造成不必要的交叉污染。专人专门负责检查母瓶材料是否有细菌、霉菌感染,对已污染的母瓶材料及时进行处理和淘汰。
3.3 避免内生细菌污染的方法
3.3.1 从室内盆栽兰花中选取洁净、无病虫害、比较细嫩、生长能力较强部位且经多次接种易获得无菌材料的兰花作为外植体,将接种的外植体严格按照获取无菌外植体的基本操作程序和外植体灭菌操作程序对其进行接种。3.3.2 正确选用表面消毒剂、消毒浓度和消毒时间。一瓶培养管放入一块材料,避免互相污染。对灭菌接种在半个月以上仍未污染,且已成活的灭菌外植体要及时转入诱导培养基内,每2～3d观察细菌、霉菌污染情况,及时消除污染试管。
3.3.3 在培养基内加入适量经过滤杀菌后的抗生素。
4 组培苗死亡问题
培养材料死亡在各个阶段都可能发生,尤其在增殖阶段中材料大量死亡,会导致增殖材料减少,损失惨重,因此在兰花组培过程中要加以重视。
4.1 避免材料死亡的方法
4.1.1 在初级培养阶段,外植体选用比较温和的灭菌剂,降低药剂浓度,减少消毒时间,选择在生长季节取芽。
4.1.2 根据不同的兰花品种准确配制各种激素、母液培养基,选用含盐量较低的培养基,也可试用1 2或1 4培养基,并调整各种激素的配比和用量,在培养基中适当添加抗生素、活性炭(0.2%～0.5%)以及必需的有机营养成分。
4.1.3 减少杂菌(真菌、细菌)污染,特别是细菌污染。
4.1.4 控制温度在25℃左右,及时转接和分瓶。培养室要定期通风换气,保持培养室有充足新鲜空气,以利于兰花组培苗生长。
4.1.5 加强组培苗的过渡管理。作好每天温度、光照的记录工作。发现温度变化大,应及时采取控温措施。
参考文献:
[1] 程广有编.名优花卉组织培养技术(第1版)[M].科学
技术文献出版社,2001.102.
[2] 程家胜编.植物组织培养与工厂化育苗技术(第1版)
[M].金盾出版社,2003.63～64.
[3] 熊丽,吴丽芳主编.观赏花卉的组织培养与大规模生产
(第1版)[M].化学工业出版社,2003.81.
(责任编辑 麻小燕)
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植物组织培养的基本步骤 成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。 培养基的主要成分 【水分】 【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂 【凝固剂】琼脂 【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银 培养基和组织培养用具的灭菌方式 【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟 【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂 【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌 【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒 【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌 【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸 【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭 【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口
【培养瓶表面】70%乙醇擦拭 【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒 植物外植体的灭菌方式 【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。 【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。 【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。 【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】
兰花的养殖方法: 1盆土要求：以含大量腐质、疏松、排水良好的中性偏酸性土壤为佳卖兰的地方有栽植的培土，2放置场所：兰花在春、夏、秋可在室外及阳台莳养，要求选择通风良好、空气湿润、又无环境污染处。靠近池塘、河滨当然好，至少要乔木或竹林及置遮阳网，减少阳光照射降低温度。兰盆最好放在木架（或钢架）上，若放地面要垫以砖头，居家阳台也可以用白铁皮制小水坛贮水垫上砖头莳养，增加湿度。 3、适当遮荫：兰花多属于半荫性植物，多数种类怕阳光直晒，需适当遮荫。兰花4月上中旬可去网开窗，多照阳光促其生长。5月份除中午阳光外，可照6个小时；从6月开始，全天候遮荫，10月以后，除中阳外，可以全敞开养护。记住谚语：“荫多叶好，阳多花好”。 4、合理施肥：兰花本吃“素”，施肥要看所选盆土及生长情况而定。凡是生长茂盛无病害的可以施肥，生长差的则不宜施肥或少量施肥。新植上盆根未发全的兰花，需经1—2年后方可施肥。一般6—7月当兰花叶芽伸长约1.5厘米时，每隔三周施一次腐熟的液肥（浓度以稀为宜约10%）。忌用化肥，如遇高温季节不宜施肥，8—9月每隔二至三周施一次稀释液肥。兰花每次施肥宜在傍晚进行，早晨浇清水，叫“回水”。 5、适当浇水：兰花浇水以雨水和泉水为好，自来水或淘米水需隔夜使用。浇时从盆边浇，不可浇入花苞内。浇水量应按照气温、盆土干湿程度及兰草生长情况而定。叶大多浇，叶细少浇。4—5月新芽尚未生土，盆土宜干一些，过湿新芽易腐烂；6—9月为兰花新芽生长期，浇水量要增加，晴天每日清晨或浇水一次，切忌中午烈日浇水。秋天的酌减少水量，可采用叶
面喷雾水，保持盆土润湿为好，冬季更应控制水量，保持“八成干，二成湿”为宜。 6、傍晚喷雾：兰花原生长在空气湿润的环境，所以干旱季节里，除蔽荫外，还必须傍晚喷雾，增加空气湿度，降低温度；也可向盆兰地面（台面）上浇水，“一冷一热”更能激发兰花生长。 7、防风防雨：“二月鬼风”老叶黄退属正常现象，可剪去枯枝败叶。兰花可淋小雨，但忌霉雨、暴雨或连续下雨，否则易烂心、烂叶。雨水多的季节，可适当撒少量草木灰。 8、修剪摘花：在兰花培养中要经常剪去枯黄断叶和病叶。以利通风。名贵兰花，如花芽太多，只留壮芽，每盆1—2朵花芽为宜。春兰开花半月后摘除，名贵兰花7天应摘除，春叶芽生长茁壮，创来年开好更好。夏兰花序上最后一朵花开放一周时，离盆面3厘米处剪下。 9、防寒保暖：兰花因品种不同，原产地各异，抗寒性强弱也不一样，所以冬天进房的时间及在室内放置的位置也不相同。寒兰、秋兰、报岁兰生长在南方，宜在气温5℃时进室（或关窗围网），并尽可能放在南面向阳处。而春、夏兰抗寒能力强，可直至0℃时才进房，放在东北面即可。在晴天无风中午前后，朝南面或东南面要开窗，拉网通风。秋兰在摄氏1—2℃的晴天，不可开窗。当然有温室的，可用电光采暖。 10、防病治虫：盆土一般要进行杀菌处理（烈日曝晒也可），以防病害发生。兰花在多雨高温季节最易发生白绢病，少量可用湿布刷除，盆量多可用500—800倍波尔多液或托布津，每隔7—10天喷洒一次。害虫以介壳虫（俗称“兰虱”）发生多，在孵化期间用1%氧化乐果和25%亚胺硫磷乳
兰花养殖方法与技巧 ：浇水 兰花的浇水是一项经常性的工作，也是兰花栽培成功与否的重要环节。兰花的盆土要 经常保持湿润，但忌含水量过多。在栽培中应根据季节的不同和兰花生长阶段的不同决定 浇水量。一般从春季开始，随温度的上升，兰花转入旺盛生长期，应逐渐增加浇水量，每 隔1～2天浇1次水;夏季气温高，又是兰花生长旺期，通常宜于清晨和傍晚各浇一次水， 切忌中午浇水。雨季来临，要根据雨水的多少和盆土的潮湿程度灵活掌握浇水量，切忌盆 土积水而引起根系腐烂;秋末，气温开始下降，应逐渐减少浇水量，每隔2～3天浇1次即可;冬季温度低，大多数兰花进入休眠期，此时要控制浇水，可每隔5～7天浇1次水，惟 冬季开花的墨兰和寒兰浇水量应适当多些。 ：选盆和培养土 一般家庭养兰，盆的选择还是以泥盆为好。如为装饰效果增加美感，可在泥盆外面套 个彩釉的瓷盆。盆的大小以兰根能在盆内完全舒展开为宜。盆土最好用兰花泥。也可自行 调制。可用腐叶土或泥炭土6份、沙土3份、饼肥1份，或用腐叶土5份、堆肥土3份、 粗沙2份混匀配制。 ：光照 兰花性喜荫蔽、凉爽环境，忌阳光直射。故北方4～5月上旬上午9时前可适当多见 些阳光，5月中旬以后需要遮荫，此时需放至凉爽通风处培养，尤其夏季遮荫度更要大， 切忌烈日暴晒。中国兰花耐阴程度以墨兰最甚，秋兰次之，而春兰和夏兰则需阳光较多。 光照是兰花形成花芽的重要因素，虽然在春、夏、秋三季兰花生长期间都需要适当遮荫，但常年将兰花放在荫蔽地方不使其接受阳光也会影响花芽分化，导致开花少或不开花。故秋凉以后应让各种兰花都多晒太阳或放在室内具有明亮散射光处和通风良好的地方;冬 季放在南窗附近，接受较多的光照，以增强其生命力，促进花芽分化。尤其对冬季开花的 墨兰、寒兰更应在冬季放室内向阳处，没有光照是开不好花的。 ：施肥 具体地讲，每年秋季花芽分化前宜连续施两次以磷钾肥为主的液肥;孕蕾期于晴天傍 晚先用清水洗净叶片，待干后再用小喷雾器把0.2%的磷酸二氢钾溶液喷洒在叶面及叶背，或根施草木灰水。这时的根外施肥对促进兰花的根、茎、花的发育均有益。花谢以后20 天左右再施两次以氮肥为主的液肥或复合化肥，可促进植株生长。阴雨天勿施肥，冬季休 眠期也要停止施肥。
兰花组织培养技术 摘要：在适宜的条件下，将兰花植株的外植体在无菌环境中应用人工培养基，通过外植体的采集与处理、培养基的制作、外植体的接种、继代增殖以及驯化移栽等操作技术，可在短期内获得大量幼小的无病毒植株，从而达到增殖扩繁的目的。组织培养技术是经济有效快速繁殖优良品种的方法，也是产生脱毒苗的重要途径。 关键词：组织培养兰花外植体试管苗 花属兰科多年生草本植物，中国兰花为兰科属中的地生兰。其香味怡人，花色淡雅，品种丰富，素有“花中君子”之称。具有很强的观赏价值和经济价值，深受人们的喜爱。此外，其也是目前世界上栽培较广的切花材料之一，兰花的切花生产，需要大批量的种苗，要获得优质高产，兰花种苗必须具备种性一致，生长齐一，长势旺盛的特点。在种苗生产上运用最广泛的是组培快繁和分株。生产实践证明，运用组织培养快繁技术生产种苗，其长势旺盛，品种复壮，抗病性强，切花质量好，对加快优良品种的培育，挽救珍惜濒危种类等起到十分重要的作用。 兰花在植物分类学上属于单子叶植物中的一个科，为多年生草本植物，附生、地生或腐生。兰花根呈圆柱状，属肉质组织，茎很短，高度约为2～3cm，兰叶大多叶边全缘，有的略有锯齿。其花属于不整齐花范畴，总状花序。兰属植物的果实为蒴果，呈三角或六角形，俗称“兰荪“。 一、无菌培养物的建立 （一）培养容器的洗涤及培养基的制作 1.培养容器的洗涤 容器的洗涤是否干净直接影响组织培养的成败，为保证培养材料在瓶内生长健壮，在培养前期一定要对容器进行彻底的洗涤与灭菌。以达到“瓶壁锃亮、水膜均匀，不挂水珠”为标准。洗涤时用洗衣粉水洗刷，再用清水冲洗3～4次，干燥后备用。 2.培养基的制作 培养基是植物组织培养的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到外植体的生长于分化。组培快繁中最常用的培养基主要是MS培养基。母液要根据药剂的化学性质分别配置，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类母液。其配置方法是先进行大量元素的配置，称量时应注意多余的药品不能回放在瓶中，应做其它处理。电子天平在使用时先对其进行调平，然后进行微量元素母液、有机物母液的配制。 当MS母液配好以后，则可进行培养基的制作，继之对琼脂和蔗糖进行称取、溶解，琼脂呈现半透明状时将糖加入容器中溶解，再加入事先吸取好的各类母液混合均匀后转入1L容量瓶中对其进行定容，然后根据培养基的要求对PH进行调整（PH值控制在5.6～5.8测定不得少于3～4次）。进行分装时，一般以培养瓶的1/4～1/3为宜，分装后立即进行灭菌。
兰花的养殖方法和5个注意事项 兰花与梅花、水仙、菊花并成为花草四雅，是我国十大名花之一。兰花自古以来被人们认为是“正气的化身”，是人间吉祥、美好食物的象征。想养好一盆兰花也不是很容易的事情，想养兰花的朋友看看吧! 兰花的养殖须知 温度 最佳生长温度是18--30摄氏度，5摄氏度以下，35摄氏度以上生长缓慢，生殖生长期为5--18摄氏度。在冬季则要放在室内。 湿度 兰花在空气相对湿度60--70%时生长良好，过干或过湿都易引发兰病。因此，室外栽培要创造一个适于兰花生长的逐部湿度小气候，室内安装喷雾器和湿度计。 光照 兰花喜阴畏阳,夏天七时前可让阳光直射兰叶，七时后用50%--90%的遮光网遮挡阳光。清明前后可让兰花多晒太阳，促使发根，多发叶芽，白露以后，天气转凉，新草大多长成，亦可多照阳光，促使花蕾饱满，使兰株积蓄更多养分，以利来年生长。
浇水 兰花是喜雨而畏潦，喜润而畏湿。在6-7月当兰花叶芽伸长约1.5厘米时，可施用1-2次稀薄腐熟的液肥(不宜用化肥)。到8-9月再施1-2次腐熟稀薄的液肥。素心种的兰花，可施用1-2次草木灰浸出液，效果非常好。施肥时间在傍晚进行最好，第二天清晨再浇一次清水。 肥料 兰花喜欢清淡，施肥宁淡勿浓。如其他植物一样，氮能促进茎、叶生长茂盛。磷能促进兰根发达，促进繁殖器官的发育健壮，茎叶舒展。镁、硫、铁及其他微量元素能使叶绿、花壮。 兰花生长旺期时要多施肥，休眠期或弱生长期可不施肥。若过度施肥，将烧伤根叶，造成无可挽回的损失。 养兰花的注意事项 1、盆子勿太大——小株栽大盆，植料用量多，容易导致通气不良，浇水也不易控制。若浇水吸水太多，植料不易干燥，细菌侵入引起烂根。 2、兰花要浅植——种植兰株不可太深，否则长期潮湿会腐烂。种植时，将植料填充根部、基部或假球茎必须露出。 3、根部要展开——种植兰花时根部要均匀展开，不可挤压在一起，这样每条根才能接触植料，通气也好。 4、数天不浇水——新种植的兰花，根部可能受伤，伤口涂了杀菌剂，3～5天不浇水，才能达到药效，也能促进新芽新根生长。 5、避免强光照——新种植兰花，都必须避免强光直射，以防脱水，应置于暖和而荫蔽的地方，可以用喷雾来提高空气中的湿度，直到兰花恢复正常生长。 对于养殖兰花还有更为确切的记载，更是形象生动。 养兰三字经 兰养好在植料要栽兰就近找腐殖土烂木屑塘泥块用火烧泥炭土
2006,35(1):71-74. Subtropical Plant Science 蝴蝶兰组织培养研究进展(综述) 郑玉忠，张振霞，陈泽华 (韩山师范学院生物系, 广东潮州 521041) 摘要：本文从蝴蝶兰外植体的选择、不同基本培养基、激素及添加物对其增殖与分化的影响，外植体褐变的防治以及生根壮苗方法等，概述蝴蝶兰组培快繁方面的研究进展，为其组培技术研究提供参考。 关键词：蝴蝶兰；组织培养；原球茎 中图分类号：Q943.1；S682.31 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2006)01-0071-04 Progress in Tissue Culture of Phalaenopsis spp. ZHENG Yu-zhong, ZHANG Zhen-xia, CHEN Ze-hua （Department of Biology, Hanshan Teachers College, Chaozhou 521041, Guangdong China） Abstract: The research progress of tissue culture of Phalaenopsis, including the effects of explants sources, culture mediums, hormones and nutrition compositions on multiplication and differentiation of protocorm-like body, the inhibition on browning of explants and methods of rooting and seedling strengthening before transplanting, are reviewed. Some reference materials are also provided for further study in tissue culture of phalaenopsis. Key words:Phalaenopsis spp.; tissue culture; protocorm-like body 蝴蝶兰（Phalaenopsis spp.）属热带或亚热带的兰科植物，其花形奇特，姿态优雅，色彩鲜艳，花期长久，素有“兰花皇后”之美誉，观赏价值极高，深受人们的喜爱，国内外市场的需求量越来越大。蝴蝶兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢，不能满足日益增长的市场需求。因此，研究和开发蝴蝶兰具有重要的意义。 组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，主要通过两条途径：一是利用种子无菌发芽，二是从离体器官诱导产生原球茎，通过原球茎的增殖培养，得到大量幼苗[1]。早在1949年，Potor[2]利用无菌培养技术成功地促使蝴蝶兰花梗上的休眠芽发育成完整植株，该方法经过其他研究人员改进后，曾一度成为蝴蝶兰的主要无性繁殖方式。1974年，Intuwong等[3]利用蝴蝶兰茎尖诱导产生了原球茎状体，再由原球茎分化成植株，为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础。原球茎是一类呈珠粒状的幼嫩器官，在兰科植物中多以这种器官发育、增殖和分化。 蝴蝶兰的组织培养中有几个关键的时期：原球茎的诱导、原球茎的继代增殖、壮苗的培育。根据这几个重要的时期及其组织培养的外界条件，国内外研究人员对蝴蝶兰组织培养进行了广泛的研究，并取得了一定的成效。本文就近年来蝴蝶兰组培快繁技术的研究现状进行综述，包括外植体的选择，不同基本培养基、激素、添加物对其增殖与分化的影响，外植体褐变的防治，以及生根壮苗的方法等。同时展望未来的发展趋势，为该研究领域今后的发展提供有益的信息。 1 外植体的选择 诱导蝴蝶兰原球茎采用的外植体主要有根段[4]、花梗苗根尖[5]、花梗腋芽[6]、茎尖[7]、叶片[8-10]、胚 收稿日期：2005-08-03 基金项目：韩山师范学院青年基金项目（QN200503）资助 作者简介：郑玉忠(1977-), 男, 广东潮阳人, 硕士, 从事植物生物技术研究。 注：张振霞为通讯作者。
大头兰花品种图片大全【大头兰花的养殖方法】 1、土壤：朱顶红种植土壤要求疏松、肥沃的砂质壤土，pH在 5.5～ 6.5，切忌积水，盆土可用腐熟厩肥土2份、腐叶土6份、沙 土2份混匀配制。 2、浇水：朱顶红需要保持植株湿润，浇水要透彻。但忌水分过多、排水不良。一般室内空气湿度即可。 3、阳光：朱顶红喜阳光，可以适量的阳光直射，不可太久。宜 放置在光线明亮、通风好，没有强光直射的窗前。 4、温度：朱顶红性喜温暖，不耐寒。夏季宜凉爽，温度以18-22℃为宜，冬季休眠期要求冷凉干燥的环境，温度不可低于5℃。 5、施肥：朱顶红喜肥，待叶片长至5-6厘米长时开始施追肥， 一般每隔半个月施1次腐熟的饼肥水，花后改为每20天左右施1次，促使鳞茎增大和产生新的鳞茎。 6、虫害：为使朱顶红生长旺盛，及早开花，应进行病虫害防治，每月喷洒花药一次，喷花药要在晴天上午9时和下午4时左右进行，中午烈日不宜喷洒，防止药害。 7、修剪：朱顶红生长快，叶长又密，应在换盆、换土同时把败叶、枯根、病虫害根叶剪去，留下旺盛叶片。 施撒肥料：大头兰喜肥，生长期间随着叶片的生长每半月施肥1次，花期停止施肥，花后继续施肥，以磷、钾肥为主，减少氮肥， 在秋末可停止施肥。盆栽可加一些过磷酸钙作基肥。 浇水要点：保持植株湿润，浇水要透彻。但忌水分过多、排水不良。 修剪要领：
1、大头兰的修剪要求不严，一般可按自己喜欢的造型修剪即可。 2、大头兰生长快，叶长又密，应在换盆、换土同时把败叶、枯根、病虫害根叶剪去，留下旺盛叶片。 盆土更换：养植大头兰的盆土经1～2年的时间，其盆土肥分缺乏，为促进新一年生长和开花，应换上新土。 繁殖要点：大头兰繁殖主要有分球、分割鳞茎、播种或组织培养的方法繁殖，下面主要介绍其分球繁殖和播种繁殖。 1、分球繁殖：分球繁殖于3～4月进行，将母球周围的小球取下另行栽植，栽植时覆土不宜过多，以小鳞茎顶端略露出土面为宜。 此法繁殖，需经2年培育方能开花。 2、播种繁殖：大头兰种子成熟后，即可播种，在18℃～20℃情 况下，发芽较快;幼苗移栽时，注意防止伤根，播种留经二次移植后，便可上入小盆，当年冬天须在冷床或低温温室越冬，次年春天换盆 栽种，第3年便可开花。 喜温暖湿润气候，生长适温为18℃-25℃，忌酷热，阳光不宜过 于强烈，应置荫棚下养护。怕水涝。冬季休眠期，要求冷凉的气候，以10℃-12℃为宜，不得低于5℃。喜富含腐殖质、排水良好的砂壤土。 生物学特性 喜温暖、湿润和阳光充足环境。要求夏季凉爽、冬季温暖，5～ 10月温度在20～25℃，11月至4月温度在5～12℃。如冬季土壤湿 度大，温度超过25℃，茎叶生长旺盛，妨碍休眠，会直接影响翌年 正常开花。光照对朱顶红的生长与开花也有一定影响，夏季避免强 光长时间直射，冬季栽培需充足阳光。土壤要求疏松、肥沃的砂质 壤土，pH在5.5～6.5，切忌积水。 看过“大头兰花怎么养”的人还看了： 1.家庭盆栽兰花如何养护 2.家庭兰花的养殖方法和注意事项
高等教育自学考试 毕业论文 论文题目：兰花组织培养技术 作者姓名：党莎 专业：应用生物技术 主考学校：甘肃农业大学 准考证号： 440509115003 指导教师姓名职称： 甘肃省高等教育自学考试办公室印制 2010年09月20日
论文标题：兰花组织培养技术论文标题：Orchid tissue culture 论文作者：党莎 论文作者：DANG Sha
目录 摘要 (1) 关键词 (1) 英文摘要 (1) 1.无菌培养的建立 (1) 1.1组织培养的发展史及兰花的形态特征 (1) 1.2培养容器的洗涤及培养基的制作 (2) 1.3外植体的采集及接种 (3) 2.继代增殖 (3) 2.1试管苗生根壮苗培养 (4) 2.2试管苗的驯化移植 (4) 3.影响兰花原球茎增殖的因素 (4) 3.1基本培养基成分对茎增殖的影响 (4) 3.2激素的影响 (5) 3.3切割方式对其影响 (5) 3.4活性炭 (5) 3.5含糖量及培养基硬度的作用 (5) 3.6继代周期的影响 (5) 4.影响兰花生根和移栽成活的因素 (5) 4.4活性炭有否对兰花生根的影响 (5) 4.2生长调节物质的不同种类及浓度比例的影响 (6) 4.3试管苗的生理状况 (6) 4.4无机盐浓度 (6)
5.兰花组培的应用 (6) 5.1快速繁殖优良品种 (6) 5.2建立无病毒株系 (6) 5.3种质资源的保存与交换 (6) 6.兰花病虫害防治 (6) 6.1兰花主要害虫及有害动物 (6) 6.2兰花主要病害 (6) 7.结论 (7) 参考文献 (8) 致谢 (9)
兰花组织培养技术 党莎 （甘肃农业大学生命科学技术学院应用生物技术 730070） 摘要：兰花属兰科（Orchidacere）多年生草本植物，中国兰花为兰科属中的地生兰。其香味怡人，花色淡雅，品种丰富，素有“花中君子”之称。具有很强的观赏价值和经济价值，深受人们的喜爱。如春兰、建兰、墨兰、寒兰等都是珍贵的观赏兰。此外，其也是目前世界上栽培较广的切花材料之一，兰花的切花生产，需要大批量的种苗，要获得优质高产，兰花种苗必须具备种性一致，生长齐一，长势旺盛的特点。在种苗生产上运用最广泛的是组培快繁和分株。生产实践证明，运用组织培养快繁技术生产种苗，其长势旺盛，品种复壮，抗病性强，切花质量好，对加快优良品种的培育，挽救珍惜濒危种类等起到十分重要的作用。关键词：组织培养；兰花；养护管理 Orchid tissue culture DANG Sha （Applied Bio-technology, College of Life Sci. &Tech., Gansu Agricultural University, 730070） Abstract: The orchid is Orchidaceae (Orchidacere) perennial herbs, Chinese orchid is an orchid in terrestrial orchids. The scent is pleasant, elegant colors, variety, known as "Gentleman flowers," said. Highly ornamental value and economic value, very popular. Such as Chunlan, Cymbidium, Cymbidium, Cymbidium orchids and other ornamental and precious. In addition, it also is the world's cultivated a broader one cut material, orchid cut flower production, require large quantities of seed, to obtain high-yield, species of orchid seedlings must have consistent growth and homogeneity, the characteristics of growing strong . In the seed production is the most widely used tissue culture and ramet. Practice shows, the use of tissue culture micropropagation technology to produce seedlings, the growing vigorously and rejuvenation varieties, disease resistance, flower quality, and speed up the cultivation of improved varieties, save endangered species such as value plays an important role. Key words: tissue culture; orchids; conservation and management 1.无菌培养的建立 1.1组织培养的发展史及兰花的形态特征
兰花的养殖方法和注意事项
兰花的养殖方法和注意事项（保存） 分开的兰丛，不要拆得太零星，每丛至少有3～5苗，最好是一年生植株、二年生植株和三年生植株保留在同一丛中。 垫盆盆底用—块瓦片盖住排水孔，再用砖块，瓦片或贝壳逐步填充，其中大隙缝填充以泥粒或豆石，一般约为盆内高度的1/2～1/3。上余的净高约10～15cm，留作培养土层。其具体高度应根据兰花的种类及兰根的长短和盆的高矮而定。铺垫物不要填得太密太实，应保留一点孔隙。实践证明，有的新根能在铺垫层的孔隙中生长良好。
栽植在铺垫层上，先填上2～3cm的培养土，用手稍压实，即可将兰花正立摆布其上，根据植株与花盆大小，可以几个单株、2丛、3丛或更多丛种在一个盆里。3丛宜栽成鼎足之势。4丛可栽成四方形，五丛宜列成梅花形。兰根要自然舒展，叶片要四方披拂。要缓缓地将兰根放入盆内，使兰根自然舒展，尽量不与盆内壁碰擦。兰株入盆后，就逐步固定兰株姿势。—盆栽一丛的，应使老假鳞茎偏居一侧，使新芽有发展的余地。一盆栽数丛的，每丛的老假鳞茎应相对地集于盆之中间，使新根新芽向外发展各有足够的空间。 填土栽植时，一手扶叶，一手添加营养土，执住兰株基部稍往上提，以舒展根系，同时摇动兰盆。让培养土深入根际；继续添土，并摇动兰盆，调整兰株的位置和高度。
用手沿盆边按压，但切勿过重而伤根，继续添土并挤压，直至盆面土壤高出盆口2～3cm，略呈馒头形。培养土应将全都兰根盖住，掩至假鳞茎基部，填土的深浅，传统认为：春兰宜浅，惠兰宜深，但一般以不埋及假鳞茎上的叶基为度。新发兰花在山野里生长时，植株上留下了土表上下的明显标志，可以此标志为准。花盆的大小也要和植株的大小、多少相称，既不要盆大而株小又少，也不宜盆小而株大又多。一般植株的数量，以预计2～3年后刚好长满盆为原则。植株大小与盆的高度相称。既利于生长，又符合观赏要求。 铺面栽植完毕后，可在盆土表面铺上一层小石粒或青苔，最好是林下优质苔藓，既美观、又可调节水分，还可保护叶面不被泥水污染，新芽也不致感染泥土中病菌而烂
兰花的养殖 因为家里兰花开了，网上找了一些文章，关于养兰的，看看很有用，贴上来大家一起看吧。 兰花养殖要点 1.春天养兰 开春后气候变化大，阴雨天多，往往还会有寒潮发生，对兰花生长很不利。此时如管理跟不上，极易导致兰花烂根、烂芽，甚至使整株死亡。保温防涝: 春季对盛花期的报岁兰、春兰，必须放置室内管理，保护花莛及花朵，因为阴雨寒冷的天气会缩短盛花期，如受冷雨浇淋，还会使花朵发生腐烂。对于处于萌芽期的建兰、寒兰等，可以置室外，必须注意兰盆疏水防涝，最好在兰盆上方架塑料薄膜遮雨。这一时期，兰花应忌一切肥料，盆土应保持微湿状态，否则，建兰、寒兰的新芽就会烂死，芽尖腐烂变成黑褐色，一直延伸至全芽褐枯死亡，俗称“黑死”。春芽烂死，会严重影响整盆兰花的当年生长繁殖和开花。防治病虫: 春季阴雨连绵，是各种病虫害的多发期。高湿的环境条件，会导致兰花褐斑病的发生和加重，也会引起蜗牛、蚜虫、地老虎、蝼蛄等害虫的为害。对褐斑病，可在初发生时喷50,多菌灵或70,托布津800倍液,1000倍液，连喷2次至3次，间隔7天至10天。对虫害以人工捕杀为主，保持兰盆及四周清洁，撒放生石灰防止害虫从盆壁及盆底疏水孔钻入盆里为害。适时施肥: 对花期已过的报岁兰和春兰应及时补肥，以施稀薄马蹄片水和叶面喷施浓度为0.1,的磷酸二氢钾液为好，催发春芽。进入5月是所有兰花的施肥期，可以在兰花盆沿埋50克至100克慢效有机肥粒和骨粉。每周进行喷施壮芽肥，肥液为0.1,的磷酸二氢钾，为预防病害，可加入托布津或多菌灵农药混喷。 阳台养兰
阳台养兰在现实的生活中已常见之。随着经济的飞速发展、家居条件的日益改善、生活质量的普遍提高，兰文化似春潮涌动，俨然地进入都市人的休闲生活中，餐桌、茶室议兰颂兰成风，书房、厅堂都已闻到兰芳的气息。然而，阳台养兰，如何养好兰，更是爱兰人关心的迫切但很难解决的现实问题。 在阳台养兰，我已有7年历史。在这几年中可以说在失败惨痛的教训中得出了经验也是比较深刻的。初养兰时，普遍存在三个误区: (1)(植料的认识问题。总抛不开传统用土养植，认为兰喜肥沃的土壤，不管是下山草还是熟草，都用同一基质莳养，并不断加肥，补给营养，拔苗助长。殊不知，下山草、刚上盆的兰草是不适合施肥的。这样很容易产生白绢病、根腐病，其结果是挖掘下山的名贵原生种一次次在手中夭折，新生苗烂芯，严重的出现大面积烂根，直至全盆死亡。 (2)(光照的认识问题:初养兰时，对兰的喜光度以及如何适当遮阴等问题很难掌握。有的认为蕙兰喜阳，就将其置在阳台上任其曝晒，结果兰叶枯黄，却黑斑累累;而认为春兰喜阴，又不敢将其放在阳台莳养，长期放在室内，缺少雨露滋润和通风透气，影响其健康生长。 (3)(喷水浇水的认识问题:初养时，给水是养兰最难的一个环节，确有“养兰要成功，给水至少三 年功”。但往往被疏忽了，可叹的是初养兰时没人充分认识其重要性，都是按“名书”指点，“夏天早晚各一次，秋天三天一次等等”，教条地、生硬地照搬照套，不根据自己养兰环境和兰的生长情况以及光照、通风植料等加以区别灵活对待，其结果是可想而知的。现我就几年来阳台养兰取得较为成功的养植方法与兰友共商，可能对初养兰的朋友有一点启示或借鉴。我以五楼北阳台作为养兰场所，并用铝合金、玻璃将其封闭，形成一个高级小温房，在东西二侧配置二台换气扇，顶上安装一个小吊扇，主要是保持空气清新、通风透气，还有在喷水施药时，能及时将叶面吹干，避免叶面起黑斑，同时用不锈钢根据兰盆大小制成多栏式可调节的托架，将兰草凌空莳养，高大约70公分左右。为增加兰房湿度，在托架下面
家庭兰花的养殖方法 场所 兰花放置的场所很重要，它直接影响兰花的生长发育。兰花一般在春、夏、秋三季放在露地（夏季放在露地荫蔽处），冬季则放在室内。室外最好要四周空旷，空气湿润。室内要有充足的光线，最好朝南。这样，有利兰花生长。兰盆最好放在木架或桌子上，不要放在地面上。 蔽荫 兰花多属于半阴性植物，多数种类怕阳光直晒，需适当遮荫。兰花在4月上、中旬，可多照阳光促进其生长。4月下旬以后要适当遮荫。夏兰、秋兰中直立性叶的品种最好放在荫蔽处的南面，使其适当多受阳光；垂叶性的秋兰和春兰，每天以受两小时的光照为好。从6月开始到9月，每天要提早蔽荫，如用芦帘可以用密帘或两层稀帘。10月以后天气转凉，阳光较弱，可推迟蔽菜，但中午前后仍需注意做好蔽荫工作。 防雨 兰花可淋小雨，但要避霉雨、阵雨或连续下雨。 浇水 花谚说：“干兰湿菊“，这话有一定道理。一般说，兰花以八分干，二份湿为最好。 般说，在6-7月当兰花叶芽伸长约1.5厘米时，可施用1-2次稀薄腐熟的液肥（不宜用化肥），但在高温季节不宜施肥。到8-9
月再施1-2次腐熟稀薄的液肥。素心种的兰花，可施用1-2次草木灰浸出液，效果甚好。施肥时间在傍晚进行最好，第二天清晨再浇一次清水。 春兰的花，约开半月，即需将花剪除；夏兰的花，到花序上最后一朵后开放一周时，也应将花序剪除。名贵的品种不应使其受粉结实，否则影响翌年开花。如果作为杂交育种的，则另需加意培养，使其果实饱满成熟。 病虫害防治 要进行杀菌处理（在烈日下曝晒即可），以防病害发生。兰花在多雨高温的季节最容易发生白绢病，可用托布津800倍液或波尔多液喷施预防。如发病严重可用托布津500-750倍释，每隔7-10天喷一次。虫害中以介壳虫发生最多，此虫附着在叶的基部，如发现介壳虫，应及时剔除。如要避免介壳虫侵袭，从4月份开始，可用“1059“2000倍液防治。 为了抑制兰花病害的发生，除平时对盆土的干湿度应作适当的控制外，还应在花盆的选上尽可能多用泥盆，少用釉盆。特别对生长差的新从山上挖来的兰花必须用泥盆栽种。这样做使盆土容易干，可促进兰花生长，减少发病率。
植物组培过程中污染产生的原因及防治措施 一、污染的原因 污染是指在培养过程中，培养基或培养材料上滋生真菌、细菌等微生物，使培养材料不能正常生长和发育的现象。组织培养中污染是经常发生的，常见的污染病原是细菌和真菌两大类。细菌污染常在接种1-2d后表现，培养基表面出现黏液状菌斑。真菌污染一般在接种后3d以后才表现，主要症状时培养基上出现绒毛状菌丝，然后形成不同颜色的孢子层。 造成污染的原因也很多，主要有 (1) 培养基及各种使用器具灭菌不彻底 (2) 外植体消毒不彻底 (3) 接种时不严格无菌操作 (4) 接种和培养环境不清洁 (5) 培养容器原因，包括盖子和封口膜等。 二、材料带菌或培养基灭菌不彻底会造成成批接种材料被细菌污染，操作人员不严格遵守无菌操作规程也是造成细菌污染的重要原因。培养环境不清洁、超净工作台的过滤装置失效、培养容器的口径过大以及封口膜破损等主要引起真菌污染。2 污染的预防措施 2.1灭菌要彻底 在组培生产中，各种培养基以及接种过程中使用的各种器具都要严格灭菌。首先是培养基的灭菌，耐高温的培养基需要在121-123℃条件下灭菌20-30min。若出现灭菌时间不足或温度不够，培养一段时间后就会在培养基表面产生细菌性的污染。一些不耐高温的物质，可采取细菌过滤器除去其中的微生物。其次，接种用的器具除了经过高温霉菌外，在接种的过程中，每使用1次后，都要蘸酒精在酒精灯火焰上灼烧灭菌，特别是在不慎接触到污染物时，极易由于器具引起污染。第三，对于被污染的培养瓶和器皿要单独浸泡，单独清洗，有条件的灭菌后再清洗。 2.2环境消毒 不清洁的环境也会使培养的污染率明显增加，尤其是在夏季，高温高湿条件下污染率更高。接种和培养环境要保持清洁，定期进行熏蒸或喷雾消毒。高锰酸钾和甲醛熏蒸效果好，但对人体有一定的伤害，一般每年熏蒸2-3次。平时读接种室和培养室可采用紫外线照射消毒或喷2%来苏尔消毒。臭氧消毒机对环境消毒效果较好，而且使用灵活方便，对人体的伤害也相对较小。 2.3严格无菌操作 在接种时要严格无菌操作，避免人为因素造成污染。为了使超净工作台有效工作，防止操作区域本身带菌，要定期读一过滤器进行清洗和更换。对内部的过滤器，不必经常更换，但每隔一定时间要检测操作区的带菌量，如果发现过滤器失败，则要整块更换。此外还需要测定操作区的风速，通过调压旋钮使操作区的风速达到无菌操作需要的20-30m/min。 植物组培过程中培养物的玻璃化及其防治方法 当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，苗体趋于透明，其茎、叶表面无蜡质，这种现象通常称为玻璃化。玻璃化为组培苗的生理失调症，它的出现会使组培苗生长缓慢、繁殖系数有所下降，玻璃化的嫩茎不宜诱导生根。 1 导致玻璃化的主要因素： ① 材料差异，在不同的种类、品种间，组培苗的玻璃化程度有所差异。
第一章 1、植物组织培养：是指在离体条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞、原 生质体等进行培养，使其长成完整植株 2、外植体：在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物上提取下来的、接种在培养基上的 无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。 3、愈伤组织：指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 4、应用 一、农业上的应用 1. 种苗快速繁殖(rapid propagation) 2.无病毒苗(virus free)的培养 3.在育种上的应用(breeding) （1）倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显； （2）克服远缘杂交的不亲合性和不孕性（胚培养）； （3）保存种质 （4）创造变异 二、在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。用于基因工程技术创造植物新种质。用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。 三、利用组织培养材料作为植物生物反应器 第二章 1、细胞全能性（Totipotency）：指任何具有完整的细胞核的植物细胞都拥有形成一个完整植 株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 2、细胞分化（cell differentiation）：指导致细胞形成不同结构，引起功能或潜在的发育方式 改变的过程。 3、脱分化（Dedifferentiation）：指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构 和功能而恢复分生状态，形成无组织结构细胞团或愈伤组织 的过程。 4、再分化（Redifferentiation）：指脱分化的细胞重新恢复分化能力，形成具有特定结构和功 能的细胞、组织、器官甚至植株的过程。 5、植物组织培养中常遇到的问题以及解决措施 一、污染及防治： 1、真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌污染，只 要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可使用。 2、用抗生素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常生长。 二、褐变及防止 （1）选择合适的外植体
兰花的养殖方法与技巧_兰花的修剪方法介绍 1、盆土，兰花喜欢含腐质、疏松、排水良好的偏酸性土壤，PH 值一般为5.5至6.5左右，所以特别注意不能有碱性物质的加入。 2、温度，春、夏、秋气候较为温暖，所以可养于室外，但这是 要注意通风性和空气湿度，一般空气要湿润，不能太干燥，最好是 能靠近池塘、河滨，当然放在乔木或竹林及遮阳网下面也是可以的，这样可以减少阳光照射降低温度。 3、阳光，兰花属于半荫性植物，所以特别怕阳光直晒，通常来说，兰花4月可去网开窗，多照阳光促其生长，5月份除中午阳光外，可照6个小时左右;从6月开始，腰围天气阳光比较毒辣，要全 天候遮荫，到了10月以后，除中阳外，可以全敞开养护。 4、施肥：兰花的施肥要看盆土及生长情况而定，生长好的可以 施肥，生长差则不宜施肥或少量施肥，很多人会搞反;新植上盆根未 发全的兰花，需经1—2年后方可施肥。当兰花叶芽伸长约1.5厘米时，每个月施肥一次(浓度以稀为宜约10%)。兰花施肥时，千万不 能用化肥，兰花每次施肥时间应该在傍晚，早晨浇清水。 6、气候变化：兰花并不会很娇嫩，可淋雨，但非常的怕梅雨、 暴雨，否则就会造成烂心、烂叶，梅雨季节，可适当撒少量草木灰。 7、修剪：这是在养殖许多花种都需要注意的一个重要步骤，兰 花也一样，要剪去枯黄叶和病叶，这样既观赏性好，而且还有利于 通风;另外兰花花芽过多，也要修剪，只留壮芽，每盆1—2朵花芽 为宜。 8、摘花，对于生长差的兰花，应进行大量的摘花，这样才能保 证正常的生长，对于长势较好的品种，也可适当摘去一些花苞，这 样花可开久些，又可使新叶多抽，老叶也不易枯死，
9、得病、这也是养殖植物经常碰见的一件事情，兰花最容易得 的病为白绢病，主要是在多雨高温季节，这时可用湿布刷除，如果 特别严重的话，可用500—800倍波尔多液，每一个星期喷洒一次。 10、害虫，兰花中最为常见的害虫是介壳虫“兰虱”，这时就要注意了，在孵化期间要用1%氧化乐果和25%亚胺硫磷乳油1000倍液，每周喷洒一次，另外要增加透气通风，从根本上减少发生病害 1、繁殖方法 种子变温储藏和室外埋土越冬处理比室温下储藏发芽率高。种子发芽的温度范围为15--30℃。小于10℃或大于35℃时不发芽。恒 温条件下发芽率普遍很低，一般播前采用温水浸种或层积处理，提 高种子出苗率。兰花草种子硬实率较高，使得兰花草种子在常温室 内培养条件下的发芽率平均仅10%--20%。野生兰花草多以分蘖形式 进行无性繁殖。 2、抗旱特性 兰花草根系发达，入土深度可达1m以上，须根稠密而发达，呈 伞状分布，这不仅是它极强的抗性和适应性的有力保证，也使其具 有很强的缚土保水能力。兰花草直立生长的叶片可有效地减少水分 蒸发，缓解雨水对地表的直接冲刷，而且还利于根部透气。在恶劣 的环境条件下，兰花草的地上部分会变得相对低矮，地上生长量会 减低20%以上，同时根系会更加发达，根系会增加10%以上，这都有 助于其在高温干旱、水涝等不良环境中正常生存。 3、耐盐碱性 兰花草是一种耐重盐碱的植物，其种子在含盐量0.44%条件下正 常发芽;含盐量0.51%时，发芽率明显下降，含盐量达0.75%丧失发 芽能力。萌发后的幼苗在土壤含盐量达0.27%、pH值达7.9--8.8的 条件下仍能正常生长并开花结实，是难得的盐碱地绿化和改良的好 材料。 4、叶绿泽性
浅析植物组织培养过程中的污染问题及解 决办法 植物组织培养指通过无菌无菌操作把植物体的外植体接种于人工配制的培养基，在人工控制的环境条件下去进行离体培养的一套技术和方法。植物组织培养过程中的温度、湿度、营养及培养基的PH等正是微生物生长的最佳条件，因此与褐化、玻璃化相比，污染更易发生，给科研及生产均带来很大危害，分析和防控污染在组织培养中是不容忽视的。 一、污染种类 从污染产生的病原来看，主要包括真菌和细菌。 细菌污染的特点为在培养基表面或材料表面出现黏液庄物体、菌落或者是浑浊的水迹状，有时甚至出现泡沫发酵状，一般在接种1-2天即能发现，主要为大肠杆菌、链球菌、芽孢杆菌，主要是由于使用未消毒好的工具及操作者呼吸排出的细菌引起或操作者的手接触材料或器皿边缘所致。 真菌污染的特点是菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴有不同颜色的孢子，一般在接种3-10天后才能发现，主要为霉菌污染，一般是由空气污染和瓶口边缘以及取放封口杨起的灰尘和真菌孢子落入器皿中造成的。 二、污染来源及防控措施 一般来说，植物组织培养中污染来源主要有三类：外植体带菌，接种污染，培养过程污染 外植体为组织培养的材料，外植体表面和内部常携带一些微生物，是植物组织培养过程的主要污染源，为了减少外植体导致的污染，应选取合适的材料，尽可能选择带菌少以及不携带内生菌的外植体。○1、选取胚和无病害的茎尖等，减少携带内生菌的几率。○2、不同
季节，外植体带菌情况不同，选择合适季节采集外植体。○3、将有土栽培改为无土栽培，减少植物携带外生菌的几率。○4、将室外的植株移到清洁的室内栽培，生长一段时间后，再取外植体。○5、利用种子在无菌条件下培育成无菌苗，然后再将无菌苗的胚轴、培根、子叶等作为外植体。○6、采用合适消毒方法，对于大多数外植体只需表面消毒即可，但由于某些外植体有内生菌，为达到较好的灭菌效果，还需进行其他处理。 接种时，由于镊子带菌或接种室及操作人员的未消毒干净也易引起污染。每次接种前，用紫外灯照射接种室、缓冲间、超净工作台20min，关闭紫外灯后，应提前打开超净工作台风机15min再进行接种，另外应定期检查超净工作台滤布，操作人员应时常注意个人卫生，勤梳洗，勤剪指甲，接种时先用肥皂洗手，并用新洁尔灭溶液浸泡5min，接种过程中，操作人员应及时用75%酒精擦拭双手和超净工作台面。接种器械应及时在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌，接种过程中应尽量少说话、咳嗽，超净工作台面上应保持气流畅通，使操作区空气不断净化。当打开培养基瓶接种时，培养瓶应拿成斜角，以避免灰尘进入瓶中。 培养室是培养物生长的室内环境。若培养室门窗封闭不严，易给苍蝇、飞蛾等的进入创造条件，有利于杂菌传播，同时室内尘埃多，若不经常清洁消毒，将会使细菌增多，因此要对培养室进行定期熏蒸（甲醛：高锰酸钾=2:1），同时应用甲醛溶液喷洗墙面，每周用75%的乙醇溶液作喷雾处理，用0.5%的新洁尔灭溶液擦洗培养架和地板，另外要及时处理培养室中的污染菌和污染苗。 三、结束语 组织培养中污染的发生时极其普遍的，严重影响组培苗的工厂化进程，给科研也带来极大损失。因此对组培中污染原因及防控的研究都是极其重要的。